结核分支杆菌重组BCG疫苗研究进展

结核分支杆菌引起的结核病是一种人兽共患的慢性传染病,短程督导化疗是治疗该病的主要措施,卡介苗是预防该病的唯一疫苗,但其免疫效果极不稳定.文章介绍了7种结核分支杆菌重组BCG疫苗构建及其免疫机制等方面的研究进展.     

两种结核DNA疫苗的免疫原性和保护效力

ＭＰＴ6 4和ＥＳＡＴ6都是结核分支杆菌复合群主要的分泌性蛋白 ,也是其重要的Ｔ细胞抗原 ,ＥＳＡＴ6编码基因在ＢＣＧ菌株中缺失〔1〕,而ＭＰＴ6 4编码基因在某些ＢＣＧ菌株中也缺失〔2〕。因此 ,本研究将结核分支杆菌ＭＰＴ6 4和ＥＳＡＴ6ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后 ,观察小鼠的体液和细胞免疫应答 ,并通过脏器的菌落计数评价这两种ＤＮＡ疫苗的保护效力 ,以筛选有效的结核病ＤＮＡ疫苗。材料与方法质粒ＤＮＡ的提取和纯化 :采用Ｑｉａｇｅｎ公司生产的质粒纯化试剂盒大量制备及纯化ＤＮＡ免疫用的质粒 ,溶于生理盐水中 ,置 2 0℃贮存备用。通…     

VNTR技术用于安徽省耐药结核分支杆菌基因分型的初步研究

目的 探讨VNTR（variable number of tandem repeat）技术在安徽省耐药结核分支杆菌基因分型中的应用。方法初步选取13个分型效果较好的VNTR基因位点。应用聚合酶链反应（PCR）和琼脂糖凝胶电泳，建立检测耐药结核分支杆菌DNA指纹多态性的方法，分析耐药结核分支杆菌DNA多态性。结果共对78株耐药结核分支杆菌的13个VNTR位点进行了检测，根据这些菌株的指纹多态性特征，共分为4个基因型（Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型），分别为Ⅰ型3．8％（3／78）、Ⅱ型6．4％（5／78）、Ⅲ型10．3％（8／78）、Ⅳ型所占比例最大，为79．5％（62／78）。在Ⅳ型菌中，耐药菌株主要为耐多药（结核分支杆菌至少耐异烟肼和利福平两种药）和单耐利福平菌株，其所占比例分别为45．8％和22．6％。结论本资料分析表明，安徽省耐药结核分支杆菌的传播似以Ⅳ型菌株为主，应加强此型菌株流行的监控。     

结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗免疫治疗作用的研究

目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检测血清抗体;免疫治疗2月和5月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果:DNA疫苗组抗原特异性抗体不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率无显著差异;各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落计数均比对照组不同程度地减少;C和B组的肺病变程度较轻。免疫治疗5月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高;各组肺、脾细菌数无显著差别比和D组的肺未见明显病变。结论:DNA疫苗似乎具有一定的免疫治疗效果。     

免疫基因多态性与结核病易感相关性的研究进展

结核病是一种高感染率、高致死率的传染病,严重威胁人类健康.近年来,随着对结核病发病机理的研究进展,研究人员发现免疫基因多态性与结核病易感性之间紧密关联.宿主针对结核分支杆菌感染的免疫应答主要包括固有免疫应答和适应性免疫应答两个部分.本文主要就以上两个部分的免疫基因多态性与结核病易感的相关性进行综述.     

