异鼠李素对肺癌的作用及其抗肿瘤机制的初步探讨

目的探讨异鼠李素体内外对肺癌增殖的影响及初步研究其抗肿瘤机制。方法将不同浓度异鼠李素加入体外培养的人A549细胞,用MTT法,^3H-TdR掺入法等测定体外抗瘤活性,用流式细胞仪、彗星电泳、免疫组化等观察其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用;采用Lewis细胞C57BL／6鼠移植瘤,观察药物对移植瘤的影响。结果异鼠李素处理A549细胞后,细胞形态出现典型凋亡特征,下调bcl-2基因,PCNA蛋白表达;上调抑癌基因P53、bax及caspase-3基因。实验观察到,异鼠李素在体内也具有明显的抗肿瘤作用,可显著降低癌细胞增殖指数,诱导Lewis肺癌凋亡,其机理可能与下调PCNA和bcl-2的表达,上调caspase-3、bax表达有关。结论异鼠李素抑制肿瘤细胞的生长增殖,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用主要机制之一,是一种有较好前景的抗肿瘤的新型中药单体。     

异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡影响的实验研究

目的：观察异鼠李素对人肝癌HepG-2细胞的增殖周期及凋亡的影响。方法噻唑蓝（Mar）法检测异鼠李素对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测异鼠李素对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。结果MTr结果提示异鼠李素对人肝癌细胞的增殖有明显抑制作用,并随着作用浓度的增大,抑制作用逐渐增强,以100mg／L的异鼠李素培养基抑制作用最明显。流式细胞仪检测可见亚二倍体峰,提示异鼠李素有诱导入肝癌细胞凋亡作用。异鼠李素可通过诱导人肝癌细胞凋亡并将细胞阻滞在G0—G1期,使细胞不能进入s期进行DNA合成,最终使瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论异鼠李素抑制人肝癌细胞的增殖。阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,可能具有一定抗肝癌作用。     

还原型辅酶Ⅰ(NADH)对PC12细胞鱼藤酮损伤的分子调控

为探讨NADH对PC12细胞线粒体鱼藤酮损伤的修复机制，采用细胞毒实验、免疫荧光和流式细胞仪检测细胞在鱼藤酮损伤前后细胞增殖基因（c-myc、c-erbB-2）、抗凋亡基因（bcl－2）、抑癌基因（p53）、细胞快反应基因（c-fos）相关蛋白和细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果表明，鱼藤酮能明显抑制PC12细胞增殖，下调c-erbB-2、c-myc、bcl-2和p53基因的表达；NADH可以抑制鱼藤酮对PC12细胞线粒体的毒性作用，上调细胞bcl-2c、c-myc、c-erbB－2基因和PCR的表达，提示鱼藤酮可能通过控线粒体磷酸化过程和下调细胞增殖基因（c-rebB-2、c－myc）、抗凋亡基因（bcl-2），上调快反应基因(c-fos）表达致使细胞损伤，NADH抑制鱼藤酮对PC12细胞的损伤可能与bcl-2、c-myc、c-erbB-2和p53表达调控有关。     

中药复方对辐射损伤小鼠脾细胞凋亡及mRNA表达的影响

目的探讨中药复方地甘口服液(DGOL)对辐射损伤小鼠脾细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达的作用.方法建立辐射损伤模型(一次性7.0Gy的X射线照射),喂饲100%地甘口服液每次0.2 ml/10 g小鼠,每日2次.第10天用原位末端标记的TUNEL技术检测脾组织细胞凋亡和原位杂交法检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达.结果地甘口服液组与对照组比脾脏的细胞凋亡率和bax mRNA表达显著减少(P＜0.01),bcl-2 mRNA的表达显著增强(P＜0.01).结论中药复方地甘口服液可能通过促进bcl-2和降低bax mRNA的表达,促进造血细胞的增生,提高机体免疫力.     

