间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞损伤机制研究

目的 建立人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的间歇性低氧（IH）模型,探讨IH损伤血管内皮细胞的机制。方法 通过低氧气体循环灌注低氧舱,建立HUVECs的IH模型。实验分为正常对照组（CON）,间歇性低氧（IH）2、4、6、8、10、12、14、16次循环组,IH+P38 MAPK阻断剂组（INH）以及持续性缺氧组（SH）。采用定量PCR技术（QPCR）检测细胞间黏附因子（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）、E选择素（E-selectin）、白介素1（interleukin -1, IL-1）、白介素6（interleukin -6,IL-6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）基因表达量;Western blot法检测P38 MAPK /NF-κB通路关键靶标蛋白表达量;细胞免疫荧光技术观察NF-κB P65核移位变化,同时检测细胞黏附功能。结果 （1） 与CON组比较,IH刺激下炎性反应相关因子IL-1、IL-6、TNF-α基因表达量升高（P<0.05）。（2） 与CON组比较,IH组HUVECs的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,NF-κB通路靶标蛋白p-IκB、NF-κB P65核蛋白表达水平均升高,而INH组变化不明显。IH组的NF-κB P65出现核移位变化。（3） 细胞黏附实验结果显示IH组人单核细胞系（human acute monocytic leukemia cell line,THP-1）与HUVECs的黏附能力较CON组增强（P<0.05）。结论 IH能够体外诱发HUVECs炎性反应,其机制与激活P38 MAPK/NF-κB信号通路相关。     

高通量测序研究不同程度间歇性低氧致大鼠肠道微生物菌群改变

目的 研究不同程度间歇性低氧(CIH)导致大鼠肠道菌群改变.方法 分别建立4周、8周CIH大鼠模型与对照组,留取各组大鼠粪便样品,利用Illumina MiSeq PE300平台进行高通量测序,测定所有粪便细菌的16SrRNA基因V3、V4区序列,使用Qimme软件分析菌群物种分类、物种多样性指数、样本间差异和各组生物...     

机体和细胞对间歇性低氧的反应与呼吸暂停综合征的关系

 睡眠障碍伴反复性呼吸暂停的患者表现为交感神经活动（sympathetic nerve activity,SNA）增强的自主神经系统功能失调和高血压。动物实验表明反复呼吸暂停引起的慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)是激发自主神经系统功能失调的主要因素。在啮齿类动物模型中,CIH使动脉化学感受性反射功能增强的部分原因在于增加了颈动脉体对低氧的敏感性,因而导致SNA增强。最近研究表明,缺氧诱导因子-1和2(hyproxia-inducible factor,HIF)转录的变化及随之而来的活性氧类介导的信号,是CIH时化学感受性反射引起的交感神经系统兴奋的重要细胞机制。     

雷帕霉素对未成熟树突状细胞RelB表达的影响研究

目的:研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)RelB表达的影响,为回输RAPA处理的imDC(RAPA-imDC)诱导移植耐受的机制研究提供实验依据。方法:分离诱导imDC、RAPA-imDC、成熟树突状细胞(mature dendritic cell,mDC),光镜和电镜观察其形态,流式细胞仪检测其CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达,用免疫荧光法检测其RelB表达。结果:①电镜结果显示imDC与RAPA-imDC形态相似,呈未成熟状态,树突少、粗短;mDC树突较多,细长。②mDC表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达显著高于imDC和RAPA-imDC(P<0.05);而imDC的表达也明显高于RAPA-imDC(P<0.05)。③免疫荧光法检测结果显示imDC、RAPA-imDC RelB表达量无显著变化,而mDC表达量高。结论:雷帕霉素能降低imDC表面的CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达,但对其RelB表达没有明显影响。     

低氧降低大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.5通道表达的p38MAPK通路机制

目的 探讨低氧对肺细小动脉平滑肌细胞Kv1.5通道表达的影响及其与p38 MAPK通路的关系,明确低氧性肺动脉高压（HPH）的发病机制.方法 SPF级雄性SD大鼠,超净工作台内分离3～4级肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）.采用p38MAPK通路抑制剂SB203580和激活剂茴香霉素干预低氧过程.细胞传至3～6代后随机分为5组：正常对照组（N）,低氧组（H）,低氧＋ DMSO组（HD）,低氧＋SB203580组（HS）,低氧＋茴香霉素组（HA）,其中N组继续5％ CO2培养箱培养.其他组于低氧培养箱培养（5％ CO2,2％O2,PO2：25 ～ 35mmHg）,均培养60h.采用RT-PCR法测定PASMCs Kv1.5 mRNA含量,采用Western blot法测定PASMCs Kv1.5蛋白含量.结果 与N组相比,H组、HD组、HA组Kv1.5mRNA和蛋白表达均明显降低（P＜0.05）.较之H组和HD组,HS组Kv1.5 mRNA和蛋白表达明显上升,差异有统计学意义（P＜0.01）,H组和HD组间差异无统计学意义（P＞0.05）,与HS组相比,HA组Kv1.5mRNA和蛋白表达明显降低（P＜0.01）.结论 低氧通过激活p38 MAPK信号通路降低Kv1.5通道表达,这可能是（HPH）的发病机制.     

