浙江地区幽门螺杆菌cagA、vacA、iceA基因型别分析

据初步统计 ,全世界超过 5 0 %的人群有幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)感染。其中西方国家的感染率为 2 5 %～ 5 0 % ,发展中国家有的高达 90 % 〔1〕。然而 ,只有少数感染者发展成消化性溃疡或胃癌 ,其中的原因尚不清楚。有研究表明 ,Ｈｐ的ｃａｇＡ、ｖａｃＡ、ｉｃｅＡ基因可能与疾病的发生有关。有关ｃａｇＡ、ｖａｃＡ与疾病的关系我国也有报道〔2〕。本文研究了浙江地区Ｈｐ菌株的ｃａｇＡ、ｖａｃＡ、ｉｃｅＡ基因型别并分析了与疾病的关系。材料和方法Ｈｐ菌株的来源 :Ｈｐ菌株分离自 60例胃、十二指肠疾…     

幽门螺杆菌中国株cagA全长基因克隆

世界范围内不同Hp菌株CagA分子变异较大，该变异可能导致不同菌株的cagA生物学作用乃至致病性不同。我国作为Hp感染较严重的国家之一，临床分离株中超过90％含有cagA基因，从克隆和分析全长cagA基因入手，开展cagA基因／CagA蛋白功能研究，对于揭示CagA在Hp致病中的分子机制具有现实意义。     

TNF基因多态性与胃十二指肠疾病幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的：研究我国湖北汉族人群肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor,TNF）基因多态性与胃十二指肠疾病及幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori,Hp）感染的关系,探讨宿主遗传因素对Hp感染在胃十二指肠疾病尤其是非贲门胃癌的作用.方法：采用病例对照研究和PCR-RFLP方法,检测210例胃十二指肠疾病患者（包括73例慢性胃炎、78例十二指肠溃疡及59例非贲门胃癌患者）和264例正常对照者的TNF-α 308、LT-α Nco Ⅰ、AspH Ⅰ双等位基因型分布.Hp感染检测血清Hp Ab-IgG.结果：胃十二指肠疾病患者的Hp阳性率90.5%,显著高于正常对照组62.1%（P＜0.000 1,Odds ratio=5.793,95%CI：3.431～9.780）.LT-α Nco Ⅰ A/G基因型在Hp阳性非贲门胃癌患者（64.0%）高于Hp阳性的正常对照组（46.0%）,差异有显著性意义（P=0.029 7,OR=2.026,95%CI：1.080～3.803）,该基因型与其他胃十二指肠疾病无相关性.TNF-α 308、LT-α AspH Ⅰ与Hp感染及胃十二指肠疾病亦无相关性.结论：LT-α Nco Ⅰ A/G基因型与中国湖北汉族人群非贲门胃癌Hp阳性相关.     

幽门螺杆菌cagA基因探针的制备与制备应用

目的 研究ｃａｇＡ＋Ｈｐ（幽门螺杆菌）与胃肠道疾病的关系，并探讨长臂光敏生物素标记的ｃａｇＡ基因探针的临床意义。方法 构建含ｃａｇＡ基因片段的重组质粒克隆株，以重组质粒ＤＮＡ为模板ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段用长壁光敏生物素标记产物ＤＮＡ，对病人进行基因探针检测及ＰＣＲ、尿酶试纸检测。结果 浅表性胃炎、深度胃炎、胃溃疡、十旨肠 治疗慢性萎缩性胃炎及胃癌病人的检测结果是：尿酶检测阳性百分率为：７０．３     

寡核苷酸微阵列技术用于检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药相关23S rRNA基因多态性

目的 幽门螺杆菌（Hp）克拉霉素耐药与23S rRNA基因A2142G、A2143G和C2182T点突变相关。本研究旨在探索建立一种快速、简便的检测方法，获取Hp克拉霉素耐药相关23S rRNA基因多态性的流行病学资料，为临床合理用药提供依据。方法收集胃黏膜标本，用于病理检查、提取DNA。根据核苷酸位点设计相应探针，探针3′端以氨基修饰，氨基与探针序列之间以间隔臂相连，将探针用芯片点样仪点至玻片上。下游引物5′末端用Cy3荧光标记，进行不对称PCR扩增。其产物与芯片杂交，杂交后洗涤、扫描芯片，观察信号强度。非荧光标记引物扩增PCR产物克隆至T载体，测序验证芯片结果。结果（1）寡核苷酸微阵列技术与测序检测Hb 23S rRNA基因多态性结果完全一致。（2）经病理和PCR证实为场阳性的54例标本，杂交结果显示A2142位点均为野生型（54/54）；A2143G突变率为11．11％（6/54），尚未发现A2143C和A2143T的突变；C2182T突变率为12．96％（7／54），尚未发现C2182A和C2182G的突变，其余均为野生型。结论（1）利用寡核苷酸微阵列技术检测坳克拉霉素耐药的23S rRNA基因多态性，快速、简便而准确，可以高通量并直接检测胃黏膜而不需进行细菌培养，为根除Hp选择用药提供科学依据，推动个体化治疗方案的实施。（2）本研究没有发现场23SrRNA基因2142点突变，A2143G和C2182T突变率分别为11．11％和12．96％。     

