U-74389G对大鼠脑创伤后细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨脂质过氧化反应与脑损伤后细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系。方法在大鼠液压颅脑损伤模型中,观察其运动神经功能;脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征;伤后bcl-2基因表达情况;比较伤前给予U-74389G对上述指标的影响。结果治疗组的颅脑伤大鼠伤后行走功能、平衡功能障碍程度明显低于未治疗组（P<0.01）。治疗组大鼠不同脑区各个时间点凋亡细胞数均显著减少,DNA电泳未见凋亡带谱。Bcl-2免疫反应阳性细胞主要位于伤侧大脑半球皮质、皮层下白质、海马及齿状回的神经细胞。表达Bcl-2蛋白的神经细胞很少见到凋亡或坏死的形态特征。Bcl-2早期改变出现在伤后6h,比细胞凋亡出现早。注射U-74389G能阻止bcl-2蛋白下调。结论U-74389G能阻止大鼠液压脑损伤后bcl-2基因表达下调,抑制脑创伤所致细胞凋亡,具有明显的神经保护作用。     

大鼠脑创伤细胞凋亡和bcl-2基因家族表达的变化

目的：研究创伤性脑损伤（TBI）脑细胞凋亡发生及bcl-2基因家族表达变化,揭示TBI后继发性脑损伤的发生机制。方法：建立大鼠TBI模型,运用组织原位标记凋亡细胞检测、免疫组织化学等技术,观察TBI后1～14d大脑伤侧皮层和海马等脑区细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的变化。结果：TBI后伤侧大脑广泛存在凋亡现象,以皮层及海马为甚;伤后1d即出现凋亡细胞,3d达高峰,7～14d逐渐恢复正常;TBI后bcl-2、bax基因在伤脑表达增高,其增高的时相与凋亡规律相似,表达与细胞凋亡发生呈正相关。结论：细胞凋亡参与TBI后脑细胞的死亡机制,bcl-2基因在TBI后的脑组织中表达增加,对细胞凋亡发生有抑制作用;bax可促进细胞凋亡,TBI后表达明显增加,参与TBI后细胞凋亡的正向调节,可能是脑创伤后细胞死亡的重要机制。     

人脑创伤后神经元凋亡及调节机制的观察

目的：观察人类急性脑创伤后迟发性神经元死亡现象，了解调节人类神经元凋亡的机制及相关基因表达变化，为临床治疗迟发性神经元死亡寻找新的方法。方法：收集急性脑创伤患者脑标本，采用光镜、电镜以及凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）观察创伤后神经元DNA损伤情况；用原位杂交、免疫组化法观察bcl-2、bax、p53、caspase-3 p20亚单位在mRNA与蛋白质水平表达变化。结果：人脑创伤后有细胞凋亡现象发生，24h左右最为明显。正常人脑组织中几乎没有bcl-2、p53 mRNA及蛋白以及活化的caspase-3存在。急性创伤后bcl-2、p53 mRNA及蛋白表达增加；caspase-3被激活。正常人脑组织持续性表达高水平bax mRNA及蛋白，创伤后bax mRNA及蛋白表达升高。结论：人脑创伤后有细胞凋亡现象发生。人脑创伤造成bcl-2、bax、p53 mRNA及蛋白表达增加；caspase-3酶活性增加。     

心肌营养素-1基因治疗大鼠脑损伤后心肌营养素-1和caspase-3的表达变化

目的 观察外源性心肌营养素-1（CT-1）基因被载体重组腺病毒（Adv）导入损伤大脑细胞后在细胞中表达的情况及其对凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）表达的影响，了解CT-1对损伤大脑神经元的作用和机制。方法 建立大鼠创伤性脑损伤（TBI）模型，于损伤脑区局部注射Adv—CT-1，应用免疫组化技术检测伤后及治疗后CT-1和caspase-3基因的表达变化。结果 TBI后1，3，7d，大脑皮层和海马等损伤脑区CT-1基因表达轻度增加；伤后12h、1，3，7d，在大脑皮层和海马等损伤脑区caspase-3基因表达明显增加，1d达高峰，3—7d逐渐降低。Adv—CT-1转染损伤脑区治疗后12h-7d，大脑皮层和海马等损伤脑区CT—1表达明显增加，7d达高峰；治疗后12h～7d在大脑皮层和海马等损伤脑区caspase-3基因表达较损伤对照组明显减少。结论 TBI后CT-1基因表达轻度增加，可能是机体对脑损伤后的反馈性保护机制；伤后caspase-3基因表达增加，是创伤后神经细胞凋亡的内在原因。伤后Adv—CT—1转染治疗可使CT-1基因在受损大脑中表达增加，而CT-1可下调凋亡基因caspase-3的表达，这可能是CT—1保护损伤神经元、促进神经功能恢复的内在机制。     

