碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制大鼠过氧化氢作用心肌细胞L型钙通道电流的增大

目的本实验旨在研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对过氧化氢作用大鼠心肌细胞L-型钙电流的抑制作用,并探讨其保护机制。方法采用Langendorff灌流系统灌流SD大鼠心脏,标准酶解法消化分离得到单个心室肌细胞,给予正常台氏液灌流5 min,灌流含过氧化氢的台氏液建立过氧化氢模型。采用全细胞膜片钳记录对照、模型以及不同浓度F2(0.1、1、10μmol·L-1)对L-型钙通道电流,观察过氧化氢作用后,F2对L-型钙通道电流的影响。结果过氧化氢作用后L-型钙通道电流增大,I-V曲线下移。F2呈浓度依赖地抑制L-型钙通道电流,I-V曲线上移。结论 F2能抑制L-型钙电流,防止过氧化氢作用时心肌细胞的钙超载,从而保护心肌细胞。     

哇巴因对心肌细胞钙瞬变及收缩力的作用

目的检测哇巴因对正常大鼠和阿霉素所致心衰大鼠左心室肌细胞的收缩力、钙瞬变和舒张期钙影响。方法腹腔注射阿霉素制备大鼠心衰模型,以改良的Langendorff装置分离心肌细胞,负载Fluo-4钙荧光染料后采用IonOptix可视化细胞动缘探测系统检测哇巴因对大鼠心肌细胞收缩功能、舒张期钙及钙瞬变的变化。结果哇巴因可浓度依赖性增加正常大鼠心肌细胞收缩力和钙瞬变,3×10-7 mol·L-1哇巴因即明显增加收缩力和钙瞬变,但对心衰大鼠心肌细胞,1×10-5 mol·L-1哇巴因才明显增加心肌细胞收缩力和钙瞬变;哇巴因也可增加正常大鼠和心衰大鼠心肌细胞舒张期钙。结论哇巴因能够增加心肌细胞收缩力、钙瞬变和舒张期钙,阿霉素所致心衰大鼠心肌细胞较正常细胞不敏感。     

昆明小鼠心室肌细胞分离方法及动作电位、L型钙通道电流记录

目的 探讨耐钙昆明小鼠心室肌细胞的急性分离方法及AP、L型钙通道电流的记录。方法 采用三步灌流法灌流,首先灌流无钙台氏液,再换成含Ⅱ型胶原酶0.1 mg.ml_-1、胰蛋白酶0.01 mg.ml_-1、牛血清白蛋白0.2mg.ml_-1的无钙台氏液灌流,消化液灌流期间,每隔5min加入20μl 的20mM CaCl₂,以观察流出液是否有单个心肌细胞来判断消化终点,最后灌流含1 mg.ml_-1牛血清白蛋白的KB液,采用全细胞膜片钳记录方式记录到动作电位及L型钙通道电流。结果 可获得80～90%杆状心肌细胞,复钙后,仍有60%细胞保持静止,细胞表面干净整洁,折光性强,边缘和横纹清晰,立体感强获得60%左右的耐钙心室肌细胞,并记录到典型的AP、L型钙通道电流。结论 该分离方法分离的细胞具有耐钙性和正常电生理特性。     

楤木皂苷C对缺血/再灌注原代大鼠心肌细胞兴奋收缩偶联及CaMK Ⅱ的调控作用

目的探讨从龙牙楤木总皂苷中分离得到的楤木皂苷C(aralosdie C,SMC)对缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的大鼠心肌细胞收缩功能和钙瞬变的影响,及钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)在其中发挥的作用。方法采用Langendorff心脏灌流系统分离原代大鼠心肌细胞,分为对照组(Control组)、模型组(I/R组)、楤木皂苷C组(I/R+SMC8μmol·L~(-1))、抑制剂组(I/R+KN-93 1μmol·L~(-1)+SMC 8μmol·L~(-1)),采用细胞收缩与离子浓度同步测定系统同步检测SMC通过调控Ca MKⅡ对单个I/R细胞收缩功能和钙瞬变的影响。结果 8μmol·L~(-1)SMC作用5 min和未加入SMC的I/R成年大鼠心肌细胞收缩功能进行比较,发现SMC处理可明显促进I/R成年大鼠心肌细胞收缩功能的恢复,SMC改善心肌细胞收缩的同时,其钙瞬变也相应改善,并且SMC使钙瞬变幅度和[Ca2+]i上升/下降的速率明显升高,但加入KN-93抑制Ca MKⅡ后,除稳态钙息值无变化外,SMC对钙瞬变的作用效果降低。结论 SMC可明显改善I/R成年大鼠心肌细胞的收缩功能和钙瞬变,其作用机制可能与Ca MKⅡ有关。     