幽门螺杆菌cagA基因探针的制备与临床应用

目的研究ｃａｇＡ＋Ｈｐ（幽门螺杆菌）与胃肠道疾病的关系,并探讨长臂光敏生物素标记的ｃａｇＡ基因探针的临床意义。方法构建含ｃａｇＡ基因片段的重组质粒克隆株,以重组质粒ＤＮＡ为模板ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段用长臂光敏生物素标记产物ＤＮＡ,对病人进行基因探针检测及ＰＣＲ、尿酶试纸检测。结果浅表性胃炎、深度胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性萎缩性胃炎及胃癌病人的检测结果是：尿酶检测阳性百分率为：７０．３、７２．２、７７．７、６９．２、２５;ＰＣＲ阳性百分率分别为：５９．２、７７．８、７１．４、７０．７、７５、７８;基因探针杂交检测阳性率分别为：４８．１、６１．１、７０．３、７０．７、６６．７、６６．６、７２．２。结论ｃａｇＡ是胃、十二指肠疾病严重程度的标志,长臂光敏生物素标记的ｃａｇＡ基因探针具有特异性强、灵敏度高的特点,为临床检验中Ｈｐ强毒株分型检测的有效方法     

IL-1基因多态性、幽门螺杆菌感染与胃癌易感性的研究进展

幽门螺杆菌 (helicobacter pylori HP)感染胃部后会引起两种不同类型的胃炎 :以胃窦部为主的胃炎和以胃体部为主的胃炎。前者胃酸分泌不变或增多 ,易诱发十二指肠溃疡 ;后者易引起胃酸分泌减少 ,从而导致胃萎缩 ,诱发胃癌。白细胞介素 - 1(Interleukin- 1,IL - 1)是一种重要的炎症介质 ,其家族成员 IL - 1β是一种很强的酸抑制剂 ,而 IL - 1ra则是 IL - 1受体拮抗剂。 IL - 1基因多态性的存在使个体在幽门螺杆菌感染后产生的 IL - 1β和 IL - 1ra量不同 ,从而影响胃酸的分泌 ,最终导致不同的临床结局。     

幽门螺杆菌ureB基因的克隆及序列分析

目的 对幽门螺杆菌（Hp)ureB核苷酸序列及推定氨基酸序列进行同源性比较分析,确定Hp菌株的ureB基因差异性,为疫苗的研究和诊断用品的评价提供依据。方法 自选设计引物,PCR扩增来自国内不同病人的4株Hp菌株的ureB基因,与pGEM-T载体克隆连接、测序;进一步同GenBank上发表的其他4株国外Hp菌株ureB的全基因序列进行比较分析。结果 8株Hp菌株的ureB基因序列出现了33种长度,CAPMF3和CPM630分别为1269bp和1680bp,其他为1710bp。6株1710bp的ureB基因序列的分析表明,国外3株Hp的ureB同源性较高,三者氨基酸的同源性达到100％。国内3株Hp的ureB变异较大,推定氨基酸同源性为98．7％－98．9％。结论 UreB作为保护性同时存在免疫保护覆盖率问题,研究疫苗和诊断用品时要注意选择使用在人群中流行占优势的Hp菌株的高度保守的UreB抗原肽,使其具有更高的覆盖率。     

幽门螺杆菌vacA基因变异性研究

目的：探索幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,简称Hp)vacA基因（vacuolating cytotoxin gene A)的变异性及其与产生空泡毒素活性的关系。方法：用自行设计的两两配对的4条引物对17株Hp的vacA基因进行PCR扩增。结果：每株细菌均可扩增出包括vacA基因不同区域的4条产物,但每种产物在不同菌株间长度有差异;对产毒株与非产毒株的扩增产物长度比较,未发现与产毒有关的区域。结论：Hp vacA基因的变异性相当大,变异部位不仅仅局限于某一区域,沿不能确定与产毒有关的基因区域。推测Hp表达VacA活性与否可能与分泌的量有关。     

