干血滤纸片法测定17-羟孕酮及临床应用

先天性肾上腺皮质增生症 (ＣＡＨ)是小儿遗传代谢病中一种危害严重的疾病 ,其中约 90 %～ 95 %因 2 1 羟化酶缺陷所致。血 17 羟孕酮 (17 ＯＨＰ)水平的测定是ＣＡＨ诊断和疗效评估的一个重要指标[1,2 ] 。本研究报告建立干血滤纸片测定 17 ＯＨＰ的酶免疫吸附试验法 (ＥＬＩＳＡ)及其在治疗ＣＡＨ时的监测结果。一、材料和方法1.对象 :本院儿科内分泌专科门诊随访的ＣＡＨ患儿 39例 ,均为 2 1 羟化酶缺乏症。其中随访和系统治疗患者 31例 ,男 18例 ,女 13例 ,诊断时年龄为 0 .1～ 8.5岁 ;失盐型 13例 ,非失盐型 18例。除失盐型在新生儿期有…     

时间分辨荧光免疫分析法检测干血滤纸片17α-羟孕酮的影响因素分析

目的分析时间分辨荧光免疫分析法(TrFIA)检测干血滤纸片17α-羟孕酮(17α-OHP)的影响因素并提出对策,以提高新生儿先天性肾上腺皮质增生症(CAH)的筛查质量。方法将干血滤纸片标本分别按抗血清和铕示踪剂的加样量(150μL、110μL、100μL、90μL、50μL)分5组,采用TrFIA法测定干血滤纸片17α-OHP的浓度;比较58孔微孔板底部去除水汽前、后的17α-OHP浓度;比较30例干血斑不同取样部位(中央和边缘)的17α-OHP浓度。结果抗血清和铕示踪剂的加样量对测定结果的影响与100μL组比较,差异有统计学意义(P<0.01);微孔板底部水汽存在与否对检测结果的影响有统计学意义(P<0.01);取样部位(中央和边缘)对测定结果影响不大,差异无统计学意义(P>0.05)。结论新生儿CAH筛查试验时应保证试剂加样量准确,微孔板底部干燥。     

细胞酶联免疫吸附试验

免疫细胞表面表达有多种抗原或受体 ,如各种ＣＤ系列分子等 ,有的可作为临床实验室检定Ｔ、Ｂ细胞和ＣＤ细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志 ,或用以研究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化 ,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制 ,等等。现有一些检测上述分子的方法 ,如免疫细胞化学法 ,荧光免疫染色法等。以流式细胞仪检测法 (ＦＡＣＳ)最为简便可靠 ,且能定量 ,缺点是需要贵重的仪器和成套的试剂 ,费用高。从方法学角度分析 ,还有几个问题限制了ＦＡＣＳ的广泛应用 ,如受检细胞为粘附性细胞时需要胰酶处理 ,因而可能破坏某…     

细胞酶联免疫吸附试验

免疫细胞表面表达有多种抗原或受体,如各种CD系列分子等,有的可作为临床实验室检定T、B细胞和CD细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志,或用以研究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制,等等.     

斑点酶联免疫吸附试验检测伤寒沙门菌特异性抗体

为提高伤寒沙门菌抗体检测的敏感性和特异性，我们用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）测定伤寒沙门菌包膜抗原Ｖｉ，菌体抗原Ｏ９和鞭毛抗原Ｈｄ的特异性抗体，并与肥达反应相比较，效果满意，报告如下。１　材料与方法１．１　研究对象　血培养检出伤寒沙门菌患者血清１４例，双份血清肥达反应效价升高４倍以上的伤寒患者血清２例，疑似伤寒发热病人血清２０例，非伤寒发热病人血清４０例，健康对照血清４０例。１．２　试剂１．２．１　羊抗人辣根过氧化物酶标抗体　购自华美生物工程公司。１．２．２　沙门菌属诊断血清　购自…     

