大鼠局灶性脑缺血—再灌注后尾壳核神经型一氧化氮合酶表达的变化

目的：探讨神经型一氧化氮合酶（Neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在大鼠脑缺血后不同时程尾壳核内的变化。方法：应用大鼠大脑中动脉阻塞模型（MCAO），结合免疫细胞化学ABC法和图像定量分析技术进行研究。结果：缺血－再灌注早期（0h,1h,6h)尾壳核内nNOS免疫反应阳性神经元数量减少，细胞形态变圆，树突缩短，形态学参数开始下降，缺血－再灌注中期（24h,48h,72h)nNOS阳性神经元数量和形态学参数较前有一过性升高，但随后仍持续降低，缺血－再灌注后期（1W）nNOS阳性神经元数量继续下降，胞体浓缩，树突消失，细胞崩解，形态学参数降到最低，结论：脑缺血－再灌注后尾壳核内nNOS免疫反应阳性神经元损伤较重，持续时间长，后期更为严重，这可能会影响尾壳核功能的恢复。     

局灶性脑缺血大鼠皮质和尾壳核神经干细胞增殖分化与nNOS的表达

本研究旨在探讨局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质和尾壳核神经干细胞的增殖分化与nNOS表达的关系。大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,5溴脱氧尿核苷(BrdU)标记分裂增殖细胞,免疫组化单标和双标记技术检测各组大鼠缺血侧皮质和尾壳核BrdU阳性细胞和nNOS的表达。模型组大鼠皮质和尾壳核BrdU阳性细胞再灌注后3d开始增多,14d达高峰,nNOS阳性细胞再灌注后7d表达增强,28d达高峰,BrdU/nNOS双标细胞在14d达高峰,占皮质BrdU阳性细胞数的42.95%,尾壳核内占42.56%。新生细胞分化组BrdU阳性细胞和BrdU/nNOS双标细胞显著多于模型组(P<0.05),皮质双标细胞占BrdU阳性细胞数的54.08%,尾壳核内占47.84%。提示局灶性脑缺血可增强大鼠皮质和尾壳核的增殖能力,部分增殖细胞分化为nNOS阳性神经元,参与神经网络的重建。     

脑缺血早期大脑皮质和尾壳核一氧化氮合酶神经元的进程变化

目的：探讨一氧化氮合酶神经元在脑缺血早期（２４ｈ内）的变化规律。方法：ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法。结果：各组间正常侧ＮＯＳ神经元无明显变化，散在分布于皮质的Ⅱ～Ⅵ层，以Ⅳ～Ⅵ为主，尾壳核内ＮＯＳ神经元数量较多，密集分布于外侧区。缺血１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ组，缺血中心区皮质和尾壳核ＮＯＳ神经元数量减少，形态无明显变化；缺血１ｈ和２ｈ组，皮质和尾壳核内ＮＯＳ神经元数量进一步减少，突起变短；缺血３ｈ和６     

大鼠局灶性脑梗死皮层血流量和c-fos表达的实验研究

目的探讨大鼠局灶性脑梗死后皮层血流量和c-fos表达的变化。方法光化学法诱导大鼠局灶性脑梗死模型,应用激光多普勒微循环测量仪检测局灶性脑梗死后各时间点坏死区和半暗带皮层血流量,采用SABC免疫组化法检测局灶性脑梗死后各时间点c-fos阳性反应的表达情况。结果脑梗死后坏死区皮层血流量呈波浪样改变,3h降至最低,为正常血流量的(9.36±1.72)%,6h后回升,12h达高峰,为正常的(31.18±1.44)%,24～48h血流量再度下降,与3h相比无显著性差异(P>0.05)。半暗带皮层血流量6h降至最低,为正常皮层血流量的(30.88±7.11)%,9～48h呈上升趋势,至48h血流恢复至正常的(91.90±4.56)%,较其它组有显著性差异(P<0.05)。c-fos在脑梗死发生30min时半暗带区即有大量蛋白表达,并随时间的延长表达量相应增加,直至6h达表达高峰;在梗死后3h整个同侧皮层出现c-fos的弥漫性表达,6h发现梗死对侧大脑皮层亦有表达。观察9h后各个时间点的表达量逐渐减少,且只限于梗死的半暗带区。在坏死区均未见c-fos表达。结论局灶性脑梗死后皮层血流量和c-fos的表达具有明显的时间和空间的变化规律。     

