MicroRNA-29b 对肝纤维化及肝星状细胞 增殖、凋亡的影响

目的 探究microRNA-29b（miR-29b）在肝纤维化过程中的作用,以及对肝星状细胞增殖和 凋亡的影响。方法 将大鼠随机分为对照组和模型组,每组10 只。模型组大鼠经腹部注射60% 3 ml/kg CCl4 复制肝纤维化模型;对照组注射等量生理盐水。分别观察两组大鼠肝纤维化情况,检测肝组织中miR -29b 、 TGF -β 1、SAMD 3 基因及TGF-β1、SAMD3 蛋白的表达。体外培养肝星状细胞HSC-T6、LX-2,转染 miR-29b siRNA,检测miR-29b 对HSC-T6、LX-2 细胞增殖、凋亡的影响,以及对TGF-β1、SAMD3 表 达的影响。结果 与对照组相比,模型组心肌纤维比例增加,随着时间延长,第6 和12 周心肌纤维比例逐渐 升高（P <0.05）。与对照组相比,模型组miR -29b 基因相对表达量降低,随着时间延长,模型组miR -29b 基 因相对表达量逐渐降低（P <0.05）。与对照组相比,模型组TGF-β1、SAMD3 基因和蛋白相对表达量升高; 随着时间延长,TGF-β1、SAMD3 基因和蛋白相对表达量逐渐升高（P <0.05）。在HSC-T6、LX-2 细胞中, miR-29b 转染组G1 期细胞比例高于空白对照组、阴性转染组,S 期细胞比例低于空白对照组、阴性转染组 （P <0.05）。miR-29b 转染组HSC-T6、LX-2 细胞凋亡率高于空白对照组、阴性转染组（P <0.05）。与空白 对照组、阴性转染组相比,HSC-T6、LX-2 细胞中TGF-β1、SAMD3 基因和蛋白相对表达量升高,miR- 29b 基因相对表达量降低（P <0.05）。结论 miR-29b 在肝纤维化过程中表达降低,miR-29b 可抑制肝星状 细胞增殖,诱导其凋亡。     

胃癌及癌前病变细胞凋亡与增殖关系的研究

目的 通过研究胃癌及癌前病变细胞凋亡及增殖的关系，探讨细胞凋亡在胃癌发生中的作用。方法 应用原位细胞凋亡TUNEL检测方法结合免疫组织化学染色方法对70例慢性胃炎、49例肠上皮化生、69例异型增生和81例胃癌进行了细胞凋亡及增殖的原位观察和比较。结果 从慢性胃炎到肠上皮化生、轻度、中度、重度异型增生至胃癌的整个演变过程中，凋亡指数和增殖指数逐渐增高，至中度异型增生时凋亡指数最高，其后开始下降，至胃癌时最低。但增殖指数仍持续上升，至进展为胃癌时达最高值。结论 在胃上皮细胞恶性转化的癌前阶段，存在着活跃的细胞增殖和大量细胞凋亡。胃上皮细胞癌变的激发阶段可能出现大量多克隆细胞增殖和凋亡共存的现象，而促进阶段则以单克隆细胞增殖为主，细胞的增殖与凋亡失衡可能与胃癌的发生有关。     

miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖及凋亡的调控

目的:探讨miR-19a在去势抵抗性前列腺腺癌中的表达及其对去势抵抗性前列腺癌细胞株PC3及DU145的增殖及凋亡的影响。方法:用定量PCR方法检测10例去势抵抗性前列腺癌细胞组织及相关癌旁的miR-19a表达,通过MTT、克隆形成、Western blotting、流式细胞仪检测增殖及凋亡及体内成瘤的方法来研究miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。结果:miR-19a在去势抵抗性前列腺癌组织中的表达相对于癌旁组织显著提高。抑制miR-19a在激素非依赖前列腺癌中的表达,可抑制细胞的增殖及集落形成并增加其凋亡。结论:在激素非依赖性前列腺癌中,miR-19a起着癌基因作用,与前列腺癌的增殖及凋亡相关。     

miR-15b靶向ABCC5对K562/A02细胞增殖、凋亡及阿霉素耐药性的影响

目的 探讨微RNA (miRNA/miR)-15b对K562/A02细胞增殖、凋亡及阿霉素耐药性的影响及其机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测K562和K562/A02细胞中miR-15b表达情况;将体外培养的K562/A02细胞随机分为对照组(正常培养)、miRNA对照(miR-NC)组(转染模拟物...     

