肿瘤坏死因子α对Raji细胞Notch1蛋白表达的影响

目的 通过探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)作用淋巴瘤细胞系Raji细胞后Notch1蛋白表达的变化,进一步明确TNF-α对淋巴瘤细胞Notch信号途径的影响.方法 采用半定量RT-PCR方法检测Raji细胞Notch1 mRNA的含量;用流式细胞术分析Raji细胞Notch1蛋白的表达及TNF-α作用后Notch1蛋白的变化.结果 ①半定量RT-PCR检测结果表明Raji细胞经TNF-α作用后Notch1 mRNA的含量明显增高,且随TNF-α浓度的增加而增高,与对照组比较,差异有极显著性意义(P<0.01);②流式细胞术分析表明,Notch1蛋白在Raji细胞呈阳性表达,TNF-α作用组Notch1蛋白的平均荧光强度明显高于对照组,差异亦有极显著性意义 (P<0.01).结论 TNF-α可上调Raji细胞内Notch1蛋白的表达;TNF-α可通过影响Notch信号途径在淋巴瘤细胞内发挥作用.     

鼻型NK／T细胞淋巴瘤增生活性的研究

目的：研究鼻型NK/T恶性淋巴瘤的增生活性.方法：应用免疫组织化学EnVision法研究31例鼻型NK/T细胞淋巴瘤和12例鼻咽黏膜反应性病变的增生活性,并统计分析Ki67标记指数（Ki67LI）.结果：免疫表型分析支持31例鼻型NK/T恶性淋巴瘤的诊断.31例NK/T细胞淋巴瘤的平均Ki67LI为0.37±0.03,12例反应性病变为0.07±0.02,两组间有差异显著（P〈0.01）.若将31例NK/T细胞淋巴瘤按高于或低于平均Ki67LI分为2组,则高于平均Ki67LI者19例,占61%;低于平均Ki67LI者12例,占39%.将低于平均Ki67LI的12例NK/T细胞淋巴瘤（0.2±0.02）与12例反应性病变相比（0.07±0.02）相比,也有统计学差异（P〈0.001）.结论：鼻型NK/T恶性淋巴瘤是一种增生活性异质性明显的恶性肿瘤.Ki67LI有助于鼻型NK/T恶性淋巴瘤的诊断.     

SNK-6细胞对铂类药物的体外敏感性及多药耐药基因mdr-1表达情况的研究

目的观察顺铂、卡铂、奥沙利铂、洛铂对人结外鼻型NK细胞淋巴瘤细胞系SNK-6细胞增殖的影响及多药耐药基因mdr-1的表达情况。方法将SNK-6细胞分别加入不同浓度的四种铂类药物中进行培养,CCK-8法检测SNK-6细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞学形态,计算半数抑制浓度IC50值,采用反转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法检测SNK-6细胞mdr-1的表达。结果不同浓度的四类药物对SNK-6细胞增殖均有不同程度抑制作用,并呈剂量依赖性,顺铂、卡铂、奥沙利铂、洛铂,其各自的半数抑制浓度IC50值依次为：（5．7±0．5）肛g／mi、（39．7±3．8）μg/ml、（11．2±1．4）μg/ml、（1．5±0．3）μg/ml;RT—PCR方法检测SNK-6细胞mdr-1的表达呈阳性。结论四种铂类药物对SNK-6细胞有不同程度抑制作用,但SNK-6细胞mdr-1呈阳性表达,我们推测铂类药物可能为不依赖mdr-1表达的且可用于NK细胞淋巴瘤治疗的药物。     

鼻腔NK/T细胞淋巴瘤21例临床分析

目的 研究鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的临床特点、近期疗效及预后情况.方法 回顾性分析21例NK/T细胞淋巴瘤患者,单纯放疗15例,放化疗6例.放疗采用调强放射治疗,化疗采用CHOP方案.结果 21例患者中,总有效率为81％,其中完全缓解（CR） 11例（52.4％）,部分缓解（PR）6例（28.6％）,病情进展4例（其中死亡3例）.结论 早期NK/T细胞淋巴瘤放疗局部控制率高,晚期NK/T细胞淋巴瘤同步放化疗疗效差.     

