川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。     

BSO逆转人肺腺癌细胞株多药耐药性的实验研究

目的研究谷胱甘肽(GSH)合成酶抑制剂——BSO对人肺腺癌多药耐药细胞株A549DDP细胞内GSH含量影响;探讨BSO逆转多药耐药(MDR)作用机制及逆转效果。方法GSH还原酶循环法测定BSO对细胞内GSH含量的影响。MTT比色法测定经BSO预处理后顺氯氨铂(DDP)、阿霉素(ADM)对细胞50%抑制浓度(IC50)的影响。流式细胞仪检测BSO对MDR细胞内柔红霉素(DNR)荧光强度的影响。结果耐药细胞A549DDP细胞内GSH含量较人肺腺癌A549细胞内GSH含量明显增高。BSO在一定浓度范围内(50～200μmol·L-1)对A549细胞和耐药细胞A549DDP无明显细胞毒性作用(抑制率均小于10%)。BSO呈剂量依赖性非线性抑制细胞内GSH的合成,其对MDR细胞内GSH合成影响较为显著,而对A549细胞内GSH合成影响较小。BSO在一定浓度范围内能降低DDP、ADM对A549DDP细胞的IC50,而对A549细胞的IC50无明显影响。A549DDP细胞内DNR荧光强度较A549细胞显著降低,能不同程度提高A549DDP细胞内柔红霉素荧光强度,均较未处理组显著提高;与未经BSO处理的A549细胞比较,细胞内荧光强度轻度增高,但统计学上无显著性差异。结论BSO能有效逆转A549DDP细胞的MDR,其机制与降低MDR细胞内GSH含量有关。     

P-gp与GST-π在鼻咽癌多药耐药细胞中的表达及其意义

目的比较P-糖蛋白(P-gp)与谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)在鼻咽癌细胞TW03及其多药耐药细胞TW03/DDP中的表达差异,进一步探讨鼻咽癌多药耐药的机制。方法制备鼻咽癌细胞TW03及其多药耐药细胞TW03/DDP的细胞爬片,利用免疫细胞化学技术,检测P-gp与GST-π在两种细胞中的表达情况。结果 GST-π在TW03/DDP中表达明显高于TW03(P<0.01),而P-gp在TW03/DDP中表达明显低于TW03(P<0.01)。结论 GST-π可能是TW03/DDP导致多药耐药中的重要原因之一,P-gp降低的原因需要进一步研究。     

补中益气汤协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预肺腺癌顺铂耐药性的分子机制研究

目的 探讨补中益气汤含药血清协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预A549/DDP细胞顺铂耐药性的分子机制研究。方法 采用siRNA干扰沉默β-catenin的表达,Western blot检测正常血清组、顺铂组、siCTNNB1-235组、siCTNNB1-510组、siCTNNB1-547组A549/DDP细胞的β-catenin蛋白的相对表达量;干扰β-catenin后,Western blot检测各组A549/DDP细胞β-catenin和Survivin的蛋白表达量,MTT法检测各组A549/DDP细胞对顺铂的IC₅₀,Annexin V/PI染色法检测各组A549/DDP细胞顺铂诱导的凋亡率。结果 相较于正常血清组（1.00）,siCTNNB1-235组（0.323±0.021）对β-catenin表达抑制率达67%（P=0.000）。RNAi技术沉默β-catenin后,与正常血清组（1.00）相比,补中益气汤联合顺铂组的Survivin（0.247±0.015）和β-catenin（0.257±0.015）蛋白的表达下调更为明显（P=0.000,P=0.000）。IC50和正常血清组（28.330±1.029） μmol/L相比,单独补中益气汤含药血清（20.350±1.155） μmol/L或单独瞬时转染siCTNNB1-235组（15.577±1.535） μmol/L均可降低A549/DDP细胞顺铂的IC₅₀（P=0.000,P=0.000）,2者联合（10.453±0.999） μmol/L使用可进一步降低顺铂的IC₅₀（P=0.000）。与正常血清组（9.130±0.384）%相比,瞬时转染siCTNNB1-235联合顺铂组（64.393±0.244）%和补中益气汤联合顺铂组（70.120±0.400）%的总凋亡率均升高（P=0.000,P=0.000）。结论 补中益气汤含药血清和瞬时转染siβ-catenin在抑制Wnt/β-catenin信号通路改善肺腺癌顺铂耐药性方面具有协同效应,且补中益气汤具有siβ-catenin瞬时转染样效应。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及耐药机制研究

