未成熟日本血吸虫卵的组分蛋白及其免疫学特性的研究

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对日本血吸虫４周、５周和６周－ＳＥＡ进行分析，分别出现２１、１４和２０条组分蛋白带，三者间既有共同组分又存在差异，显著出不同的分子基础。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要于３０．８ＫＵ到４９．６ＫＵ之间，其主要反应带为４９．６ＫＵ，３９．７ＫＵ和３３．７ＫＵ。推测４９．６ＫＵ和３３．７ＫＵ这两怕 诱导宿主产生抗卵或熟过程中可能起着重要作用。     

紫外线照射日本血吸虫尾蚴疫苗保护性抗原的筛选

目的：分析经紫外线照射处理后日本血吸虫尾蚴蛋白的差异性表达，并从中筛选出有效的保护性抗原组分。方法：收集尾蚴，制备抗原，进行SDS-PAGE电泳后，转印至硝酸纤维素膜上，与照射尾蚴免疫血清和正常感染血清分别进行免疫印渍(Western blot)试验，比较两反应条带的差异性，筛选出惟有免疫血清所能识别的特有的抗原组分，并测定其分子量。结果：在童虫抗原中发现一条能被免疫血清所识别的特异性抗原条带，并测得其分子量为75kDa。结论：紫外线照射致弱尾蚴可诱导宿主产生特异性抗体，被该抗体所识别的抗原分子量为75kDa。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要集中于３０８ＫＵ到４９６ＫＵ之间，其主要反应带为４９６ＫＵ、３９７ＫＵ和３３７ＫＵ。推测４９６ＫＵ和３３７ＫＵ这两抗原分子在诱导宿主产生抗卵成熟过程中可能起着重要作用。     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

三种吸虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应性及其表位研究

采用免疫标记技术（ＴＥＳ一ＩＥＳＴ、ＡＷＡ一ＩＥＳＴ和ＴＥＳ一ＩＦＡＴ）及酶联免疫印渍技术（ＥＬＩＢ）对卫氏并殖吸虫，华支睾吸虫和姜片虫成虫可溶性抗原与日本血吸虫卵和成虫可溶性抗原之间的交叉反应性及其表位分子基础进行了研究。７１０份上述３种吸虫病人血清与日本血吸虫抗原之间的交叉反应率分别为３．９％（１０／２５９），４．２％（１１／２６１）和３．２％（６／１９０）．用ＥＬＩＢ对上述吸虫组分抗原分析结果表明，卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫和姜片虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应表位分子量分别为９７～７６ｋｕ，４０～１４．５ｋｕ和１０６～１４ｋｕ，华支睾吸虫和姜片虫成虫抗原之间显示６７～１４ｋｕ，范围的交又反应表位分子量。本研究为今后纯化抗原，提高血清学方法的特异性和敏感性，提供了重要依据。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及成熟虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，发现ＳＩＥＡ诱导小鼠产生显著的抗生殖及抗卵胚发育的免疫力，与对照组比较，ＳＩＥＡ免疫鼠在攻击感染后４６天，肝，肠组织内总虫卵数明显下降，成熟虫卵数和粪卵数分别降低了５９．９８％，６６．８６％和６６．９７％，粪卵下降程度与肝，肠组织中成熟虫卵的减少相一致，ＳＥＡ免疫后未呈现上述效应。     

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。     

日本血吸虫卵可溶性抗原与病人和病兔血清的免疫印斑反应

日本血吸虫可溶虫卵抗原（ＳＥＡ）与血吸虫病人和兔血清的免疫印斑反应结果表明：ＳＥＡ中有七咱不同分子量的蛋白为主要血清学反应成分，其中≤２６ＫＤ、７ＫＤ及９６ＫＤ组分蛋白在血吸虫病检查中具有高度的敏感性和特异性，尤其是抗７ＫＤ和９６ＫＤ抗体在治疗兔的血清中消失较早。     

被动转移抗SIEA－Cp101血清对人工感染日本血吸虫鼠肺虫卵肉芽形成的影响

目的　了解SIEA Gp10 1对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响。方法　采用虫卵肉芽肿肺模型对SIEA Gp10 1的作用进行研究。将 36只昆明鼠随机分为 5组 ,各组被动转移的成分分别为 :抗SIEA Gp10 1,抗SIEA2 8kDa ,抗SIEA Gp10 1与抗SIEA2 8kDa混合血清 ,同时设正常兔血清组与生理盐水对照组。分别于第 1、3、5天尾静脉注射抗血清、正常兔血清或生理盐水 ,各组于第 2天注射日本血吸虫成熟虫卵 ,第 8天取鼠肺组织切片 ,观察虫卵肉芽肿变化并测量、比较虫卵肉芽肿大小。结果　正常兔血清组与生理盐水组相比 ,虫卵肉芽肿大小无统计学差别 (P >0 0 5 ) ;与正常兔血清组比较 ,实验组虫卵肉芽肿的大小分别下降了 18 0 8%、2 8 30 %和 6 44 % ,其中抗SIEA2 8kDa差别显著 (P<0 0 5 ) ,抗SIEA Gp10 1和混合血清组差别不显著 (P >0 0 5 )。肉芽肿内外细胞成分的观察显示 ,正常兔血清组与生理盐水组无明显的差别 ;而抗SIEA2 8kDa血清被转组 ,虫卵破坏加快 ,部分虫卵卵内仅见残渣和少量炎性细胞。抗SIEA Gp10 1与混合血清组部分虫卵坏死 ,有一定数量的炎性细胞浸润。结论　SIEA2 8kDa分子具有抗卵胚发育和抑制虫卵肉芽肿形成的作用。混合血清组较抗SIEA2 6 2 8kDa组虫卵破坏较轻 ,虫卵肉芽肿增大 ,细胞数量增多 ,是否     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原致敏对树突状细胞功能的影响

目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)致敏对树突状细胞(DC)功能的影响.方法利用SEA致敏DC,流武细胞术(FACS)检测SEA致敏的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应检测SEA致敏的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用.结果与未致敏的DC相比,SEA致敏后,DC摄取抗原的能力无明显变化,SEA致敏的DC抑制混合淋巴细胞反应.结论体外SEA致敏DC后,不是促进DC的活化,而是抑制DC的生物学活性.     