荞麦花叶总黄酮的舒张血管作用及其机制

目的探讨荞麦花叶总黄酮(TFBFL)对大鼠离体胸主动脉的舒张作用与机制。方法采用离体血管环灌流装置,经生物信号采集与分析系统测定血管环张力的变化;激光扫描共聚焦显微镜技术检测血管平滑肌细胞内钙浓度。结果在苯肾上腺素(phenylephrine,PE)10-6mmol.L-1或KCl60 mmol.L-1预收缩的保留内皮和去除内皮的血管环中,TFBFL均能够浓度依赖性的引起血管舒张;相对于去除内皮的血管环,TFBFL对保留内皮的血管环的舒张作用更明显。保留内皮的血管环用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(100mmol.L-1)预孵后,TFBFL诱导的血管舒张作用明显减弱。在无钙灌流液中,用KCl 60 mmol.L-1去极化去除内皮的血管环后,逐渐加入Ca2+,使血管环呈浓度依赖性收缩;TFBFL(0.8 mg.L-1)孵育10 min后可使CaCl2的量效曲线向下移位且可使PE在无钙灌流液中诱导的血管环最大收缩幅度明显降低。激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内钙的结果表明,TFBFL浓度依赖性(0.4、0.8 mg.L-1)的抑制了静息状态平滑肌细胞质内钙浓度的升高。结论 TFBFL能够浓度依赖性舒张大鼠胸主动脉,其作用机制可能是降低细胞内游离Ca2+浓度;对于保留内皮的血管环,TFBFL也作用于血管内皮细胞,促进一氧化氮的释放,引起血管舒张。     

钙耐受大鼠心肌细胞分离方法研究

目的:探讨钙耐受大鼠心肌细胞的快速、高效分离方法。方法:采用自行改进的Langendorff心脏灌流装置,逆行主动脉恒流灌注获得单个耐钙心肌细胞,KB液温育后以全细胞膜片钳方式记录离子流。结果:分离所得70%存活心肌细胞有80%为钙耐受心肌细胞,可记录到典型的瞬时外向钾电流。结论:根据灌注压力变化掌握消化时间,控制好细胞分离过程的各种因素,能够获得大量具有正常电生理特性的钙耐受心肌细胞。     

小檗碱对豚鼠心室肌细胞胞浆内游离钙离子浓度的影响

研究小檗碱对豚鼠心肌细胞胞浆 [Ca2 + ]i 的影响 .用酶解法分离单个豚鼠心肌细胞 ,Fluo- 3/AM标记胞浆内游离钙离子 ,激光扫描共聚焦显微镜实时测定胞浆 [Ca2 + ]i变化 .结果 ,小檗碱 1 -1 0 0 μmol· L-1对正常台氏液中静息状态细胞胞浆[Ca2 + ]i 无明显影响 ;小檗碱 1 μmol·L-1对 KCl30mmol·L-1引起的细胞外钙内流有抑制作用 ( P<0 .0 1 ) ,而小檗碱 1 0 0 μmol·L-1对细胞内钙库释放有强烈激动作用 ( P<0 .0 1 ) .结果提示在豚鼠心肌细胞上低浓度小檗碱即能抑制电压依赖性钙通道 ,而高浓度时又能激动细胞内钙库释放 .     

成年大鼠心肌细胞高效激光共聚焦显微镜钙成像方法

目的建立高效易行的测定心肌细胞钙成像方法。方法Langendorff灌流获取成年大鼠心室肌细胞。大鼠心肌细胞经Fluo-4染色后分别加入玻璃底的6孔培养板中,连接Ion C-Pace EP刺激器,于激光共聚焦显微镜下测定胞内钙离子浓度的动态变化。结果约80％的细胞跟随所设频率规律的收缩。激光共聚焦显微镜记录到与刺激器频率相同的有规则的细胞钙瞬变。加入咖啡因后钙释放增加,提示此为钙库的钙释放。结论利用新型的刺激装置,结合激光共聚焦显微技术,我们成功地获得了高效易行的成年大鼠心肌细胞Ca^＋成像方法。此法也可用于其他实验动物心肌细胞,易于记录细胞内钙离子浓度的动态变化。     

