蛴螬提取物对人肺癌A549细胞Bax和p21蛋白表达的影响

目的观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞增殖的影响及诱导凋亡的机制。方法采用MTT法检测蛴螬提取物对人肺癌A549细胞的增殖抑制率;运用免疫细胞化学SP法检测用药前后Bax和p21蛋白表达的变化;运用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。结果蛴螬提取物对人肺癌A549细胞具有明显的增殖抑制作用,并呈时间依赖性;蛴螬提取物组细胞Bax和p21表达均增强,细胞凋亡率与对照组相比有显著性差异,并被阻滞在细胞周期的S期。结论蛴螬提取物可通过上调Bax和p21使细胞阻滞于S期,从而抑制A549细胞的生长。     

非诺贝特联用顺铂对人肺癌A549细胞抑制和凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体仪激动剂非诺贝特联用顺铂对体外培养的人肺癌A549细胞增殖和凋广的影响及可能机制。方法采用MTF法分别检测单用非诺贝特、顺铂和非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制情况。采用Hoechest染色观察非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制作用。流式细胞术检测联合用药对A549细胞的凋亡诱导作用。RT—PCR法检测联合用药对A549细胞中caspase－3、survivinmRNA的表达变化情况。结果非诺贝特对肺癌A549细胞有抑制作用,呈现时间剂量关系。联合用药组作用肺癌A549细胞48h后比单用药组的细胞抑制作用强（P〈0．05）。形态学观察及流式细胞术结果显示联合用药组A549凋亡细胞数目多于单药组,RT—PCR结果提示联合用药组较单用药组上调caspase－3mRNA的表达,下调stirvivin mRNA的表达。结论非诺贝特与顺铂联用可以增强顺铂杀伤肺癌A549细胞作用,其机制可能与上调caspase－3的表达和下调survivin的表达有关。     

诺帝对人肺腺癌细胞A549及其耐药株A549DDP体外生长的影响及机制

目的探讨诺帝对肺腺癌细胞系A549及耐顺铂株A549DDP的作用及机制,为诺帝的临床应用提供理论依据。方法 MTT法检测诺帝对A549及A549DDP细胞增殖的抑制作用,流式细胞术（FCM）分析细胞周期,免疫细胞化学SP法及原位杂交法分别检测细胞质内P糖蛋白及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达。结果诺帝干预后A549及A549DDP细胞增殖明显受抑,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞减少;A549及A549DDP细胞质内P糖蛋白及VEGF mRNA表达均明显降低。结论诺帝对A549及A549DDP细胞生长均有抑制作用,其机制可能是抑制肿瘤血管生成及降低P糖蛋白表达。     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

人参皂苷CK与顺铂联用对人肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其机制探讨

目的探讨人参皂苷CK与顺铂联用对人肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其作用机制。方法不同浓度(50、25、12.5、6.241、3.125、1.562 5μg/m L)人参皂苷CK单独或加不同浓度顺铂(20、10.5、2.5、1.251、0.625μg/m L)作用于A549细胞,MTT法测定人参皂苷CK与顺铂单用或联用对A549细胞的抑制率,流式细胞术检测各细胞周期所占百分比及细胞凋亡率;ELISA法检测A549细胞VEGF水平。结果人参皂苷CK和顺铂联用对A549细胞增殖的抑制效应呈浓度依赖关系;两药大剂量(50μg/m L人参皂苷CK+20μg/m L顺铂)联用时合用指数(CI)≈1,为相加效应,小剂量联用(1.562 5μg/m L人参皂苷CK+0.625μg/m L顺铂)时CI>1,为拮抗效应;两药大剂量联用时A549细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期被阻滞在G0/G1期,两药联用凋亡率高于单用人参皂苷CK或顺铂(P均<0.05);两药联用时A549细胞培养上清液中的VEGF水平低于单用人参皂苷CK或顺铂(P均<0.05)。结论人参皂苷CK与顺铂大剂量联用对人肺腺癌A549细胞株的抑制效应为相加效应,小剂量联用时为拮抗效应;大剂量联用可明显诱导A549细胞凋亡,其抗肿瘤机制与减少内源性VEGF分泌有关。     