用抗卡介苗单抗制备独特型抗体作为肿瘤独特型疫苗

研究发现牛结核分支杆菌—卡介杆菌(BCG)广泛分布于各种类型肿瘤细胞中,如MethA 纤维肉瘤、结肠癌等肿瘤,因此制备BCG 疫苗,具有广泛的抗肿瘤作用。本文用抗BCG 单克隆抗体(Ab1)制备的抗独特型抗体(Ab_2),表现出明显的抗MethA 纤维肉瘤的活性。纤维肉瘤MethA     

结核分支杆菌Rv0901基因置换型打靶载体的构建

目的：对结核杆菌H37Rv的Rv0901基因进行体外扩增，构建基因打靶载体，利用基因打靶技术进行结核分支杆菌基因Rv0901功能的研究。方法：结核分支杆菌标准毒力株H37Rv体外培界，扩增目的基因，连接载体及目的片段，切除目的基因，筛选阳性克隆，酶切鉴定。结果：经酶切鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符，鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段，成功切除靶片段。证实标记基因插入片段插入方向正确。结论：成功构建了用于结核分支杆菌基因打靶的置换型载体，为随后将进行的Rv0901基因敲除株的建立，Rv0901基因功能的研究奠定了基础。     

结核病治疗性疫苗的研究进展

耐药结核分枝杆菌的出现以及由于免疫功能失衡导致的免疫耐受是阻碍结核病有效治疗的两个重要原因。治疗性疫苗能通过对已感染结核分枝杆菌的机体产生二次免疫激发,打破机体的免疫耐受,诱导保护性免疫应答而达到清除结核分枝杆菌的目的。目前,结核病治疗性疫苗研究主要集中在DNA疫苗、亚单位疫苗、减毒活疫苗和死疫苗上。因其可纠正机体失衡的免疫状态,且对耐药性的结核分枝杆菌可产生同样的清除作用,所以,近年来结核病治疗性疫苗逐渐受到人们的关注和重视并取得了较大发展。     

结核病治疗性疫苗的研究进展

耐药结核分枝杆菌的出现以及由于免疫功能失衡导致的免疫耐受是阻碍结核病有效治疗的两个重要原因.治疗性疫苗能通过对已感染结核分枝杆菌的机体产生二次免疫激发,打破机体的免疫耐受,诱导保护性免疫应答而达到清除结核分枝杆菌的目的.目前,结核病治疗性疫苗研究主要集中在DNA疫苗、亚单位疫苗、减毒活疫苗和死疫苗上.因其可纠正机体失衡的免疫状态,且对耐药性的结核分枝杆菌可产生同样的清除作用,所以,近年来结核病治疗性疫苗逐渐受到人们的关注和重视并取得了较大发展.     

结核病治疗性疫苗的研究进展

耐药结核分枝杆菌的出现以及由于免疫功能失衡导致的免疫耐受是阻碍结核病有效治疗的两个重要原因.治疗性疫苗能通过对已感染结核分枝杆菌的机体产生二次免疫激发,打破机体的免疫耐受,诱导保护性免疫应答而达到清除结核分枝杆菌的目的.目前,结核病治疗性疫苗研究主要集中在DNA疫苗、亚单位疫苗、减毒活疫苗和死疫苗上.因其可纠正机体失衡的免疫状态,且对耐药性的结核分枝杆菌可产生同样的清除作用,所以,近年来结核病治疗性疫苗逐渐受到人们的关注和重视并取得了较大发展.     

抗结核分支杆菌治疗对难治性视神经脊髓炎转归的相关性研究

目的本研究旨在探讨难治性视神经脊髓炎（NMO）的治疗方法，以及与结核分支杆菌的相关性。方法本研究对13例激素治疗无效的视神经脊髓炎的病人进行了前瞻性的研究，治疗前均进行磁共振和腰穿检查。脑脊液进行常规检查和应用巢式PCR监测分支杆菌MPB-64基因，治疗前应用EDSS对病人的伤残程度进行评分。进行抗结核诊断性治疗，并进行长期随访和观察。结果所有的病人在治疗前脊髓MR均有超过3个脊髓阶段的异常信号。EDSS评分在4．5～9；视敏度均有明显下降。巢式PCR扩增结核杆菌基因有3个病人呈阳性结果。病人对抗结核治疗反应良好，治疗后EDSS评分逐步下降，脊髓内的异常信号在治疗后逐渐消退，视力改善。结论本研究显示结核分支杆菌感染在NMO的发生、发展过程中可能起着重要作用。鉴于该病预后差，以及抗结核治疗在本研究中令人鼓舞的效果，作者认为在激素治疗无效时，应为病人进行诊断性抗结核治疗。     