依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡的实验研究

目的观察依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡率的影响,探讨其对急性脊髓损伤后脊髓组织的保护作用。方法成年SD雄性大鼠60只,随机分成对照组和依达拉奉组,均采用改良Allen’s撞击法,致伤力为50gcf（10g×5cm）损伤T9～10制作动物模型,术后实验组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水。每组分别于6h、12h、24h、72h、7d5个时间点处死动物取材,每个时间点6只大鼠,对受损脊髓部位进行免疫组织化学检测神经细胞凋亡因子bcl-2和bax基因的表达及用原位末端标记法（TUNEL法）标记神经元凋亡细胞。结果与对照组相比,依达拉奉组bcl-2蛋白表达水平显著提高,bax蛋白表达水平明显下降。对照组检测到较高的细胞凋亡率。依达拉奉组细胞凋亡率较对照组明显下降。结论依达拉奉可能通过清除氧自由基、上调bcl-2和下调bax蛋白表达来抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,从而保护大鼠神经组织。     

脑创伤后nNOS和iNOS对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的 探讨大鼠脑创伤后神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOs)的神经毒性作用机制及7-硝基吲唑(7-NI)和氨基胍(AG)的治疗作用.方法 雄性成年Wistar大鼠250只,随机分为5组(假手术组、创伤组、AG治疗组、7-NI治疗组、AG+7-NI联合治疗组),每组又分为伤后1、3、6、12h及1、3、7、14d共8个时相点.采用Marmatou法制作大鼠重型弥漫性颅脑创伤模型,免疫组织化学法检测海马CA1区nNOS和iNOS表达情况,TUNEL法观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡情况,双标染色观察细胞凋亡与nNOS、iNOS的关系.结果 创伤组海马CA1区nNOS表达在伤后6h达高峰,iNOS表达及细胞凋亡在伤后3d达高峰,各治疗组凋亡细胞均有不同程度的减少.伤后6h创伤组TUNEL与nNOS共阳性细胞较多,应用7-M后共阳性细胞明显减少.伤后3d创伤组TUNEL与iNOS共阳性细胞较多,应用AG后共阳性细胞明显减少.结论 大鼠脑创伤后nNOS和iNOS的过度表达对大脑神经组织具有毒性作用,是海马CA1区神经细胞凋亡的原因之一.7-NI和AG可抑制nNOS和iNOS的活性,减少神经细胞凋亡,从而起到神经保护作用.     

放射复合伤口愈合中外周血淋巴细胞凋亡及其与愈合延迟的关系

为研究放射复合伤口愈合中外周血淋巴细胞凋亡规律并探讨其与愈合延迟的关系，将120只大鼠随机分为单纯创伤组与创伤复合照射组，用原位末端标记（TUNEL）方法检测细胞凋亡，碱磷酶免疫组织化学方法检测Bax,Bcl-2蛋白表达，结果发现，创伤复合照射组动物白细胞数出现下降，伤后3天降至最低，伤后5天仍显著低于单纯创伤组；伤后两组动物中血淋巴细胞凋亡率均升高，但创伤照射组凋亡率始终高于单纯创伤组；伤后不同时间淋巴细胞Bax蛋白出现升高，创伤照射组明显高于单纯创伤组，而Bcl-2呈现相反的变化趋势，该结果提示，照射后外周血白细胞数的降低和淋巴细胞凋亡的增加是辐射延迟伤口愈合的重要原因，Bax和Bcl-2蛋白参与了淋巴细胞凋亡的调控。     

白藜芦醇对大鼠脑创伤后伤区脑组织神经细胞凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇（resveratrol，Res）对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用改良的Feeney自由落体脑损伤模型，对颅脑损伤大鼠用Res（50mg／kg，ip）治疗，应用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学方法检测受损脑组织治疗前后TUNEL阳性细胞数、Bcl-2及Bax的表达变化。结果治疗组大鼠脑组织TUNEL及Bax表达阳性细胞数低于创伤组及对照组（P〈0．05），Bcl-2表达伤后持续升高，治疗组高于对照组和创伤组（P〈0．05），创伤组和对照组差异不明显（P〉0．05）。结论白藜芦醇具有抗凋亡作用，可能是通过抑制促凋亡因素，促进抑凋亡因素表达来减少颅脑损伤后神经细胞的凋亡，发挥脑保护作用，其详细机制有待进一步研究。     