Wnt/β-catenin通路关键分子在NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达及其临床意义

目的:研究Wnt/β-catenin通路的关键分子β-catenin、c-myc和cyclinD₁在NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)组织中的表达,阐明其与NKTCL患者临床特征的关系。方法:采用Real-time PCR法检测人NKTCL细胞株(SNK-6和YTS)及人正常NK细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、c-myc和cyclinD₁ mRNA的表达水平;采用免疫组织化学SP法检测NKTCL组织和反应性增生的淋巴组织中β-catenin、c-myc蛋白的表达阳性率,并分析蛋白表达与患者临床特征的关系;分析NKTCL患者中β-catenin和c-myc蛋白表达的相关性;Kaplan-Meier法分析β-catenin表达与NKTCL患者中位生存期的关系。结果:细胞株SNK-6和YTS中β-catenin、c-myc和cyclinD₁ mRNA的表达阳性率明显高于正常NK细胞(P<0.05);NKTCL组织中β-catenin和c-myc蛋白表达阳性率(24%和56%)明显高于淋巴结反应性增生组织(0%和25%)(P<0.05);β-catenin表达与Ann Arbor分期有关联(P<0.05),c-myc表达与Ann Arbor分期和Ki-67水平有关联(P<0.05),NKTCL患者中β-catenin和c-myc表达呈正相关关系(r=0.770,P<0.05);β-catenin阳性表达患者中位生存期低于β-catenin阴性表达患者(P<0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路中关键分子β-catenin、c-myc、cyclinD₁在NKTCL组织中高表达,并且其表达水平与NKTCL患者临床分期有关联。     

外周T细胞淋巴瘤的临床病理和免疫组织化学特征

目的 探讨外周T细胞淋巴瘤临床和病理组织特征以及免疫组织化学特征在其诊断和鉴别诊断以及分类中的价值。方法 应用组织形态学观察及免疫组织化学分析对既往诊断的64例外周T细胞淋巴瘤（PTCLs），进行HE染色和CD45RO，CD20，CD3，CD56，CD4，CD8，CD30，ALK的免疫表型测定，结合临床，根据新的WHO 2001分类标准进行分类和分析。结果 确诊了64例外周T细胞淋巴瘤，包括29例外周T细胞淋巴瘤（非特殊性），占45．3％；13例间变性大细胞淋巴瘤（ALCL），占20．3％；11例（17．2％）结外NK／T细胞淋巴瘤（鼻型）（NK／TCL）；肠病型T细胞淋巴瘤（ITCL）和皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤（SCPTCL）各5例，各占7．8％；1例侵袭性NK细胞白血病（ANKCL），占1．6％。临床上，男性多于女性，大于40岁多见（78％）。发生在淋巴结的有44例，其次鼻咽部10例，咽喉部5例，睾丸、腹部包决、左大腿、腰椎、甲状腺各1例，累及的部位较广。组织病理形态：瘤细胞大、中、小均可见，染色质细，胞浆浅染。免疫组织化学：64例外周T细胞淋巴瘤中70．3％，10．9％，98．4％分别表达CD45RO，CD20，CD3；13例间变性大细胞淋巴瘤中11例表达CD30，11例结外NK／T细胞淋巴瘤（鼻型）100％表达CD56，阳性率和阴性率差异有显著性。结论 外周T细胞淋巴瘤是一类异质性很强的肿瘤，必须结合临床、病理组织特征和免疫组织化学特征进行诊断和鉴别诊断以及分类。     

稳定过表达/下调表达miR-125b-5p Jurkat T细胞株的建立及验证

目的 构建稳定过表达/下调表达miR-125b-5p的Jurkat T细胞株,为miR-125b-5p在免疫性疾病中的发病机制研究奠定基础。 方法 扩增质粒,经293T细胞包装产生慢病毒颗粒,感染Jurkat T细胞,RT-qPCR检测miR-125b-5p表达情况,Western blotting检测下游靶基因UVRAG表达情况。采用单因素方差分析,2组之间比较应用LSD检验,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果 hsa-miR-125b-5p慢病毒过表达载体及对照转染Jurkat T细胞后均有绿色荧光表达,hsa-miR-125b-5p慢病毒干扰载体及对照转染Jurkat T细胞后均有红色荧光表达;RT-qPCR显示和对照组比较慢病毒过表达载体组miR-125b-5p表达水平明显增高(P<0.01),慢病毒干扰载体组miR-125b-5p表达水平明显降低(P<0.01),差异均有统计学意义。Western blotting显示和对照组比较,慢病毒过表达载体组下游靶基因UVRAG表达明显降低(P<0.001),慢病毒干扰载体组下游靶基因UVRAG表达明显升高(P<0.001),差异均有统计学意义。 结论 成功建立了稳定过表达/下调表达hsa-miR-125b-5p的Jurkat T细胞株。      

