草药蛇足石杉的研究进展

对蛇足石杉的药理作用及其临床应用方面的研究作较全面综述,并对其应用前景作一展望。     

HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量

目的 考察蛇足石杉不同产地、不同部位中石杉碱甲（Hup A）和总碱含量；比较不同提取方法对石杉碱甲含量的影响。方法 采用RP－HPLC法测定Hup A的含量。结果 Hup A在根、茎、叶中的含量煤戏、叶＞根；贵州、广东和安徽产地的Hup A含量分别为0.018%,0.021%,0.020%，提取方法之间差异不显著。结论 Hup A含量在蛇足石杉中的分布为地上部分大于地下部分。不同产地Hup A含量有一定差异。     

蛇足石杉生物碱成分的研究(Ⅱ)

从石杉科植物蛇足石杉中分离出３个生物碱。经光谱分析鉴定，分别为８－ｄｅｏｘｙｓｅｒｒａｔｉｎｉｎｅ（Ⅰ）、ｌｙｃｏｄｉｎｅ（Ⅱ）和ｐｈｌｅｇｍａｒｉｕｒｉｎｅ Ｂ（Ⅲ）。其中Ⅱ和Ⅲ为首次从该植物中分得。     

蛇足石杉生物碱成分的研究(Ⅳ)

从石杉科植物蛇足石杉中分离出二个生物碱,经光谱鉴定分别为６－β－羟基石杉碱甲和马尾杉碱Ｎ。这两个化合物均首次从该植物中得到。生物实验初步结果表明,６－β－羟基石杉碱甲为又一个强效胆碱酯酶抑制剂,其毒性低于石杉碱甲,而对电鳐ＡＣｈＥ的抑制作用比石杉碱甲强约４倍。     

蛇足石杉中石杉碱甲含量的动态变化分析

目的:为揭示蛇足石杉Huperzia serrata居群间和居群内石杉碱甲(HupA)含量的变异程度和变异规律,以及引种前后的变化情况。方法:以采自浙江、广西和重庆的3个蛇足石杉居群,共73株活体植物为研究对象,用改进的HPLC测定了每株引种前后的HupA含量,采用变异系数、单因素方差分析和配对t检验等统计方法,分析了居群间和居群内HupA含量的多样性特征,以及引种前后的含量变化规律。结果:蛇足石杉中石杉碱甲含量在居群间和居群内存在极其丰富的多样性,居群间的含量差异达显著或极显著水平,居群内含量的变异系数从东到西分别为0.36,0.43,0.40;同园引种1年后,东部的浙江居群与西部的广西和重庆居群间的含量差异仍保持极显著的水平,而西部的广西和重庆居群间含量的显著性差异则消失,同时,各居群个体的石杉碱甲含量在引种前后均未发生明显的变化。结论:蛇足石杉中石杉碱甲含量的高低是遗传因素与环境条件共同作用的结果,但更受遗传因素控制。     

蛇足石杉化学成分和药理作用研究进展

结合国内外文献综述蛇足石杉生物碱和三萜化学成分和药理作用,尤其重点归纳蛇足石杉石松生物碱的结构、类型。石杉碱甲为高选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂,优于国外已上市的老年痴呆症治疗药物,是首先从蛇足石杉中发现的lycodine生物碱类型,从蛇足石杉分离的该类型其他生物碱也具有较强的类似活性,具备进一步研究与开发的潜力。     

蛇足石杉中生物碱含量测定方法的研究

目的建立蛇足石杉总生物碱含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法,以石杉碱甲为对照,在246 nm波长下建立标准曲线进行蛇足石杉中生物碱含量测定。结果实验表明吸光度和含量间具有良好的线性关系(r=0.999 49),且精密度良好(RSD=1.14%);样品在1 h内测定稳定(RSD=0.947%)。结论紫外分光光度法是一种简便、快速测定蛇足石杉中生物碱含量的方法,该测定方法可作为蛇足石杉的质量控制。     

蛇足石杉生物碱的研究

综述了蛇足石杉生物碱单体结构、主要物理常数、提取分离方法、药理作用机制、人工合成等方面的研究进展。     

蛇足石杉主要活性成分及其生物合成研究进展

蛇足石杉Huperzia serrata为我国珍稀濒危药用植物,可供利用的资源极其有限,其所含石杉碱甲对治疗阿尔茨海默病、改善学习记忆等具有显著的疗效。对蛇足石杉的主要活性成分进行系统综述,基于现有研究推导了其活性成分可能的生物合成途径,为其资源开发利用和活性成分的生物合成提供科学参考。     

蛇足石杉生物碱成分的研究(Ⅵ)

蛇足石杉 H uperzia serratum( Thunb.) Trev.为石杉科石杉属植物 ,自从该植物中分得一个强效胆碱酯酶抑制剂福定碱即石杉碱甲 [1,2 ]以来 ,为进一步寻找生物活性成分 ,笔者又从中分得十几个生物碱成分[3～ 5] 。国内外文献报道及初步药理实验表明 ,具明显生理活性的化合物主要集中在类似 Selagine骨架的结构类型中 [6] 。笔者在继续寻找新的生理活性成分中 ,又分得 2个生物碱单体 (碱 和 ) ,经光谱鉴定分别为马尾杉碱 M和异福定碱 ,这两个化合物均为 Selagine型结构生物碱 ,并为首次从该植物中分得。初步药理实验表明 ,碱 也有较好的…     