重组人Flt3配体对微血管内皮细胞的抗辐射作用研究

目的：研究Flt3配体（FL）对人微血管内皮细胞系细胞（ECV）的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法：用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响,用AnnexinV-PI方法测定细胞凋亡,用RT－PCR方法分析细胞凋亡基因hax和Bcl-2的改变。结果：ECV表达Flt3受体,FL能激发ECV增殖,ECV经15Gy的照射后,FL能有效地拮抗照射对ECV增殖的抑制作用;同时照后ECV的bax基因表达增加,bcl-2基因表达轻度降低。FL通过抑制bax基因的表达,降低辐射引起的ECV细胞凋亡。结论：FL通过抑制细胞凋亡,减轻辐射引起的ECV的损伤,可能在辐射损务患者造血微环境的保护中具有应用价值。     

Survivin和Caspase-3在大鼠颅脑损伤中的作用

目的：探讨大鼠颅脑损伤后Survivin蛋白表达和Caspase-3活性变化的规律和意义。方法：42只Wistar大鼠随机分为对照组（n=6）与损伤组（n=36）。采用自由落体法建立大鼠颅脑损伤模型，分别于伤后不同时间点，应用免疫组织化学法检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化，利用分光光度法测定Caspase-3活性变化，应用流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况。结果：与对照组相比，Caspase-3活性、细胞凋亡率及Caspase-3、Survivin蛋白表达在大鼠脑损伤后均显著升高（P〈0．01）。通过相关性分析，大鼠脑损伤后脑组织Caspase-3的活性与细胞凋亡率具有正相关性（P〈0．01），而和Survivin表达具有负相关性（P〈0．01）。结论：大鼠颅脑损伤后，Survivin表达增加可下调Caspase-3的活性，减少细胞凋亡。     

大鼠脑创伤后bcl-xL和bax mRNA的表达改变

目的探讨脑创伤后bcl-x     

脑损伤大鼠海马差异表达基因的筛选

目的 筛选出创伤性脑损伤(TBI)大鼠海马的差异表达基因.方法 TBI组(3只)采用液压冲击装置,建立大鼠中度TBI模型.对照组(5只)除不予打击外,其他操作同创伤组.采用Affymetrix大鼠全基因组芯片检测两组大鼠伤后3 h海马基因表达的变化,获取差异表达基因.结果 筛选出差异表达(相差≥2倍)基因共有159个,其中上调136个,下调23个.结论中度TBI后大鼠海马基因表达发生明显变化,尤以大量上调为主,提示继发性TBI是一个多因素参与的过程.     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的观察大鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡现象。应用垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)观察其对损伤后大鼠神经细胞凋亡的影响。方法采用TBI模型,运用原位末端标记(Tunel)技术,观察大鼠中度脑损伤后2小时～3天伤侧大脑皮层、海马神经细胞凋亡情况。结果(1)Tunel染色:伤侧大脑半球广泛存在细胞凋亡,以受伤区周缘为甚,伤后2小时即可见凋亡细胞,2～3天达高峰。(2)PACAP治疗后12小时～3天,伤侧皮层、海马区细胞凋亡数与损伤组比较明显减少(P<0.05)。结论大鼠TBI后,神经元在发生变性、坏死的同时,存在凋亡现象。PACAP能阻滞大鼠TBI后神经细胞的凋亡,具有脑保护作用。     

创伤性脑损伤后脑组织c-fos表达及细胞凋亡

目的研究创伤性脑损伤（TBI）后脑组织c-fos表达及神经细胞凋亡,探讨神经细胞凋亡在脑继发性损害中的作用,及c-fos基因表达与凋亡的关系。方法雄性Wistar大鼠,随机分为假手术对照组和脑创伤后3、12、24、72小时和7天组,采用自由落体撞击致重型颅脑损伤。应用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组化法观测c-fos的表达。结果TBI后3小时创伤组各组脑组织即出现c-fos表达和神经细胞凋亡,随伤后时间逐渐增强,至伤后72小时达高峰,伤后7天仍有明显的c-fos表达和神经细胞凋亡。其分布区域为脑挫伤区、挫伤周围皮质和海马,累及细胞类型包括神经元和胶质细胞。c-fos表达与神经细胞凋亡在时序空间分布上基本一致,两者呈正相关。结论创伤性脑损伤可引起脑组织明显的c-fos表达和神经细胞凋亡,c-fos表达增加在神经细胞凋亡和修复中可能起重要作用。     

环孢霉素A对弥漫性轴索损伤后大鼠神经功能保护的研究

目的　探讨大鼠弥漫性轴索损伤后应用环孢霉素A治疗能否促进大鼠神经功能的恢复。方法　将 2 4只SD大鼠随机均分为正常对照组、损伤对照组和环孢霉素A治疗组 ,制作大鼠弥漫性轴索损伤模型 ,用Morris水迷宫和木梁平衡实验评价大鼠学习记忆能力和综合平衡能力。结果　环孢霉素A治疗后 ,大鼠在木梁上的时间长于损伤对照组 (F =2 75 4 4 ,P <0 0 1 ) ,在连测的 5天内 ,治疗组和损伤对照组行为评分呈下降趋势 ,治疗组平衡能力好于对照组 (F =36 97,P <0 0 1 )。在水迷宫实验中 ,尽管治疗组找到平台的时间和正常对照组相比有所延长 (F=6 9 2 7,P <0 0 1 ) ,但明显少于损伤对照组 (F =1 72 1 0 ,P <0 0 1 )。结论　环孢霉素A能改善大鼠的学习记忆能力和综合平衡能力 ,促进大鼠神经功能的恢复     

