用甲壳素膜培养的鼠胚脊髓神经元生长形态的扫描电镜研究

目的：在组织培养条件下人工构筑神经组织的组织化构型，以对其生长形态及临床价值进行研究。方法：以甲壳素膜为支持物，做原代大鼠鼠胚脊髓神经组织的体外培养，标本置扫描电子显微镜下观察。结果：甲壳素膜和培养细胞之间有较强的相容性，能使神经元和胶质细胞比较充分地展示出多种组织化结构的形态特点。结论：甲壳素膜的组织相容性和可塑形性将使其在修复神经损伤和神经移植中获得广泛的应用。     

鸡胚脊神经节的分散细胞培养法

神经组织分散细胞培养法是Ｎａｋａｉ［１］于１９５６年首创。Ｎａｋａｉ利用酶学方法将神经组织分离成相互独立的单个细胞进行培养。神经细胞是高度分化的细胞,形态结构和生理机能极其复杂,因此培养神经细胞要求条件特殊且复杂。我们的研究对象是神经成长圆锥（ｇｒｏ...     

HrlFN-γ和hrlL-4对体外培养人早孕滋养层细胞PCNA和bcl-2表达的影响

【目的】研究人重组卜干扰素（hrlFN-7）和白细胞介素4（hrlL-4）对人早孕滋养层细胞PCNA和bel-2表达的影响。【方法】采用人工流产方法提取绒毛膜组织，在体外培养条件下加入hrlFN-7和hrlL-4，继续培养24h，用倒置光显微镜和透射电镜观察绒毛膜组织形态学变化，应用免疫组织化学法检测绒毛膜组织滋养层细胞PCNA和bel-2蛋白表达。【结果】hrlFN-7处理的滋养层细胞PCNA和bel-2表达均较对照组弱；hrlL-4处理的滋养层细胞PCNA和bel-2表达较对照组增强。【结论】hrlFN-7抑制滋养层细胞的增殖，hrlL-4促进滋养层细胞的增殖。     

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的 利用体外细胞培养技术,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备.方法 分别采用间接接触法(MTT法)和直接接触法评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.MTT法:采用体外培养的小鼠成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液(0、50%和100%),于接种后第2、4、7天通过MTT法显色,在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值,计算相对增殖率,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行评价;直接接触法:将体外培养的L929细胞分为两组,空白对照组为常规培养的L929细胞,实验组为L929细胞与聚乳酸-甲壳素接骨板共培养,逐日用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学发生的变化,评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.结果 随道时间推移,不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液对L929细胞增殖均有促进作用(P＜0.01),在第2、4、7天各浓度之间无明显差异性(P＞0.05),提示L929细胞增殖与聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液的浓度无明显相关;L929细胞在聚乳酸-甲壳素接骨板表面粘附生长,随时间推移,粘附细胞数量增加,细胞数量及形态与空白对照组比较无明显差异,评分聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性为0级.结论 聚乳酸-甲壳素接骨板无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种具有发展前景的可吸收骨折内固定材料.     

周围神经组织工程种子细胞的研究进展

周围神经组织工程的研究目前还处在起步阶段，主要研究包括：种子细胞的分离和培养，支架材料的开发，人工神经的组织还原。体外构建工程组织的核心方法是首先分离自体或异体组织的细胞，经体外扩增达一定数量后，将这些细胞种植到预先构建好的三维支架上，在适宜的条件下，细胞沿着支架迁移、铺展、生长和分化，最终发育成为具有特定形态功能的工程组织。本文从组织工程方面对种子细胞的研究进展做一综述。     

甲壳素/聚氨酯共混物膜结构与性能的研究

采用共混的方法分别制备了丁羟型和聚醚型聚氨酯／甲壳素共混膜(HPCT和PPCT系列)，研究了甲壳素加入量对共混膜力学性能、热稳定性、溶胀性和吸湿性的影响，讨论了共混物膜在不同环境条件下的降解性能。结果表明随着甲壳素含量的增加共混材料对水的亲和力和热稳定性提高，当甲壳素质量分数分别为0．15和0．10时HPCT系列和PPCT系列具有较佳的力学性能，HPCT和PPCT系列分别在pH=7．0和pH=4．7的环境中具有良好的降解性能。     

培养的周围神经组织特殊三色染色法

目的；以特殊三角染色法显示培养的周围神经组织中轴索及雪旺氏细胞等结构。方法：大鼠背根神经体外培养后，用苏木素精，固绿ＦＣＦ，变色素２Ｒ及磷钨酸等配制三色染色液染色。结果：神经轴索呈蓝绿色，雪旺氏细胞核为红色或紫红色，胞质为浅灰色。结论：特殊的三色染色法能区别显示培养的周转神经组织中轴索及雪旺氏细胞。     