鼻NK/T细胞淋巴瘤生存素基因表达与细胞凋亡和增殖的关系

目的 :探讨凋亡抑制基因生存素 (Survivin)在鼻NK/T细胞淋巴瘤中的表达 ,及其与细胞凋亡和增殖的关系。方法 :应用TdT介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术和免疫组织化学链霉素抗生物素 过氧化酶连接法 (SP法 )检测 2 5例鼻NK/T细胞淋巴瘤组织和 10例反应性增生淋巴组织中的细胞凋亡、增殖细胞核抗原 (PCNA)和Sur vivin基因表达水平。结果 :2 5例鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中Survivin表达阳性 17例 (6 8.0 0 % ) ,10例反应性增生淋巴组织中Survivin不表达 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 2 5例鼻NK/T细胞淋巴瘤中平均凋亡指数 (AI)为 1.92 %± 0 .86 % ,平均增殖指数 (PI)为 4 1.4 8%± 5 .10 % ;Survivin表达阳性组AI(1.71%± 0 .6 1% )显著低于阴性组 (2 .2 9%± 0 .72 % ) ,PI(4 3.35 %± 4 .80 % )显著高于阴性组 (37.5 0 %± 2 .90 % ) ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结果 :鼻NK/T细胞淋巴瘤中Survivin基因表达上调 ,Survivin基因可能通过肿瘤细胞凋亡的抑制和细胞增殖参与NK/T细胞淋巴瘤的发生发展。     

广西地区成熟T和NK细胞淋巴瘤与EB病毒感染的关系

目的 探讨成熟T和NK细胞淋巴瘤与EB病毒(EBV)感染的关系.方法 用原位杂交法检测184例成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER(EBV编码的小RNA)表达情况,统计不同类型成熟T和NK细胞淋巴瘤与EBV感染相关性.结果 184例成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER阳性率为69％,EBER表达与组织学类型和发生部位有关(P ＜0.001),不同类型淋巴瘤EBER表达率不同:结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(ENKCL)为100％,EBER阳性细胞数超过30％;血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)为83％,阳性细胞数不到10％,阳性细胞多为反应性B细胞;外周T细胞淋巴瘤,非特殊型(PT,NOS)为40％;肠病相关性T细胞淋巴瘤(EATL)为28％;间变性大细胞淋巴瘤(ALCL) ALK+为18％.结外成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER表达率显著高于结区的(P＜0.01),两组EBER阳性细胞及其分布也不同.结外EBER表达率为81％,阳性细胞多为肿瘤细胞,阳性细胞多超过30％;而结内者表达率为43％,阳性细胞多为母化的肿瘤细胞或反应性B淋巴细胞,阳性细胞不到10％.结论 结外成熟T和NK细胞淋巴瘤发生与EBV感染密切相关,而结内成熟T和NK细胞淋巴瘤EBV感染可能为继发感染.检测肿瘤组织EBER表达有助于成熟T和NK细胞淋巴瘤的诊断和治疗.     

肠道原发性非霍奇金淋巴瘤85例分析

摘要：目的了解不同细胞来源的肠道原发性非霍奇金淋巴瘤（PINHL）在临床特征、内镜表现、诊断及治疗、预后方面的差异。
方法回顾性分析我院2003年1月~2010年12月间明确诊断的PINHL病例,分别统计B细胞来源与T细胞来源的PINHL在临床
表现、内镜表现、诊断治疗,并随访预后。结果共纳入PINHL 85 例,中位年龄52 岁,男女比例为3.05∶1,B细胞来源58 例
（68.2%）,T细胞来源27例（31.8%）。T细胞淋巴瘤较B细胞淋巴瘤具有发病年龄小（32岁vs 56岁,P<0.01);发热、便血、腹泻、盗
汗多（P<0.05）;病变以多部位弥漫性分布和肠镜下以溃疡及溃疡浸润性表现为主;确诊时间长（4月vs 2月,P<0.01）;误诊率高
（16/27 vs 12/58,P<0.01）;预后差等特点;且T细胞淋巴瘤以结外NK/T淋巴瘤为主。结论我院PINHL中,T细胞来源淋巴瘤比
例高,发病年龄更早,诊断困难,容易误诊,总体预后差,病理分型以结外NK/T淋巴瘤为主。
     

