C9和CD59在大鼠脊髓损伤组织中的表达

背景已有研究表明补体系统在继发性脑挫裂伤中发挥重要作用,但补体系统在脊髓损伤中是否存在表达并参与继发性损伤目前却鲜有报道.目的探讨补体系统固有成分C9及补体调节因子CD59在脊髓损伤组织中的表达.设计随机分组、实验对照研究.地点和对象实验在中国医科大学实验动物部完成,对象为55只体质量250～300 g健康SD大鼠,由中国医科大学实验动物部提供.干预55只SD大鼠随机分损伤组、假手术组及正常对照组,采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,于伤后12 h,1,3,5,7 d对脊髓损伤组织取材制成冷冻切片,进行苏木精-伊红(HE)染色、C9和CD59免疫组化染色,半定量法图像分析.主要观察指标观察各实验组伤后各时间点脊髓损伤组织的变性坏死、中性粒细胞浸润及C9,CD59阳性反应物的表达部位及时程.结果伤后12 h损伤组织中开始有C9[灰度阈值面积(threshold ara,TA)(1.02±0.19),平均灰度值(average gray value,AG)(82.18±4.19)],CD59[TA(0.35±0.08),AG(95.12±4.89)]阳性表达,在伤后3 d达到高峰(C9TA 4.06±0.21,AG 61.75±2.39;CD59TA 1.21±0.14;AG 69.08±2.18)之后表达逐渐减少,伤后1周趋于稳定(C9TA1.34±0.21,AG 85.82±5.36;CD59TA 0.42±0.07,AG 96.21±2.97),随时间延长存在动态变化过程,且与脊髓损伤组织的变性坏死、中性粒细胞浸润程度相一致.正常对照组及假手术组各时间点均未见C9及CD59阳性表达.结论在脊髓损伤组织中有补体固有成分C9及补体调节因子CD59的表达,补体系统参与了继发性脊髓损伤.     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤组织C9和CD59表达的影响

背景：甲基强的松龙(methylprednisolone，MP)在脊髓损伤治疗中的作用现已得到国际公认，但其作用机制复杂，且目前并没有完全被揭示。目的：探讨MP对大鼠脊髓损伤组织C9和CD59表达的影响。设计：随机分组、实验对照、前瞻性研究。地点和对象：实验地点为中国医科大学，实验对象为50只体质量250-300g健康SD大鼠。干预：50只SD大鼠随机抽签法分MP组和生理盐水组，采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型，于伤后12h，1，3，5，7d对脊髓损伤组织取材制成性冷冻切片，进行苏木精-伊红(HE)染色、C9和CD59免疫组化染色，半定量法图像分析。主要观察指标：观察各组伤后各时间点脊髓损伤组织的变性坏死、中性粒细胞浸润及C9，CD59阳性反应物的表达部位及时程。结果：MP组在伤后12h，1，3，5，7d时间点C9阳性表达均明显轻于生理盐水组，分别为87．82&;#177;4．16，82．13&;#177;3．84，65．91&;#177;4．04，82．69&;#177;6．15，95．53&;#177;7．49，且差异有显著性意义(t=3．70，6．61，3．43，5．62，4．08，P&;lt;0．01)；MP组在伤后12h，1，3d时间点CD59的表达明显轻于生理盐水组，分别为102．52&;#177;8．03，93．45&;#177;7．24，73．86&;#177;5．32，且差异有显著性意义(t=3．05，P&;lt;0．01，t=2．41，2．27，P&;lt;0．05)，伤后5，7d时间点两组间无显著性意义。结论：MP可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤。     

大鼠脊髓损伤后中性粒细胞趋化因子基因表达的变化

目的：探讨大鼠脊髓损伤后中性粒细胞趋化因子(CINC—1)表达的变化规律。方法：SD大鼠42只，随机分为7组，采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型，以反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法测定伤段脊髓组织CINC—1表达情况。结果：正常脊髓组织内存在CINC—1 mRNA的表达，脊髓损伤后1h表达迅速增强，伤后6h达峰值(1．027&;#177;0．124)与假手术组(0．175&;#177;0．095)比较差异有非常显著性意义，(t=13．359，P&;lt;0．01)，随后逐渐下降但维持较高水平至损伤后72h。结论：脊髓损伤后CINC—1 mRNA表达迅速增强，提示CINC-1参与了继发性脊髓损伤过程，并可能是一种损伤因素。     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤组织C9和CD59表达的影响