目的：建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP,探讨其耐药的机制。方法：采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP;CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）检测各种抗癌药对COC1和COC1／DDP细胞增殖的抑制作用,并计算耐药指数;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果：历时5个月建立COC1／DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9．44;与COC1比较,COC1／DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降（P〈0．01）。结论：入卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP耐药性稳定,耐药机制可能与GSH／GST-π解毒系统活性增强,减少细胞内顺铂含量有关。     

补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究

目的从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择最佳含药血清的浓度。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5%和10%的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出最佳含药血清浓度,计算出最佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数。结果补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系。5%高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5%中剂量组和5%低剂量组,并与5%空白血清组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。10%各剂量组对A549/DDP的抑制率与10%空白血清组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。经筛选,10%中剂量含药血清作用48 h为最佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降（P〈0.05）,对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46。结论 10%中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用。     

TRAIL联合顺铂对胃癌多药耐药基因GST-π的影响

目的探讨肿癌坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)与顺铂联合应用对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药(MDR)基因谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂的抗癌活性并计算其亚毒性剂量IC10。流式细胞术检测TRAIL(200μg/L)及顺铂(亚毒性剂量)单用及联合应用后的细胞凋亡率。分别采用RT-PCR和ELISA法检测加药前后耐药基因GST-πmRNA及蛋白的表达情况。结果对照组、顺铂组、TRAIL组以及TRAIL顺铂联合用药组作用48 h后胃癌细胞凋亡率分别为2.69%、8.26%、9.71%和31.13%,与对照及单药组比较,联合用药组细胞凋亡明显升高(P<0.05)。RT-PCR和ELISA法结果显示,与单药组比较,联合用药组协同作用明显,多药耐药(MDR)基因GST-πmRNA和蛋白表达下降(P<0.05)。结论 TRAIL和顺铂联合应用能协同诱杀胃癌细胞,其机制可能是通过下调GST-π基因和蛋白表达,逆转或部分逆转MDR。     

β-Catenin信号转导通路在肺癌A549细胞顺铂耐药中的作用

目的建立肺癌A549顺铂多药耐药细胞株,研究肺癌耐药的机制。方法使用顺铂逐步增加剂量和间歇大剂量冲击相结合的方法诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;绘制A549和A549/DDP细胞生长曲线,观察二者的增殖速度变化;Western blotting实验显示A549和A549/DDP细胞之间Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β和β-Catenin蛋白的表达改变。结果经过30周的诱导我们建立了肺癌A549细胞的顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为(1.37±0.09)和(11.63±0.74)μmol/L,与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂耐药8.47倍,生长曲线结果显示A549/DDP细胞的增殖速度与A549细胞没有显著性差异;Western blotting的结果显示A549/DDP细胞的Akt磷酸化水平升高,抑制了下游GSK-3β的活性,导致了细胞内β-Catenin蛋白的上调。结论建立了肺癌A549顺铂多药耐药细胞系A549/DDP,A549/DDP细胞中β-Catenin通路的激活与其耐药性的形成有一定的相关性。     

