一种新的淋巴细胞亚群流式细胞检测方法的建立

目的 根据流式细胞仪的结构和原理,结合淋巴细胞亚群表面抗原的分布特点,设计新的流式细胞检测荧光抗体标记组合方案,以简化操作步骤,减少操作失误,降低试验成本.方法 在组合方案CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PE-Cy5中加入CD19-FITC,则PE-Cy5和FITC双阳性细胞为CD4+T淋巴细胞,PE-Cy5阴...     

带状疱疹患者外周血T淋巴细胞亚群分析

带状疱疹患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群分析李大宁，余红上海第二医科大学附属新华医院皮肤科上海２０００９２带状疤疹是一种由水痘一带状疱疹病毒（ＶＺＶ）感染引起的疾病，机体对ＶＺＶ的特异性免疫目前认为主要是细胞免疫。本文采用流式细胞仪（ＦＣＭ）技术测定带状疤疹...     

应用四色荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨四色荧光标记流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后外周血淋巴细胞亚群:辅助性T淋巴细胞(CD4 ),抑制性和细胞毒T淋巴细胞(CD8 ),B淋巴细胞(CD19 ),NK(CD16 CD56 ) 细胞的绝对数和百分率等的变化.方法 收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂对照组,采用四色荧光标记流式细胞术对服用云芝丹参胶囊后的鼻咽癌患者外周抗凝全血的淋巴细胞亚群CD4 细胞、CD8 细胞、B细胞、NK细胞进行绝对计数和相对计数,并对两组结果进行比较分析.结果 四色荧光标记流式细胞术结果显示:接受放射治疗的鼻咽癌患者在服用云芝丹参胶囊16周后,外周血T淋巴细胞的绝对数和百分率,以及Ts、Th细胞绝对数的下降均明显低于安慰剂组(P＜0.05);中药组和安慰剂组NK细胞百分率的变化均显著增高(P＜0.05); 但两组NK细胞绝对值的变化不存在明显差异(P＞0.05).结论 云芝丹参能明显减轻放射治疗对鼻咽癌患者的淋巴毒性.     

丙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

丙型肝炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化李灼亮，郑茉莉，谢庆，涂荫国，黄振国空军广州医院传染病科广州５１０６０２一般认为［１～４］慢性乙型肝炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化，可反映患者全身免疫状态，ＣＤ８＋细胞显著升高，ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值下降，可能...     

肺癌患者手术前后外周血T细胞亚群的变化

肺癌是我国常见的恶性肿瘤,是严重危害人类生命健康的主要疾病之一。目前肺癌的治疗手段仍以手术为主,因而研究肺癌患者手术前后机体细胞免疫功能的变化有着重要的临床意义。目前有研究发现,恶性肿瘤的形成和发展与宿主的细胞免疫功能密切相关。恶性肿瘤患者常存在机体免疫平衡失调,且以细胞免疫功能为主,表现为外周血T淋巴细胞的抑     

肾小球疾病患者外周血T淋巴细胞亚群的观察

细胞免疫在肾小球肾炎的发生发展过程中发挥着重要的作用[1] ,但慢性肾小球肾炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群在临床上尚无一致的结论[2 ] ,可能与运用不同的检测方法有一定关系。本文运用流式细胞仪 ,检测肾病患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群 ,藉以探讨对二者之间的关系。1　临床资料共检 15 4例 ,年龄 14～ 78岁 ,中位数 38岁。慢性肾炎41例 ,肾病综合征 44例 ,慢性肾衰 (原发性肾小球 ) 5 4例 ,狼疮性肾炎 (ＬＮ ) 7例 ,紫癜性肾炎 8例。另外 ,根据血浆白蛋白情况将肾病综合征分为白蛋白 >2 5ｇ/Ｌ组 (Ａ组 )和白蛋白 <2 5ｇ/Ｌ组 (Ｂ组 ) ,Ａ组血…     

肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群变化特点及临床意义

目的:探讨肺癌患者外周血T淋巴细胞变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测法检测56例肺癌患者(其中20例早中期肺癌、36例晚期肺癌);18例健康人群外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中总T细胞(CD3+)、Th细胞(CD3+CD4+)、Tc细胞(CD3+CD8+)、NKT细胞(CD3+CD16+CD56+)、NK细胞(CD3-CD16+CD56+)、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+)占CD4+T细胞比例和CD3+γδT细胞比例。结果:56例肺癌患者总T细胞(CD3+)比例明显低于健康组(61.41%±7.88%vs71.63%±5.59%,P0.001),肺癌患者Tc细胞比例明显低于健康组(23.58%±7.18%vs28.44%±5.20%,P0.05),肺癌患者Treg比例明显高于健康组(6.20%±1.63%vs3.65%±2.00%,P0.001);肿瘤组外周血CD3+γδT细胞比例显著低于健康组(3.35%±1.41%vs5.53%±1.87%,P0.01)。但肺癌患者晚期组与肺癌早中期组比较外周血CD3+γδT细胞比例显著增高(3.70%±1.89%vs2.64%±1.41%,P0.05),肺癌患者晚期组与早中期组比较外周血Treg细胞比较显著增高(6.78%±2.64%vs5.06%±1.22%,P0.05)。肺癌患者外周血中NK细胞低于健康组(15.02%±7.61%vs18.74%±6.39%,P0.05),而Th细胞和NKT细胞都有所降低,但差异尚不具统计学意义(P0.05)。结论:肺癌患者总T细胞、Th细胞、Tc细胞和NK细胞都有所降低,Treg细胞有所上升,提示肺癌患者处于免疫抑制状态。Treg细胞和CD3+γδT细胞与肺癌的临床病程具有一定的关联性。     

白血病患者外周血T淋巴细胞亚群和SOD水平

据文献报告[1] ,超氧化物歧化酶与肿瘤的关系颇受临床的关注。而有关白血病患者ＳＯＤ水平与Ｔ淋巴细胞亚群水平的报道不多 ,为此我们进行了探讨 ,旨在了解白血病患者的免疫功能的变化 ,现报道如下。对象和方法一、对象 :(一 )正常人 :35人。均为我院预防保健科体检合格的健康人 ,无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患 ,肝、肾功能试验正常 ,无血液病史。(二 )病人组 :32人。均为临床、血常规、骨髓像、常规组织化学染色检查确诊。其中急性非淋巴细胞性白血病 12例 ,Ｍ14例、Ｍ2 6例、Ｍ52例 ,急性淋巴细胞白血病 2 0例 ,Ｌ16例、Ｌ2 9例、Ｌ35例…     

T淋巴细胞在不同类型白血病患者外周血中的变化

目的通过对不同类型白血病患者外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的检测以评价不同类型白血病患者的细胞免疫功能。方法采用流式细胞术检测200例不同类型白血病患者和52例健康志愿者外周血T细胞亚群的水平。结果与正常对照组相比,急性白血病和慢性白血病患者的CD4+/CD8+比值都是下调的(P<0.05);急性白血病患者(包括急淋和急粒)的CD3+、CD8+细胞水平是上升的,且急淋患者还伴随着CD4+细胞的降低(P<0.05);慢性白血病患者的CD3+、CD4+细胞水平是下调的,其中慢淋患者的CD3+细胞下调更为显著,而慢粒患者则是以CD8+细胞增高为主(P<0.05)。结论不同类型白血病患者外周血T淋巴细胞均存在免疫异常,且具有不同异常方式,对指导治疗及疗效观察有一定的临床意义。     

基因修饰树突状细胞诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群重排的研究

目的探讨以腺相关病毒（AAV）为载体,前列腺特异性抗原（PSA）基因转染树突状细胞（DC）诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群变化特点及临床意义。方法抽取30例前列腺癌患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,以rAAV/PSA感染DC前体细胞,采用系列细胞因子诱导DC前体细胞成熟。第6天收集成熟DC并与T细胞按比例混合培养,诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。分别于DC与T细胞混合培养前后应用流式细胞术分析外周血T细胞亚群及调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg）的表达水平。结果 PSA基因转染DC刺激T淋巴细胞爆发增殖,与培养前比较,混合培养6d后CD8^＋、CD8^＋CD69^＋、CD8^＋CD28^＋T细胞的比例和CD8^＋/CD4^＋比值均明显增高,差异有统计学意义（P〈0.01）;而CD8＋CD28-T细胞和Treg细胞的比例均显著降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。CD4^＋T细胞比例较前略有升高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PSA基因转染DC能够有效地激活CD8＋抗原特异性CTL,下调免疫抑制性T细胞,提高患者的细胞免疫功能,为前列腺癌的免疫治疗提供新的有效策略。     