组织工程神经中雪旺细胞的形态

目的:观察组织工程神经中雪旺细胞的形态.方法:体外培养雪旺细胞,用倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察雪旺细胞在PGLA膜上的生长情况和雪旺细胞在BAM凝胶中的形态,用BrdU标记雪旺细胞,观察雪旺细胞-PGLA复合体植入SD大鼠3wk后,雪旺细胞的存活情况.结果:倒置显微镜下,PGLA膜上的雪旺细胞形态与常规培养特点相同,BAM凝胶中雪旺细胞逐渐恢复双极状形态,形成类Büngner带结构,然后可见细胞从凝胶中迁出;扫描电镜下,雪旺细胞细长的双极状形态特点明显,许多细胞聚合类似于Büngner带;透射电镜下,雪旺细胞底部形成一些特殊的钉状突与PLGA膜内接触;免疫组化染色显示组织工程神经中雪旺细胞大量存活.结论:本实验的组织工程神经中雪旺细胞形态正常,生长良好.     

丝素蛋白材料细胞相容性的研究

目的：研究再生丝素膜对大鼠真皮细胞生长和细胞遗传学的影响。方法：采用静置贴壁培养法在再生丝素膜上培养大鼠真皮细胞，并用活细胞计数法和常规染色体检测技术，观察再生丝素膜对细胞生长和染色体的影响。结果 再生丝素膜能支持细胞正常生长，呈现正常的生长繁殖曲线且染色体的形态和数目正常。结论 再生丝素膜对大鼠真皮细胞具有良好的细胞相容性。     

静磁场连续曝磁对牙髓干细胞增殖和分化的影响

目的：研究静磁场连续曝磁对牙髓干细胞增殖和分化的影响。方法：搭建静磁场下细胞培养装置，磁通强度（35±5）mT，以常规培养的细胞为对照组。用扫描电镜检测磁场下与常规培养细胞的形态，以CCK?8检测细胞的增殖情况，同时检测细胞的碱性磷酸酶活性，并进行茜素红染色以说明矿化物形成情况。结果：扫描电镜显示，磁性培养的细胞与常规培养的细胞在形态上没有显著差异；磁场下与常规培养下的细胞增殖情况也没有差异；但是磁场下细胞的碱性磷酸酶活性显著增高（P < 0.05），且矿化物的形成也显著增多（P < 0.05）。结论：静磁场连续曝磁对牙髓干细胞的形态和增殖没有影响，但促进了其成骨方向的分化。     

再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响

目的 研究再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞生长的影响。方法 采用静置贴壁培养法在再生丝素膜上体外培养鼠胚真皮层成纤维细胞，并用活细胞计数法及MTT比色法观察再生丝素膜对细胞的形态、功能和生长的影响。结果 再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞的贴壁能力和形态及其代谢功能未见明显改变，也未见明显毒性，并能支持细胞正常生长，呈现正常的生长繁殖曲线。结论 再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞具有良好的细胞相容性。     

新生大鼠大脑皮层神经细胞的原代无血清培养

神经细胞原代培养是研究神经组织形态结构和功能及其在缺血缺氯等各种损伤条件下的病理变化的重要方法之一，体外神经细胞培养经历了有血清培养向无血清培养的发展过程．近年来，应用无血清培养神经细胞方法比较广泛，各个实验室都有自已的经验．我们实验室对大脑皮层神经细胞原代培养进行了较长时间摸索，有些体会值得交流。     

HrIFN-γ和hrIL-4对体外培养人早孕滋养层细胞PCNA和bcl-2表达的影响

【目的】研究人重组γ-干扰素(hrIFN-γ)和白细胞介素4(hrIL-4)对人早孕滋养层细胞PCNA和bcl-2表达的影响。【方法】采用人工流产方法提取绒毛膜组织,在体外培养条件下加入hrIFN-γ和hrIL-4,继续培养24 h,用倒置光显微镜和透射电镜观察绒毛膜组织形态学变化,应用免疫组织化学法检测绒毛膜组织滋养层细胞PCNA和bcl-2蛋白表达。【结果】hrIFN-γ处理的滋养层细胞PCNA和bcl-2表达均较对照组弱;hrIL-4处理的滋养层细胞PCNA和bcl-2表达较对照组增强。【结论】hrIFN-γ抑制滋养层细胞的增殖,hrIL-4促进滋养层细胞的增殖。     