促红细胞生成素及其受体在大鼠创伤性颅脑损伤模型中的表达及意义

目的 研究创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠损伤周围脑组织促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)及其受体(erythropoietin receptor,EPOR)的表达.方法 78只SD大鼠按随机数字表法分为对照组(6只)、假手术组(36只)、液压冲击脑创伤模型组(36只).根据处死时间,分为6,24 h和3,5,7,14 d6个时相点,每个时相点假手术组和脑损伤组各处死6只大鼠,取损伤周围脑组织.利用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测EPO、EPOR的mRNA表达和蛋白表达.结果 EPO在伤后24 h内即升高,到第3天达到高峰,并可维持2 d左右,至伤后第7天开始下降,于伤后14 d基本恢复至伤前水平;而EPOR于伤后24 h到达高峰,至伤后14 d表达量仍可维持较高的水平.结论 TBI后24 h内源性EPO及其受体的表达即开始增加,但二者的表达具有不一致性,且EPO相对受体表达具有短暂性.

Abstract：

Objective To study the expressions of erythmpoietin(EPO)and its receptors(EPOR)in the injured brain tissue ofthe rats with traumatic brain injury(TBI).Methods A total of78 SD rats were randomly divided into three groups including control group(six rats),sham group(36rats) and fluid percussion injury group(36 rats).The rats were sacrificed at 6,24 hours,3,5,7 and 14days after TBI in the sham group and the fluid percussion injury group(six rats at each time point).Then,the injured brain tissues were removed for observation of the mRNA and protein expressions of EPO and EPOR by meaDiB of real-time PCR and Western blot. Results The expression of EPO was increased at 24 hours and reached the peak at day 3 after TBI.The hish expression level of EPO could maintain for two days or so.began to decrease at day 7 and recovered to normal at day 14 after Till.While the expression of EPOR reached the peak at 24 hours after TBI and maintained hish level at day14. Conclusions The expressions of EPO and EPOR show increase within 24 hours after TBI.In fact,the expressions of both factors are not in consistency,with more transient expression of EPO.     

灯盏花素对创伤性脑损伤大鼠学习记忆功能的影响

目的 观察灯盏花素对创伤性脑损伤大鼠学习记忆功能和脑氧自由基的影响.方法 通过液压损伤法建立大鼠创伤性脑损伤模型,水迷宫实验和避暗实验测定大鼠学习记忆功能,并于测试后取脑测定总超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）含量.结果 在Morris水迷宫实验中,灯盏花素能明显缩短脑创伤大鼠逃避潜伏期;在避暗实验中,灯盏花素能显著延长脑创伤大鼠学习记忆潜伏期,减少错误次数.灯盏花素可以显著降低脑创伤大鼠脑组织MDA含量和显著增加T-SOD含量.结论 灯盏花素可改善脑创伤大鼠学习记忆功能,其作用与抑制氧自由基反应有关.     

丁苯酞对大鼠脑组织放射性损伤的保护作用

目的 探讨丁苯酞对大鼠单次全脑照射后的防护作用机制.方法 120只SD大鼠采用随机数字法分为假照射组、照射组和丁苯酞组.采用10 Gy单次全脑照射模型,制模后丁苯酞组大鼠分别按剂量0.3、1.0和3.0 mg/kg丁苯酞腹腔注射;测定脑组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用免疫组织化学法检测海马凋亡相关基因蛋白表达的变化,并在电镜下观察组织学超微结构.结果 与假照射组比较,照射后大鼠脑组织中MDA含量升高、SOD活性降低,促凋亡基因bax表达增高(t=-3.78～ ～1.89;2.69 ～3.48,P＜0.05)、抑凋亡基因bcl-2表达下降,电镜下照射组大鼠海马CA1区神经元呈明显的凋亡超微结构形态;与照射组比较,丁苯酞组大鼠脑组织中MDA含量降低、SOD活性升高,Bcl-2蛋白表达显著增加、Bax蛋白表达明显降低(t=2.94 ～3.76,-3,89～ -1.96,P ＜0.05),神经细胞结构损伤明显轻于照射组.结论 丁苯酞通过降低大鼠全脑照射后脑组织中MDA含量、升高SOD活性,有效抑制凋亡,对放射性脑损伤的保护作用呈现剂量依赖性.