99Tc-MDP与帕米膦酸二钠对MDA-MB-231细胞增殖及凋亡作用的对比研究

目的观察^99Tc-亚甲基二膦酸盐（MDP）与帕米膦酸二钠对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和凋亡的影响及其作用差异.方法不同剂量^99Tc-MDP与帕米膦酸二钠注射液处理细胞,采用细胞计数及四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MDA-MB-231细胞增殖;流式细胞仪观察细胞凋亡、检测细胞周期及凋亡相关基因bcl-2与bax的表达.结果50 μmol/L ^99Tc-MDP与帕米膦酸二钠处理MDA-MB-231细胞48 h即可抑制其增殖,细胞存活率分别为45.9%和64.0%,差异有显著性（P＜0.05）;50μmol/L^99Tc-MDP与帕米膦酸二钠均可诱导细胞凋亡,用药后大量MDA-MB-231细胞被阻滞于G0/G1期和S期,细胞凋亡率分别为9.59%和5.96%,差异有显著性（P＜0.05）;50 μmol/L^99Tc-MDP即可使MDA-MB-231细胞凋亡相关基因bcl-2表达明显减弱,200 μmol/L帕米膦酸二钠可使bcl-2表达明显减弱,二者对bax表达无影响.结论^99Tc-MDP及帕米膦酸二钠均可抑制MDA-MB-231细胞增殖及诱导MDA-MB-231细胞凋亡,并调控bcl-2的表达;^99Tc-MDP作用强于帕米膦酸二钠.     

白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞bcl-2基因表达的影响

目的：观察白英水提物诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,初步探讨其分子机制。方法：常规方法制备白英水提物,体外培养人卵巢癌A2780细胞,MTT法提示其有较强的体外抑制A2780细胞作用。采用半定量RT—PCR法检测凋亡相关基因bcl-2表达。实验组设白英水提物12．5、25．0、50．0mg／ml 3种浓度,以顺铂（25．0μg／ml）为阳性对照组。结果：白英水提物对A2780细胞增殖有抑制作用,且呈明显的量效关系,半定量RT—PCR法检测显示bcl-2 mRNA表达下调,诱导其发生凋亡。结论：白英水提物对A2780细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导A2780细胞凋亡的分子机制可能与下调bcl-2基因表达有关。     

大鼠脑创伤细胞凋亡和bcl-2基因家族表达的变化

目的：研究创伤性脑损伤（TBI）脑细胞凋亡发生及bcl-2基因家族表达变化,揭示TBI后继发性脑损伤的发生机制。方法：建立大鼠TBI模型,运用组织原位标记凋亡细胞检测、免疫组织化学等技术,观察TBI后1～14d大脑伤侧皮层和海马等脑区细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的变化。结果：TBI后伤侧大脑广泛存在凋亡现象,以皮层及海马为甚;伤后1d即出现凋亡细胞,3d达高峰,7～14d逐渐恢复正常;TBI后bcl-2、bax基因在伤脑表达增高,其增高的时相与凋亡规律相似,表达与细胞凋亡发生呈正相关。结论：细胞凋亡参与TBI后脑细胞的死亡机制,bcl-2基因在TBI后的脑组织中表达增加,对细胞凋亡发生有抑制作用;bax可促进细胞凋亡,TBI后表达明显增加,参与TBI后细胞凋亡的正向调节,可能是脑创伤后细胞死亡的重要机制。     

术前区域性动脉灌注化疗对晚期乳腺癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨术前区域性动脉灌注化疗对晚期乳腺癌细胞凋亡及其相关基因表达的影响.方法 将56例晚期乳腺癌患者随机分为治疗组(术前动脉灌注化疗)和对照组(未行术前化疗),各28例.利用TUNEL法检测两组的癌细胞凋亡情况,运用免疫组化方法检测两组bcl-2、bax基因的表达状况.结果 乳腺癌细胞凋亡指数(AI)治疗组为7.28%±2.68%,对照组为4.21%±1.87%;bcl-2基因的表达,治疗组为0.68±0.06,对照组为2.24±0.36;bax基因的表达,治疗组为0.72±0.06,对照组为0.38±0.04.上述指标两组间比较均有显著性差异(P＜0.05).结论 术前区域性动脉灌注化疗能诱导肿瘤细胞凋亡,而术前化疗后肿瘤细胞AI上升与化疗的疗效有关;术前化疗可影响乳腺癌细胞凋亡相关基因的表达,bcl-2/bax在诱导细胞凋亡中起重要作用,可作为预测化疗效果的指标.     