蛇足石杉内生真菌DSJ5的分离及其代谢产物HPLC-DAD筛选研究

目的:从蛇足石杉中筛选分离能产生生物活性物质石杉碱甲及其类似物的内生真菌。方法:从蛇足石杉新鲜植株中分离纯化内生真菌,采用HPLC-DAD筛选内生真菌的代谢产物。结果:内生真菌DSJ5代谢产物的色谱峰与石杉碱甲在相同的色谱条件下保留时间相同,且紫外光谱相近;DSJ5经形态特征鉴定为胶胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioide。结论:HPLC结合紫外光谱特征可用于检测内生真菌中微量的代谢产物;蛇足石杉内生真菌DSJ5可能产生石杉碱甲。     

蛇足石杉离体培养产石杉碱甲的条件优化及动力学研究

目的以具有产石杉碱甲能力的蛇足石杉离体叶状体为研究对象,探究蛇足石杉离体培养物累积石杉碱甲的影响因素及生产动态变化规律。方法应用正交设计对蛇足石杉离体培养叶状体的植物生长物质浓度进行筛选,采用HPLC法对叶状体提取物中的目标成分进行定性定量检测,用Logistic模型拟合叶状体的生长曲线。结果以白光为主要光源,光照时间为12 h/d,1/4 MS固体培养基,为蛇足石杉叶状体产石杉碱甲的最佳条件,相对增殖率达到3 174.5%,石杉碱甲累积量为72.45μg/L;蛇足石杉离体叶状体增殖的生长曲线呈"S"形,继代周期以50 d左右为最适;60 d后生长进入稳定阶段,累积石杉碱甲量明显加快,直至85 d达到最大值7.453μg/g,即叶状体先快速增殖,后累积石杉碱甲。结论叶状体累积石杉碱甲与叶状体增殖呈非生长偶联型,叶状体增长规律符合Logistic生长模型,最大的比生长速率(μmax)为0.071·d-1。     

超声波提取蛇足石杉内生真菌2F09P03B中石杉碱甲的研究

 目的确定一株蛇足石杉内生真菌2F09P03B发酵培养物中石杉碱甲的超声波辅助提取工艺,以改善石杉碱甲提取率。方法对提取溶剂、pH值等影响提取效率的因素分别进行单因素实验;对料液比、超声波功率、负载率(dutycycle)、超声时间4个影响超声波提取效率的因素在单因素实验基础上利用正交实验进行优化。结果超声波辅助提取石杉碱甲的最佳工艺条件是:提取溶剂为pH4.0的酸水,碱性还原反应在pH7.5～8.0进行,料液比1:20,超声波功率140W,超声波负载率30%,超声时间40min。此条件下,该内生真菌石杉碱甲的提取率达0.074%,约为其他传统提取方法的1.5～2倍。结论超声波辅助提取法的石杉碱甲提取率较其他方法有了显著提高,并能大幅度缩短提取时间,应在蛇足石杉内生真菌2F09P03B石杉碱甲的提取中加以应用。     

不同种质资源蛇足石杉引种及差异蛋白比较分析

目的 筛选野生蛇足石杉引种驯化的优质种质资源,并建立其分子鉴别方法。方法 对来自福建大田、三明市郊、南靖3个不同种质资源野生蛇足石杉引种驯化,HPLC法分析不同种质资源蛇足石杉中石杉碱甲（Hup A）量;采用蛋白质双向电泳技术,分析不同种质资源蛇足石杉差异蛋白。结果 种质资源来自大田的蛇足石杉适应性较强,植株长势好,成活率为65.5%,且茎叶Hup A量也较高,分别为197.80和87.54 μg/g;遮阳成活率为77.8%,远高于未遮阳的成活率（7.1%）;黄土地成活率为75%,远高于水田沙壤土的成活率（18.8%）。不同种质资源蛇足石杉共有15个差异蛋白质点,不同种质资源蛇足石杉的差异蛋白质点丰度差异较大。结论 人工引种栽培时,土壤选择以黄土质为佳,并需要给予必要的遮阳;种质资源来自福建大田的蛇足石杉可以作为蛇足石杉优质种质资源进行引种驯化;利用蛇足石杉差异蛋白质点的丰度差异,可以作为鉴别不同蛇足石杉种质资源的依据。     