硝酸纤维素膜在细胞培养和染色中的应用

目的：提供一种新的用于细胞培养和病理技术的支持介质。方法：应用硝酸纤维素膜培养细胞和病理染色并与常规方法培养细胞的比较。结果：细胞生长良好，形态正常，染色后结构清晰，与常规玻璃培养的细胞无明显差异。结论：硝酸纤维素膜具有良好的透光性及化学稳定性，无细胞毒性作用，同时对细胞有较好的亲合性，可以替代玻片，较玻片具有广阔的应用前景。     

脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞共同培养建立血脑屏障模型

目的：建立能够模拟在体血脑屏障的体外模型。方法：培养大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞，用免疫组织化学染色的方法鉴定细胞，分别接种两种细胞于多聚酯多孔膜的两面，相关显微镜及HE染色观察细胞在多聚酯膜上的生长情况。结果：培养的脑微血管内皮细胞多数为梭形铺路石样外观，而星形胶质细胞呈具有多个突起的典型形态，免疫组织化学染色鉴定细胞的纯度分别在90％和95％以上，两种细胞能够以单层细胞的形式生长于多聚酯多孔膜的两面。结论：通过脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共同培养能够形成与在体血脑屏蔽类似的结构，是一种建立血脑屏障模型的可行方法。     

乳膜培养人内皮细胞及其整装电镜标本制作技术的研究

用Falcon塑料培养器皿的原料，自制一种支持膜（PF），经明胶处理后，首次用于浮膜培养人内皮细胞。细胞片长至亚融合时，以高锰酸钾混合固定液固定、消化细胞以保存细胞的膜系统。将固定后的细胞连同PF贴附于铜网上，干燥后在TEM80Kv条件下，细胞的内质网及线粒体等超微及立体超微结构可被清楚地观察到。还讨论了本方法的优点并与文献中的其它整体细胞方法做了比较。     

低免疫原性脱细胞神经基质的制备及其理化性能

目的：制备低免疫原性异种脱细胞神经基质并评估其理化性能。方法：以α-1，3-半乳糖苷转移酶基因敲除（GTKO）猪坐骨神经为实验原料对基因敲除猪坐骨神经进行脱细胞处理制备低免疫原性异种脱细胞神经基质，通过HE、DAPI染色及DNA残留量检测评价神经组织的脱细胞效果；I型胶原、层黏连蛋白、纤连蛋白免疫组织化学及天狼猩红染色评价脱细胞神经细胞外基质组分保留情况；α-1，3-半乳糖基（a-gal）免疫荧光检测异种抗原a-gal的残留；扫描电镜（SEM）分析脱细胞神经三维组织结构及孔隙率。结果：组织染色显示脱细胞神经基质内膜、外膜、束膜中的细胞均去除干净，DNA定量结果显示DNA含量下降了95%。天狼猩红染色及免疫组织化学结果显示脱细胞神经组织较好地保留了胶原纤维与细胞外基质主要蛋白。SEM结果显示脱细胞神经较好地保留了其三维组织结构，细胞毒性检测表明脱细胞神经基质无细胞毒性。结论：本研究自主设计的四联脱细胞方案能彻底去除神经组织中的细胞成分与异种抗原，并且较完整地保留了神经组织结构，与天然神经具有高度相似性。     

神经干细胞的分离培养及超微结构研究

目的研究神经干细胞分离培养及其超微结构特征。方法从胚胎大鼠的大脑皮质、室管膜下区等神经组织分离神经干细胞，用无血清培养技术在体外进行培养、扩增和传代。采用免疫荧光技术，鉴定神经干细胞和分化的神经细胞，同时进行电镜结构观察。结果从胚胎大鼠的大脑皮质、室管膜下区等组织获得了大量神经干细胞，可自我增殖并多向分化。神经球表面呈微绒毛结构，内层细胞结合较为松散．可见凋亡小体。部分细胞分化为具有突起和轴突样结构的细胞。结论分离培养的神经干细胞具有自我增殖和多向分化潜能，并具有与功能相对应的超微形态结构。     

组织工程简介

人体由细胞、组织和器官构成。人体的组织可归纳为四大类型：上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织。它们在胚胎时期的发生来源、细胞构成、形态特点及功能等方面，各具明显的特性。四大基本组织以不同的种类、数量     

大鼠胸腺皮髓质交界区的嗜金属性细胞

应用银染色法和组织化学法探讨了大鼠胸腺皮、髓质交界区（ＣＭＺ）嗜金属性细胞（ＭＣ）的形态结构和性质。银染色法显示：在胸腺皮、髓质交界区存在着大量的嗜金属性细胞，并在此区形成一个致密的细胞带。组织化学法显示：这些细胞具有ＡｃＰ和ＮｓＥ阳性反应性，呈ＰＡＳ阳性反应以及其胞质含有被醛复红染色的颗粒。由此认为，这些嗜金属性细胞属于巨噬细胞。