脑缺血新模型:大鼠胡须体觉皮层局灶性缺血模型的建立

目的:建立一个简单、可靠的、可以直接研究单一功能变化和组织形态变化之间联系的大鼠胡须体觉皮层局灶性脑缺血模型。方法:大鼠经10%水合氯醛麻醉后,经右侧顶叶皮层处开颅,在显微镜下结扎大脑中动脉的2～3个分支。应用激光多普勒血流仪检测结扎前、后局部脑血流情况,细胞色素氧化酶染色确定胡须体觉皮层和梗死部位的关系,2,3,5-氧化三苯基四氮唑(TTC)染色检测梗死面积大小。胡须依赖实验检测胡须功能。结果:大脑中动脉主要侧支结扎后,梗死中心及周围局部脑血流明显下降。细胞色素氧化酶染色及TTC染色均示梗死区域位于胡须体觉皮层。局灶性缺血3d,测定梗死面积约占全脑面积的15%。梗死形成后大鼠胡须分辨物体纹理的能力下降。结论:选择性的将大鼠具有单一功能的胡须体觉皮层制作成局灶性脑缺血模型,提供了一个较好的研究功能变化和组织形态变化之间联系的脑缺血动物模型。     

大鼠短暂性局灶性脑缺血模型的改进

目的:改进大鼠短暂性(<2小时)局灶性脑缺血模型的制作方法。方法:采用雄性SD大鼠24只,分实验组和对照组,实验组又分三组,用线栓法使大脑中动脉(MCA)分别缺血15min、30min、60min,每组6只;假手术对照组6只。所有实验动物均采用乙醚麻醉,在手术过程中用5-0丝线结扎颈外动脉,在结扎的近侧剪断颈外动脉或其分支-枕动脉,经颈外动脉断端或枕动脉将4-0单丝尼龙线插入颈内动脉直至大脑中动脉起始处。假手术对照组动物线栓插入颅内但不达大脑中动脉起始处。术后即可观察动物行走时是否转圈。结果:所有实验组动物都及时观察到动物行走时出现转圈的表现,符合实验的入组标准。假手术对照组动物术后没有观察到转圈的表现。结论:短暂性局灶性脑缺血模型制作方法经改进更易于制作、可行性更强、可信度更高且有利于进一步推广运用。     

大鼠局灶性脑缺血实验指标及评价

缺血性脑血管疾病是一个复杂的病理生理过程，评价脑缺血的指标各种各样，在实验中选取何种指标评价是试验成功的关键，本就脑缺血大鼠在记忆、形态、微循环等指标的研究进展作一综述与评价。     

大鼠局灶性脑缺血实验指标及评价

缺血性脑血管疾病是一个复杂的病理生理过程 ,评价脑缺血的指标各种各样 ,在实险中选取何种指标评价是试验成功的关键 ,本文就脑缺血大鼠在记忆、形态、微循环等指标的研究进展作一综述与评价     

尾壳核与大脑皮质缺血区炎症细胞反应的比较

目的：观察尾壳核和大脑皮质缺血区炎症细胞的反应模式,探讨尾壳核对缺血反应敏感的病理机制。方法：采用局灶脑缺血模型和组化,免疫组化染色方法,观察尾壳核和大脑皮质缺血区ED1、OX6和CD3阳性细胞的反应。结果：HE染色显示缺血尾壳核的组织病理学变化呈明显的团块状坏死区,T淋巴细胞和单核/巨噬细胞却显示明显的团块状排列,同时,缺血尾壳核小胶质细胞亦发生强烈的激活反应,并高表达免疫分子MHCⅡ类抗原,炎症细胞在尾壳核与在大脑皮质缺血区的反应形式不同。结论：单核/巨噬细胞,小胶质细胞和T淋巴细胞在缺血尾壳核的反应和分布特征与该区的组织病理学变化明显一致。提示这些因素可能与尾壳核对缺血的敏感性有关。     