利用小干扰RNA表达框鉴定小鼠骨髓树突状细胞有效沉默RelB基因的实验研究

目的 构建靶向小鼠RelB基因的小干扰RNA（siRNA）表达框,鉴定针对小鼠骨髓树突状细胞（DC）的RelB基因最有效的siRNA序列。方法 利用PCR方法构建3个不同位点的表达框,R1／siRNA、R2／siRNA和R3／siRNA分别位于1027、302和1121位点。利用阳离子脂质体AdvantGene转染小鼠骨髓DC,转染24h后,脂多糖（LPS）刺激DC,用RT-PCR和免疫荧光方法检测DCReIB基因表达的变化。结果 经LPS刺激后DC成熟,RelB基因表达显著高于未成熟DC;R1／siRNA和R3／siRNA转染DC后,LPS刺激仍然可以增强RelB基因表达,而R2／siRNA转染DC后,LPS刺激不能增加RelB基因表达。结论 R2／siRNA可有效抑制RelB基因表达,有望用于构建新的耐受性DC应用于临床免疫耐受的诱导。     

丙泊酚对慢性间歇性低氧小鼠认知功能的影响及其机制

目的 探讨丙泊酚对慢性间歇性低氧小鼠认知功能的影响及其机制。方法 雄性12周C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、丙泊酚低剂量组(2 mg/kg,临床用量)、丙泊酚中剂量组(10 mg/kg, 5倍临床用量)及丙泊酚高剂量组(20 mg/kg, 10倍临床用量),每组12只。空气舱氧气含量在21%与6%之间交替维持90 s构建慢性间歇性低氧小鼠模型(共14 d,每天8 h)。造模完成后,丙泊酚组小鼠腹腔注射对应剂量丙泊酚,对照组和模型组注射与丙泊酚组等体积脂肪乳。采用Morris水迷宫测试小鼠逃避潜伏期及穿越平台次数。行为学测试后每组取6只小鼠新鲜海马组织检测腺苷A_2A受体(adenosine A_2A receptor, A_2AR)、谷氨酸转运体-1(glutamate transporter-1, GLT-1)、谷氨酸-天冬氨酸转运体(glutamate-aspartate transporter, GLAST)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素1β(int...     

核转录因子RelB抑制途径对骨髓树突状细胞表面分子表达的影响研究

目的 探讨核转录因子RelB抑制途径对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cells)的表面分子表达的影响,为致耐受树突状细胞的研究提供新方法.方法 rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养体系培养小鼠骨髓树突状细胞,免疫磁珠方法纯化;用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40的表达,设LPS-DC对照组、未处理组和LPSRNAi RelB DC组.结果 核转录因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40均低水平表达,显著低于成熟Dc表面分子的表达(P<0.05),且经LPs刺激后(LPS RNAi RelB DC)DC表面上述三类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组(P<0.05),与未处理组(immature DC)表面分子表达水平相当.结论 核转录因子RelB抑制的骨髓树突状细胞表面分子表达水平低,呈现出致耐受的树突状细胞的特点,是致耐受树突状细胞研究的一种新方法.     

氧自由基对间歇低氧所致细胞凋亡的作用

1氧自由基与慢性间歇低氧 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea—hypopnea syndrome,OSAHS）是指睡眠时反复发生上气道阻塞,引起呼吸暂停和（或）通气不足,伴打鼾及睡眠结构紊乱,频繁发生血氧饱和度下降,继而引发一系列病理生理变化并导致临床并发症。     

树突状细胞及其抗肿瘤疫苗

肿瘤的免疫治疗是继手术、放疗、化疗之后于20世纪90年代逐渐发展、成熟起来的一种新的肿瘤治疗方法。其基本理论依据是:通过调节或增强机体固有的内在性防御机制(主要为机体对肿瘤细胞的免疫监视和免疫排斥)来抑制或杀伤肿瘤细胞,或通过抑制肿瘤细胞转化,促进恶性细胞分化来降     