蛇足石杉HsCAO2基因的克隆、生物信息学分析及载体构建

目的 为筛选高活性的蛇足石杉铜胺氧化酶（copper-containing amine oxidase,CAO）,通过生物工程方法实现石杉碱甲（huperzine A,HupA）的合成、为加快新药创制进度提供理论依据。方法 基于蛇足石杉转录组测序得到的CAO序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术,扩增、拼接并验证获得该基因的全长cDNA序列,并将其命名为HsCAO2。结果 通过RACE技术得到HsCAO2的cDNA全长为2696 bp,CDS为2199 bp,编码732个氨基酸。氨基酸序列同源性比对发现,HsCAO2具有保守的氨基酸位点和Cu²⁺结合位点;进化树分析结果表明,HsCAO2与蛇足石杉中的另一个CAO（HsCAO1）同源性最高,达91.67%;蛋白质结构分析结果表明,HsCAO2也可能在生物体里以同源二聚体的形式存在。在此基础上,进一步分别构建了超表达载体pOX-HsCAO2和体外蛋白表达载体pET-28a （+）-HsCAO2。结论 HsCAO2很可能是蛇足石杉中的一个新的功能性CAO,且超表达载体和体外蛋白表达载体的成功构建为进一步研究其功能奠定了基础。     

不同条件对蛇足石杉组培苗生长及石杉碱甲积累的影响

目的:考察不同条件对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的影响。方法:通过添加不同浓度的组合激素、无机氮源、前体物、诱导子,考察其对蛇足石杉干重增长率和石杉碱甲含量的影响。结果:不同条件对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的影响不同,适当的组合激素和无机氮源利于蛇足石杉组培苗的生长,前体物和适当的诱导子利于石杉碱甲的积累。其中0.50 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)IBA的激素组合对蛇足石杉组培苗的生长促进效果最显著,其干重增长率在培养12周时约是对照组的1.32倍,而0.5 mmol·L~(-1)的赖氨酸对石杉碱甲积累的调控效果最好,与对照相比,在培养12周时,石杉碱甲含量提高了71.46%。结论:本研究初步实现了对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的调控,为通过千层塔的组织快繁缓解石杉碱甲的资源短缺提供了理论基础。     

蛇足石杉的地理分布

目的 获取蛇足石杉在世界范围内的地理分布数据,并绘制蛇足石杉的世界及中国资源分布图.方法 查阅世界范围的植物志和部分大型标本馆中有关蛇足石杉的文献资料,特别中国各大标本馆和中国植物志.结果 获取了蛇足石杉在世界范围内的地理分布数据,尤其明确了蛇足石杉在中国详细的分布状况,蛇足石杉主要分布于长江以南各省,东北地区有零星分...     

TMT蛋白质组学与生物信息学分析不同石杉碱甲含量的蛇足石杉叶状体的蛋白差异

目的分析不同石杉碱甲(Hup A)含量蛇足石杉叶状体(离体培养物,分别为株系A、B、C)的蛋白差异,探究可能与Hup A积累合成的相关酶。方法利用定量蛋白质组学串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)技术对不同株系蛇足石杉叶状体进行定量蛋白质组学检测和鉴定,再对差异蛋白进行GO和KEGG等生物信息学分析。结果株系B的Hup A含量最低,株系C的Hup A含量最高,是B的2倍,株系B和C两者有78个差异蛋白,且差异蛋白GO富集分析,分子功能(MF)所占比例为28.75%;通过不同株系间蛋白质差异表达的比对,分析得到这3个株系在以氨基酸为起始的生物碱代谢通路中共有2种差异蛋白(P93541、Q8RXU4)。P93541蛋白在Hup A低含量的株系B中表达下调,在相对高含量的株系A和C中均上调;而Q8RXU4蛋白在低含量的株系B中表达上调,在相对高含量的株系A和C中均表达下调。结论 Hup A含量差异与蛋白表达差异呈正相关,分析得到2种可能与Hup A积累相关的酶P93541、Q8RXU4,为Hup A生物合成生物信息学分析提供了依据。     

蛇足石杉茎尖组织培养研究

目的：研究蛇足石杉茎尖组织培养条件,建立组织快繁体系。方法：通过添加不同浓度的蔗糖及植物激素改良基础培养基,考察其对蛇足石杉茎尖诱导丛生芽和GGB（绿色小体）,GGB的分化以及丛生芽生根的影响。结果：诱导茎尖发生丛生芽和GGB的最适宜培养基分别为MS+2%蔗糖和MS+4%蔗糖;将GGB转接在MS+2%蔗糖培养基中,平均每团GGB可分化出16株丛生芽;在改良MS+10 μmol·L-1IBA生根培养基中,全部丛生芽再生健壮的根系,再生植株的移栽成活率可达80%。HPLC检测表明,组织快繁的蛇足石杉植株具有石杉碱甲合成能力,其含量为60740±3075 μg·g-1,与野生植株相当。结论：初步建立蛇足石杉组织快繁体系,扩大了蛇足石杉种质资源,并为石杉碱甲的合成途径提供了研究基础。     

蛇足石杉过氧化物酶和酯酶同工酶比较研究

采用聚丙烯酰胺不连续垂直平板电泳(PAGE)技术,对蛇足石杉的过氧化物酶(POD)同工酶及酯酶(EST)同工酶酶谱进行了比较分析.结果 表明,两种同工酶在蛇足石杉的组织中均有不同的表达程度,在叶中POD检测到8条酶带,EST检测到7条酶带;在茎中POD检测到4条酶带,EST检测到6条酶带;在根中POD检测到5条酶带,EST检测到5条酶带.两种酶同工酶带型在蛇足石杉中存在明显的组织器官特异性.