MODS技术快速检测结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性研究

目的探讨MODS技术快速检测左氧氟沙星耐药性的效果。方法用24孔细胞培养板进行结核分枝杆菌（MTB）液体药敏检测，并对最佳检测条件进行探讨；将建立的MODS技术用于测定60株MTB临床分离株左氧氟沙星耐药性，并与传统罗氏绝对浓度法药敏结果进行比较。结果本法与罗氏绝对浓度法药敏结果相符58株，不符2株；符合率为96．7％；如以罗氏绝对浓度法药敏结果为判断标准，MODS检测左氧氟沙星耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为100％、96．0％、83．3％、100％、96．7％。结论MODS技术检测左氧氟沙星耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点，可作为结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性的检测新方法之一。     

应用硝酸盐还原试验快速检测结核分枝杆菌药物敏感性

目的评价硝酸盐还原试验(Nitrate Reducrase Assay,NRA)方法检测结核分枝杆菌分离株的药物敏感性的应用价值。方法通过应用NRA方法和绝对浓度法同时检测了492株结核分枝杆菌临床分离株和30株质控菌株对INH、RFP、SM、EMB的药物敏感性,以牛结核分枝杆菌标准株、结核分枝杆菌标准菌株H37Rv做阴阳性对照。并随机选择62株菌株进行重复试验。结果与绝对浓度法比较,NRA检测对INH、RFP、SM、EMB的耐药性的敏感性分别为91.6%、96.5%、92.2%、90.7%;特异性分别为96.0%、98.2%、97.3%、97.3%;一致率分别为95.0%、97.9%、96.2%、96.7%。重复试验符合率为100%。结论NRA是一种成本低、操作简单、快速、与绝对浓度法有较高一致率的药敏试验方法,具有良好的临床应用前景。     

应用硝酸盐还原试验快速检测结核分枝杆菌药物敏感性

目的评价硝酸盐还原试验(Nitrate Reducrase Assay,NRA)方法检测结核分枝杆菌分离株的药物敏感性的应用价值。方法通过应用NRA方法和绝对浓度法同时检测了492株结核分枝杆菌临床分离株和30株质控菌株对INH、RFP、SM、EMB的药物敏感性,以牛结核分枝杆菌标准株、结核分枝杆菌标准菌株H37Rv做阴阳性对照。并随机选择62株菌株进行重复试验。结果与绝对浓度法比较,NRA检测对INH、RFP、SM、EMB的耐药性的敏感性分别为91.6%、96.5%、92.2%、90.7%;特异性分别为96.0%、98.2%、97.3%、97.3%;一致率分别为95.0%、97.9%、96.2%、96.7%。重复试验符合率为100%。结论NRA是一种成本低、操作简单、快速、与绝对浓度法有较高一致率的药敏试验方法,具有良好的临床应用前景。     

56例颈部淋巴结核药物敏感试验分析

为了解我院颈部淋巴结核患者结核分枝杆菌药敏情况,将我院几年来颈部淋巴结核患者的标本进行药敏分析。1材料和方法56株结核分枝杆菌来自我院2001年3月-2003年12月门诊和住院患者,均采用患者脓汁进行改良罗氏培养基分离培养得到的菌株。药物纯品RFP、SM、PAS、INH、1321、EB购制国内制药厂。药敏试验方法采用绝对浓度间接法。送检标本经4%     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的研究

目的建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC)。以细菌接种量为10-3mg/ml,药物浓度5μg/ml、37℃作用24 h为药敏试验条件。结果噬菌体法测定112株结核分枝杆菌临床分离株卷曲霉素敏感91株、耐药21株,绝对浓度法敏感92株、耐药20株;两法测定均为敏感89株、均为耐药18株。在5株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,3株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定卷曲霉素耐药性的敏感性为90%(18/20),特异性为96.7%(89/92),阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为97.8%(89/91),准确性为95.5%(107/112)。结论噬菌体生物扩增法测定卷曲霉素耐药性简便快速,只需2 d时间,操作不需特殊仪器设备,具有很高的敏感性和特异性,可作为MTB的卷曲霉素耐药性快速筛选方法,建议临床推广应用...     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的研究