莱菔硫烷诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡的 p38MAPK 途径研究

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane, SFN）诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡过程中,p38MAPK 途径的作用。方法：流式细胞仪检测 SFN 对 HepG-2 细胞凋亡率的影响,Western Blotting 方法检测细胞内 p38 及 p-p38 蛋白表达。结果：SFN可明显诱导 HepG-2 细胞凋亡,10、20、40 μmol/L SFN 作用 48 h 后,对 HepG-2 细胞的抑制率分别达到 27.42 %、46.53 %、58.92 %;10、20、40 μmol/L 的 SFN 可上调 HepG-2 细胞内 p-p38 蛋白的表达,而对 p38 的表达无明显影响。结论：SFN 可诱导 HepG-2细胞的凋亡,而且这一过程与阻断 p38MAPK 途径有关。     

未成熟DCs诱导同种免疫低应答及 CD14分子在DCs上的表达

目的：从健康人外周血单核细胞诱导树突状细胞（DCs）,并且证实未成熟DCs在体外可以诱 导同种T细胞的低应答。 方法：人外周血单核细胞经GM-CSF,IL-4及TNF-α联合诱导,分化出不同发育阶段的DCs。采用再次混合淋巴细胞培养的方法观察未成熟DCs处理过的T细胞对与未成熟DCs同一来源的T细胞的应答能力。 结果：在DCs的未成熟期与成熟期均中度以上表达CD14分子;随着培养时间的不同DCs内吞能 力不断变化,在第7天达高峰,且内吞量高于相同培养时间的单核细胞（P＜001）;在再次混合淋巴细胞反应中,供者未成熟DCs预处理的受者T细胞当再次被供者的T细胞刺激时应答降低,而对第三者的T细胞刺激则表现强反应性。 结论：诱导人外周血单核细胞获得不同发育阶段的DCs,经过再次混合淋巴细胞反应发现具 有中度表达共刺激分子的未成熟DCs在体外可以诱导T细胞免疫低应答。     

慢性间歇性缺氧对高脂饮食导致的动脉粥样硬化的影响

目的：在慢性间歇缺氧的条件下，用高脂饮食方法建立兔的动脉粥样硬化模型，探讨相关致病机制。方法：24只新西兰兔．随机分为对照组、缺氧组、高脂饮食组、高脂饮食合并缺氧组，每组6只。观察各组兔第0周、第6周、第10周外周血血脂指标和C反应蛋白变化；实验第10周取各组兔主动脉光镜下观察病理学变化。结果：各实验组第6周时的血脂学指标与实验开始时比较均显著升高（P〈0．05）。与对照组比较总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇均有显著性差异（均P〈0．05）。实验第6周。缺氧组、缺氧并高脂饮食组与对照组比较C反应蛋白显著升高（均P〈0．05）。组织病理学观察发现，各实验组动物的主动脉管壁均有不同程度动脉粥样硬化病变形成．严重程度比较，缺氧并高脂饮食组〉高脂饮食组〉缺氧组。结论：单纯慢性缺氧10周可使兔动脉产生动脉粥样硬化的早期病变：慢性间歇缺氧合并高脂饮食10周时可使兔主动脉形成动脉粥样硬化斑块。     

HIF—la asODN转染的树突状细胞对胶质瘤细胞生长的影响

目的研究缺氧诱导因子-1a（HIF-1a）反义寡核苷酸（asODN）转染的树突状细胞（DC）与U251胶质瘤细胞融合后的抗胶质瘤活性。方法将HIF-1a asODN利用脂质体包裹转染DC,采用PEG化学融合方法将DC与U251胶质瘤细胞融合,通过MTT法及流式细胞仪检测胶质瘤细胞凋亡率。结果HIF-1a asODN转染DC组与各对照组相比细胞增殖下降,凋亡增加（P〈0．01）。结论HIF-1a asODN转染DC后,再与U251胶质瘤细胞融合能够比单纯使用HIF-1a asODN转染U251细胞或单纯使用DC细胞取得更好的抑制胶质瘤细胞生长及促进其凋亡的效果。     

慢性间歇低氧对幼鼠学习记忆的影响

目的建立慢性间歇低氧幼鼠模型,研究其空间学习记忆能力和海马CA1区神经元超微结构的变化。方法八臂迷宫训练成功的3~4周龄SD幼鼠40只随机分2周间歇低氧组(2H)、对照组(2C)和4周间歇低氧组(4H)、对照组(4C),建立慢性间歇低氧动物模型,间歇低氧结束后八臂迷宫测试学习记忆能力,透射电镜观察海马CA1区神经元的超微结构变化。结果间歇低氧组参考记忆错误[(3.30±1.06)次、(2.00±0.67)次]、工作记忆错误[(2.30±0.67)次、(1.00±0.82)次]和总错误次数[(5.40±1.78)次、(3.00±0.82)次]均高于对照组(P<0.05),且随着间歇低氧时间的延长,这种错误次数增多(P<0.05);电镜下间歇低氧组海马CA1区神经细胞的形态、胞浆内的细胞器均有明显变化。结论慢性间歇低氧可引起幼鼠空间学习记忆能力下降,这可能和海马CA1区神经元超微结构改变有关。     