碱性成纤维细胞生长因子对豚鼠耳蜗外毛细胞钙调控的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (Basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)对豚鼠耳蜗外毛细胞 (Outerhaircells,OHCs)钙调控的影响以及这种影响与硫酸链霉素的拮抗效应 ,旨在深入探讨硫酸链霉素急性耳毒性和bFGF防治作用的分子生物学机制。方法　豚鼠全麻后断头活杀 ,酶 -机械法分离获得单离的OHCs。 10 μmol·L-1的Fluo 3 /AM负载 ,室温下放置 60min后用ACASUltima型激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM ,MeridianUSA)观察各种条件下OHCs[Ca2 + ]i的变化。结果　① 10 0mmol·L-1的高钾细胞外液和含 1nmol·L-1bFGF的正常细胞外液灌流分别导致 10 /11和 9/9个细胞的 [Ca2 + ]i升高 ,而高钾无钙细胞外液和含 1nmol·L-1bFGF的无钙细胞外液灌流则分别为 0 /7和 0 /8个细胞 [Ca2 + ]i 升高。②经 1 0mmol·L-1的硫酸链霉素处理后 ,灌流高钾细胞外液则 0 /12个细胞 [Ca2 + ]i 升高 ,灌流bFGF则为 4/8个细胞 [Ca2 + ]i 升高。③ 1nmol·L-1的bFGF作用后 ,灌流高钾细胞外液 ,OHCs[Ca2 + ]i升高的幅度较高 ,持续时间较长。④ 3组细胞均提前 1h加入 1mmol·L-1的硫酸链霉素 ,实验前 5min分别加入 0 1、1 0和 10nmol·L-1的bFGF ,灌流高钾细胞外液则分别导致 4/11、6/9和 12 /12个细胞 [Ca2 + ]i的升高。结论　bFGF和?     

广枣叶提取物原儿茶酸对大鼠离体正常心脏心功能的影响

目的主要研究广枣叶提取物原儿茶酸对大鼠离体正常心脏心功能有何影响。方法取SD大鼠,开胸取出心脏后,置于Langendorff灌流装置上用k-H液持续灌流,观察心肌收缩力和心电图,待稳定后给药,继续观察心电图和心肌收缩力的变化,从而判断是否该药有效。结果发现原儿茶酸在不同浓度的情况下对心脏的心电及心肌收缩力有不同的影响。结论原儿茶酸对心脏有减慢心率和心肌收缩力的作用。     

茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响

目的研究茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制。方法用激光共聚焦显微镜探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度((FI-FI0)/FI0,%;FI0:对照;FI:给药)表示。结果①茶黄素(10,20,40μmol.L-1)对正常台氏液中心肌细胞内游离钙浓度没有影响,却可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加。②预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可大部分取消茶黄素(20μmol.L-1)在模拟缺血液中的作用。③茶黄素(20μmol.L-1)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加。④当细胞外液钙浓度由1 mmol.L-1增加到10 mmol.L-1而诱发心室肌细胞钙超载时,部分心室肌细胞产生可传播的钙波,茶黄素(20μmol.L-1)可降低钙波发生的频率和持续时间,最终阻断钙波并降低[Ca2+]i。结论茶黄素可抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网的内钙释放从而降低[Ca2+]i。     

低浓度的哇巴因引起豚鼠心室肌细胞内钙增高的可能途径

目的观察哇巴因(ouabain,OUA)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响。方法酶解分离豚鼠心室肌细胞,负载Fluo3-AM,激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca2+]i的荧光密度,结果用相对荧光强度(FI-FI0)/FI0(%)表示,其中,FI0:给药前的荧光密度值,FI:给药后的荧光密度值。结果在正常台氏液及无钙台氏液中,OUA(1×10-9~1×10-6mol·L-1)浓度依赖性地升高细胞内钙浓度,在正常台氏液分别为16.7±6.8(P<0.01)、26.0±4.7(P<0.01)、183.0±101.0(P<0.01)、295.0±172.0(P<0.01),而在无钙台氏液中OUA升高[Ca2+]i不如在正常台氏液中,分别为9.19±4.73(P<0.05)、20.75±5.2(P<0.05)、85.79±64.7(P<0.05)、231.0±26.0(P<0.05)。肌浆网钙通道抑制剂理阿诺碱Ryanodine(1×10-5mol·L-1)可部分抑制正常台氏液时OUA的效应5.3±2.1(P<0.01)。在无钠无钾台氏液中,OUA(1×10-9~1×10-6mol·L-1)对心室肌细胞[Ca2+]i的影响分别为16.5±6.5、25.0±5.0、162.0±45.0、280.0±96.0与正常台氏液比较无差别(P>0.05)。蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮(genistein,GST;1、10、50、100μmol·L-1)可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的OUA效应,分别为17.5±3.1、14.2±8.9、0.8±7.6(P<0.05)、-1.9±6.7(P<0.01)。L-型钙通道激动剂BayK8644,肌浆网钙通道开放剂Ryanodine(1×10-7mol.L-1)在正常台氏液中均可提高[Ca2+]i为13.3±3.2(P<0.05)、6.4±5.6(P<0.05)。三羟异黄酮可取消其效应为-13.0±21.0(P<0.01)、-1.6±5.9(P<0.01)。结论低浓度的OUA升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度,此作用与其开放钙通道及促进内钙释放有关,且信号转导通过此二途径起作用。     