32P胶体致人胰腺癌Pc-3移植瘤细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的 观察低剂量^3-P胶体瘤体内注射诱导裸鼠人胰腺癌Pc-3移植瘤细胞凋亡的生物学效应、相关基因的表达及其可能的作用机理。方法建立：BALB／c裸鼠人胰腺癌Pc-3移植瘤动物模型，分别向30只荷瘤鼠瘤块中心注射不同剂量(0．37、0．74、1．48、2．96和5．92MBq)的^32P胶体溶液，对照组注射等体积冷胶体。于注射后24h取出瘤块；通过流式细胞仪、透射电镜及免疫组织化学检测等方法，研究肿瘤组织的细胞凋亡率、细胞坏死率、细胞超微结构改变及Apo2．7、Caspase-3、bcl-2、box相关基因的表达。结果 0．74、1．48和2．96MBq组瘤体内注射后电镜下可见典型的细胞凋亡表现，5．92MBq组细胞则以大量坏死为主。辐射诱导凋亡过程中，bcl-2／bax比值下调，Apoa2.7、Caspase-3蛋白表达均明显增加。结论 ^32P胶体瘤体注射可诱导荷瘤裸鼠人胰腺癌Pc-3肿瘤细胞凋亡；Aao2．7、Caspase-3、bcl-2及bax蛋白参与调控辐射诱导细胞凋亡过程。     

蒺藜总皂苷对缺氧复氧损伤心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2与bax表达的影响

目的观察蒺藜总皂苷（GSTT）对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法利用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注（M1／R）模型,分正常培养组、模型组和蒺藜总皂苷大、小剂量组。流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,免疫组化检测心肌细胞凋亡基因bcl-2、bax的表达。结果GSTT大、小剂量组均可显著降低细胞凋亡率（P〈0．05）。GSTT大剂量组可显著上调bcl2表达（P〈0．01）、下调bax表达（P〈0．05）,而GSTT小剂量组可上调bcl—2表达（P〈0．05）,但对bax表达无明显影响。结论GSTT可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡,其作用可能是通过上调bcl-2、下调bax表达实现的。     

浓缩铀诱发人白血病细胞凋亡及相关基因调控研究

目的　研究浓缩铀诱发人白血病HL 6 0细胞凋亡的损伤特征及对凋亡相关基因bcl 2和bax的调控作用。方法　研究受浓缩铀内照射不同时间诱发HL 6 0细胞凋亡的DNA凝胶电泳。运用免疫组织化学技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2 bax的蛋白表达 ,以及RNA分子杂交技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2mRNA的转录水平表达。结果　在浓缩铀作用下 ,HL 6 0细胞的DNA呈现出在核小体间断裂的阶梯状条带形成的凋亡特征 ;并且观察到对照HL 6 0细胞中bcl 2蛋白呈高度表达 ,为 (88± 7) % ,而受浓缩铀辐照后 ,可下调至 (6 1± 5 ) %。bax在对照细胞中的表达很低 ,在浓缩铀作用下 ,未见明显改变。而且受浓缩铀辐照后 ,可使HL 6 0细胞中bcl 2mRNA表达呈明显下调。结论　浓缩铀可诱发HL 6 0细胞凋亡发生 ,其诱发凋亡的程度随浓缩铀作用时间的延长而增加。并且发现浓缩铀诱发人白血病HL 6 0细胞的凋亡作用 ,与其下调凋亡相关基因bcl 2的表达相关联。     

89Sr诱发K562癌细胞凋亡及其相关基因表达研究

目的 探讨^89Sr诱发K562癌细胞凋亡放射毒理效应的分子机理。方法 采用分子病理和定量病理技术研究^89Sr内照射诱导的K562癌细胞凋亡，剂量效应关系和重要相关基因bcl-和bax在其中的表达。结果 K562细胞经^89Sr内照射6和24h，提取DNA，琼脂糖凝胶电泳图谱上出现典型的“阶梯状”区带，伴有“拖尾”，而对照组未见“阶梯状”区带，荧光双标记流式细胞仪法定量检测，^89Sr内照射6，9，12，24和48h后，K562细胞凋亡率和坏死率均较对照组有明显升高（P＜0．01），随着^89Sr内照射时间的延长，累积剂量的提高，均无显著变化（P＞0．05），免疫组织化学染色显示，对照组K562细胞中bcl-2和bax蛋白均有表达，bcl-2蛋白表达阳性细胞率82．8％，bax为44.4%,bcl-2/bax比值1.86;^89Sr内照射24h后的K562细胞中，bcl-2蛋白表达阳性细胞率31.4%,bax为38.2%,bcl-2/bax比值0.82，与对照组相比，差异显著（P＜0．05）；RT－PCR显示bcl-2 mRNA在对照组K56细胞中高表达；^89Sr内照射12h后已有明显的下调，24h后则非常显著。结论 ^89Sr内照射K562细胞后，细胞凋亡与细胞坏死并存，且^89Sr诱导K5622细胞的凋亡可能是通过bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低，bcl-2/bax比值下降而调控的。     

