膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因5＇CpG岛甲基化检测

目的 探讨P16、P15、P14基因5＇CpG岛在膀胱移行细胞癌中甲基化状态及其临床意义。方法 应用甲基化特异性PCR（methylation—specific PCR，MSP）方法检测40例膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因甲基化程度，χ^2检验分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级分期间关系。结果 膀胱移行细胞癌P16、P15、P14 5＇CpG岛甲基化扩增阳性化率分别为27．5％、17．5％、35％，而正常膀胱组织中均未检测到三种基因5＇CpG岛甲基化。P16、P14基因甲基化与膀胱癌病理分级分期有显著性差异（P〈0．05），P15基因则没有显著性差异（P〉0．05）。结论 P16、P15、P14基因在膀胱癌组织中的甲基化率较高，三种抑癌基因5＇CpG岛异常高甲基化，在膀胱癌的发生、发展中具有重要作用。     

膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因5''''CpG岛甲基化检测

目的探讨P16、P15、P14基因5'CpG岛在膀胱移行细胞癌中甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测40例膀胱移行细胞癌P16、P15、P14基因甲基化程度,χ2检验分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级分期间关系。结果膀胱移行细胞癌P16、P15、P14 5'CpG岛甲基化扩增阳性化率分别为27.5%、17.5%、35%,而正常膀胱组织中均未检测到三种基因5'CpG岛甲基化。P16、P14基因甲基化与膀胱癌病理分级分期有显著性差异(P<0.05),P15基因则没有显著性差异(P>0.05)。结论P16、P15、P14基因在膀胱癌组织中的甲基化率较高,三种抑癌基因5'CpG岛异常高甲基化,在膀胱癌的发生、发展中具有重要作用。     

PTEN甲基化及其异常表达与膀胱移行细胞癌的关系

目的探讨PTEN基因启动子甲基化及其mRNA异常表达与膀胱移行细胞癌临床及病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态,应用RT-PCR技术检测其mRNA的表达水平。结果膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01);PTEN基因mRNA在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是56.2%(27/48)和100.0%(15/15),两组间差异有统计学意义(P<0.01);PTEN基因启动子甲基化率与其mRNA表达水平在不同病理分级、临床分期间差异有统计学意义(P<0.05),且PTEN启动子甲基化与其mRNA表达存在明显关联性(χ2=21.372,r=0.555,P<0.01)。结论 PTEN基因启动子甲基化可导致其mRNA表达的缺失,对膀胱移行细胞癌的发生及转移有着极其重要的影响。     

膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3 的表达及其启动子甲基化的研究

目的检测膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)启动子甲基化及其蛋白表达,探讨TIMP-3在该肿瘤中的作用及临床意义。方法采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统对38例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜中TIMP-3的表达进行检测分析,用甲基化特异的PCR(MSP)法检测TIMP-3基因启动子的甲基化状态。结果TIMP-3在膀胱癌中呈高表达,且与分级呈正相关,但不与分期相关,其启动子甲基化发生率为5.3%(2/38)。结论TIMP-3参与膀胱癌侵袭转移,其启动子甲基化发生率不高,检测其表达水平对膀胱移行细胞癌预后判断具有一定的参考价值。     

膀胱癌中eya4基因启动子区甲基化状态及其临床意义

目的 探讨膀胱癌细胞系和膀胱移行细胞癌组织中EYA转录共激活磷酸酶4(eya4)基因启动子区CpG岛甲基化状态及在临床病理特征中的意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测eya4基因在5株膀胱癌细胞系、1株膀胱永生化上皮细胞系和75例膀胱移行细胞癌组织及癌旁组织,并结合临床病理特征行统计学分析.结果 eya4基因启动子区在5株膀胱癌细胞系中,有4株出现甲基化,其甲基化率为80%;在人正常膀胱细胞系中甲基化阴性.eya4在膀胱癌组织中的甲基化率为70.7%(53/75),显著高于癌旁组织(24%,18/75),差异有统计学意义(x2=32.760,P<0.01).eya4基因启动子区CpG岛甲基化在临床病理特征中如单发膀胱肿瘤与多发膀胱肿瘤相比,直径≤3 cm的膀胱肿瘤与＞3 cm的膀胱肿瘤相比,低级别膀胱肿瘤与高级别膀胱肿瘤相比,浅表性膀胱肿瘤与浸润性膀胱肿瘤相比,差异均有统计学意义(P<0.05),但与年龄和性别无关.结论 基因eya4启动子区甲基化与膀胱癌的发生发展有关,可能作为膀胱移行细胞癌诊断的一个新的标志物.     