目的 建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法 应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC)。以细菌接种量为10^-3mg/ml,药物浓度5μg/ml、37℃作用24 h为药敏试验条件。结果 噬菌体法测定112株结核分枝杆菌临床分离株卷曲霉素敏感91株、耐药21株,绝对浓度法敏感92株、耐药20株;两法测定均为敏感89株、均为耐药18株。在5株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,3株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定卷曲霉素耐药性的敏感性为90%(18/20),特异性为96.7%(89/92),阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为97.8%(89/91),准确性为95.5%(107/112)。结论噬菌体生物扩增法测定卷曲霉素耐药性简便快速,只需2 d时间,操作不需特殊仪器设备,具有很高的敏感性和特异性,可作为MTB的卷曲霉素耐药性快速筛选方法,建议临床推广应用。     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性

目的　建立快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性的噬菌体生物扩增法 ,并探讨其在结核分枝杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法　应用噬菌体生物扩增法测定 5 2 4株结核分枝杆菌利福平耐药性 ,并与绝对浓度法结果进行比较 ,对不符合的菌株采用BactecMGIT 96 0测定其最低抑菌浓度 (MIC)。结果　噬菌体法测定 5 2 4株结核分枝杆菌临床分离株利福平敏感 30 1株、耐药 2 2 3株 ,绝对浓度法敏感 313株、耐药 2 11株 ;两法测定均为敏感 2 88株、均为耐药 198株。在 38株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中 ,35株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准 ,则噬菌体法测定利福平耐药性的敏感性为 93 8%、特异性为 92 0 %、阳性预测值为88 8%、阴性预测值为 95 7%、准确性为 92 7%。结论　噬菌体生物扩增法测定利福平耐药性只需 2天时间 ,操作简便 ,不需特殊仪器设备 ,可作为结核分枝杆菌利福平耐药性的快速筛选方法。     

比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性探讨

目的探讨比例法与绝对浓度法测试结核分枝杆菌药物敏感性结果的一致性。方法用绝对浓度法和比例法同时对2946株结核分枝杆菌进行4种抗结核药物（RFP、EMB、SM、INH）的耐药性测定。结果RFP、EMB、SM、INH用绝对浓度法与比例法药敏测试结果一致率分别为：97.8%、96.7%、94.3%、92.3%。经统计学检验,两种方法测试2946株菌株4种药物敏感性结果差异有统计学意义（P<0.05）。结论绝对浓度法与比例法进行结核分枝杆菌测定总的一致率较高,但差别有统计学意义,在进行耐药性评价时应考虑药敏方法是否一致。     

变色液体培养基快速检测结核分枝杆菌及其耐药性研究

目前用于检测结核分枝杆菌及其耐药性的方法有多种,但大部分检测方法所需时间都较长,以培养为基础的绝对浓度法或者比例法需要2～3个月的时间才能得到药敏结果,因此建立快速、简便、准确的检测方法就成为临床研究领域的一个重要课题.     

硝酸盐还原试验与反向斑点杂交试验联合检测结核分枝杆菌耐药性

目的 联合检测结核分枝杆菌耐药性,以提高其灵敏度和特异性.方法 对126株已知耐药浓度的结核分枝杆菌耐药株和敏感株分别采用硝酸盐还原试验( Nitrate Reductase Assay,NRA)和反向斑点杂交试验(reverse-dot blot hybridization,RBH),检测其异烟肼(INH)和对利福平(RFP)的耐药性,并将结果将与绝对浓度法结果相比较.结果 硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测与绝对浓度法比较有高度的一致性(P＞0.05),异烟肼灵敏度95.5％,特异性100％;利福平灵敏度100％,特异性98.1％.结论 硝酸盐还原试验和反向斑点杂交试验联合检测可作为快速结核分枝杆菌耐药性试验方法.     

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性研究

目的 建立快速测定结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性测定中的应用价值。探讨噬菌体检测技术(PhaB)快速检测氧氟沙星抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值。 方法 应用PhaB测定205株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对氧氟沙星的耐药性,并与绝对浓度法药敏结果比较,对两法检测结果不一致的菌株进行比例法测定。 结果 以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则PhaB检测OFX的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值(PPV、NPV)及准确度分别为95.4%、93.2%、91.2%、96.5% 和94.1%,共有12株菌株PhaB法药敏结果与绝对浓度法检测结果不符,其中9株PhaB法药敏结果与比例法相符合。 结论 PhaB检测氧氟沙星药敏结果与绝对浓度法有较高的一致率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法。     