双靶点阻滞对肺腺癌细胞的协同抑制作用及其可能机制

目的探讨联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)对肺腺癌A549细胞株的协同抑制作用及其可能机制。方法采用不同药物干预肺癌A549细胞株,分为4组:正常对照组、单药吉非替尼组、单药塞来昔布组、联合用药组。药物干预细胞48 h后台盼蓝(trypan blue)染色法检测药物对细胞生长的影响;以Hoechst33258染色法和流式细胞术观察用药前后细胞凋亡和细胞周期的变化。采用Western blot检测EGFR和COX-2蛋白的表达情况。结果随着时间和剂量增加,单药吉非替尼与塞来昔布对A549细胞的抑制作用增强,加药48 h,联合用药组抑制率明显高于单药组(P0.01)。联合用药组细胞凋亡率明显高于单独用药组(32.40%vs7.12%和8.43%;P0.01)。联合用药组S期细胞比例为(3.2±0.9)%,较单药吉非替尼组[(37.4±1.6)%]和单药塞来昔布组[(21.0±3.1)%]明显减少(P0.01);联合用药组G0/G1期细胞比例为(87.2±6.4)%,较单药吉非替尼组[(61.4±5.2)%]和单药塞来昔布组[(51.8±4.7)%]明显增加(P0.01)。与单独用药组比较,联合用药组EGFR和COX-2蛋白的表达明显减弱(P0.05)。结论联合用药通过EGFR和COX-2双靶点阻滞发挥作用,有望为肺癌的化学预防和治疗提供新的策略。     

姜黄素通过上调miR-15a/16表达抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖促进细胞凋亡的机制

目的探讨姜黄素抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡的分子机制。方法不同浓度(0.0、12.5、25.0、50.0μmol/L)姜黄素处理48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测A549细胞增殖,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3活性检测试剂盒检测Caspase3活性,RT-PCR检测细胞中微小RNA(miR-15a/16)表达;采用Lipofectamine2000转染miR-15a/16抑制剂后,MTT法、流式细胞仪和TUNEL-4′,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)双染法检测miR-15a/16对姜黄素处理的A549细胞增殖、周期和凋亡的影响;采用双荧光素酶报告基因实验检验miR-15a/16与细胞周期蛋白(Cyclin)D1和B淋巴细胞瘤(BCL)2的靶向关系,Western印迹检测CyclinD1和BCL2蛋白的表达。结果姜黄素能够呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖、增加Caspase 3活性和诱导miR-15a/16的表达;以50μl姜黄素处理A549细胞后,细胞的增殖能力受到抑制,细胞在G1期比例升高、S期和G2/M期比例降低,细胞凋亡能力和Caspase 3活性增强;转染miR-15a/16抑制剂后,姜黄素抑A549细胞增殖和促细胞凋亡的作用得以逆转;双荧光素酶报告基因实验证实CyclinD1和BCL2是miR-15a/16的靶基因,同时转染miR-15a/16模拟物后,CyclinD1和BCL2蛋白表达降低,反之则升高。结论姜黄素可通过上调miR-15a/16表达抑制A549细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-524-5p靶向FABP5调控非小细胞肺癌增殖、凋亡的机制研究

目的探讨非编码小RNA-524-5p(miR-524-5p)是否通过靶向调控脂肪酸结合蛋白5(FABP5)从而影响非小细胞肺癌的增殖和凋亡。方法实时定量PCR(qPCR)检测非小细胞肺癌细胞(A549、H1299、H1650)和正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中miR-524-5p和FABP5表达,选择miR-524-5p表达量最低的细胞系用于后续实验;运用生物学信息预测miR-524-5p靶基因,双荧光素酶报告基因进行验证;蛋白质印迹法(Western Blot)检测上调或下调miR-524-5p对FABP5的影响,以及A549细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bax蛋白水平;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡。结果与正常肺上皮细胞相比,miR-524-5p在非小细胞肺癌细胞系中表达下调(P0.05),FABP5 mRNA和蛋白表达上调(P0.05)。miR-524-5p在A549细胞中的表达量最低。FABP5是miR-524-5p的靶基因。miR-524-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平,提升p21、Bax蛋白水平,差异均达到显著水平(P0.05),与抑制FABP5表达(si-FABP5)作用结果相同。FABP5过表达可以逆转miR-524-5p过表达对细胞增殖的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-524-5p能够抑制非小细胞肺癌增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向调控FABP5表达有关。     

miR-139-5p靶向SLC39A7基因通过Wnt/β-catenin信号抑制肾癌细胞周期和增殖

目的 研究miR-139-5p对肾癌(RC)细胞周期和增殖的影响和潜在机制。方法 以正常肾小管上皮细胞HK-2为对照,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹检测RC细胞系A498、786-O和SN12C-PM6中miR-139-5p和SLC39A7的表达;在786-O细胞中高表达miR-139-5p和敲减SLC39A7,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CyclinE和β-catenin蛋白表达水平,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞存活率和细胞周期,双荧光素酶报告系统验证miR-139-5p和SLC39A7的关系。结果 与NC组和miR-con组相比,miR-139-5p组miR-139-5p表达量显著上升(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),CyclinD1和CyclinE表达量均显著降低(P<0.05),G0/G1期和G2/M期细胞百分比显著升高(P<0.05),S期细胞百分比显著降低(P<0.05)。与NC组和si-con组相比,si-SLC39A7组786-O细胞中SLC39A7、...     