膀胱移行细胞癌中PTEN基因启动子甲基化及其表达的研究

目的 检测膀胱移行细胞癌中PTEN基因启动子甲基化状态及其蛋白表达水平,并探讨它们与该肿瘤临床及病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学(S-P)法检测PTEN蛋白的表达,甲基化特异性PCK(MSP)法检测PTEN基因启动子的甲基化状态.结果 PTEN蛋白在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是54.0%(27/50)和100.0%(10/10),两组间差异有显著性(P＜0.01),且其表达水平在不同病理分级、临床分期间差异也存在显著性(P＜0.01);在膀胱癌组织中PTEN基因启动子甲基化率为14.0%(7/50),而在正常膀胱组织中未检测到其启动子的甲基化(0/10),两组间差异有显著性(P＜0.05),且PTEN基因启动子甲基化与其蛋白表达水平呈负相关(P＜0.05).结论 PTEN基因启动子的甲基化可导致基因的沉默,是PTEN蛋白表达缺失的重要原因.PTEN基因启动子甲基化及其蛋白的表达缺失可能在膀胱移行细胞癌的发生及进展过程中起着重要作用,并对该肿瘤的生物学行为产生较大影响.     

COX-2在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的研究膀胱移行细胞癌中COX-2表达及其与肿瘤临床分期、病理分级、复发和转移的关系。方法采用免疫组化技术检测40例膀胱移行细胞癌组织和12例正常膀胱黏膜组织中COX-2蛋白表达，并分析其与膀胱癌临床分期、病理分级、复发和转移的关系。结果膀胱移行细胞癌组织中COX-2蛋白表达增高，阳性率为77．5％；并随肿瘤分期、分级增高而增高，复发组高于无复发组，转移组高于未转移组。结论膀胱移行细胞癌组织中COX-2蛋白高表达，并与肿瘤临床分期、病理分级、复发和转移有关，对膀胱癌的诊断和判断预后有一定的意义。     

膀胱移行细胞癌组织与尿沉渣细胞WWOX基因启动子甲基化相关性研究

目的探讨膀胱移行细胞癌组织与其对应尿沉渣细胞中氧化还原酶的WW结构域(WWOX)基因启动子区CpG岛的甲基化状态以及二者甲基化的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测54例膀胱癌患者手术切除的癌组织及尿沉渣细胞中WWOX基因启动子区甲基化状态。结果 54例膀胱癌患者癌组织中WWOX基因启动子区的甲基化率达35.2%,对应的尿沉渣细胞中甲基化率为29.6%,分别与各自对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且膀胱癌组织WWOX基因启动子区的甲基化和对应的尿沉渣细胞的甲基化存在明显的相关性(r=0.881,P<0.05)。不论是在癌组织还是尿沉渣细胞中,WWOX基因启动子区甲基化率随着癌组织分级的增加逐渐升高(P<0.05)。结论 WWOX基因启动子区的异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,尿沉渣细胞中WWOX基因启动子区的异常甲基化可能是膀胱癌早期诊断的分子标志物之一。     

凋亡相关基因Survivin在膀胱移行细胞癌组织中表达的研究

目的研究凋亡制基因Survivin在膀胱移行细胞癌组织中的表达与肿瘤分级,分期和预后的关系.方法应用免疫组织化学法,检测45例膀胱移行细胞癌和10例膀胱黏膜组织中Survivin蛋白表达.结果 45例膀胱移行细胞癌Survivin蛋白阳性表达率为71.1%,而正常膀胱黏膜中Survivin表达均为阴性;按病理分级阳性表达率为Ⅰ级52.6%,Ⅱ级75%,Ⅲ级90%,按病理分期为T1期55.6%,T2～T4期81.6%;获得随访的12例Survivin蛋白阳性表达肿瘤7例复发(58.3%),表达阴性11例复发3例(27.3%);Survivin蛋白表达与膀胱癌分级、分期和临床复发有关.结论 Survivin在膀胱移行细胞癌异常表达,其异常表达与膀胱移行细胞癌生物学行为有关,是临床判断膀胱癌预后的一个参考指标.     