幽门螺杆菌lpp20基因的克隆及序列分析

幽门螺杆菌 (Hp)lpp2 0基因编码Hp外膜上的一种相对分子质量约为 18× 10 3的脂蛋白 (Lpp2 0 )。有研究表明 ,Lpp2 0具有良好的免疫原性和免疫保护性 ,是一种理想的疫苗候选抗原。本研究对Hp郑州分离株MEL HP2 7lpp2 0基因进行克隆和测序 ;通过对 7株Hplpp2 0基因的核苷酸序列及相应的氨基酸序列进行同源性分析 ,确定Hplpp2 0基因的变异性。采用由本研究室从郑州当地慢性萎缩性胃炎患者体内分离的HpMEL HP2 7菌株 ,应用自行设计的PCR引物 :上游 5′ GCCGAATTCATGAAAAATCAAGTTA 3′(EcoRⅠ ) ,下游 5′ GCCGTCGACCTA…     

幽门螺杆菌omp11基因的克隆及序列分析

目的　对幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)郑州分离株MEL Hp2 7和NCTC116 37株外膜蛋白基因 (omp11)进行克隆和测序 ;确定不同Hp菌株omp11基因序列的变异性 ,并对该基因编码多肽的化学及免疫学特性进行预测 ,为幽门螺杆菌疫苗抗原的筛选提供数据。方法　提取Hp染色体DNA ,用自行设计的PCR引物 ,从染色体DNA上扩增出omp11基因 ,将其克隆到载体pNEB193中 ,用重组质粒转化大肠杆菌 (E .coliJM10 9)。对重组质粒进行酶切鉴定 ,对插入的omp11基因片段进行测序 ,应用生物信息学软件Omiga2 .0、GeneDoc2 .3和GenBank、Swiss port数据库对 4个Hp菌株 (MEL Hp2 7、NCTC116 37、2 6 6 95、J99)的omp11基因序列进行同源性分析 ,并对该基因编码多肽的主要化学特征和抗原结构域进行预测。结果　MEL Hp2 7和NCTC116 37株omp11基因的核苷酸序列长度均为5 6 1bp ,不同菌株间核苷酸序列的同源性为 96 .6 %～ 98.0 % ,与国内的MEL Hp2 7株同源性最高的菌株是NCTC116 37,二者的同源性为 97.9%。 4株Hpomp11基因编码的氨基酸序列长度均为 186aa ,不同菌株间氨基酸序列的同源性为 98.9%～ 10 0 % ,与MEL Hp2 7株同源性最高的菌株是 2 6 6 95 ,二者的同源性为 99.5 %。预测HpMEL Hp2 7omp11基因编码多肽的相对分子质量 (Mr)     

幽门螺杆菌毒力基因cagA、cacA与胃十二指肠疾病的关系

国际上已有很多国家对本国幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉ ｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)分离株的ｖａｃＡ基因进行了研究和分析。Ａｔｈｅｒｔｏｎ等曾提出ＨｐｖａｃＡ基因镶嵌型模型 ,将信号序列分为三型 ,中间序列分为两型〔1〕 ,但来自欧洲和日本的报告显示不同地区Ｈｐ分离株具有较高多态性 ,具有地区、人群相关性特点。然而 ,目前国内尚未见这方面的研究报告。为了解我国Ｈｐ临床分离株ｖａｃＡ基因型特点以及不同ｖａｃＡ基因同胃、十二指肠疾病的关系以及ｃａｇＡ基因同Ｈｐ毒力的关系 ,本实验进行了以下研究。材料与方法菌株 :113株…     

IL-1基因多态性、幽门螺杆菌感染与胃癌易感性的研究进展

幽门螺杆菌(helicobacter pylori HP)感染胃部后会引起两种不同类型的胃炎：以胃窦部为主的胃炎和以胃体部为主的胃炎。前者胃酸分泌不变或增多，易诱发十二指肠溃疡；后者易引起胃酸分泌减少，从而导致胃萎缩，诱发胃癌。白细胞介素-1(Interleukin-1，IL-1)是一种重要的炎症介质，其家族成员IL-1β是一种很强的酸抑制剂，而IL-1ra则是IL-1受体拮抗剂。IL-1基因多态性的存在使个体在幽门螺杆菌感染后产生的IL-1β和IL-1ra量不同，从而影响胃酸的分泌，最终导致不同的临床结局。     