人参皂苷增加顺铂抗肺癌A549细胞活性的机理研究

目的观察人参皂苷与顺铂联合作用肺癌A549细胞的细胞毒作用,探索相关作用机制。方法 MTT实验检测人参皂苷、顺铂对人肺癌A549细胞的细胞毒作用;提取药物处理细胞总蛋白,Western blot检测细胞survivin蛋白的表达变化;Annexin V/PI双染、流式细胞仪检测细胞凋亡的发生。结果人参皂苷和顺铂对肺癌A549细胞的半数抑制浓度(IC50)值分别为(43.26±3.27)和(2.34±0.15)μmol/L;20、40μmol/L人参皂苷与顺铂联合作用A549细胞,顺铂对A549细胞的IC50值减少为(1.42±0.33)、(0.61±0.04)μmol/L,P<0.01。Western blot检测显示人参皂苷剂量依赖性的降低肺癌A549细胞survivin蛋白的表达。流式细胞仪凋亡检测显示人参皂苷使顺铂诱导的细胞凋亡增加(P<0.01)。结论人参皂苷可以显著增加顺铂对肺癌A549细胞的致凋亡作用,下调survivin蛋白表达可能是其增敏的主要机制。     

miR-515-5p靶向RING1增强NSCLC A549/DDP细胞顺铂敏感性分析

目的探讨微小RNA-515-5p(miR-515-5p)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞顺铂敏感性的影响及机制。 方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BEAS-2B、A549及A549/DDP细胞中miR-515-5p的表达情况。A549/DDP细胞分为NC组、miR-515-5p组、si-RING1组及miR-515-5p inh+si-RING1组,CCK-8法检测A549/DDP细胞增殖活性,用WB检测RING1和凋亡相关蛋白的表达情况。用双荧光素酶报告基因系统验证miR-515-5p与RING1的靶向关系。 结果miR-515-5p在BEAS-2B、A549及A549/DDP中的表达水平分别为(1.00±0.03)、(0.61±0.03)、(0.31±0.04);A549/DDP细胞转染miR-515-5p mimics后,NC组和miR-515-5p组细胞在24、48、72和96 h时的OD₄₅₀值分别为(0.61±0.02)、(0.52±0.02),(0.84±0.02)、(0.68±0.04),(1.03±0.03)、(0.79±0.04),(1.08±0.03)、(0.86±0.04);以上指标组间差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-515-5p组cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达水平显著高于NC组,Bcl-2的表达水平显著低于NC组。A549/DDP细胞转染si-RING1、miR-515-5p inhibitor后,NC组,si-RING1组和miR-515-5p inh+si-RING1组细胞在24、48、72和96 h时的OD₄₅₀值分别为(0.63±0.02)、(0.49±0.04)、(0.58±0.03)、(0.83±0.03)、(0.62±0.05)、(0.80±0.02)、(1.05±0.04)、(0.76±0.03)、(1.02±0.04)、(1.15±0.05)、(0.86±0.03)、(1.12±0.06);以上指标组间差异均有统计学意义(P<0.05)。si-RING1组cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达水平显著高于NC组和miR-515-5p inh+si-RING1组,Bcl-2的表达水平显著低于NC组和miR-515-5p inh+si-RING1组。 结论miR-515-5p通过靶向下调RING1的表达增强A549/DDP细胞顺铂敏感性。     

The effects of S-phase kinase-associated protein 2 (SKP2) on cell cycle status, viability, and chemoresistance in A549 lung adenocarcinoma cells

S-phase kinase-associated protein 2 (SKP2), a member of the F-box family of ubiquitin-protein ligase complexes, controls the stability of cell cycle-related proteins including p27Kip1. The authors examined how the expression level of SKP2 affects the expression level of cell cycle-related proteins, cell cycle status, viability, and chemoresistance in A549 lung adenocarcinoma cells. Overexpression of SKP2 reduced the expression of p27Kip1, cyclin E, and p21Cip1, increased S-phase cells, rescued A549 cells from apoptosis due to adenoviral infection, and also increased chemoresistance against camptothecin, cisplatin, and AG1478. Down-regulation of SKP2 did not affect cell cycle status, and reduced cell viability.     