纤支镜灌洗液经变色液体培养基快速培养结核分枝杆菌对涂阴肺结核诊断价值的研究

目的评价纤维支气管镜小量肺泡灌洗液经变色液体培养基快速培养结核分枝杆菌对涂阴肺结核的诊断价值。方法对40例涂阴肺结核患者分别行纤支镜小量肺泡灌洗、刷检或活检，将灌洗液经变色液体培养基快速培养结核分枝杆菌。结果纤支镜肺泡灌洗40例，灌洗液培养出结核分枝杆菌17例，阳性率42．5％，刷检32例，阳性5例，活检8例，阳性3例，刷检＋活检阳性率20％，P〈0．05有统计学意义。快速培养检出时间平均13．5天。结论纤支镜灌洗液经变色液体培养基快速培养结核支杆菌，可提高涂阴肺结核中结核分枝杆菌的检出率，缩短了细菌培养检出时间，值得应用     

硝酸盐还原试验快速检测结核分枝杆菌药敏试验

目的探讨一种廉价、简便、快速的检测结核分枝杆菌药敏的方法。方法以绝对浓度法对照,对92株结核分枝杆菌进行硝酸盐还原酶试验,并比较两种方法。结果四种一线抗痨药物利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇的敏感度分别为96.83%、97.22%、94.11%、88.89%;特异度为92.59%、85.0%、87.80%、96.43%;符合率为93.48%、96.74%、91.30%、93.48%。两种方法无显著性差异,但硝酸盐还原酶法的检测时间要比绝对浓度法快2～3周。结论硝酸盐还原酶法是一种快速、准确检测结核药敏的方法。     

不同报告时间结核分枝杆菌药物敏感性试验结果不一致的原因

目的 探讨和分析使用绝对浓度法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)时不同报告时间结果不一致的原因.方法 2010年1-6月笔者收集采用绝对浓度法于37℃含INH的L-J培养基上培养4周时无菌落生长、时间延长至6周后才生长的13株菌株(含药培养基延迟生长菌株).这些菌株来源于11例结核病患者(2例患者的菌株在低浓度和高浓度INH时均有菌落生长);同时收集这11例结核病患者的临床敏感株作为对照菌株,共计24株菌株.进行比例法药敏试验和PCR菌种鉴定,并利用分枝杆菌散在分布重复单位(Mycobacterium interspersed repetitive unit,MIRU)和结核分枝杆菌间隔区寡核苷酸分型(spoligotyping)技术进行基因分型,并选择对照菌株和含药培养基延迟生长菌株MRIU分型不同的3株菌株进行人工模拟不同浓度INH时混合的敏感菌株和耐药菌株进行绝对浓度法药敏试验,观察不同报告时间(4周和6周)的药敏试验结果.结果 24株菌株经PCR鉴定均为结核分枝杆菌复合群.比例法药敏试验中13株含药培养基延迟生长菌株均对INH耐药,11株对照菌株均对INH敏感.3例患者的对照菌株和含药培养基延迟生长菌株Spoligotying分型属于不同型别,分别为北京基因型和T2型、北京基因型和H3型、北京基因型和T2型.人工混合感染的3株菌株比例(临床株:H37Rv)小于1∶128时可能会出现4周无菌落生长而6周有菌落生长的结果.结论 对药物敏感性不同的结核分枝杆菌造成的混合感染,当耐药菌株的比例较低时,可能造成不同报告时间药敏试验结果不一致的情况.     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性

目的建立快速测定结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在耐药性测定中的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法测定456株结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性。并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用BactecMGIT960测定其最低抑菌浓度(MIC)。结果噬菌体测定456株结核分枝杆菌临床分离株左氧氟沙星敏感267株,耐药189株,绝对浓度法敏感279株,耐药177株。两法测定均为敏感257株,均为耐药167株。在32株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符合的菌株中30株噬菌体法与MIC测定结果相符。如以绝对浓度法药敏结果判断标准,则噬菌体法测左氧氟沙星耐药性的敏感性为94.35%,特异性为92.11%,阳性预测值为88.36%。阴性预测值为96.26%,准确性为92.98%。结论噬菌体生物扩增法测定左氧氟沙星耐药性需2d,操作简便.不需要特殊仪器设备,可作为结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性的快速筛选方法。     