芹菜素逆转肺癌A549/DDP细胞耐药及机制

目的：研究芹菜素对肺癌A549/DDP细胞的作用,探讨芹菜素逆转肺癌耐药的作用及机制。方法：体外培养肿瘤细胞,以不同浓度芹菜素作用为实验组,用MTT法检测A549/DDP细胞增殖和分析药物敏感性,用Rhodamine-123潴留实验检测A549/DDP细胞内药物外排情况,用Western blot法检测肿瘤细胞内P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp)和肺耐药蛋白(lung resistance-related protein,LRP)表达情况,用RT-PCR法检测肿瘤细胞内多药耐药基因（multidrug resistance gene l,MDR1）mRNA和LRP mRNA的转录情况。结果：与DDP组相比,20、40、80 μmol/L的芹菜素明显抑制了A549/DDP细胞生长增殖（P＜0.05）。DDP对A549/DDP细胞的IC50为(14.33±0.41) μg/mL,在芹菜素作用下其IC50降为(5.76±0.36) μg/mL,逆转倍数为2.48,两者相比有统计学差异（P＜0.05）。芹菜素作用下,A549/DDP细胞内的Rhodamine-123蓄积增加,细胞内P-gp表达减弱,MDR1 mRNA转录水平下降,对LRP表达及LRP mRNA转录无明显改变。结论：芹菜素对A549/DDP细胞生长有抑制作用;芹菜素还具有逆转A549/DDP细胞肿瘤耐药的功能,其机制与降低MDR1 mRNA转录和下调P-gp介导的药物外转功能有关。     

不同剂量环磷酰胺对肺癌裸鼠移植瘤耐药的影响

目的 研究不同剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对裸鼠 A549 肺腺癌移植瘤耐药情况的影响,同时观察其抑瘤效果和毒副作用.方法 建立荷 A549 肺癌的 BALB/c裸小鼠模型,分别给予不同剂量 CTX 腹腔注射干预,观察肿瘤体积、小鼠体质量和毒副作用.免疫组化检测移植瘤组织中GST-π和LRP的表达情况.结果 小剂量、高频率 CTX治疗组用药初期肿瘤生长较快,后逐渐延缓,且在较长一段时间内肿瘤生长缓慢;大剂量 CTX治疗组用药初期肿瘤生长较慢,后生长加快.从化疗副作用来看:小剂量、高频率 CTX治疗组裸鼠无明显体质量减轻及行动迟缓、反应迟钝、精神食欲差等毒副反应,大剂量 CTX治疗组则毒副反应较明显.免疫组化结果示:小剂量、高频率CTX治疗组与对照组相比 GST-π和 LRP 表达程度稍强(P》0.05);大剂量组与对照组相比 GST-π和 LRP表达程度均明显增强(P＜0.01);大剂量组与小剂量、高频率组相比 GST-π和 LRP 表达增强(P＜0.05).结论 CTX 小剂量、高频率的给药模式不易产生获得性耐药,与传统的大剂量给药模式相比,小剂量、高频率的给药模式能够更显著、持久地抑制肿瘤增长,且毒副反应小,裸鼠耐受性好.     

EGCG对肺癌A549/DDP细胞药物敏感性的影响及机制

目的探讨EGCG对肺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂敏感性的影响及作用机制。方法MTT法检测EGCG对A549/DDP细胞药物敏感性的影响。AO/EB染色法检测EGCG联合顺铂处理A549/DDP细胞前后凋亡的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot方法观察EGCG作用前后耐药蛋白GST-π、Survivin表达的变化。结果MTT比色法显示20、40、60μg/mL EGCG均可增加细胞对顺铂的敏感性;荧光显微镜下观察到EGCG处理后细胞体积缩小,核固缩,呈典型的凋亡形态学改变;Western Blot方法检测发现,不同浓度的EGCG处理细胞24 h后GST-π、Survivin蛋白表达均下调。流式细胞术显示,20、40、60μg/mL EGCG联合顺铂处理细胞24 h后,凋亡率逐渐增加,说明EGCG联合顺铂能够促进肺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。结论EGCG能够增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与降低GST-π、Survivin蛋白表达从而诱导细胞凋亡有关。     