类风湿性关节炎患者2H4+T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析

了解类风湿性关节炎患者免疫功能的异常变化，探讨其发病机制。方法，使用间接免疫荧光和直接免疫荧光方法对１１例ＲＡ患者和１２例健康人的外周血Ｔ淋巴细胞进行了研究。结果：ＲＡ患者与对照组比较ＣＤ３＾＋Ｔ细胞和ＣＤ＾＋４Ｔ细胞地明显变化，ＣＤ８＾＋Ｔ细胞明显减少，     

甲真菌病患者外周血淋巴细胞免疫表型的分析

目的 探讨甲真菌病患者外周血淋巴细胞免疫表型的情况.方法 应用流式细胞仪对24例甲真菌病患者及20例健康人的外周血淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞进行测定与分析.结果 甲真菌患者外周血CD8+淋巴细胞明显高于健康对照组(P<0.05),而CD3+细胞,CD4+细胞,CD4+/CD8+、CD19+细胞、CD16+CD 56+细胞与对照组变化不明显.结论 甲真菌患者存在着一定程度的细胞免疫异常,以CD8+细胞介导的免疫反应占主要地位.     

特发性血小板减少性紫癜患者T细胞及B细胞亚群变化的研究

目的 探讨特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者T、B淋巴细胞亚群的变化.方法 从大理州人民医院收集ITP患者和健康者的外周血,用Sysmex血液分析仪及流式细胞术分析T细胞及B细胞亚群.结果 与健康人群比较,ITP患者CD3+T细胞百分率无明显变化,CD4+T细胞百分率降低(42.39％±12.12％,P＜0.05),CD8+T细胞百分率升高(46.93％±11.99％,P＜0.05);CD19+B细胞百分率升高(14.11％±10.28％,P＜0.05),T2B细胞百分率(34.51％±9,70％,P＜0.05)、成熟B细胞百分率(30.91％±7.12％,P＜0.05)及记忆性B细胞百分率(23.31％±8.23％,P＜0.05)增多,差异均有统计学意义.ITP患者T1 B细胞、Kappa+B细胞、Lambda+B细胞百分率与健康人差异无统计学意义.结论 ITP患者外周血T细胞亚群和B细胞亚群分布发生了变化,这种变化在ITP发病中的作用尚需进一步研究.     

Effects of moderate and severe malnutrition in rats on splenic T lymphocyte subsets and activation assessed by flow cytometry

Malnutrition is distributed widely throughout the world and is a particular problem in developing countries. Laboratory animals have been very useful in studying the effects of varying levels of malnutrition because non-nutritional factors that affect humans may be controlled. The objective of the present study was to determine the effects of moderate and severe malnutrition on lymphocyte proportions and activation markers of T cells in experimentally malnourished rats during lactation by flow cytometry. Lower absolute (total) and relative (%) numbers of CD3+ and CD4+ lymphocyte subpopulations were observed in moderately (second degree) and severely (third degree) malnourished rats compared with well-nourished rats (P < 0.05). Both groups of malnourished rats showed a significant decrease in the percentage of CD71+ cells at 24 h post-activation with phytohaemagglutinin (PHA). After 24 h activation of spleen cells with PHA, a lower percentage of CD25+ cells was observed in malnourished than well-nourished rats (P < 0.05). In conclusion, the results of this study indicated an altered expression of CD71 and CD25 during activation of T lymphocytes in malnourished rats and may partially explain increased susceptibility to infection associated with malnutrition. Moreover, these results demonstrated that moderate malnutrition affects the response of T lymphocytes as much as severe malnutrition.     

多发性硬化患者外周血记忆性T细胞亚群的研究

目的：近来研究表明中心记忆性和效应记忆性T细胞构成记忆性T细胞的两个亚群，但在多发性硬化（Multiple sclerosis，MS）中的作用尚不清楚，因此测定了MS患者外周血记忆性T细胞亚群的水平，并进一步探讨了可能导致记忆性T细胞亚群变化的机制。方法：采用流式细胞仪和酶联免疫吸附分析（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）分别检测未治疗MS、正常对照组外周血记忆性T细胞亚群的阳性率和血浆IL-15浓度。进一步根据MS临床表现分为复发-缓解型MS（Relapse-remission MS，RRMS）和慢性进展型MS（Chronic progressiveMS，CPMS）两个亚组。结果：与正常对照比较，在CD8^＋T细胞亚群中，MS患者中心记忆性T细胞（Central memory T cell，TCM）、终末效应记忆性T细胞明显增多和减少（P〈0．05和P〈0．01），RRMS患者终末效应记忆性T细胞明显少于正常对照（P〈0．05）；MS患者血浆IL-15水平较正常对照明显升高（P〈0．05）。结论：研究显示了Ms患者中CD8^＋T CM上调，可能反映了在MS早期被诱导产生的一个持续慢性炎性应答，我们推测CD8^＋T CM的异常改变可能在维持MS慢性炎症的过程中起着重要作用，而IL-15则可能参与了促进TCM分化的调节过程。     