钙流拮抗药对眼镜蛇心脏毒升高大鼠心肌胞浆Ca~（2＋）作用的影响

Ｆｕｒａ－２荧光测定实验显示，眼镜蛇心脏毒（ＣＴＸ）能明显升高新鲜分离的大鼠心肌细胞的胞浆Ｃａ２＋浓度。维拉帕米在完全阻断高Ｋ＋引起胞浆Ｃａ２＋升高的浓度下（１μｍｏｌ·Ｌ－１）．能明显抑制ＣＴＸ作用，但不能阻断之。１．５μｍｏｌ·Ｌ－１ＣＴＸ使离体大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ心脏收缩幅度逐渐减少，最后心脏停搏于收缩期。维拉帕米及硝苯吡啶均能明显延长心脏的搏动时间，但不能阻止ＣＴＸ引起的心脏停搏。结果提示，ＣＴＸ引起膜去极化使电位依赖性Ｃａ２＋通道开放不是ＣＴＸ触发Ｃａ２＋内流的唯一机理。     

小檗碱对培养的新生大鼠心肌细胞内游离钙含量的影响

采用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ－２作为细胞内钙离子的荧光探针，利用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统。检测了培养新生大鼠心肌细胞内游离钙的浓度，并观察了小檗碱对去甲肾上腺素，Ｈ２Ｏ２，高Ｃａ２＋及高Ｋ＋引起细胞内钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化的影响。小檗碱对心肌细胞静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响，能浓度依赖地抑制去甲肾上腺素和Ｈ２Ｏ２引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高。小檗碱５０μｍｏｌ·Ｌ－１能抑制高Ｋ＋引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高，而小剂量（１－１０μｍｏｌ·Ｌ－１）则无作用。对搏动细胞，小檗碱能抑制其［Ｃａ２＋］ｉ瞬间变化的最大值，对最小值则无作用。     

度洛西汀对大鼠胸主动脉环舒张功能的影响

目的研究度洛西汀(DLX)对血管舒张功能的影响并探讨其作用机制。方法采用离体血管环灌流装置,观察DLX对大鼠胸主动脉环的作用及不同工具药的影响。结果 DLX对KCl(30 mmol.L-1)和NE(1μmol.L-1)预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用,对内皮完整和去内皮血管环舒张作用无差异,该舒张作用为非内皮依赖性。在KCl预收缩基础上,加入钾通道阻断剂格列苯脲Gli(10μmol.L-1)、四乙胺TEA(10 mmol.L-1)、氯化钡BaCl2(1 mmol.L-1)、四氨基吡啶4-AP(1 mmol.L-1)和5-HT2受体阻断剂赛庚啶(1μmol.L-1)均不能抑制DLX的舒血管效应;α1受体阻断剂哌唑嗪(1μmol.L-1)组对DLX舒血管作用有抑制作用。在无钙液中,DLX可以明显抑制NE和CaCl2收缩血管的作用。结论 DLX能够浓度依赖性的舒张血管,其机制可能与抑制经由血管平滑肌细胞膜VDC和ROC通道的钙离子内流,拮抗α1受体以及抑制胞质内钙离子释放有关。     