慢性间歇低氧所致高血压的中枢调控机制研究进展

睡眠呼吸暂停综合征可以引起持续性的血压升高,但其引起血压升高的机制尚不完全清楚。目前认为中枢调控的交感神经放电活性增强在高血压形成过程中发挥重要作用。间歇低氧动物模型研究结果显示间歇低氧可以快速及持续的激活包括孤束核、终板及下丘脑室旁核在内的中枢环路影响交感神经放电活性。本文将对孤束核、终板及下丘脑室旁核在间歇低氧所致交感神经放电活性增强及高血压中的作用做一综述,进一步探讨间歇低氧所致高血压的中枢调控机制。     

小分子活性肽apelin在低氧诱导肺血管内皮细胞损伤中的表达及其意义

目的: 探讨apelin-APJ系统在低氧诱导肺血管内皮细胞(PVECs) 损伤中的表达变化,阐明小分子活性肽apelin对细胞增殖的影响。方法: 体外培养的大鼠PVECs 分为正常对照组、低氧6h组、低氧12h组、低氧24h组、低氧48h组、低氧24h加 apelin组和apelin组,MTT法检测各组细胞增殖率。体外培养的大鼠PVECs 分为正常对照组和低氧6h组、12h组及24h组,免疫荧光染色法检测细胞中apelin蛋白荧光表达,Western blotting法检测apelin-APJ系统蛋白表达水平。结果: 与正常对照组比较,低氧6、12 h组和apelin组细胞增殖率无明显变化(P>0.05),低氧24和48h组细胞增殖率明显降低 (P<0.05或P<0.01);与低氧24和48h组比较,低氧24h加apelin组细胞增殖率明显升高(P<0.05)。与正常对照组比较,低氧6h组细胞中apelin荧光表达强度无明显变化(P>0.05),低氧12和24h组细胞中apelin荧光表达强度明显降低(P<0.01)。与正常对照组比较,低氧6、12和24h组细胞中apelin蛋白表达水平明显下降(P<0.01),而APJ蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。结论: 低氧可能通过降低小分子活性肽apelin损伤内皮细胞,而外源性给予apelin在一定程度上能够保护低氧对肺血管内皮细胞的损伤作用。     

���Լ�ϵ���ģ�ʹ�������Ĥ���˼����;������

目的：通过对慢性间断低氧(CIH)大鼠动脉内膜病理改变及厚度的观察和血管炎症因子变化的检测,探讨CIH对动脉内膜的损伤及其可能的途径。方法：24只成年Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为4组：慢性间断低氧组(CIH组),慢性间断低氧+N-乙酰半胱氨酸干预组(CIH+NAC组)、慢性间断低氧+生理盐水组(CIH+NS组)和常氧对照组(control组),每组6只。经相应处理42 d后处死大鼠取心脏血和胸主动脉。ELISA法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α),氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),正五聚蛋白3(PTX3)血清浓度,观察胸主动脉病理变化,通过计算机图像分析系统测定动脉内膜厚度。结果：CIH组及CIH+NS组大鼠胸主动脉内皮细胞部分受损脱落,少量单核细胞、巨噬细胞浸润,动脉内膜厚度与对照组比较均明显增厚(P<0.001);CIH+NAC组大鼠胸主动脉内膜厚度与CIH组及CIH+NS组比较显著减小(P<0.001)。CIH组及CIH+NS组大鼠血清HIF-1α,ox-LDL,PTX3浓度与对照组比较明显增高(P<0.001)。CIH+NAC组大鼠血清HIF-1α,ox-LDL,PTX3水平较CIH组及CIH+NS组明显降低(P<0.001)。大鼠血清HIF-1α,ox-LDL,PTX3浓度间呈正相关,ox-LDL,PTX3浓度与胸主动脉内膜厚度呈正相关(P<0.001)。结论：CIH可损伤血管内皮细胞,使动脉内膜增厚。CIH通过激活氧化应激状态,增加HIF-1α,ox-LDL,PTX3等因子的产生是导致血管内皮损伤的一个重要途径。