雌激素对缺氧视网膜Müller细胞色素上皮衍生因子表达的影响

目的:探讨雌激素对缺氧视网膜Müller细胞色素上皮衍生因子（P EDF）表达的影 响。 方法:采用逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和Western blotting印 迹分析方法分别测定不同浓度（10^-7、10^-6、10^-5 mmol/L）雌二醇 （E₂）作用于缺氧Müller细胞后，细 胞内 PEDF mRNA及蛋白表达水平。 结果:缺氧24 h后PEDF mRNA及蛋白表达明 显降低， 10^-7、10^-6、10^-5 mmol/L E₂作用于Müller细胞后可明显缓解 由于缺氧引起的细胞内PEDF mRNA及蛋白表达的降低，并与E₂的浓度有关。 结论:雌激素可以调控PEDF的表达 ，其可能在雌激素对视网膜新生血管形成的调控中起重要作用。     

维甲酸诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 研究维甲酸(rentinoic acid,RA)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithlium,RPE)细胞凋亡特征。 方法 体外培养的RPE细胞中加入10-^5_、10^-6_、10^-7mol/L RA,应用吖啶橙荧光染色和核苷酸末端转移酶介导的dUIP末端标记法(Tdt-mediated dUIP nick end labelling method,TUNEL法)观察凋亡细胞。 结果 10^-5、10^-6、10^-7mol/L RA诱导RPE细胞凋亡,凋亡细胞表现为细胞固缩,染色质聚.TUNEL法显示凋亡细胞DNA片断化.10^-7、10^-6、10^-5mol/L RA作用5天时,凋亡指数分别为36.9、44.9%、61.4%。作用6天时，凋亡指数分别为48.0%、59.9%、74.2%。经统计学处理,同一RA浓度时,随作用时间延长凋亡指数增加;同一作用时间时,随RA浓度增大凋亡指数增加,差异有显著性(P<0.05). 结论 RA能诱导RPE细胞凋亡，且有很好的时间剂量效应。(中华眼底病杂志,1998,14:153-155)     

腺苷抑制P2X7和N-甲基-D-天冬氨酸受体诱导的视网膜神经节细胞死亡

目的研究腺苷（adenosine）对嘌呤受体P2X₇和谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体激活诱导的大鼠视网膜神经节细胞（RGC）死亡的神经保护作用。方法（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物荧光金（aminostilbamidine）以标记RGC，检测P2X₇激动剂BzATP（50 μmol/L）、谷氨酸NMDA受体激动剂（100 μmol/L）和腺苷（300 μmol/L）对体外培养RGC存活率的影响;（2）体外培养未经荧光金标记的新生大鼠RGC，以10 μmol/L 钙离子（Ca²⁺ ）荧光染料Fura-2乙酸甲酯（Fura-2 Am）标记后，利用Ca²⁺影像测定仪分别测定BzATP、NMDA和腺苷对RGC内Ca²⁺浓度的影响。结果BzATP和NMDA均可引起体外培养的RGC死亡，BzATP在50 μmol/L、NMDA在100 μmol/L 浓度下，均杀死约30%RGC。而300 μmol/L 腺苷则可明显减轻两者对RGC的毒性作用，使RGC 存活率分别从68.9%±2.3%、69.9%±3.2% 提高至91.2%±3.5%（P＜0.001）、102.1%±3.9%（P＜0.001）。BzATP可引起RGC内Ca2+持续升高，在50 μmol/L浓度下可使细胞内Ca²⁺升高至（1183±109） nmol/L。在300 μmol/L腺苷作用下，BzATP介导的Ca²⁺升高幅度显著降低，仅升高为（314±64）nmol/L（P＜0.001）。结论腺苷能阻止P2X⁷受体和NMDA受体激活诱导的RGC死亡和细胞内钙离子浓度升高，具有神经保护作用。（中华眼底病杂志，2007，23：133-136）     