背景甲基强的松龙(methylprednisolone,P)在脊髓损伤治疗中的作用现已得到国际公认,但其作用机制复杂,且目前并没有完全被揭示.目的探讨MP对大鼠脊髓损伤组织C9和CD59表达的影响.设计随机分组、实验对照、前瞻性研究.地点和对象实验地点为中国医科大学,实验对象为50只体质量250～300 g健康SD大鼠.干预50只SD大鼠随机抽签法分MP组和生理盐水组,采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,于伤后12 h,,3,,7 d对脊髓损伤组织取材制成性冷冻切片,进行苏木精-伊红(HE)染色、C9和CD59免疫组化染色,半定量法图像分析.主要观察指标观察各组伤后各时间点脊髓损伤组织的变性坏死、中性粒细胞浸润及C9,D59阳性反应物的表达部位及时程.结果MP组在伤后12 h,,3,,7 d时间点C9阳性表达均明显轻于生理盐水组,分别为87.82±4.16,2.13±3.84,5.91±4.04,2.69±6.15,95.53±7.49,且差异有显著性意义(t=3.70,.61,.43,.62,.08,＜O.01);MP组在伤后12 h,,3 d时间点CD59的表达明显轻于生理盐水组,分别为102.52±8.03,3.45±7.24,3.86±5.32,且差异有显著性意义(t=3.05,＜0.01,=2.41,.27,＜0.05),伤后5, d时间点两组间无显著性意义.结论MP可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤.     

重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后脂质过氧化的影响

目的：观察重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后脂质过氧化和超微结构改变的影响。 方法：实验于2004-05／08在吉林大学第二医院中心实验室完成。选择健康成年SD大鼠27只，采用改良Allen’s法制作脊髓损伤模型。27只SD大鼠随机数字表法分为3组：治疗组（H=9）：造模后立刻给予重组人促红细胞生成素腹腔内注射（5000U／kg）1次；生理盐水对照组（n=9）：造模后立刻给予等量生理盐水腹腔内注射1次。正常组（n=9）：不作任何处置。采用硫代巴比妥酸法检测脊髓损伤后2，24，48h丙二醛含量变化，使用透射电镜技术评估脊髓损伤后各时相点的超微结构评分。 结果：纳入大鼠27只，均进入结果分析。①生理盐水对照组和治疗组伤区丙二醛含量随伤后时间的增加呈不断升高的趋势，生理盐水对照组伤后2，24，48h伤区丙二醛含量较正常组明显增加，差异有显著性意义[分别为（92．45&;#177;6．22），（65．62&;#177;2．22）nmol／g；（112．56&;#177;6．68），（68．20&;#177;1．84）nmol／g；（142，38&;#177;7．24），（66．40&;#177;2．04）nmol／g，P〈0．05]。治疗组伤后2，24，48h丙二醛含量较生理盐水对照组明显降低[分别为（68．54&;#177;5．88），（92．45&;#177;6．22）nmol／g；（75．24&;#177;6．28），（112．56&;#177;6．68）nmol／g．P〈0．05；（88．34&;#177;8．52）．（142．38&;#177;7．24）nmol／g，P〈0．01]。②生理盐水对照组的超微结构评分随伤后时间的增加呈不断升高的趋势，而治疗组的超微结构评分随伤后时间的增加则变化不大，相对稳定。治疗组伤后2，24，48h的超微结构评分均较生理盐水对照组明显降低，差异有显著性意义[分别为（1.28&;#177;0．45），（3．84&;#177;0．25）分；（1．38&;#177;0．28），（4．24&;#177;0，38）分；（1．42&;#177;0．36），（4．98&;#177;0．52）分，P〈0．05]。 结论：重组人促红细胞生成素能够明显降低脊髓损伤后丙二醛含量，减轻脊髓损伤后的脂质过氧化，显著降低脊髓损伤后的超微结构评分，明显减轻脊髓损伤后的超微结构改变，有效地保护脊髓组织，具有明显的神经保护作用.     