shRNA干扰沉默Mcl-1基因对淋巴瘤细胞系增殖的影响

目的研究慢病毒介导的髓细胞白血病基因(Mcl-1)短发夹状RNA(shRNA)干扰对淋巴瘤细胞系SNK-6增殖和凋亡的影响。方法设计以Mcl-1为靶点的shRNA并构建携带此shRNA的慢病毒载体,转染淋巴瘤细胞系SNK-6,荧光定量PCR(qPCR)及Western blot方法检测病毒感染前后Mcl-1 mRNA及蛋白表达变化,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)和流式细胞仪分析细胞增殖和凋亡变化的情况。结果成功构建Mcl-1-shRNA慢病毒表达载体,并可有效感染淋巴瘤细胞株SNK-6,感染后SNK-6细胞Mcl-1基因的mRNA水平及蛋白水平表达明显下调,MTT法检测显示慢病毒介导的Mcl-1基因shRNA干扰与对照病毒组相比可明显抑制SNK-6细胞增殖[(31.6±3.3)%vs(5.8±2.7)%,P<0.01],流式细胞仪测定感染后细胞凋亡明显高于对照病毒组[(28.9±2.1)%vs(5.3±1.5)%,P<0.01]。结论慢病毒介导的Mcl-1基因shRNA干扰技术可特异性阻断SNK-6细胞Mcl-1基因的表达,抑制细胞的增殖并促进细胞的凋亡。     

罗格列酮逆转Burkitt淋巴瘤raji细胞对紫杉醇耐药的作用及机制

目的研究罗格列酮（RGZ）逆转Burkit％淋巴瘤raji细胞对紫杉醇耐药的作用及机制。方法建立人Burkitt淋巴瘤raji紫杉醇耐药细胞株（raji／TAX25）,细胞计数法检测raji／TAX25对TAX的耐药指数和RGZ处理后各组raji细胞的增殖活性。流式细胞仪检测凋亡率,蛋白质印迹（westernblot）检测raji细胞耐药基因P-gp和多药耐药相关蛋白（MRP）的变化。结果成功建立了raji／TAX25耐药株、耐药指数为4590,RGZ明显逆转Burkitt淋巴瘤raji细胞对紫杉醇的耐药性（P〈0．01）。western blot检测发现raji细胞P-gp和MRF表达显著下降（P〈0．05）。结论RGZ具有逆转Burkitt淋巴瘤raui细胞对紫杉醇耐药的作用,其作用机制与下调P-gp和MRP表达有关。     

青蒿琥酯联合硼替佐米对T细胞淋巴瘤细胞的抑制作用观察

[目的]观察青蒿琥酯联合硼替佐米对T细胞淋巴瘤细胞的增殖抑制作用.[方法]MTT法观察青蒿琥酯、硼替佐米对Jurkat细胞的增殖抑制效应及协同效应,瑞氏染色油镜下观察细胞形态变化.[结果]青蒿琥酯、硼替佐米都能够明显抑制Jurkat细胞增殖,表现出凋亡形态学改变.以远低于IC50剂量的青蒿琥酯(4μg·mL-1)联合10～320 ng·mL-1硼替佐米作用Jurkat细胞24h,硼替佐米的JC50从(137.64±6.82 )ng· mL-1降为( 17.72±2.75 )ng·mL-1,联合组生长抑制率均显著高于硼替佐米单药组(P＜0.01),药物联合作用均呈协同方式.[结论]青蒿琥酯能协同硼替佐米抑制Jurkat细胞,有望成为有前途的治疗T细胞淋巴瘤方案.     

成熟T和NK细胞淋巴瘤与EB病毒感染关系的探讨

目的探讨成熟T和NK细胞淋巴瘤与EB病毒感染的关系。方法用原位杂交法检测121例成熟T和NK细胞淋巴瘤EBV,rt（EB病毒编码的小RNA）表达情况,统计不同类型成熟T和NK细胞淋巴瘤与EB病毒感染相关性。结果121例成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER阳性率为63．6％（77／121）,其中结外者EBER阳性表达率为75．9％（60／79）,阳性细胞多为肿瘤细胞,阳性细胞数〉30％;而结内者EBER阳性表达率为40．5％（17／42）,阳性细胞多为母化的肿瘤细胞或反应性B淋巴细胞,阳性细胞数〈10％。结外成熟T和NK细胞淋巴瘤EBER表达率显著高于结内（P〈0．01）。EBER表达与组织学类型有关（P〈0．01）。不同类型淋巴瘤EBER阳性表达率不同：结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤（ENKCL）为98．0％（48／49）,EBER阳性细胞数〉30％;血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（AITL）为77．8％（7／9）,阳性细胞数〈10％,阳性细胞多为反应性B细胞;外周T细胞淋巴瘤非特殊型（PT,NOS）为41．5％（17／41）;肠病相关性T细胞淋巴瘤（EATL）为33．3％（2／6）;间变性大细胞淋巴瘤并ALK阳性（ALCL,ALK＋）者为18．2％（2／11）。结论结外成熟T和NK细胞淋巴瘤发生与EB病毒感染密切相关,而结内成熟T和NK细胞淋巴瘤EB病毒感染可能为继发感染。检测肿瘤组织EBER表达有助于成熟T和NK细胞淋巴瘤的诊断和治疗。     