embB基因突变与结核分支杆菌耐乙胺丁醇的关系

对ｅｍｂＢ基因突变与结核分支杆菌耐乙胺丁醇之间的关系进行研究 ,以期建立敏感、特异、简便、快速地检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇基因型的分子药敏试验方法。以结核分支杆菌Ｈ37Ｒｖ标准株为对照 ,10 7株临床分离株经 16ＳｒＤＮＡ聚合酶链反应 (ＰＣＲ) 单链构象多态性(ＳＳＣＰ)初步鉴定均为结核分支杆菌。传统的药敏试验显示 38株为药物敏感株 ,6 9株为耐ＥＭＢ分离株 ;进一步进行ＥＭＢＭＩＣｓ测定 ,4株ＭＩＣｓ为 5 μｇ ｍｌ,3株为10 μｇ ｍｌ,10株为 2 0 μｇ ｍｌ,2 3株为 30 μｇ ｍｌ,2 9株ＭＩＣｓ≥ 5 0 μｇ ｍｌ。结核分…     

Der p2重组胞壁型E.coli-BCG穿梭表达载体的构建和鉴定

目的：构建能够携带外源蛋白-屋尘螨抗原(Der p2)基因并能在脑壁表达的E.coli-BCG穿梭载体。方法：用PCR技术，从结核分支菌毒株H37Rv基因中，扩增结核分支杆菌19kDa抗原的脑壁区及其上游调控元件(19—ss)基因，并克隆人含有Der p2基因的c穿梭载体POLYC中。用间接免疫荧光染色法，检测该载体能够携带并表达的Der p2基因在牡牛分支杆菌宿主中表达。结果：经测序证实，所克隆的19-ss基因序列正确。所构建的含有19-ss基因的E.coli-BCG穿梭载体(pCW)能完成在大肠杆菌和牡牛分支杆菌细胞之间的穿梭，并介导抗生素抗性基因表达。经免疫荧光检查，外源基因Der p2以脂蛋白的形式表达于分支杆菌宿主的表面。结论：成功地构建了以脑壁嵌合形式表达外源蛋白的E.coli-BCG穿核载体。     

结核分支杆菌3种不同靶基因传统PCR巢式PCR检测比较研究

本文以结核分支杆菌的插入序列基因、6 5KDa抗原基因和rpoB基因为靶基因 ,系统地比较了以 1对引物扩增的传统PCR和以 2对引物扩增的巢式PCR的灵敏度和特异性。结果为本文所采用的引物均为人结核分支杆菌复合群特异 ;巢式PCR灵敏度高于传统PCR ,其中以rpoB基因为靶基因的巢式PCR灵敏度达一个结核分支杆菌。rpoB基因巢式PCR产物经DNA测序并可确认对利福平敏感与否。rpoB基因巢式PCR可作为结核病和利福平耐药的辅助诊断方法     

结核分支杆菌耐药基因检测对获得性耐药性的研究

了解不同年龄段肺结核病人的结核分支杆菌获得性耐药情况, 比较两种耐药性检测方法的检测效果, 评价它们的临床应用价值.用药敏试验(绝对浓度法)检测了结核分支杆菌株对RFP、INH、SM、PZA和EMB耐药情况, 采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测结核分支杆菌耐药rpoB、katG、 rpsL、pncA和embB基因突变, 用绝对浓度法作药物敏感试验.青年组、中年组和老年组获得性耐药率分别为89.2%、85.3%和67.6%, 耐药基因突变率分别为76.2%、81.3%和63.2%,青年组耐药率和耐多药率显著高于其他组.结核杆菌耐药基因突变与耐药水平联系密切, 多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药区,也有少数基因突变发生在低耐药区.不规律用药时间越长耐药率越高.不同年龄组获得性耐药情况有差别, 应重视不同年龄组, 特别是青年组耐药率检测.PCR-SSCP是一种快速检测结核杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变敏感、特异的方法.     