大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶的表达及动态改变

目的：探讨大鼠急性脊髓损伤后不同时段髓内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA动态表达。方法：36只SD大鼠抽签法随机分组，任选一组作为对照。采用Allen法制作急性脊髓损伤模型，在损伤后2，6，12，24，48h等时段，以反转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)分析：iNOS mRNA表达。在脊髓损伤后24h，用免疫组化方法分析iNOS在脊髓不同类型神经细胞中的表达与分布，并以比色法测定脊髓损伤后血清NOS及一氧化氮的含量。结果：脊髓损伤后，神经元、星形细胞和小胶质中均可见iNOS表达，以神经元表达为主。脊髓损伤后2h可见iNOS表达0．56&;#177;0．02，24h达高峰1．20&;#177;0．05，48h开始降低0．70&;#177;0．06。血清中NOS及一氧化氮的动态改变与损伤组织iNOS mRNA变化趋势相一致。结论：研究资料提示脊髓损伤后脊髓内iNOS表达增高，过量产生的一氧化氮加重了继发性脊髓损伤。     

大鼠脊髓半横断损伤后神经生长因子、脑源性神经营养因子及神经营养因子3的表达变化

目的：观察脊髓半横断损伤后早期不同时间神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3的表达变化。方法：实验于2005-07／12在解放军总医院神经外科实验室完成。取成年清洁级雄性SD大鼠，体质量（250&;#177;20）g。将24只SD大鼠按双盲法随机分为2组，对照组6只，仅进行至椎板切除，即行切口关闭，不损伤脊髓。损伤组18只，3％戊巴比妥钠腹腔麻醉后，T10处椎板切开后，在T9～T10间用虹膜刀片横断半侧脊髓。同侧后肢呈现软瘫，刺激无反应后，关闭切口。分别于伤后3，7，21d不同时间点取材，每个时间点6只。取损伤位点尾侧段T10节段制作冰冻切片，运用神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3兔抗血清以免疫组化ABC法染色。观察并计数脊髓半横断损伤后尾侧端腹角神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3的阳性神经元数。组间比较均采用q检验。结果：①神经生长因子、脑源性神经营养因子主要分布于正常大鼠脊髓腹角神经元细胞浆，神经营养因子3分布于脊髓腹角神经元细胞核、胞浆。②损伤后3，7，21d腹角脑源性神经营养因子和神经营养因子3阳性神经元数均较对照组明显增加[（15．48&;#177;3．20）。（12．59&;#177;2．03），（11．33&;#177;1．92），（7．31&;#177;1．54）；（16．73&;#177;3．30），（11．15&;#177;2．85）。（13．20&;#177;3．39）。（6．00&;#177;1．50），（P〈0．01）1，术后3d时达高峰，随伤后时间的延长进行性减少。⑧损伤后3，7，21d神经生长因子阳性神经元数较对照组明显增加[（10．63&;#177;2．90），（14．07&;#177;2．37），（9．35&;#177;3．50），（4．00&;#177;0．63）。（P〈0．01）]，术后7d时达高峰，3d与21d比较差异无显著性意义。结论：脊髓半横断损伤后神经生长因子、脑源性神经营养因子和神经营养因子3表达明显增加，提示它们可能在脊髓半横断损伤早期修复中发挥作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤后bcl-2及bax基因表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脊髓损伤后bcl-2和bax基因表达的影响。方法：利用Allen WD法以25gcf致伤SD大鼠脊髓制作损伤模型，经蛛网膜下腔导管于术后即刻，0.5，1．2，3，4，6,12，24，48h导管注入bFGF20μL(含bFGF200U)；对照组相同时间点注入等量生理盐水作对照。术后2，6，12，24，48h取损伤脊髓组织，采用免疫组化和原位杂交方法分别检测Bcl-2、Bax蛋白和bcl-2 mRNA基因的表达。结果：脊髓损伤后应用bFGF显著促进bcl-2基因的表达，2，6，12，24，48h Bcl-2平均光密度值分别为0.165&;#177;0.020,0.254&;#177;0.081，0．312&;#177;0．017,0.415&;#177;0．021，0．304&;#177;0．031，(P&;lt;0．01，t=2.729—9．279),Bax平均光密度值分别为0．034&;#177;0．021，0．184&;#177;0.014，0．204&;#177;0．014．0.216&;#177;0027，0．180&;#177;0.013(P&;lt;0.01，t=4．601～6，376),提高Bcl-2蛋白的含量，降低了Bax蛋白的水平，每组数据差异具有统计学意义。结论：bFGF通过促进bcl-2基因的表达、抑制Bax蛋白的表达抑制脊髓损伤后神经细胞的凋亡，从而保护脊髓组织，这可能是bFGF对脊髓损伤具有保护作用的机制之一。     