膀胱移行细胞癌组织中MTS1基因mRNA的检测及意义

目的：研究多肿瘤抑制基因MTS1在膀胱移行细胞癌细胞中的表达方法。方法：应用原位分子杂交方法检测46例膀胱移行细胞癌标本中抑癌基因MTS1的分布与表达。结果：46例膀胱组织中MTS1基因mRNA表达的阳性率为52.0%，其阳性率随膀胱癌病理分级、临床分期的上升而降低，MTS1 mRNA表达阳性者3年生存率明显高于阴性者。结论：MTS1 mRNA的表达与膀胱移行细胞癌的分化程度相关，可用于评估膀胱癌的恶性度及预后。     

胃癌中E-cad的表达及启动子甲基化的临床意义

目的探讨E-cad（上皮型钙黏素）在胃癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态与胃癌发生、发展、转移和预后等生物学特性的关系。方法应用免疫组织化学SP法和MSP（甲基化特异PCR法）,检测38例癌旁组织和72例胃癌组织中E-cad的表达情况及其启动子甲基化状态。结果癌旁组织均表达E-cad,而胃癌组织E-cad阴性表达率为63.89%（46/72）,其表达缺失与胃癌的分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度密切相关（P〈0.05）。在癌旁组织中无E-cad启动子甲基化,而胃癌组织E-cad启动子甲基化发生率为56.94%（41/72）。随着肿瘤的去分化,临床分期增高,肿瘤浸润深度增加和淋巴转移E-cad启动子甲基化率逐渐增加（P〈0.05）。结论E-cad表达缺失和启动子甲基化与胃癌的发生、发展及预后密切相关,启动子甲基化是E-cad表达缺失的重要原因。     

候选抑癌基因syk启动子甲基化与乳腺癌发生和转移的关系

目的　探讨脾酪氨酸激酶 (spleentyrosinekinase ,syk)基因启动子甲基化与乳腺癌发生、发展过程的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 4 0例乳腺癌组织、癌旁组织及15例乳腺纤维瘤组织中sykmRNA的表达 ,同时用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测syk基因启动子甲基化情况。结果　 4 0例癌旁组织、乳腺纤维瘤组织均检测到syk基因的表达 ,乳腺癌组织有 9例检测到syk基因的表达 ,syk基因在乳腺癌组织中表达率显著降低 (P <0 .0 5 )。癌旁组织及乳腺纤维瘤组织未发现有syk基因启动子的甲基化 ,4 0例乳腺癌组织中有 17例检测到syk基因启动子的甲基化 ,癌组织syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 5 )。有淋巴结转移的 18例乳腺癌组织中 ,有 14例syk基因启动子甲基化 ,有淋巴结转移的syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。结论　syk基因启动子甲基化是导致syk基因失活的原因之一 ,syk基因启动子的甲基化可能与乳腺癌的发生、转移相关。     

RASSF10基因启动子区甲基化状态在宫颈癌中的临床应用

目的探讨RASSF10基因启动子区甲基化状态在宫颈癌中的临床意义。方法收集本院2005年6月～2013年12月经术后病理证实的70例宫颈癌患者,取其经手术切除癌组织70例和配对癌旁组织标本70例,采用甲基化特异性PCR(MSP)分析法检测RASSF10基因启动子区DNA甲基化状态,分析RASSF10基因启动子区甲基化状态与临床病理特征(年龄、肿瘤大小、颈深部间质侵犯、盆腔淋巴结转移、FIGO分期及肿瘤分级程度)的关系及宫颈癌预后的相关性因素分析。结果 MSP检测发现宫颈癌组织中RASSF10基因启动子区甲基化为38.6%,未甲基化为43例(61.4%),而正常宫颈组织未见甲基化;宫颈癌中RASSF10基因启动子甲基化状态与年龄、肿瘤大小、颈深部间质侵犯及盆腔淋巴结转移无关(P0.05),而与FIGO分期及肿瘤分化程度有关。70例宫颈癌患者的中位生存期与年龄、肿瘤大小及颈深部间质侵犯无关,但与FIGO分期、肿瘤分化程度、盆腔淋巴结转移及RASSF10基因启动子区甲基化有关,其中RASSF10基因启动子区甲基化者5年生存率为66.7%,未甲基化者的5年生存率为88.4%,差异具有统计学意义(P0.05)。多因素分析结果显示FIGO分期、肿瘤分化程度、盆腔淋巴结转移和RASSF10基因启动子区甲基化状态为本组宫颈癌患者预后独立因素。结论 RASSF10基因启动子区甲基化在宫颈癌中高表达,且与FIGO分期、肿瘤分化程度及预后有关,可作为宫颈癌预后的参考指标。     