非离子表面活性剂对肿瘤细胞多药耐药性逆转的实验研究

目的探讨非离子表面活性剂聚氧乙烯醚聚乙二醇300曲拉通X100对肺癌耐药细胞A549／DDP（顺铂）多药耐药性的逆转及其机制。方法用MTT法进行体外耐药逆转实验，荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度。结果合用非离子型表面活性剂前后，A549／DDP对化疗药物阿霉素、顺铂、丝裂霉素、5-FU、依托泊甙和长春新碱的敏感性均有显著性差异（各组都为P〈0．01）；三种非离子型表面活性剂都能显著增加耐药细胞内ADM浓度，实验组与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论三种非离子表面活性剂具有逆转A549／DDP耐药性的作用，逆转机制可能是改变细胞膜的流动性，抑制多药耐药相关膜蛋白的功能。     

Mifepristone对卵巢癌细胞的单己糖神经酰胺表达及耐药性的影响

目的研究单己糖神经酰胺在卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂耐药性中的作用,探索mifepristone对COC1/DDP细胞耐药性逆转的机制.方法将耐药细胞分为顺铂组、顺铂+mifepristone组,MTT方法检测各组细胞抑制率;采用改良的Hahomori方法分别提取、纯化耐药细胞COC1/DDP(用mifepristone处理前后)和敏感细胞COC1的中性鞘糖脂,高效薄层层析、凝胶光密度成像系统分析各组CMH的差异将耐药细胞分为三组顺铂组、mifepristone组、顺铂+mifepristone组,用透射电镜观察各组细胞的超微形态结构变化.结果mifepristone可以逆转COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,1.25μmol/L的mifepristone与浓度为(0.1～1.25)μg/ml的顺铂联合应用,使细胞的抑制率从单用上述浓度顺铂时的(8.84±6.29)%～(17..71±8.00)%上升为(15.26±6.75)%～(27.15±7.69)%(P＜0.001),且有剂量依赖性.耐药细胞的CMH表达率为(37.14±3.34)%,明显高于敏感细胞的(14.05±1.44)%(P＜0.001),耐药细胞经1.25μmol/L、5μmol/L mifepristone处理后,CMH分别下降到(26.62±2.63)%(P＜0.05)和(17.50±0.67)%(P＜0.001).顺铂和mifepristone联合作用,透射电镜观察到耐药细胞出现异染色质浓缩、边聚,产生了凋亡小体.结论mifepristone在较低浓度即可逆转卵巢癌细胞COC1/DDP对顺铂的耐药性,其增敏机制可能与抑制单己糖神经酰胺的表达、促进细胞凋亡相关.     

补肺消积方逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的实验研究

目的观察补肺消积方对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐药逆转的影响。方法用补肺消积方含药血清高、中、低剂量干预人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP,用噻唑蓝(MTT)法检测干预后不同时间(12h、24h、48h)的肺腺癌细胞。结果补肺消积方含药血清组和空白组比较,OD值降低(P0.05),细胞生长抑制率升高(P0.05),半效抑制浓度(IC50)降低(P0.05),耐药指数降低(P0.05),以高剂量含药血清组24h及48h作用明显。结论补肺消积方含药血清能有效逆转肺腺癌A549/DDP细胞耐药。     

P-gp,LRP和GST-π在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后的关系

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者中耐药基因P-糖蛋白(P-gp),肺耐药相关蛋白(LRP)和谷胱苷肽-S转移酶(GST-π)的表达特点及对预后的影响.方法:用免疫组化方法检测168例非小细胞肺癌组织中的P-gp,LRP及GST-π表达情况并随访部分患者以研究其表达与预后的相关性.结果:在168例非小细胞肺癌患者中,P-gp,LRP和GST-π表达的阳性率分别为60.7%,64.03%和63.1%.P-gp和LRP与肿瘤组织类型有关,腺癌阳性率高于鳞癌(P<0.05);这3种耐药基因与病变大小相关,病变直径≥5 cm患者中,其阳性率高于直径<5 cm患者(P<0.05);有淋巴结转移患者P-gp和LRP的阳性表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05);P-gp,LRP和GST-π表达为阴性患者2 a生存率高于阳性患者(P<0.05);三种耐药基因的表达与分化程度和年龄无关.结论:P-gP,LRP和GST-π的表达不仅与非小细胞肺癌的耐药情况有关,同时也可作为判断非小细胞肺癌患者预后的指标之一.耐药基因在非小细胞肺癌中的表达程度及特点不同,因而有必要对其进行联合检测以判断耐药及预后情况.     