E-CD与胃癌临床病理特征的关系探讨

目的 :探讨 E-CD与胃癌临床病理的关系。方法 :应用免疫组织化学方法( Ls AB法 )检测胃癌及胃炎病变中 E-CD的表达。结果 :胃癌中 E-CD表达明显减弱 ( 3 2 / 44 ,P<0 .0 1 )。 E-CD的表达在胃癌的大体类型间呈显著性差异 ( P<0 .0 5) ,与浸润程度及淋巴结转移与否呈极显著性差异 ( P<0 .0 1 ) ,而与分化程度无关 ( P>0 .0 5)。结论 :E-CD与胃癌的生长方式、浸润程度、淋巴结转移有相关性     

miR-130a/b与肿瘤关系的研究进展

目的：总结国内外miR-130a和miR-130b在肿瘤学领域研究的现状。方法：应用PubMed和中国知网数据库检索系统,以“microRNA、miR-130a、miR-130b和肿瘤”等为关键词,联合检索1993-01—2013-12的相关文献。纳入标准：1）microRNA在肿瘤研究中的新进展;2）miR-130a;3）miR-130b;4）肿瘤。根据纳入标准,符合分析的文献47篇。结果：miR-130a和miR-130b是高度同源的microRNA,通过干扰靶mRNA转录或降解靶基因来调控基因表达,它们在不同的肿瘤中差异表达,并在多种肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和肿瘤耐药方面发挥着重要作用。结论：miR-130a/b在肿瘤发生发展中发挥促癌或抑癌的作用,其在肿瘤耐药方面的研究可以为多重耐药的患者提供新的视角。     

MicroRNA-20b在卵巢癌细胞中的表达及对增殖和凋亡的影响

探讨microRNA-20b（miR-20b）在卵巢癌细胞系中的表达及对增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-20b 在卵巢癌细胞系A431、SKOV3 及正常卵巢上皮细胞系Hose 中的相对表达量,将SKOV3 细胞系分成未转染对照、阴性对照及miR-20b 模拟物组,用Lipofectamine2000 分别不转染、转染miR-20b scramble 和miR-20b mimics,CCK8 实验测定3 组细胞增殖能力,流式细胞术测定3 组细胞凋亡,Western blot测定张力蛋白同源在10 号染色体有缺失的磷酸酶（PTEN）、裂解型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的相对表达量。结果qRT-PCR示A431、SKOV3细胞系miR-20b 相对表达量较Hose 细胞系低;miR-20b 模拟物组在0、24、48、72 及96 h的OD45 nm 值低于未转染对照组和阴性对照组;miR-20b 模拟物组凋亡率高于阴性对照组和未转染对照组;miR-20b 模拟物组PTEN 相对表达量低于阴性对照组,裂解型PARP蛋白相对表达量高于阴性对照组。结论miR-20b 抑制卵巢癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与下调PTEN 和上调PARP 蛋白表达有关。     

miR-19 b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-19b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法根据前期miRNA芯片结果提示丹皮酚处理后人肝癌HepG2细胞的miR-19b表达增加,采用qRT-PCR验证丹皮酚处理 HepG2细胞的 miR-19b表达改变;将 hsa-miR-19b mimics瞬时转染HepG2细胞,采用qRT-PCR验证转染效率,MTT比色法检测转染后细胞体外增殖抑制率,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 qRT-PCR验证62.5 mg/L丹皮酚处理人肝癌HepG2细胞24 h后miR-19b差异表达明显。过表达miR-19b可以抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡。结论丹皮酚作用可以引起肝癌细胞miR-19b表达出现差异性表现。过表达 miR-19b可能是丹皮酚抑制HepG2细胞增殖和促进凋亡作用的部分机制。     