慢性局灶脑缺血区血管周细胞的形态学观察

为了深入研究血管周细胞的生物学特性和在脑缺血病理过程中的形态学变化规律 ,对不同缺血时间的大鼠大脑皮质缺血区和尾壳核区的血管周细胞的变化进行了免疫组织化学探查。结果显示 :(1)在脑缺血早期 (3 d,1周 ) ,ED2阳性反应的血管周细胞呈圆形或卵圆形 ,无明显的突起。数量增加的阳性细胞主要位于大脑皮质缺血灶外围的血管周围 ,并随血管走行而分布 ,缺血灶中央区的阳性细胞数量少。在缺血侧尾壳核 ,阳性细胞的数量明显增加 ,呈卵圆形或杆状 ,阳性细胞大多数位于尾壳核的实质内 ,少数位于血管壁内 ;(2 )在脑缺血后期 (4周 ,6周 ) ,大脑皮质缺血灶外周的 ED2阳性细胞的数量、形态和分布形式与脑缺血早期相比 ,也无明显变化 ;但在脑缺血灶的中央区有大量的 ED2阳性反应细胞 ,呈圆形 ,无明显突起 ;脑缺血后期 ED2阳性细胞主要位于尾壳核外侧区 ,其数量与缺血早期无明显的变化 ,但细胞形态变化显著 ,大多数细胞胞体肥大并有 2～ 3个明显的突起。脑缺血后期 ,在侧脑室脉络丛出现大量 ED2阳性反应的细胞 ,其胞体肥大 ,并有多个突起。结果表明 :慢性局灶脑缺血导致大脑皮质缺血区和尾壳核区的血管周细胞发生特征性的形态学改变。提示 ,血管周细胞与慢性脑缺血病理变化有联系     

Effect of focal cerebral ischemia on nitric oxide synthase expression in rats

Time- and cell-type-dependent immunohistochemical activity of nitric oxide synthase (NOS) was investigated in rat cerebral cortex following focal ischemia and the local concentration of nitric oxide (NO) was measured. NO concentration increased 2 min after the ischemia. Brain NOS-immunoreactive neurons increased in number 5 min after the ischemia. Endothelial cell NOS immunoreactivity was first detected in vascular endothelial cells and astrocytes 5 min after the ischemia, and it increased again during 60 min to 4 days after the ischemia in reactive astrocytes. Inducible NOS immunoreactivity was detected in astrocytes, vascular endothelium, and microglia/macrophages at the periphery of the ischemic core during 2–4 days after the ischemia.This study was presented at the 28th Annual Meeting of the Clinical Electron Microscopy Society of Japan, Osaka, October 17–19, 1996.     

局灶性脑缺血对大鼠前额叶皮质神经型一氧化氮合酶的影响

目的:探讨局灶性脑缺血对大鼠前额叶皮质损伤区域神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达以及氧化应激水平的影响.方法:8周龄雄性健康SD大鼠12只,随机分为两组,分别为假手术组(sham)和缺血组(ischemi-a),通过光化学诱导法建立大鼠局灶性脑缺血模型.采用Nissl染色观察大鼠前额叶皮质神经元损伤情况,免疫组织化学染...     

Effects of acute hypobaric hypoxia on the nitric oxide system of the rat cerebral cortex: Protective role of nitric oxide inhibitors

Exposure to hypobaric hypoxia produces neuropsychological disorders. The brain nitrergic system was investigated following hypobaric hypoxia in the presence or absence of nitric oxide synthase (NOS) inhibitors. Adult rats were exposed to a simulated altitude of 8325 m (27,000 ft) for 7 h and killed after 0, 1, 3, 5, and 10 days of recovery. In addition to normobaric controls, three experimental groups were studied: i) subjected to hypobaric hypoxia without inhibitors; ii) subjected to hypobaric hypoxia and treated with 7-nitroindazole; iii) subjected to hypobaric hypoxia and treated with N(omega)-nitro-l-arginine methyl ester (l-NAME). Cerebral cortex was assayed by immunohistochemistry, Western blotting, and enzymatic assays. In animals subjected to hypobaric hypoxia without inhibitors, there was an increase in neuronal nitric oxide synthase (nNOS) immunoreactivity and Ca(2+)-dependent NOS activity from 0 to 1 days of reoxygenation. In these animals, inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression and Ca(2+)-independent activity were undetectable, but nitrotyrosine immunoreactivity was found in some neurons. Administration of either inhibitor prevented the increase in nNOS immunoreactivity and enzymatic activity provoked by hypobaric hypoxia. Concomitantly, nitrotyrosine immunoreactivity decreased progressively. In conclusion, activation of the nitrergic system constitutes a cortical response to hypobaric hypoxia and the administration of NOS inhibitors could provide new therapeutic avenues to prevent and/or treat the symptoms produced by hypobaric hypoxia.     