L-精氨酸和L-NAME对牛小梁细胞增殖和凋亡的影响

目的研究L-精氨酸和L-NAME对体外培养的牛小梁细胞增殖和凋亡的影响.方法在体外培养的牛小梁细胞中分别加入浓度为1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1×10-5mol/L、1×10-4mol/L、1×10-3mol/L及1×10-2mol/L的L-精氨酸和左旋-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)与小梁细胞共同孵育48 h,以不加药组为对照组,用化学比色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)及四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测小梁细胞在上述药物中增殖和凋亡状况.结果≥1×10-4mol/L的L-精氨酸通过促进NO的产生导致小梁细胞凋亡并抑制细胞的增殖;而≥1×10-5mol/L的L-NAME通过抑制NO的产生,促进小梁细胞的增殖.结论高浓度的NO可抑制小梁细胞的增殖,诱导细胞凋亡.     

培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制与Ki-67表达

目的 探讨柔红霉素对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生的抑制及其与Ki-67表达的关系。 方法 用180μg/L柔红霉素作用培养的人RPE细胞12h，之后24 h用氚-标记脱氧胸苷(tritium-labelled thymidine deoxyribose,³H-TdR)掺入法测定DNA合成抑制率，免疫细胞化学染色和定量分析观察Ki-67表达，流式细胞术检测细胞周期变化。 结果 培养人RPE细胞DNA合成抑制率与柔红霉素剂量成正比，对照组和柔红霉素组Ki-67阳性细胞率分别为89.3%和45.6%(P＜0.01)，两组中阳性细胞胞核积分光密度值分别为68.1±6.2和27.3±5.5 (P＜0.01)。柔红霉素组^G₂期细胞比例由8.9%增至29.5%。 结论 柔红霉素使培养人RPE细胞阻滞于^G₂期，抑制了细胞增生；Ki-67表达可以反映RPE细胞的增生抑制。（中华眼底病杂志，2000，16：1-70）     

高功率微波对视网膜神经节细胞脂质过氧化作用的实验研究

目的 观察微波对体外培养的兔视网膜神经节细胞的脂质过氧化损伤作用。 方法 体外培养兔神经节细胞,以平均功率为80　mW/cm²的微波进行辐照,辐照时间分别为15、30、45min。辐照后立即于倒置显微镜和电镜下观察细胞形态变化,羟胺法和改良硫代巴比妥酸荧光法分别测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。 结果 微波辐照后,细胞轴突消失,电镜可见线粒体及内质网肿胀。随辐照时间延长,细胞逐渐趋向于坏死,细胞MDA含量增高,45min辐照组MDA含量为对照组的5.11倍。SOD则逐渐降低。 结论 微波可引起视网膜神经节细胞脂质过氧化损伤,脂质过氧化反应可能是微波视网膜损伤的作用机制之一。 (中华眼底病杂志,2000,16：32-34)     

抗视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50单克隆抗体相应抗原的提取

目的 从SO-Rb₅₀细胞中提取出抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体相应的抗原。 方法 用离子交换层析法从SO-Rb₅₀细胞中初步分离抗原，并利用抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体以dot blotting鉴定抗原，然后以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化出抗原目的蛋白条带，用Westein blotting检测其相对分子质量。 结果 从SO-Rb₅₀细胞裂解液的总蛋白中分离出一条抗原目的蛋白条带，其相对分子质量约为83×10³。 结论 从SO-Rb₅₀细胞裂解液中能够提取出抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体对应的抗原。 （中华眼底病杂志，2003，19：152-155）     