microRNA-125b对人视网膜母细胞瘤增殖和凋亡作用实验研究

目的:探讨microRNA-125b(miR-125b)在人视网膜母细胞瘤细胞中的表达,及其对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:采用RT-PCR方法检测miR-125b在视网膜母细胞瘤细胞系Y79中的表达;构建miR-125b过表达(miR-125bmimic)和抑制载体(miR-125inhibitor)转染Y79细胞,检测miR-125b表达情况;通过细胞凋亡实验和细胞增殖实验(CCK-8)观察miR-125b过表达和抑制表达后,对肿瘤细胞增殖力和凋亡的影响。结果:miR-125b在人视网膜母细胞瘤细胞系中Y79细胞系中呈高表达;miR-125bmimic组(Y79+miR-125bmimic)中miR-125b的表达较miR-NC组(未处理的Y79细胞)表达显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-125binhibitor组(Y79+miR-125binhibitor)中miR-125b的表达较miR-NC组表达显著减少,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-125bmimic组较miR-NC组相比,Y79细胞增殖力显著增高,细胞凋亡显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);而miR-125inhibitor组较miR-NC组相比肿瘤细胞增殖力显著下降,细胞凋亡率显著提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-125b可能是通过DRAM2基因来发挥其致癌作用;结论:miR-125b可能作为癌基因在视网膜母细胞瘤中发挥作用,并对肿瘤细胞增殖和凋亡具有显著影响。     

双氢青蒿素对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

研究双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法采用噻唑蓝（methylthiazoletetrazolium,MTT）法检测DHA对人胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用;用流式细胞技术、荧光显微镜、透射电子显微镜检测经DHA处理后BGC-823细胞的凋亡率及形态特征的变化;Western印迹方法检测凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8表达的变化。 结果MTT分析表明,DHA作用可明显抑制BGC-823细胞的增殖,抑制率随药物浓度的增加而增大,且随着时间的延长而增大,具有显著的剂量和时间依赖性（P＜0.01）,半数抑制浓度(IC50值)为3.4 μmol/L。流式细胞术检测结果显示,随着DHA药物浓度的增加,凋亡峰愈加明显,并呈现出剂量依赖性（P＜0.01）。形态学的观察结果：BGC-823细胞在DHA作用下出现典型的凋亡形态。Western印迹显示：Bax、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达随着DHA给药浓度的增加而增高。 结论DHA对BGC-823细胞增殖有抑制作用;DHA通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-8表达促进BGC-823细胞凋亡。     

胃癌组织Fas基因表达与细胞凋亡和增殖的关系

目的: 探讨Fas基因表达水平与胃癌细胞增殖活性及细胞凋亡程度的关系.方法: 胃癌组织53例,用原位杂交及免疫组化染色法分别检测Fas mRNA,Fas蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较.结果: 胃癌组织表达Fas mRNA 28例(52.8%),表达Fas蛋白24例(45.3%),两种方法检测结果一致性非常显著(P<0.01).胃癌53例增殖期细胞标记物PCNA表达及凋亡细胞的阳性率均为100%,细胞凋亡和细胞增殖指数呈显著性负相关(r=-0.982,P<0.01).随胃癌细胞Fas蛋白表达水平升高,PCNA阳性细胞指数相应减少,肿瘤凋亡细胞指数则相应增加.Fas蛋白组细胞凋亡指数显著高于-/ 组(P<0.01),Fas蛋白组PCNA指数显著高于 / 组(P<0.01).结论: 胃癌细胞Fas基因表达可引起细胞凋亡增加与增殖减少.     

miR-92a反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-92a反义寡核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901和MKN-45分为反义寡核苷酸处理组和无义寡核苷酸对照组,分别转染miR-92a ASO和无义寡核苷酸,同时设未转染空白对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测处理前以及处理48 h后胃癌细胞中miR-92a的表达变化;MTT法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果 Anti-miR-92a作用48 h后,miR-92a在两种胃癌细胞中的表达均显著下降(P<0.05);细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05),荧光染色显示其细胞核呈凋亡细胞的特征样改变。结论以miR-92a为靶标的ASO可以有效抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡。     

羟基喜树碱对胃癌细胞的诱导凋亡及凋亡相关基因表达的影响

[目的]探讨羟基喜树碱(HCPT)对胃癌MGC-803细胞株的诱导凋亡和抗增殖作用及凋亡相关基因表达的影响.[方法]通过MTT比色法、HE染色、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色及各种显微镜观察,并且采用原位细胞凋亡检测法(TUNEL法)及免疫细胞化学法,观察HCPT对胃癌MGC-803细胞株的诱导凋亡和抗增殖作用及凋亡相关基因的表达情况.[结果]HCPT在质量浓度0.5~48.0 mg/L范围内对胃癌MGC-803细胞株均有抑制生长作用,并表现出显效关系;在倒置显微镜、HE染色光学显微镜、AO/EB染色荧光显微镜和透射电子显微镜下,均可见MGC-803细胞的凋亡形态学改变;不同质量浓度HCPT均可诱导胃癌MGC-803细胞凋亡,细胞凋亡率随药物质量浓度的增高而上升,当药物作用48 h时细胞凋亡率达高峰;增殖细胞核抗原Ki-67的阳性表达率随HCPT质量浓度的增高和作用时间的延长而降低;当12 mg/L HCPT作用于胃癌MGC-803细胞株48 h后,明显下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达和上调促进凋亡基因Bax的表达.[结论]HCPT对胃癌MGC-803细胞株有诱导凋亡和抗增殖作用,其机制可能与下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达和上调促进凋亡基因Bax的表达有关.     