急性给锂小鼠大脑皮层一氧化氮合酶阳性神经元的时程变化

目的：为阐明锂对脑发育影响的机理,探讨急性给锂不同时程对小鼠大脑皮层神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的影响。方法：小鼠腹腔注射氯化锂,采用ABC免疫组织化学方法,观察急性给锂后24h内不同时程小鼠大脑皮层nNOS阳性神经元数目的变化。结果：急性给锂即刻小鼠大脑皮层nNOS阳性神经元数目明显增加,1h后达到高峰,6h和12h恢复到正常水平,24h较12h又有所增高,但仍处于正常水平。结论：急性给锂对小鼠大脑皮层nNOS活性有一定影响,这种变化可能是锂神经毒性的机制之一。     

大鼠脑缺血后突触超微结构的变化

目的：探讨脑缺血损伤对突触的影响。方法：采用大鼠，制成脑缺血模型，应用透射电镜观察大脑顶叶皮质突触的变化。结果：随着缺血时间的延长，神经毡内突触数目逐渐减少；突触结构中突触小泡、线粒体也发生改变。缺血48h，突触小泡减少，甚至消失；线粒体变性、减少乃至消失，嵴减少或消失呈空泡状。突触前后膜被破坏，典型的突触结构已不存在。结论：脑缺血后，随缺血时间延长，突触结构异常，突触密度下降。     

当归补血汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注血-脑屏障和大脑皮质神经元的影响

目的:探讨当归补血汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经元的治疗作用。方法:将90只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、当归补血汤(高、中、低剂量)组。观察各组大鼠行为学缺陷、从股静脉注入伊文斯蓝溶液观察血-脑屏障通透性变化、用Nissl染色法观察大脑皮质神经元的形态和数量。结果:与模型组相比较,当归补血汤治疗组各剂量均能改善大鼠神经功能(P<0.05)、减少脑组织中伊文斯蓝含量(P<0.05)、增加大脑皮质神经元数量(P<0.05),并以中剂量组效果最好。结论:当归补血汤对缺血再灌注引发的大脑皮质神经元死亡有保护作用,这可能与其降低血-脑屏障通透性有关。     

一氧化氮合酶抑制剂对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响

目的:观察一氧化氮(NO)和不同类型的一氧化氮合酶(NOS)抑制剂对大鼠局灶性脑缺血损伤后的影响。方法:用线栓法复制大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)模型后注射氨基胍(AG)和N^G－硝基－L-精氨酸(L-NA),观察大鼠脑缺血后脑梗死体积和脑组织中NO、MDA含量和NOS、SOD活性的变化。结果:AG有明显的减轻局灶性脑缺血损伤作用;L-NA在缺血后1 h、6 h时给药,有保护作用,但在3 h时给药,无显著改变。结论:AG对局灶性脑缺血损伤有治疗作用;L-NA在不同时间给药,对脑缺血损伤也有明显治疗作用。     

大鼠翼腭神经节和脑动脉神经纤维一氧化氮合酶表达的年龄变化

目的：观察大鼠翼腭神经节及脑底动脉壁神经纤维一氧化氮合酶(NOS)表达的年龄变化规律。方法：用NADPH-d组织化学法及图像观察分析不同年龄组翼腭神经节及脑底动脉壁神经纤维NOS表达。结果：从幼年到成年,翼腭神经节中NOS神经细胞密度呈逐渐下降趋势,而胞体大小逐渐增加,至成年时最大,直至老年无明显改变。脑底动脉神经纤维密度从幼年到成年逐渐增高,从成年起维持较高密度直到老年。结论：出生后翼腭神经节和脑底动脉壁神经纤维NOS表达的年龄变化有其特定的规律。     

线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型方法的改进

目的：提出一个手术简单,重复性好的大鼠局灶性脑缺血模型的改进方法。方法：SD大鼠45只,随机分为3组（15只／组）,除空白对照组外,局灶性脑缺血再灌注组与丁基苯酞治疗组均采用大鼠颈总动脉套管进线和分离翼腭动脉但不结扎的方法复制局灶性脑缺血,观察脑梗死体积,脑组织含水量和神经功能缺陷的改变。结果：局灶性脑缺血再灌注比较假手术对照组．脑梗死体积,脑组织含水量和神经功能评分均有明显的差异。结论：改进线栓法复制的大鼠局灶性脑缺血模型可靠,重复性好。