背景光照明强度对视网膜电图和振荡电位的影响

目的观察不同强度背景光照明下视网膜电图(electroretinogram, ERG) 和振荡电位(oscillatory potentials, OPs)的变化,了解视网膜神经性调控机制对环境照明改变的反应。方法应用自行设计的全视野刺激的ERG记录仪,采用 DTL纤维电极于角膜端记录出生25~29 d Albino鼠(Wistar Fu)眼在暗视及以2个对数单位递增的4个背景光强 度 ——“弱”(1.43×10^-6cd/m²)、“次弱”(1.43×10^-4cd/m²)、“ 次强”(1.43×10^-2cd/m²)和“强”(1.43×10^-2cd/m²)下的ERG a波和b 波。采用数字式滤波器,同时记录OPs。刺激闪光强度为1.43×10^-2cd/m²,闪光时程75 ms,闪光间隔时间1 min 。结果随着背景照明强度的增强,OPs子波数由5个减少至3个,但子波振幅总和增加。当背景光强度增强到最强水平,OPs振幅总和减少。ERG a波和b波振幅在2个弱背景光照明下未见改变。但在强背景照明范围,a波和b波振幅随照明强度的增强而呈下降趋势。结论Albino鼠视网膜内层存在的神经调控系统对环境照明改变的反应比感光细胞更敏感、更快。记录OPs时采用适当的连续背景光照明,可提高反应记录的稳定性。(中华眼底病杂志,2001,17:286-288)     

兆科降纤酶和抗αvβ3整合素抗体对牛视网膜 血管内皮细胞粘附、移行的影响

目的探讨蛇毒制剂兆科降纤酶和抗α_vβ₃整合素抗体23C6对血管内皮细胞粘附移行的影响。方法以玻璃粘连蛋白 (Vn)、胶原包被培养皿，牛视网膜血管内皮细胞中加入不同浓度的兆科降纤酶和抗α_vβ₃整合素抗体，孵育60 min 后进行细胞粘附分析和移行分析。应用透射电子显微镜，对兆科降纤酶和抗α_vβ₃整合素抗体干预后的牛视网膜血管内皮细胞进行凋亡检测。结果兆科降纤酶和抗α_vβ₃整合素抗体均呈剂量依赖性抑制牛视网膜血管内皮细胞对Vn、胶原的粘附和移行。兆科降纤酶半数抑制浓度 (IC₅₀) 小于0.05 μmol/L,而抗α_vβ₃整合素抗体的(IC₅₀) 高于2.5 μmol/L。 0.1 μmol/L的兆科降纤酶即可抑制81.8%的内皮细胞对Vn的粘附，10 μmol/L抗αvβ3整合素抗体则可抑制76.3％。经两者干预后的牛视网膜血管内皮细胞内均可见典型的凋亡小体。结论兆科降纤酶和抗α_vβ₃整合素抗体能显著抑制牛视网膜血管内皮细胞对细胞外基质的粘附和移行，其机理可能在于诱导牛视网膜血管内皮细胞凋亡。(中华眼底病杂志,2005,21:118-121)     

环缩酚酞抑制血管内皮细胞生长因子诱导的血视网膜屏障破坏

目的 观察两种新的环缩酚酞（Hep）衍生物Hep-A、Hep-B对血管内皮细胞生长因子（VEGF）诱导的血视网膜屏障破坏的效应。 方法 将C57BL/6J小鼠分为正常对照组、阳性对照组、Hep-A、Hep-B治疗组，对照组皮下注射安慰剂，治疗组分别皮下注射Hep-A、Hep-B 10 mg/kg，2次/d，持续5d 。5d后，阳性对照组、Hep-A、Hep-B治疗组玻璃体内注射1μl 10^-6mol/L重组人类VEGF诱导血视网膜屏障破坏，6h后腹腔内注射3.7×10⁴Bq/g的³H-甘露醇。处死小鼠并测量视网膜、肺、肾组织的放射活性，分别计算各组的视网膜与肺、视网膜与肾放射性比率，用方差分析比较各组间差异。 结果 正常对照组的视网膜与肺和视网膜与肾放射性比率分别为0.38±0.04和0.21±0.03；阳性对照组为1.05±0.11和0.46±0.04，均较正常对照组显著升高（P值均<0.01）；Hep-A治疗组分别为0.59±0.06和0.32±0.03，均较阳性对照组显著降低（P值均<0.01）；Hep-B治疗组分别为0.54±0.04和0.35±0.03，均较阳性对照组显著降低（P值分别＝0.01和<0.01）。 结论 Hep-A和Hep-B可以抑制VEGF诱导的血视网膜屏障破坏。 （中华眼底病杂志，2004，20：352-354）     