前胡丙素对培养心肌细胞~（45）Ca~（2＋）摄入及细胞内游离钙的影响

利用培养的乳鼠心肌细胞测定细胞４５Ｃａ２＋的摄入及细胞内游离钙的浓度。结果表明，前胡丙素（Ｐｒａ－Ｃ）１０－１００μｍｏｌ·Ｌ－１依浓度抑制４５Ｃａ２＿的摄入，并抑制由３０μｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ所引起的４５Ｃｓ２＋摄入的增加，同时Ｐｒａ－Ｃ１００μｍｏｌ·Ｌ－１对去甲肾上腺素所诱发的４５Ｃａ２＿摄入的增加也有抑制作用。Ｐｒａ－Ｃ１０μｍｏｌ·Ｌ－１和维拉帕米１０μｍｏｌ·Ｌ－１能抑制细胞外高钾（３０，５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高，同时Ｐｒａ－Ｃ３０ｍｏｌ·Ｌ－１和维拉帕米１０μｍｏｌ·Ｌ－１对去甲肾上腺素１０μｍｏｌ·Ｌ－１在无钙及含ＣａＣｌ２１．３ｍｍｏｌ·Ｌ－１的溶液中所引起的［Ｃａ２＋］，的增加也有抑制作用。提示前胡丙素对心肌细胞的作用与其阻滞钙通道有关。     

银杏内酯A对缺血/再灌注损伤的大鼠心功能的影响

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的心功能的影响。方法 Langendorff灌注离体大鼠心脏,用停灌复灌的方式制备心肌缺血/再灌注损伤模型,记录左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、收缩压和舒张压最大变化速率(±LVdp/dtmax)和心率(HR)的变化,并测定复灌后冠状动脉流出液中LDH和SOD的含量及心肌梗死面积。分离单个细胞进行GA预处理,模拟缺血/再灌注培养后检测心肌细胞存活率和单个心肌细胞的收缩幅度。结果 GA预处理以后,LVSP、-dp/dtmax和HR在复灌10 min时较缺血/再灌注组具有明显的改善(P<0.05),并增加心率,减少LDH的生成,增加SOD的活性,降低心肌梗死面积。经GA预处理的心肌细胞存活率明显提高,10μmol.L-1GA能够明显提高缺血后单个心肌细胞的收缩幅度。结论 GA对缺血/再灌注损伤的心肌具有一定的改善作用。     

莲心碱对几种平滑肌作用的研究

莲心碱（Ｌｉｅ）抑制去氧肾上腺素（ＰＥ），５－羟色胺（５－ＨＴ），组胺（Ｈｉｓ）和高Ｋ＋引起的兔主动脉环收缩，对ＰＥ引起的收缩，其抑制作用更为明显；也抑制ＰＥ所致兔尿道平滑肌的收缩。在兔主动脉环和大鼠肛尾肌标本，Ｌｉｅ使甲氧胺（Ｍｅｔ）及ＰＥ的量效曲线平行右移，最大反应不压低，ＰＡ２值分别为６．８和６．６。Ｌｉｅ还明显抑制去甲肾上腺素（ＮＥ）所致的内钙释放，而对ＮＥ所致外钙内流影响较小。提示：Ｌｉｅ具有阻断肾上腺素α１受体和抑制细胞内钙释放作用。     

氯化钆对兔颈上交感神经节突触传递的影响

用蔗糖间隙法研究氟化钆对离休免领上交感神经节突触传递的影响低浓度ＧｄＣｌ３（４０－１６０μｍｏｌ·Ｌ１）对神经书复合动作电位有易化作用。高Ｃａ２＝可增强Ｇｄ３＋的效应；无Ｃａ２＋溶液中Ｇｄ３＋不显示易化作用。钙通道阻断剂维拉帕米可拮抗Ｇｃ３＋的易化作用。低浓度的Ｃｄｃｌ３对复合动作电位后超极化电位和Ｎ波亦有易化作用，但对乙酰胆碱去极化电位则无影，高浓度ＧｄＣｌ３（０．５１０ｍｍｏｌ·Ｌ１）对神经节复合动作电位及其后超极化电位，Ｎ波和乙酰胆碱去极化电位均显示抑制作用。     

3,4′,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖甙抑制凝血酶非依赖花生四烯酸途径诱导兔血小板聚集作用及机理

3,4’,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖甙(PD)0.33,0.56,0.95,1.63,2.79mmol·L~1能显著抑制2.3mmol·L~1·s~1凝血酶诱导的家兔洗涤血小板聚集,呈良好的量效关系,PD对1 min和最大血小板聚集抑制率IC_(50)分别为0.57和1.16 mmol·L~1,并能使血小板聚集延迟相延长,血小板聚集速度减慢,PD0.33～1.63mmol·L~1对血小板聚集时TXA_2释放无明显影响,仅在浓度为2.79mmol·L~1时,才明显减少TXA_2释放,PD的作用与阿司匹林不完全相同.这可能与它们的作用机理不同有关,本文还观察了PD0.33 mmol·L~1有抑制凝血酶诱导兔血小板胞浆游离钙离子浓度升高的作用。