MicroRNA-10b调控乳腺癌细胞生长增殖与凋亡的研究

研究MicroRNA-10b(miR-10b)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生长增殖和凋亡的调控作用。采用能模拟内源miR-10b的miR-10b模拟物以及能特异靶向敲除内源miR-10b的miR-10b抑制剂分别转染乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231。RT-PCR测定转染后细胞中miR-10b的表达水平,MTT检测miR-10b对细胞增殖活力的影响,流式细胞仪检测miR-10b对细胞周期和凋亡的影响。生物信息学软件预测miR-10b潜在的靶基因,3’UTR荧光素酶报告法验证其靶向性,Western blot检测caspase-3、P21的蛋白表达水平。研究证实,miR-10b模拟物上调乳腺癌中miR-10b的表达水平,与对照组相比,细胞增殖能力提高,细胞周期加速,细胞凋亡率降低;反之miR-10b抑制剂能显著下调miR-10b的表达,与对照组相比,细胞增殖能力降低,细胞周期阻滞,细胞凋亡率上调。初步探讨miR-10b的作用机制可能是通过靶向作用于TP53INP1,抑制细胞周期与凋亡关键蛋白caspase-3、P21的表达水平,从而促进乳腺癌的发生发展。     

miR-92b对胃癌细胞周期和凋亡的影响

目的观察miR-92b对胃癌细胞周期和凋亡的影响。方法在胃癌SGC-7901细胞中瞬时转染化学修饰的microRNA抑制物,抑制miR-92b的表达。采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,并在荧光显微镜下观察细胞形态,western blot检测Bcl-2和p53的变化。结果抑制miR-92b表达后,细胞周期延缓,凋亡细胞比率增加,细胞核皱缩,Bcl-2和p53表达下调。结论 miR-92b在胃癌发展过程中推动细胞通过周期限制点,加速细胞生长,并可能通过抑制线粒体凋亡途径促进胃癌细胞增殖。     

青藤碱联合氟尿嘧啶对人胃腺癌SGC7901细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨青藤碱联合氟尿嘧啶(5-Fu)对人胃癌SGC7901细胞增殖及Bcl-2、Bax和环氧化酶(COX)-2表达的影响。方法:体外培养人胃腺癌SGC7901细胞系,四甲基偶氮唑蓝法测定对照组、5-Fu组(5-Fu 50 mg/L)、青藤碱低浓度组(青藤碱 1.25 mmol/L)、青藤碱中浓度组(青藤碱2.5 mmol/L)、青藤碱高浓度组(青藤碱 5 mmol/L)及联合组(5-Fu 25 mg/L+青藤碱2.5 mmol/L)对SGC7901细胞增殖作用的影响;碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;免疫细胞化学法测定Bcl-2、Bax和COX-2蛋白表达情况。结果:青藤碱、5-Fu作用SGC7901细胞24、48和72 h后,青藤碱对人胃腺癌SGC7901细胞的增殖具有抑制作用,呈时间、浓度依赖性,与5-Fu联用后协同抑制细胞增殖(P<0.05～P<0.01);5-Fu组、青藤碱各浓度组及联合组的细胞凋亡率均较对照组明显增高(P<0.01),其中联合组均较单药组的凋亡率明显降低(P<0.01)。对照组Bcl-2和COX-2蛋白表达较明显,而青藤碱组、5-Fu组及其联合组染色减弱;与对照组差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01),其中联合组均较单药组阳性率明显降低(P<0.01)。对照组Bax蛋白表达较弱,青藤碱组、5-Fu组及其联合组阳性率相对增加;与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),且联合组均较单药组阳性率明显升高(P<0.01)。结论:青藤碱联合5-Fu对人胃腺癌SGC7901细胞增殖具有协同抑制作用,能够上调Bax表达,下调Bcl-2、COX-2表达,可能发挥增敏作用。