淋巴结分支杆菌性梭形细胞假瘤

目的 探讨淋巴结分支杆蓖性梭形细胞假瘤的临床病理特征。方法 对2例淋巴结分支杆菌性梭形细胞假瘤,常规石蜡切片,HE、抗酸染色,免疫组织化学标记,光镜观察。结果 患者均系1岁婴儿,无免疫缺陷疾病和使用免疫抑制剂史,出生1个月后接种卡介苗,临床表现：腋下淋巴结结节性肿大伴发热,病理表现：淋巴结肉梭形细胞束状或席纹状增生伴有淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞浸润和增生的毛细血管,形成梭形细胞假瘤,抗酸染色显示病变内大量分支杆菌,免疫组织化学标记梭形细胞Mac387和溶菌酶强阳性、S-100阴性。结论 在免疫功能低于或缺陷患者（如AIDS）和婴儿接种卡介苗后,可以发生淋巴结分支杆菌性梭形细胞假瘤,该病应与淋巴结的原发性梭形细胞肿瘤鉴别,确诊对其治疗十分重要。     

布氏杆菌pCDNA3.1-L7/L12核酸疫苗的构建及其免疫学评价

目的 获得布氏杆菌保护性抗原L2／L12重组蛋白及pCDNA3．1-L7／L12重组质粒，并比较其诱导特异性免疫应答的能力。方法 PCR扩增布氏杆菌核蛋白L7／L12基因分别构建至原核表达载体PET32a( )和真核表达载体pCDNA3.1( )中；pET32a-L7／L12重组质粒转化BL21(DE3)，所表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析、纯化后免疫小鼠；pCDNA3.1-12／L12重组质粒配以GM-CSF同时肌肉注射免疫小鼠，3次免疫后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果ELISA、Western blot检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生，蛋白苗所诱导的抗体效价远远高于DNA疫苗；通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发TH1型免疫为主。结论 所构建的布氏杆菌DNA疫苗和蛋白苗均具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力，DNA疫苗诱导产生的细胞免疫反应强于蛋白苗，可作为潜在的布氏菌新型疫苗，有进一步研究的意义。     

045 IL-7或IL-15延长结核杆菌感染鼠的存活期

世界上三分之一的人口感染了胞内病原体结核分支杆菌 (ＴＢ) ,由此引起的死亡率不断增加。既往研究表明 ,感染分支杆菌的ＭΦ可大量产生ＩＬ 7和ＩＬ 15 ,二者都作用于特定的Ｔ细胞亚群。与ＩＬ 2、ＩＬ 4或ＩＬ 10不一样 ,ＩＬ 7能够以一种非过剩的形式介导小鼠淋巴细胞生成 ,所以可认为是一种特殊的细胞因子 (ＣＫ)。ＩＬ 7由免疫或非免疫细胞产生 ,能够维持较强的细胞免疫应答 (α/ β和γ/δＴ细胞 )持续几个月。与ＩＬ 7一样 ,ＩＬ 15主要是由感染的ＭΦ和树突状细胞产生的。基于动物实验研究的资料 ,ＩＬ 15在小鼠体内能够潜在活化个…     

壳聚糖递送的结核基因疫苗诱导的肺部黏膜免疫及在抗结核免疫保护中的意义

诱导肺局部黏膜免疫对于早期控制结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberfulosis)十分关键.在我们过去构建的结核基因疫苗pHSP65pep有效诱导脾脏IFN-γ+Th1细胞应答的基础上,为更好诱导呼吸道和肺局部黏膜免疫,采用天然生物多糖壳聚糖(chitosan)作为黏膜递送介质递送结核基因疫苗.制备壳聚...     

国外窗口

国外窗口ＲＩＰ治疗活动性结核Ｂａｒｎｅｓ报道结核病在世界范围内再次居成人传染病死因的首位，而且对多种药物抗药的结核分支杆菌发病率的增加特别令人关注。近１０年来，结核病发病率显著增长，世界卫生组织预测本世纪９０年代的１０年中有９０００万人将患结核病，其...