Detection of Mycobacterium-specific interferon-gamma-producing human T lymphocytes by flow cytometry

Flow cytometry has proven to be a useful tool for the investigation of cytokine synthesis by selected cell subpopulations. While most reports have used mitogen stimulation or long-term cultures with antigen, we describe here a novel method to allow the detection of rare mycobacterial antigen-specific cytokine synthesizing cells within one day. The most important feature of this method is the use of an FITC-conjugated isotype-matched control antibody to identify and exclude cells which fluoresce non-specifically. With this technique, we demonstrate interferon-gamma (IFN-gamma) staining in 785 cells per 1 x 10(5) T cells counted, in mycobacterial antigen-stimulated peripheral blood mononuclear cells from a BCG-vaccinated subject. In comparison, only 14 IFN-gamma-staining T cells were seen in the cultures not stimulated by mycobacterial antigen. Less than 10 cells per 1 x 10(5) T cells are stained by an irrelevant control antibody. Specific responses are detectable after 12 h of in vitro culture, and peak at 24 h. In volunteer health care workers, IFN-gamma staining correlated with IFN-gamma production using a published ELISPOT assay (r=0.927). IFN-gamma staining was also higher in PBMC from mantoux skin test-positive volunteers, compared to cells from skin test-negative subjects (p=0.0045). Flow cytometry following short-term culture can thus be used for enumeration of antigen-specific IFN-gamma synthesizing cells.     

腰椎间盘退变性疾病与外周血淋巴细胞亚群的关系

文题释义：淋巴细胞亚群：淋巴细胞是白细胞的一种,是机体免疫应答功能的重要细胞成分,是淋巴系统几乎全部免疫功能的主要执行者,占外周血白细胞总数的20%-40%,按其发生迁移、表面分子和功能的不同,主要分成T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞三大类。 自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)：是机体重要的免疫细胞,不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关,而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。 背景：既往研究认为椎间盘退变的主要原因为遗传、衰老、营养不良和负荷史,免疫系统在椎间盘退变过程中的作用尚不清楚。 目的：观察腰椎间盘退变患者外周血淋巴细胞亚群的变化,并研究腰椎间盘退变程度与外周血各淋巴细胞亚群的关系。 方法：收集76例腰椎间盘退变性疾病患者和56例健康志愿者(对照组)的血样,用流式细胞仪检测外周血各淋巴细胞亚群,包括CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD19⁺B细胞、CD3^-CD16⁺CD56⁺自然杀伤细胞等淋巴细胞亚群的百分率,计算CD4⁺/CD8⁺比值。采用Pfirrmann分级标准评估2组腰椎间盘退变程度和分级,进一步评估外周血各淋巴细胞亚群与腰椎间盘退变程度的相关性。研究经郑州大学第一附属医院伦理审查委员会批准(伦理批号：2019-KY-285),所有受试者都签署了知情同意书。 结果与结论：①腰椎间盘退变性疾病组的腰椎间盘退变程度明显高于对照组(P < 0.05);②腰椎间盘退变性疾病组CD4⁺T细胞百分率、自然杀伤细胞百分率和CD4⁺/CD8⁺比值明显高于对照组(P < 0.05);腰椎间盘退变性疾病组CD8⁺T细胞百分率较对照组显著降低(P < 0.05);③对照组腰椎间盘退变程度与外周血各淋巴细胞亚群无相关性;腰椎间盘退变性疾病组腰椎间盘退变程度与CD4⁺ T细胞百分率、CD4⁺/CD8⁺比值、自然杀伤细胞百分率成线性正相关(r =0.412,P=0.000;r=0.715,P=0.000;r=0.494,P=0.000),与CD8⁺ T细胞百分率成线性负相关(r=-0.737,P=0.000);④结果表明,腰椎间盘发生退行性改变可能与外周血各淋巴细胞亚群改变有关,且CD4⁺T细胞增多、自然杀伤细胞增多以及CD4⁺/CD8⁺比值增高可能加速腰椎间盘退变。提示,免疫系统改变预示腰椎间盘退变发生的可能,其有望成为腰椎间盘退变性疾病的防治靶点。 ORCID: 0000-0002-8087-2356(冯阳) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程