125I粒子对前列腺癌PC-3移植瘤bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨125I粒子持续低剂量率照射对前列腺癌PC-3移植瘤bel-2、bax基因表达和细胞凋亡的影响.方法 利用2枚37 MBq 125I粒子模型对前列腺癌PC-3移植瘤裸鼠进行48,96和192 h照射,用免疫组织化学方法分析bcl-2和bax基因表达情况.用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡率.凋亡率和bax/bcl-2比值之间的相关性采用线性相关分析.统计学处理采用SPSS 11.0软件.结果 125I粒子持续低剂量率照射48 h后bcl-2表达下降到4.00±2.00,与对照组比较差异无统计学意义(t=2.500,P=0.067);96和192 h后bcl-2表达分别下降到2.67±1.16和3.00±1.00,与对照组比较差异有统计学意义(t=4.950,3.464;P=0.008,0.026).bax表达分别上升到11.33±2.89,8.67±1.16和8.67±1.16,与对照组比较差异有统计学意义(t=3.334,4.025,5.292;P值分别为0.029,0.016和0.006).125I粒子持续低剂量率照射48 h组PC-3细胞凋亡率为22.3%,与对照组比较差异无统计学意义(P=0.404);照射96和192 h组凋亡率增加到21.7%和30.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.016,0.036).各照射组之间凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).125I粒子持续低剂量率照射Pc-3细胞凋亡率和bax/bcl-2比值呈正相关(r=0.784,P=0.012).结论 125I粒子持续低剂量率照射可使PC-3细胞bcl-2表达下降,bax表达上升,诱导凋亡增加,而凋亡率与bax/bcl-2比值呈正相关.125I粒子对肿瘤细胞的抑制可能通过bcl-2、bax途径诱导细胞凋亡而发挥作用.     

补充L-赖氨酸对急性力竭运动大鼠肾细胞凋亡及凋亡调控基因蛋白表达的影响

目的:探讨补充L-赖氨酸对急性力竭运动大鼠肾细胞凋亡及凋亡调控基因蛋白表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠24只,随机分成3组:安静对照组、运动组和运动给药组。安静对照组不运动,运动组和运动给药组进行一次力竭运动。安静对照组和运动组在力竭运动前均灌胃一次生理盐水,而运动给药组灌胃L-赖氨酸一次。运动后即刻处死大鼠,取肾组织,HE常规染色观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax、bcl-2和p53蛋白表达。结果:与安静对照组相比,运动组和运动给药组大鼠细胞凋亡发生率和凋亡指数显著增加(P<0.01);与运动组相比,运动给药组凋亡指数显著下降(P<0.05)。与安静对照组相比,运动组和运动给药组bax、bcl-2和p53蛋白表达的阳性细胞平均光密度值(MOD)、阳性物质表达面积和阳性指数PI差异显著增高(P<0.01,P<0.05);与运动组相比,运动给药组bax和p53显著降低,bcl-2显著增高(P<0.05)。与安静对照组相比,运动组bcl-2/bax显著降低(P<0.05),运动给药组显著增加(P<0.05);且运动给药组显著高于运动组(P<0.05)。结论:(1)一次力竭运动前补充L-赖氨酸使力竭运动诱导的肾细胞凋亡显著减少;(2)一次力竭运动前补充L-赖氨酸可使p53蛋白表达显著降低,使bcl-2蛋白表达显著增高,并使bcl-2/bax比值增高,从而起到抑制细胞凋亡的作用。     

地甘口服液对辐射损伤小鼠细胞周期及凋亡相关基因的影响

目的　探讨中药复方地甘口服液对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因 (cyclinD1)及凋亡相关基因 (bcl 2和bax)mRNA表达的作用。方法　建立辐射损伤模型 (一次性用直线加速器给予6 0Gy的X射线照射 ) ,喂饲小剂量 10 0 %和大剂量 2 0 0 %的地甘口服液每次 0 2ml 10g小鼠 ,每日 2次。第 9天用原位杂交法检测小鼠骨髓单个核细胞cyclinD1、bcl 2和baxmRNA的表达。结果　地甘口服液组与对照组比骨髓细胞促凋亡基因baxmRNA表达显著减少 (P <0 0 1) ,而cyclinD1和bcl 2m RNA的表达显著增强 (P <0 0 1)。结论　中药复方地甘口服液抗辐射损伤可能是通过上调细胞周期素基因cyclinD1和bcl 2的表达及降低baxmRNA的表达 ,从而促进造血细胞的增生和提高机体免疫力 ,达到保护机体的目的 ,为临床用药提供理论指导     