非霍奇金淋巴瘤免疫功能的变化及临床意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）免疫功能的变化及其临床意义。方法初治NHL患者50例为实验组,采集静脉血检测T细胞亚群、NK细胞及免疫球蛋白（Ig）水平,与30名健康对照者进行比较;并对50例患者中不同临床分期、有无B症状及治疗有效无效组进行比较。结果实验组外周血CD4^＋、NK细胞计数及CD4^＋/CD8^＋比值均明显低于对照组（P〈0.05）,实验组与对照组的CD3^＋、CD8^＋、CD19^＋计数比较差异无统计学意义（P〉0.05）;实验组中,治疗无效组、有B组症状组、Ⅲ＋Ⅳ期组的CD4^＋、NK细胞计数及CD4^＋/CD8^＋比值明显降低（P〈0.05）;实验组与对照组及实验组各亚组间的Ig A、Ig G、Ig M水平比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 NHL患者存在细胞免疫抑制,其临床分期、治疗疗效与细胞免疫功能有关,而与体液免疫的相关性有待进一步探讨。     

IL-21对Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究

目的 探讨IL-21对淋巴瘤Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用及其机制。方法 MTT比色法检测观察IL-21对Raji细胞增殖的影响;流式细胞仪观察24h后IL-21对细胞凋亡的影响;RT-PCR检测Livin及caspase-3mRNA水平,观察IL-21对基因表达的影响。结果 IL-21对Raji细胞增殖有抑制作用,呈时间和剂量依赖性（P〈0.05）;0、10、100μg/L组细胞凋亡率分别为7.26%、15.12%、22.57%,药物组与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01或〈0.05）;随着IL-21浓度升高,LivinmRNA的表达水平逐步下降,caspase-3mRNA表达逐步升高（P〈0.05）。结论 IL-21可以抑制淋巴瘤细胞的增殖和促进细胞的凋亡,可能与调节Livin、caspase-3基因表达有关。     

夏枯草及联合化疗药物对Raji细胞增殖的影响

目的探讨夏枯草（prunella vulgaris,PV）及与化疗药物联合对人淋巴瘤细胞Raji体外生长的抑制作用。方法MTT法测定夏枯草及分剐与紫杉醇（TAX）、顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）联合应用对Raji细胞的生长抑制率;免疫组化方法检测夏枯草对Raji细胞内Survivin及Caspase-3蛋白表达的影响。结果①夏枯草抑制Raji细胞的生长,其半数抑制浓度（IC50）为30．26μg／ml且呈剂量相关性。②夏枯草（10μg／ml）与TAX、DDP、VCR分别合用时抑制率较单用TAX、DDP时的抑制率高（P〈0．05）,但较单用VCR时无明显增加抑制作用。③免疫组化结果显示30μg/ml夏枯草作用于Raji细胞48h后,Survivin表达减弱,而Caspase-3蛋白表达增强。结论夏枯草对Raji细胞增殖具有抑制作用,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞凋亡有关;与TAX、DDP联合应用,可提高其化疗效果。     

PDTC增强TRAIL对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对EBV阳性的人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测TRAIL（1、10、100ng／mL）及TRAIL（1、10、100ng／mL）＋100μmol／mLPDTC时Raji细胞的生长抑制率;原位末端酶标记技术（TUNEL）检测Raji凋亡细胞。结果①TRAIL 1、10ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率分别为-35．52％及-15．07％;TRAIL 100ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率为6．68％,并且呈时间依赖性（P〈0．05）。②TRAIL（1、10、100ng／mL）加入PDTC后,12hRaji细胞生长抑制率分别为1．18％、4．96％、14．63％,均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。③TRAIL（100ng／mL）联合PDTC时Raji细胞凋亡指数最高为79．49％,较TRAIL 100ng／mL（28．84％）有显著性升高,1、10ng／mL TRAIL联合PDTC后Rail凋亡细胞也均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。与MTT法检测结果具有一致性。结论TRAIL能诱导Raji细胞凋亡但作用不敏感。PDTC能显著增强TRAIL对Raji细胞的诱凋亡作用。