酶联免疫吸附试验测定α1-酸性糖蛋白

为了建立α１－酸性糖蛋白测定方法。以α１－酸性糖蛋白纯品免疫家兔，得抗α１－酸性糖蛋白抗体，用双抗体夹心酶联免疫吸附技术测定血清及体液α１－酸性糖蛋白。方法线性为０．０５～５ｍｇ／Ｌ，批内变异系数平均为５．６％，批间变异系数平均为９％，平均回收率为１０３％。该方法操作简便，测定只需５０分钟，可用于血清和体液α１－酸性糖蛋白的临床常规测定     

酶联免疫吸附试验应用体会

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测已被确认为乙型肝炎(HBV)感染的实用指标之一。对抗 HBc(乙型肝炎核心抗体)的检测是更为灵敏的乙型肝炎病寿复制的重要指标。我们采用酶联免疫吸附试验(ELiSA)检测抗 HBc 提高了乙型肝炎的诊断率。特别是对 HBsAg 阴性检测抗 HBc 意义更大。材料及实验结果     

酶联免疫吸附试验的再认识

将待测抗原或抗体先包被于固相载体表面,再用标记有酶的抗原或抗体与固相载体的相应抗体或抗原发生特异性反应,加入酶底物及色原后显色,,显色程度与待测抗原或抗体量呈相关性［1］,这就是酶联免疫吸附试验（ELISA）的基本原理。该试验虽然操作简便,特异性、敏感性也较好,广泛应用于实验室常规检测中,但由于很多因素都会影响试验结果。故有必要对ELISA 进行再认识。     

斑点—酶联免疫吸附法检测幽门螺杆菌抗体IgG及其临床意义

以幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ，ＨＰ）超声粉碎物作包被抗原，以硝酸纤维素膜为载体，借助于酶标ＳＰＡ建立了检测ＨＰ ＩｇＧ抗体的斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。并用此法对１８例慢性胃炎、消化性溃疡患者（患者组），１９例儿童（儿童组）和２２例正常成人（成人组）进行了血清中ＨＰ ＩｇＧ抗体的测定。结果显示，患者组抗体检出率为７２．２％，与快速尿素酶法相比，符合率为８３     

酶联免疫吸附试验测定中3个关键步骤

临床酶联免疫吸附试验（ELISA）测定通常是以微孔板为固相的测定模式,测定操作一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、显色、比色、结果判断等方面,任何一个环节不当操作都会影响测定结果,尤以加样、温育、洗板更显重要,笔者就临床ELISA测定中这3个步骤作如下分析。     

血清新喋呤的酶联免疫吸附法测定

目的建立血清新喋呤的酶免疫测定方法，并确定血清新喋呤的正常范围。方法通过碳二亚胺将新喋呤分别与牛血清白蛋白、鸡白蛋白连接制成新喋呤蛋白质交联物，用新喋呤牛血清白蛋白交联物免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，通过细胞融合筛选出产生抗新喋呤的单克隆抗体，并采用该单克隆抗体建立了血清新喋呤的酶联免疫吸附竞争抑制法。结果４１２例献血员（正常组）血清新喋呤为５２±２２μｇ／Ｌ（ｘ±ｓ），４９例消化道恶性肿瘤为１４８±１０５μｇ／Ｌ（ｘ±ｓ），２１例皮肌炎为１６３±１１４μｇ／Ｌ（ｘ±ｓ）。ｔ检验表明，采用酶联免疫吸附法测定，消化道恶性肿瘤组、皮肌炎组的血清新喋呤与正常组比较Ｐ值均＜０．００１。本方法检测的批内变异系数（ＣＶ）为００３６３，批间ＣＶ为００９１７。结论本法操作简便、方法敏感、正常值范围明确、重复性好，可用于临床研究     

用酶联免疫吸附试验检测腺病毒

从临床标本分离腺病毒,最早用的一种方法是组织培养,虽此法敏感,但从接种标本到出现细胞病变(CPE)的时间较长,而且不恒定。一般认为CPE出现的速度与感染的病毒量或腺病毒的型别有关。标本中病毒量少时,CPE将长达28天才出现,最后还须用补体结合试验或免疫荧光方法鉴定。这两种方法均可检测病毒复制过程中过量合成的六邻体亚单位抗原。如在CPE出现前能检测少量腺病毒抗原,则可加速诊断。本文介绍了用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染细胞提取液中的腺病毒抗原。其方法是用纯化腺病毒5型六邻体抗原免疫的豚鼠抗体,提取球蛋白后吸附于聚苯乙烯板,置37℃     