中国幽门螺杆菌cagA基因敲除突变株生物学特性分析

细胞毒素相关基因A蛋白（cytotoxin-associatedgeneA，CagA）是幽门螺杆菌（Hp）最重要的毒力因子之一。流行病学研究认为，CagA阳性肋感染与消化性溃疡和胃癌发生的关系比CagA阴性菌株更为密切，提示CagA可能是一种重要的疾病相关蛋白，在坳致病过程中发挥作用。由于却菌株自身的变异，CagA阳性株与CagA阴性株间除CagA基因外存在许多差异之处，因此，在自然状态下很难对CagA基因功能做出真实判断。     

抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与特性研究

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)感染是人类最常见的慢性细菌感染 ,可导致胃炎、消化性溃疡和胃癌等 ,还可引起口腔溃疡 ,与一些非胃肠疾病如发育不良、冠心病、糖尿病和胆石症等的发生有关[1,2 ] 。幽门螺杆菌粪抗原 (Ｈｐｓｔｏｏｌａｎｔｉｇｅｎ ,ＨｐＳＡ)检测是一种诊断Ｈｐ感染的新技术 ,其诊断准确性可达 90 %以上 ,同时具有简便快速、价格低廉、对病人无任何创伤 ,可不需任何仪器等优点[3 ,4 ] 。本研究采用传统的杂交瘤细胞技术 ,通过制备效价高、特异性好的抗Ｈｐ单克隆抗体 ,为Ｈｐ抗原检测技术的建立…     

cagA基因阳性幽门螺杆菌培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系GES-1生长的影响

目的：研究cagA^ 幽门螺杆菌（Hp）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）的作用及机制。方法：制备Hp培养滤液，PCR鉴定cagA基因。采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验、单细胞微凝胶电泳及流式细胞仪等，观察Hp (cagA^ ）培养滤液对GES－1细胞的作用。结果：经Hp(cagA^ )培养滤液处理GES－1细胞，细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂。生长曲线可见细胞增生活跃，增殖率195％。克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强，增殖率达到337．5％。流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组。Hp(cagA^ ）培养滤液可使GES－1细胞形成彗星现象。结论：Hp(cagA^ )培养滤液可以导致GES－1细胞的生长特性改变，呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征。DNA损伤可能是cagA诱导GES－1细胞生长特性改变的机制之一。     

幽门螺杆菌cagA蛋白的制备级复性和纯化

目的通过优化复性液的组成、pH值、稀释度等,建立幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A,cagA)表达产物的制备级复性及纯化方法。方法以包涵体形式存在的cagA表达产物先用5mL/LTritonX-100进行初步纯化,使其纯度达到约90%;再用含8mol/L脲的变性剂溶解包涵体,用复性液[0.1mol/LTris-HCl、2mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)及50mmol/L精氨酸(Arg),pH8.0]稀释复性后,用DEAE-HP阴离子交换色谱进行纯化。结果用稀释法复性及液相色谱法纯化,一次可得到100~140mg的cagA。ELISA检测其抗原活性为1∶16000;SDS-PAGE检测纯度为98%。结论用制备级复性、纯化制备的cagA,可作为抗原用于制备检测抗幽门螺杆菌抗体的检测芯片,效果良好,并已获得国家新药批文。     

镇江地区幽门螺杆菌cagA、vacA基因及亚型与胃肠病患者的相关性

我们利用分子生物学技术，研究镇江胃肠疾病患者感染幽门螺杆菌（Hp）菌株的cagA基因型、vacA基因型，探讨基因型与胃肠疾病的关系。     

幽门螺杆菌黏附素AlpA保守区基因的克隆、序列测定及其生物信息学分析

目的 克隆幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp)4种黏附素（babA,alpA,alpB和hopZ)基因的保守区，并对其进行序列及生物信息学方法。方法 利用 ANTHEPROV4.3c软件，分析已证实的Hp4种黏附素蛋白序列，发现4种黏附素的C－端氨基酸存在保守区。选取AlpA的C－端结构基因序列作为引物进行PCR，将PCR产物定向插入载体pET-22b( )，以DNA自动分析仪进行序列测定，并以生物信息学软件分析其生物学特性。结果 克隆片段的长度为588bp，与发表的黏附素AlpA保守区基因的序列完全一致。ANTHEPROT V4．3c软件预测其蛋白质的Mr约为22500，并显示出良好的抗原性和疏水性。结论 用PCR方法，从幽门螺杆菌ssl中获取到黏附素AlpA保守区的基因序列，为研究Hp黏附素的分子机制和免疫原性奠定了基础。     

幽门螺杆菌BabA2/UreI融合基因表达质粒的构建

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）疫苗被认为是控制Hp感染有效的方法之一。本研究联合应用Hp BabA2和UreI基因作为构建Hp DNA疫苗的目的基因，成功构建了pcDNA3．1／BabA2/UreI真核表达质粒。