雌激素对视网膜光损伤的保护作用

目的：探讨雌激素对光诱导的视网膜感光细胞凋亡的抑制作用及其 机制。 方法：雌性Sprague－Dawley （SD）大鼠20只随机分为去势组和去势+雌激素组，每组各10只大鼠。 接受12h亮、12 h暗(12∶12)的循环光照射，光照强度（600.0±35.4） lx，共14次。所有 大鼠摘除 右眼球，测量视网膜外核层的厚度，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNE L）法检测视网膜外核层凋亡的感光细胞，免疫组织化学染色结合图像分析系统观察视网膜 一氧化氮合酶（NOS）的表达及分布。 结果：光照后去势组外核层薄于去 势+雌激素组。去势 组、去势+雌激素组外核层被TUNEL法标记的阳性凋亡细胞数分别为 (0.0275±0.0069)、 (0.0162±0.0054) 个/μm²，两组间差异有统计学意义（t=4.1370，P=0.0012）。去势组及去势+雌激素组视网膜内核层NOS阳性着色细胞的积分吸光度［A，旧称 光密度（OD）］值分别为0.3675±0.0662、0.2941±0.0350，两组间差异有统计学意义（t=3.4885，P =0.0031）。 结论：雌激素可通过调控NOS的合成、抑制感光细胞的凋 亡而对视网膜光损伤起保护作用。     

雄激素预处理对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠视神经和视网膜神经节细胞的影响

目的:观察雄激素预处理对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大 鼠视神经形态功 能和视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响。 方法:将雌性Wistar大鼠41只 随机分为正常组10只、未 用药对照组15只和雄激素组16只。正常组和未用药对照组每天以1％乙醇灌胃，雄激素组每 天以0.25 mg/kg甲睾酮灌胃。用药20 d后，未用药对照组和雄激素组注射0.4 ml完全弗 佐剂-豚鼠脊髓匀浆，并辅以注射百日咳疫苗诱导EAE模型。诱导前7 d，大鼠上丘和外侧膝状体 注射荧光金以逆行标记RGC。继续用药至诱导后14～30 d，取正常鼠 和出现症状48～72 h内的未用药对照组和雄激素组大鼠，应用光学显微镜和闪光视觉诱发电 位 （FVEP）观察其视神经形态和功能的变化；荧光显微镜下观察视网膜铺片并计数RGC；原位缺口末端标记法（TUNEL）观察RGC的调亡情况。 结果：诱导10d开始，E AE大鼠相继出现尾及后肢无力，麻痹等症状。与未用药对照组相比，雄激素组的发病潜伏期 延长（P=0.035），症状评分降低（P=0.042）。未用药对照组大鼠视神经纤维走 行纡曲呈波浪状，弥漫脱髓鞘 改变；雄激素组视神经纤维走行较规则，脱髓鞘改变不明显。FVEP显示与未用药对照组相比 ，雄激素组的N₁、P和N₂波潜伏期明显缩短（P＜0.05），N_1^-P和P-N₂振幅提高（P＜0.05）。正常组、未用药对照组和雄激素组RGC数分别为（2284±132）、 （934±78）、（1725±95）个/mm²，雄激素组RGC数较未用药对照组增多（P＝0.028）。正常组、未用药对照组和雄激素组TUNEL阳性细胞数分别为（4.02±0.16）、（24.44±2.22）、（9.84±2.36）个/高倍视野，雄激素组TU NEL阳性细胞数较未用药对照组明显减少（P＝0.025）。 结论:雄激素可降低EAE发病率和症状评分，抑制EAE鼠RGC的凋亡，减轻视神经脱髓鞘改变，改善视神经传导功能。     

褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨褪黑素(Mel)对过氧化氢(H202)氧化损伤的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞的保护作用及其作用机制.方法 实验研究.采用600μmoL/L H2O2建立体外培养的hRPE细胞氧化损伤模型.实验分为6组:溶剂对照组、600μmoL/L H2O2+溶剂组(H2O2损伤模型组)、600μmoL/L H2O2+10-7mol/L Mel组、600μmoL/L H2O2+10-6moL/L Mel组、600 μmol/L H2O2+10-5mol/L Mel组、600μmol/L H2O2+10-4moL/L Mel组.通过四甲基偶氮唑盐(MTT))法检测细胞活性;测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化损伤程度;分别用DNA Ladders电泳法和流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.溶剂对照组与600μmol/L H2O2组间均数比较采用随机区组设计的t检验;600μmol/L H2O2组以及600μmol/L H2O2+不同浓度Mel组间均数比较采用单因素5水平设计的方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 H2O2模型组较对照组细胞活性明显降低、SOD活件降低、MDA含量增加、凋亡率升高,差异均有统计学意义(t=2.25,39.50,68.42;P<0.05);Mel干预组较模型组细胞活性升高、SOD活性升高、MDA含最减少、凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05),并与药物浓度的变化呈正相关趋势.结论 Mel对H2O2诱导的RPE的氧化损伤具有保护作用,其机制可能与影响细胞活性、增强抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关.     

L-精氨酸和左旋-硝基精氨酸甲酯对纯化视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的 探讨L-精氨酸(L-arginine, L-Arg)和左旋-硝基精氨酸甲酯（L-nitro-arginine-methylester, L-NAME）对纯化培养的视网膜神经节细胞(retinal gangal cells, RGCs)凋亡的影响。 方法 同化培养液培养抗体纯化的Sprague-Dawley(SD)系大鼠RGCs；在纯化培养的RGCs中分组加入体积百分浓度为1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1 mol/L的L-Arg及L-NAME，培养24 h后检测各组培养上清液中硝酸盐含量、细胞的活性；培养 48 h后检测各组细胞的凋亡及细胞中bcl-2、bax及p53 mRNA的表达。 结果 培养上清液中硝酸盐含量随着L-Arg体积百分浓度的增高而增高，随着L-NAME体积百分浓度的升高而降低。低体积百分浓度时，随着L-Arg和L-NAME体积百分浓度的增加bcl-2 mRNA表达逐渐增高，bax及p53 mRNA的表达无明显变化。而高体积百分浓度时则相反。 结论 L-Arg低体积百分浓度时能促进RGCs的生长，高体积百分浓度时则促进细胞凋亡；L-NAME对L-Arg的毒害作用则起抑制作用。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 137-139)     

苏拉明对体外培养的人眼视网膜色素上皮 细胞增生抑制作用的时效性研究

目的观察苏拉明对体外培养的人眼视网膜色素上皮（RPE）细胞增生抑制作用的时效关系，了解它对RPE细胞的作用方式，进一步阐明其防治增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的优势。方法9块96孔细胞培养板，每块取12孔，其中实验组和对照组各6孔。2组各孔内均接种浓度为5×104个/ml的RPE细胞0.1 ml。换液后实验组加250 μg/ml苏拉明，对照组不加。4 d后2组均更换成正常培养液；在生物倒置显微镜下观察RPE细胞生长情况；分别于加药后1、2、4 d及撤药后1、2、3、5、7、9 d随机抽取1块培养板终止培养，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测同一培养板上两组RPE细胞增生情况。随机化区组 t 检验比较两组吸光度值的差异，计算细胞增生抑制率。结果倒置显微镜下，对照组RPE细胞在接种后第7天完全融合。实验组细胞间隙较对照组稍增大，接种13 d时细胞仍未融合。实验组RPE细胞加入苏拉明后第1天，增生抑制率为14.85%，第4天达最高25.79%；撤药后第1天下降到12.35%，然后逐渐又上升，到撤药后第3~5天达顶峰超过20%，之后逐渐回落，到第9天达14.71%。结论苏拉明对血清诱导的RPE细胞增生具有长时间的抑制作用，特别是在撤除药物后还能再次引起后抑制作用，整个过程呈现特殊的双峰型抑制效应。(中华眼底病杂志,2005,21:25-27)