酶联免疫吸附试验测定血小板抗体

本文作者介绍一种简单、灵敏和重复性好的酶联免疫吸附试验(ELISA),测定特发性血小板减少性紫癜(ITP)的血小板抗体。一、材料和方法:取正常人或患者EDTA抗凝血,分离血小板,把它悬浮于EDTA-VBS液中,调整血小板计数至50,000个/mm~3。用碱性磷酸酶标记抗人IgG(Anti-IgG~(AP))。准确取0.1ml血小板悬液,加入0.1ml1/250的Anti—IgG~(AP),37℃30分钟,离心,洗沉淀物3次。加1ml基质(P-硝基苯磷酸二钠),37℃5分钟,加1ml 5N NaOH终止反应,离心,将上清液于410nm测OD。取0.1ml生理盐水作标准与1/2500的Anti-IgG~(AP)保温,以下步骤同上。用Bo-     

快速酶联免疫吸附试验检测HBsAg

我们对常规检测HBsAg 的ELISA法加以鞣化载体、应用聚乙二醇(PEG)、提高酶浓度等措施,建立了一种快速法,全程仅45分钟,与常观法作多项对比实验效果较好。     

血清新喋呤的酶联免疫吸附法测定

目的 建立血清新喋呤的酶免疫测定方法，并确定血清新喋呤的正常范围。方法 通过碳二亚胺将新喋呤分别与牛血清白蛋白、鸡白蛋白连接制成新喋呤－蛋白质交联物，用新喋呤－牛血清白蛋白交联物免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，通过细胞融合筛选出产生抗新喋呤单克隆抗体，并采用该单克隆抗体建立了血清新喋呤的酶联免疫吸附竞争抑制法。结果 ４１２例献血员（正常组）血甭新喋呤为５．２±２．２μｇ／Ｌ（＾－ｘ±ｓ），４９例消化道恶性肿瘤     

血筛实验室HBsAg酶联免疫吸附试验灰区设置分析

目的 评价本实验室乙肝表面抗原(HBsAg)酶免试剂灰区设置0.8倍临界值(CO值)的必要性及合理性.方法 1)采用2种HBsAg的ELISA试剂分别检测卫生部临检中心"化学发光多中心合作项目"血清盘标本792份,计算2种试剂真阳性检出率、灰区标本确证阳性率;绘制ROC曲线确定2种试剂最佳CO值,比较不同CO值下(最佳...     

酶联免疫吸附试验影响因素的分析

ELISA法以微孔板条为固相的测定模式,操作非常简单,其技术条件要点包括:试剂的制备,反应条件的选择和操作标准化.影响因素一般涉及到样本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响测定结果,现分述如下.     

酶联免疫吸附试验测定操作的体会

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定操作非常简便,一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响测定结果,且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚.     

酶联免疫吸附试验检测法的质量控制

酶联免疫吸附试验（ELISA）因其操作简单,灵敏度高,特异性好,经济安全等特点而在临床上广泛应用,但是由于其操作步骤复杂,一般包括试剂准备,样本收集,加样,温育,洗涤,显色,比色,结果判定等,其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响。因此,必须加强ELISA检测的全面质量控制,保证其结果的准确可靠。结合本院临床免疫室工作的实际经验,现总结报道如下。     

酶联免疫吸附试验终止剂的比较研究

酶联免疫吸附试验终止剂的比较研究梁中琴，穆荣普（苏州医学院生物技术研究所，江苏苏州２１５００７）终止剂作为在ＥＬＩＳＡ试验中的影响因素之一至今未能引起人们足够的注意。为此我们选择６种常用的终止剂进行较为系统地比较研究。为终止剂的优化提供依据，兹将实验...