单克隆双抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫卵抗原

用双抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫卵主要血清学抗原。为了在所用的单克隆抗体H6、C12、H7及B2中获得包被抗体与复盖抗体(酶联抗体)的最适组对,我们进行了20组配对试验。实验结果表明,H7单抗最适于作包被抗体而H6单抗最适于作复盖单抗。有兴趣的是最佳的配对组是H7-EH6和混合单抗-EHG组而不是混合单抗-E混合单抗组。上述两个最佳组对在10次试验的OD均值均较任何一组高,有非常显著的意义(P<0.01)。我们还观察到,同一单抗既作包被抗体又作复盖抗体的效果常不理想。     

肝靶向剂LHSA交联“425”制剂抗日本血吸虫卵肉芽肿效果的研究

应用靶向剂LHSA交联“425”制剂，经腹腔注入感染日本血吸虫尾蚴后4周的BALB／c小鼠，每鼠0．5ml／d（内含“425”制剂10mg）。连续用药2周（相当于感染后6周）后，肝内虫卵肉芽肿平均直径与感染对照组相比，下降了39．93％，平均面积下降了62．37％；平均体积下降了79．01％。停药1～2周（相当于感染后7～8周）时，平均直径、面积和体积分别下降了34．04％～40．24％，59．00％～65．92％和74．79％～77．23％。结果表明，LHSA交联“425”制剂具有明显的抗日本血吸虫卵肝内肉芽肿病变的效果。     

血吸虫合成多肽抗原免疫效果的实验研究

人工合成的10个不同血吸虫多肽片段对小鼠进行免疫保护实验，采用200μg／只皮下注射，共免疫3次，每次间隔1周，末次免疫后2周，以（40±2）条日本血吸虫正常尾蚴攻击感染。另设不免疫攻击感染日本血吸虫的小鼠为对照组。实验组小鼠分别获得10．7％～73．6％的减虫率、23．0％～75．9％的减卵率和－11．22％～66．78％的虫卵结节减小率。各实验组血清抗体均为阳性，随时间的延长有增高趋势。实验提示，以寡赖氨酸为母校，连接4个或8个抗原肽的多肽抗原效果比较理想。     

日本血吸虫卵肉芽肿形成中细胞成分及其相互关系的动态观察

本文应用光镜、电镜及酶组化技术对小鼠肝内实验性日本血吸虫卵肉芽肿的形成进行了动态观察,发现各阶段中的主要细胞成分为淋巴细胞、嗜酸性白细胞和巨噬细胞。病变向晚期发展时,成纤维细胞增多。浆细胞初见于感染后4周,到晚期则集中于肉芽肿周边区。酶组化证明,最初与虫卵接触的为巨噬细胞。经电镜鉴定,见于肉芽肿内的泡沫细胞源于巨噬细胞。淋巴细胞从其超微结构看似属T细胞。这些结果显示,日本血吸虫卵肉芽肿的形成可能是以细胞免疫为主的体液和细胞免疫混合反应的结果。     

肺吸虫抗原与日本血吸虫病兔血清的交叉反应

肺吸虫成虫粗抗原与日本血吸虫病兔血清可出现交叉反应,煮沸后的成虫粗抗原与血吸虫病兔血清也存在交叉反应。成虫粗抗原经Sephadex G-200过柱后得到两个蛋白峰,环状沉淀试验、对流免疫电泳和间接血凝试验证实,第1个蛋白峰与血吸虫病兔血清存在交叉反应,第2个蛋白峰无交叉反应。成虫粗抗原、煮沸的成虫粗抗原和过柱后得到的两个蛋白峰,分别经圆盘电泳后作过碘酸雪夫(PAS)染色,证实第2个蛋白峰不含糖蛋白。由此推断,肺吸虫成虫粗抗原与抗血吸虫血清发生交叉反应的成分是一类热稳定的糖蛋白。     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

日本血吸虫感染动物红细胞上非游离性循环抗原水平的检测和动态研究

应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原的多克隆抗体（抗ＳＥＡ－ＰｃＡｂ）检测感染５０～２００条尾蚴后不同时间的兔红细胞（ＲＢＣ）上非游离性循环抗原（ＮＦ－ＣＡｇ）。结果表明，感染兔ＲＢＣ上存有ＮＦ－ＣＡｇ，而正常家兔ＲＢＣ上则无；ＧＭＲＴ，前者为２．８３±０．１７～１０２４．００±０．００，后者为１．００±０．００～３．３６±０．１５，两者有显著性差异（均Ｐ＜０．０１）：感染家兔后４～７周内，ＧＭＲＴ呈现低水平，８～９周时显著升高，１０周时均为高峰（ＧＭＲＴ达１０２４．００±０．００），１０周后，均明显下降，１８周时为低水平。结果表明．ＮＦ－ＣＡｇ检测优势仅在感染早期（１０周内）。本文报告感染兔ＲＢＣ上存有ＮＦ－ＣＡｇ，尚未见类似报道，为今后研究ＣＡｇ的新途径和新内容提供了依据，也为感染宿主体液内ＣＡｇ的归宿问题提供了重要依据。