硝呋齐特对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制

目的探讨硝呋齐特(nifuroxazide)对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的nifuroxazide处理肺腺癌A549细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察nifuroxazide对细胞增殖的影响;流式细胞术观察nifuroxazide对细胞凋亡的影响;采用Transwell小室观察nifuroxazide对细胞迁移及侵袭的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测nifuroxazide对微小RNA-219-5p(miR-219-5p)表达的影响;观察抑制miR-219-5p表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果nifuroxazide处理A549细胞后细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.05),随浓度增加其抑制作用逐渐增强(P<0.05);nifuroxazide作用于A549细胞后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),miR-219-5p与Bax的表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl2表达水平显著降低(P<0.05);抑制miR-219-5p的表达可逆转nifuroxazide对A549细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的作用。结论硝呋齐特可通过上调miR-219-5p的表达诱导A549细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭。     

微小RNA-190低表达调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-190对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的A549细胞分为对照(Ctrl)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组和miR-190抑制剂(anti-miR-190)组,转染miR-190抑制剂及其阴性对照后,采用实时荧光定量PCR检测检测A549细胞...     

YAP调控肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的机制分析

目的探讨Yse相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其机制。 方法采用MTS检测顺铂对肺腺癌A549细胞以及肺腺癌耐顺铂A549/DDP细胞的50%抑制浓度(IC₅₀)。使用qPCR以及Western blot检测A549和A549/DDP细胞中YAP mRNA以及蛋白的表达。Western blot检测维替泊芬(Verteporfin, VP)处理A549/DDP后YAP蛋白表达变化。将A549/DDP细胞设置为DMSO对照组、顺铂组(DDP组)、维替泊芬组(VP组)、顺铂联合维替泊芬组(DDP+VP组),采用MTS检测0、24和48 h各处理组细胞活力的变化。采用qPCR检测VP处理A549/DDP后干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA表达变化。 结果顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50分别为(4.07±0.03)μg/ml、(23.44±0.98)μg/ml,耐药指数为5.76。A549/DDP细胞中YAP显著高于A549细胞(P<0.05)。VP处理A549/DDP细胞后YAP蛋白表达水平较DMSO组明显降低。DDP+VP组较单独DDP组,其细胞活力在24 h和48 h均明显降低(P<0.05)。qPCR检测发现A549/DDP细胞经VP处理后,干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA均较DMSO组明显降低(P<0.05)。 结论YAP可能参与了肺癌细胞的顺铂耐药。抑制YAP可通过抑制肿瘤干细胞特性,进而发挥逆转耐药的作用。     

miR-539通过靶向调控DCLK1抑制非小细胞肺癌的侵袭能力

目的 探讨非小细胞肺癌组织中miR-539的表达水平及其抑制肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 通过基因表达数据库dbDEMC分析miR-539在非小细胞肺癌组织及正常肺组织中的表达量差异.根据235例miR-539高表达的非小细胞肺癌患者和102例miR-539低表达的非小细胞肺癌患者随访资料,分析miR-539与非小细胞...     

In vitro study on blocking mTOR signaling pathway in EGFR-TKI resistance NSCLC

Objective:To investigate the effect and mechanism of inhibitor everolimus on EGFR-TKI resistance NSCLC.Methods:MTT assay was used to detect proliferation of human non-small cell lung cancer cell line A549.Flow cytometry was used to detect the changes of apoptosis and cycle distribution in each group after 24 h and 48 h.RT-PCR was used to detect the changes of PTEN and 4EBP1 expression levels after 48 h of monotherapy and combination therapy.Results:MTT assay showed that everolimus had dose-dependent inhibition against growth of A549 cells.Flow cytometry showed when everolimus could induce apoptosis and induce G0/G1 phase cell cycle arrest,which was time-dependent(P0.05).RT-PCR showed everolimus could increase PTEN and 4EBP1 expression.Conclusions:mTOR inhibitor everolimus has an inhibitory effect on EGFR-TKI resistant NSCLC,which cannot reverse the resistance effect of EGFR-TKI resistant cell line A549.The relationship between EGFR/AKT signaling pathway and the mTOR signaling pathway and the mechanism in non-small cell lung cancer need further study.     

土贝母苷甲对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨土贝母苷甲对人肺腺癌细胞(A549)增殖及凋亡的影响.方法 应用MTS法检测土贝母苷甲不同浓度、不同时间对A549细胞增殖的影响;使用1μg/mL土贝母苷甲处理A549细胞48 h作为处理组,对照组加入培养基培养48h;使用流式细胞仪分别检测两组细胞的周期分布及细胞凋亡率;并使用Western blot检测两...