肝癌、肺癌、胃癌患者血清GST-π含量的测定及其临床意义

采用Guesdon法制备出生物素化兔抗人GST-π抗体(B-IgG)。以生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(BA-ELISA)测定了肝癌、肺癌、胃癌患者血清和胎儿脐带血血清中的GST-π含量。测定结果,肝癌、肺癌、胃癌患者血清中GST-π含量分别为7.25±6.47ng/ml,4.3±1.85ng/ml,3.74±2.25ng/ml,比正常人的1.16+0.81ng/ml均显著升高,胎儿脐带血血清中GST-π含量为1.14±0.88ng/ml,与正常人相比无明显差异。故认为,血清中GST-π很有可能成为肝癌、肺癌、胃癌的一个肿瘤标志。     

多药耐药相关蛋白在卵巢上皮癌的表达及其临床意义

目的 探讨多药耐药相关蛋白在不同卵巢上皮癌组织中的表达及与卵巢上皮癌化疗效果的关系.方法 采用SP免疫组化方法联合检测多药耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、谷胱苷肽-S-转移酶-7π(GST-π)、肺耐药相关蛋白(LRP)等在36例卵巢上皮癌组织中的表达情况,取同期卵巢良性肿瘤及交界性肿瘤各10例作为对照组.结果 卵巢上皮癌组织P-gp、GST-π和LRP阳性表达率与良性和交界性肿瘤之间比较差异均有统计学意义(均P0.05).P-gp和LRP在卵巢上皮癌组织中的阳性表达率随其临床分期及病理分级的升高而升高(P<0.01);GST-π的阳性表达率在临床分期Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ一Ⅳ期之间比较差异有统计学意义(P<0.01),但在病理分级G1、G2与G3之间比较差异无统计学意义(P>0.05).P-gp、GST-π和LRP在卵巢上皮癌的阳性表达率与化疗疗效呈负相关(P相似文献   

罗非昔布对胃癌细胞BGC-823内在耐药的逆转作用

目的探讨罗非昔布和抗癌药5-氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（DDP）和依托泊甙（VP-16）联用抗胃癌细胞株BGC-823的疗效及多药耐药（multidrug resistance gene,MDR）相关基因上的机制。方法0.1μmol/L罗非昔布单用和与不同浓度梯度化疗药5-FU、DDP及VP-16联合应用于胃癌细胞株BGC-823 48 h,MTT法检测各自的抑制率,中效原理评价用药的协同作用;以0.1μmol/L、1.0μmol/L和10μmol/L罗非昔布干预胃癌细胞48 h,RT-PCR观察用药前后多药耐药相关基因变化情况。结果抗癌药与罗非昔布联用同罗非昔布单用或抗癌药单用比较,联合治疗组协同作用明显（均P〈0.01）。RT-PCR显示,胃癌细胞株BGC-823多药耐药相关蛋白（multidrug-associatedprotein,MRP）和谷光甘肽-S-转移酶π（glutathione-S-transferasesπ,GST-π）基因表达,无MDR1表达;罗非昔布干预以后,MRP和GST-π均有不同程度的下降（均P〈0.05）。结论罗非昔布可协同抗癌药抗胃癌细胞BGC-823。其协同抗癌机制为逆转或部分逆转MDR现象,是较好的化疗增敏剂。     

补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌A549/DDP耐药细胞内药物浓度的影响

探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内DDP浓度的作用 ,选择人肺腺癌耐药细胞株A5 4 9/DDP为模型 ,采用荷瘤动物血清药理及流式细胞法 ,结果补肾化瘀解毒方荷瘤动物含药血清能显著提高肺癌A5 4 9/DDP耐药细胞内DDP浓度 (P <0 .0 5 ) ,与正常动物含药血清无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,表明补肾化瘀解毒方含药血清能提高肺癌耐药细胞内化疗药物浓度 ,对探讨补肾化瘀解毒方逆转肺癌耐药性具有重要作用。