喉鳞癌蛋白酪氨酸磷酸酶基因突变及甲基化研究

目的研究喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)基因突变和启动子甲基化状况。方法应用聚合酶链反应-单链构像多态性方法(PCR-SSCP)分析银染系统,检测喉鳞状细胞癌新鲜或冰冻组织中PTEN基因第5、第8外显子的突变,采用甲基化敏感聚合酶链反应方法(MSP)分析喉癌及正常喉组织PTEN基因启动子过甲基化。结果PTEN基因突变均发生在喉鳞癌中,占17.5%(7/40),其中第5外显子有6例发生突变,突变率15.0%(6/40),这6例中有低分化3例,中分化3例,无高分化;淋巴结转移占83.3%(5/6)。第8外显子仅有1例发生突变,突变率为2.5%(1/40),该病例虽无淋巴结转移,但病理为低分化。40例喉鳞癌组织中,有40.0%(16/40)例PTEN基因启动子区甲基化,9例喉正常组织中未发现甲基化,喉癌中有2例既有第5外显子突变发生,又有启动子甲基化,占5.0%;有1例既有第8外显子突变,又有启动子甲基化,占2.5%。结论PTEN基因启动子甲基化及基因突变是其在喉鳞癌中失活的原因,并且该基因失活可能与喉鳞癌演进有关。     

RASSFIA基因启动子甲基化与乳腺癌相关性研究

目的:研究抑癌基因RASSF1A在乳癌组织中的表达情况及与RASSF1A基因启动子甲基化的关系。方法:运用RT-PCR方法检测40例乳癌组织和6例乳腺良性肿瘤和5例正常乳腺组织中RASSF1A的表达,运用甲基化特异PCR方法检测这些组织中RASSF1A基因启动子的甲基化情况。结果:RASSF1A基因在40例乳腺癌组织中8例(20%)存在表达缺失,差异无统计学意义(P>0.05)。但其表达量明显低于正常乳腺组织(P<0.05)。乳腺癌组织的RASSF1A基因启动子甲基化频率(65%)明显高于正常乳腺组织(20%)和乳腺良性肿瘤(17%)(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子的高甲基化是引起RASSF1A基因表达下调的重要原因,在肿瘤的发生和发展中起重要的调控作用。     

口腔鳞状细胞癌组织中死亡相关蛋白激酶的甲基化及其蛋白的表达

目的：探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因的表达、甲基化状态及与口腔鳞状细胞癌（OSCC）的关系,为研究DAPK基因在OSCC组织中表达改变的机制及肿瘤基因治疗方法打下基础。方法：采用甲基特异性PCR和免疫组织化学方法分别检测23例正常口腔黏膜组织和53例OSCC组织中DAPK基因甲基化率、DAPK蛋白表达率。结果：23例正常口腔黏膜组织中无一例检测到DAPK基因启动子区甲基化,53例OSCC患者30例（56.60%）口腔黏膜组织中DAPK基因启动子区完全甲基化,8例（15.09%）DAPK基因部分甲基化,总甲基化率为71.69%（38/53）,与正常口腔黏膜组织甲基化率比较差异有显著性（P<0.01）。在23例（100%）正常口腔黏膜组织中DAPK蛋白表达均呈阳性,53例OSCC患者中36例（67.92%）口腔黏膜组织中DAPK蛋白表达下调,二者比较差异具有显著性（P<0.01）;OSCC患者口腔黏膜组织中DAPK蛋白低表达组DAPK基因甲基化率（32/36,88.89%）高于正常表达组（6/17,35.29%）（P<0.01）。结论：DAPK基因启动子区甲基化是该基因在OSCC组织中表达降低的机制之一,DAPK基因甲基化引起的基因功能静默可能与OSCC的发生有关。     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

MSP法检测胰腺癌Syk基因甲基化改变的研究

目的 :探讨胰腺癌Syk基因启动子区 5’CpG岛甲基化改变的特点与临床病理特征的关系。方法 :采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子甲基化情况。结果 :32例癌旁正常胰腺组织未发现有Syk基因启动子的甲基化 ,14 /32例胰腺癌组织检测到Syk基因启动子的甲基化 ,癌组织Syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 5 )。有淋巴结转移的 15例胰腺癌组织中 ,有 10例Syk基因启动子甲基化 ,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。结论 :Syk基因启动子甲基化是导致Syk基因失活的原因之一 ,Syk基因启动子的甲基化与胰腺癌的发生、转移相关。     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。