实时荧光定量PCR法分析结核分枝杆菌对异烟肼耐药的分析

目的利用实时荧光定量PCR技术快速检测异烟肼耐药结核分枝杆菌。方法收集到医院就诊的结核病疑似患者痰液样本,提取痰液样本的总DNA,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对结核分枝杆菌感染进行快速筛查,并与传统药敏试验进行比较,对两者的灵敏度、特异性、一致性进行比较分析。结果检测346例结核病人临床分离培养样本,药敏试验检出257例异烟肼敏感标本,101例异烟肼耐药标本;实时荧光定量PCR法共检测出异烟肼敏感和耐药标本225例98例,灵敏度为86.64%,特异性为93.92%,一致率为93.12%。结论跟传统药物敏感性实验相比,实时荧光定量PCR法检测速度快速、特异性强、灵敏度较高,可用于结核分枝杆菌耐异烟肼突变的快速检测,适于耐多药结核病的快速筛查。     

145株非结核分枝杆菌对10种药物的耐药性分析

目的了解我院非结核病患者分离的非结核分枝杆菌对10种药物的耐药状况。方法用MB/Bact 240分枝杆菌培养仪和改良罗氏管对患者的多种标本进行分枝杆菌分离培养鉴定,对分离到的分枝杆菌采用绝对浓度法对10种抗结核药物,利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素,利福喷丁、丙硫异烟肼、氧氟沙星、卷曲霉素、卡那霉素和对氨基水扬酸进行药物敏感性试验。结果 1722例患者的标本非结核分枝杆菌培养阳性145株,对10种药总耐药率97.2%（141/145）,单耐药率最高为异烟肼、链霉素和对氨基水扬酸,最低为氧氟沙星。结论非结核分枝杆菌耐药情况十分严重,应加强抗结核药物的耐药性监测;根据药敏试验选择科学有效的化疗方案。     

比例法与绝对浓度法测定分枝杆菌耐药性的探讨

本文报告我室试用比较法洞察发枝杆菌耐药性，并在接受韩国国家参比实验室质量控制的同时，将传统的绝对浓度法结果与之对比，２８株分枝杆菌应用比例法所得药敏试验结果与韩国反馈的结果相比，总符合率为８８％，５８株分枝杆菌绝对浓度法与比例法药敏试验结果相比，总符合率为９０％，其中敏感和耐药的符合率分别为９８％和８２％，认为，比例法在某些方面较绝对浓度法具有优越性，但较易产生系统误差，探讨既符合中国实际情况又与     

88例力克肺疾耐药情况分析

力克肺疾 (简称 DIP)是以特殊方法将异烟肼与对氨基水杨酸分子化合而成 ,为一种抗结核新药在临床上广泛应用。我院自 1998年 8月至今对 3 84例患者痰分枝杆菌培养菌株进行药敏试验 ,显示有 88例对力克肺疾耐药。现就力克肺疾及 INH和PAS耐药情况作一分析。1　临床资料1.1　方法及判断耐药标准 :3 84例患者痰培养为 :3 64例结核分枝杆菌、2 0例非结核枝杆菌生长 ,采用罗氏绝对浓度间接法进行药敏试验 ,药敏接种浓度为 10 0 mg/ml。判断耐药标准 :DIP是新药 ,国家尚无标准 ,暂以 1ug作为耐药标准 ,1ug以下为敏感 ,1ug以上为耐药。 INH和…     

mRNA定量法用于结核分枝杆菌利福平敏感性分析的研究

目的 评价应用mRNA定量法进行结核分枝杆菌利福平敏感性分析的可行性和应用价值。方法 定量检测结核分枝杆菌85B mRNA，分别以mRNA拷贝数百分比(使用利福平药物后mRNA拷贝数占用药前的百分比)为1％和10％作为耐药临界指标分析53株结核分枝杆菌临床分离株对利福平的敏感性，并与绝对浓度法作比较。其中29株为利福平耐药株、24株为利福平敏感株。结果53株结核分枝杆菌临床分离株mRNA定量法检测：在利福平浓度为1μg/ml的条件下分别以1％和10％为耐药临界比例时，与绝对浓度法相比准确性分别为70％、81％，敏感性分别为100％、100％。特异性分别为33％、58％；在利福平浓度为2μg/ml的条件下分别以1％和10％为耐药临界比例时，与绝对浓度法相比准确性分别为85％、93％。敏感性分别为100％、97％，特异性分别为67％、88%，在利福平浓度为4μg/ml的条件下分别以1％和10％为耐药临界比例时在与绝对浓度法相比准确性分别为93％、93％，敏感性分别为93％、93％，特异性分别为92％、92％。结论mRNA定量法用于结核分枝杆菌药物敏感性分析具有快速、可定量等优点，建议mRNA定量法测定利福平敏感性采用临界药物浓度为2μg/ml、耐药临界比例为10％。