依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡的实验研究

目的观察依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡率的影响,探讨其对急性脊髓损伤后脊髓组织的保护作用。方法成年SD雄性大鼠60只,随机分成对照组和依达拉奉组,均采用改良Allen’s撞击法,致伤力为50gcf（10g×5cm）损伤T9～10制作动物模型,术后实验组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水。每组分别于6h、12h、24h、72h、7d5个时间点处死动物取材,每个时间点6只大鼠,对受损脊髓部位进行免疫组织化学检测神经细胞凋亡因子bcl-2和bax基因的表达及用原位末端标记法（TUNEL法）标记神经元凋亡细胞。结果与对照组相比,依达拉奉组bcl-2蛋白表达水平显著提高,bax蛋白表达水平明显下降。对照组检测到较高的细胞凋亡率。依达拉奉组细胞凋亡率较对照组明显下降。结论依达拉奉可能通过清除氧自由基、上调bcl-2和下调bax蛋白表达来抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,从而保护大鼠神经组织。     

^99Tc-亚甲基二膦酸盐对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜及软骨凋亡相关因子的影响

目的探讨^99Tc-亚甲基二膦酸盐（MDP）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的疗效,以及对滑膜和软骨细胞凋亡相关因子bcl-2、bax的影响。方法设立正常对照组;采用皮下注射法用牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂诱导CIA大鼠模型,分为模型对照组（尾静脉注射生理盐水）、^99Tc-MDP组（每天1次尾静脉注射^99Tc-MDP,按体质量0．04μg ^99Tc／kg）和甲氨蝶呤（MTX）组（按体质量每周1次尾静脉注射MTX 1mg／kg）,采用关节炎指数（AI）评价各CIA组大鼠关节炎程度,免疫组织化学染色法检测滑膜及软骨细胞bcl-2和bax表达;应用SPSS13．0软件对实验数据进行统计学处理。结果（1）^99Tc-MDP和MTX均能减轻CIA大鼠关节炎程度,降低AI评分,改善CIA大鼠关节滑膜炎的病理学变化。（2）与正常对照组[bcl-2：（7．56±1．18）％,bax：（6．14±1．71）％]比较,CIA模型对照组滑膜bcl-2和bax表达明显升高[（39．30±0．53）％、（27．37±2．45）％;q=46．27,24．57,P均〈0．001];与模型对照组比较,^99Tc-MDP组和MTX组滑膜细胞bcl-2水平降低[（30．24±2．09）％、（27．25±3．33）％;q=13．20,17．56,P均〈0．001],bax表达有所增加但差异无统计学意义,bcl-2／bax比值明显降低。（3）在软骨细胞中,CIA模型对照组bcl-2和bax表达[（20．20±2．78）％、（36．40±1．67）％]显著高于正常对照组[（9．91±4．09）％、（6．71±3．50）％;q=10．51,37．01,P均〈0．001];与模型对照组比较,^99Tc-MDP组和MTX组bcl-2增高[（26．58±2．52）％、（27．06±1．92）％;q=6．53,7．01,P均〈0．001],而bax水平降低[（24．26±2．75）％、（23．53±0．74）％;q=15．12,16．04,P均〈0．001],bcl-2／bax比值增高。结论凋亡相关因子bcl-2和bax的异常表达与CIA的发生发展密切相关。^99Tc-MDP能够减轻CIA大鼠关节炎程度,调节滑膜和软骨细胞b     

P物质对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨P物质(SP)对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 体外培养瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞．采用细胞爬片免疫组织化学方法检测在SP及SP受体拮抗剂Spantide作用下不同成纤维细胞PCNA、bcl-2、bax的表达。结果 SP可促进不同成纤维细胞PCNA、bcl-2的表达．同时抑制其bax的表达。在SP作用下．瘢痕疙瘩成纤维细胞PCNA、bcl-2表达的增强程度及bax表达的受抑程度显著强于增生性癜痕成纤维细胞和正常成纤维细胞．而增生性癜痕成纤维细胞又强于正常成纤维细胞。Spantide可以完全或部分拮抗SP对不同成纤维细胞的作用,结论 SP通过调控成纤维细胞凋亡相关基因的表达参与病理性瘢痕形成,该作用由SP受体介导。