硫酸镁对大鼠脊髓损伤的保护效应

背景：已有研究证实脊髓损伤后组织及血清中镁离子含量明显下降，而镁离子下降对细胞膜离子通透性、血管调节以及继发性脊髓损伤等均有影响。目的：观察大鼠脊髓损伤模型腹腔注射硫酸镁后对脊髓损伤的保护作用。设计：随机对照实验。单位：武汉大学人民医院骨科。材料：成年健康SD大鼠48只，随机分为2组，对照组和实验组，每组24只。方法：实验于2002-04／08在武汉大学人民医院骨科实验室完成。取48只大鼠建立脊髓损伤模型。对照组于脊髓损伤后1h腹腔注射适量生理盐水；实验组于伤后1h给予硫酸镁300mg／kg腹腔注射。用药后4，8，24h，每组各时相点取6只大鼠，大鼠损伤部位细胞内游离钙离子浓度，采用荧光分光光度计测定；大鼠脊髓超氧化物歧化酶活性以黄嘌呤氧化法检测；大鼠脊髓丙二醛浓度以硫代巴比妥酸法检测。评估标准以钙离子含量降低，超氧化物歧化酶活性增高和丙二醛含量降低表示硫酸镁对脊髓损伤有保护作用。于伤后8，24h和1周对大鼠进行斜板试验观察脊髓功能。将大鼠置于一块有纹理橡胶皮覆盖的斜板上，斜板倾斜角度从0&;#176;缓慢上升，直至大鼠不能保持原有位置5s时，读取斜板度数。每只测试3次后取均值，测量的角度增加表示脊髓功能状态有改善。主要观察指标：①大鼠脊髓损伤部位细胞内游离钙离子浓度变化。②大鼠脊髓组织内超氧化物歧化酶活性与丙二醛浓度的改变。③大鼠脊髓功能观察结果。结果：①两组大鼠脊髓损伤部位细胞内游离钙离子浓度变化比较：术后8，24h实验组显著低于对照组[（376．5&;#177;36．2比425．9&;#177;32．7）&;#215;10^-9moL／L，（316．3&;#177;13，9比350．2&;#177;29．4）&;#215;10^-9mol／L，P〈0．05]。②两组大鼠脊髓组织内超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量比较：各时相点与对照组相比，实验组丙二醛水平明显下降，超氧化物歧化酶升高（P〈0．01）。③两组大鼠脊髓功能观察结果：实验组改善不明显，仅在1周时角度明显大于对照组[（53．3&;#177;4．3）&;#176;，（44．3&;#177;5，7）&;#176;，P〈0，05]。结论：脊髓损伤大鼠腹腔注射硫酸镁后，损伤区周围细胞内游离钙离子浓度明显降低，脂质过氧化产物水平改变，表明硫酸镁对实验大鼠脊髓损伤有显著的保护作用，从而减轻继发性脊髓损伤。     

脊髓损伤大鼠后肢功能恢复与内源性神经营养素表达之间的关系

目的：观察随着脊髓不完全损伤后大鼠后肢功能恢复，内源性神经营养因子表达的变化。 方法：实验于1998-04／09在解放军第三军医大学野战外科研究所完成。Wistar大白鼠44只，脊髓功能观测组12只；脊髓形态观察组32只，随机分为正常组2只、手术假伤组15只和脊髓腹侧损伤组15只。脊髓功能观测组12只和脊髓腹侧损伤组15只造脊髓损伤模型；手术假伤组15只进行造模处理，但不损伤脊髓。脊髓功能观测组于脊髓受压前及脊髓受压迫损伤后6，24，72h，7，14，21d对受试动物进行后肢行为功能评定。脊髓形态观察组32只实验动物进行免疫组织化学染色．随机计数50个细胞，观察神经营养素脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、神经生长因子、神经营养素3的表达。 结果：44只实验大鼠均进入结果分析。①脊髓致伤后受试动物后肢出现明显瘫痪，随着时间的延长，脊髓功能得到逐步恢复。其中以伤后3-14d脊髓功能恢复最快，以后恢复较缓慢。②自伤后3h开始，脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、神经生长因子、神经营养素3的表达开始增加，并于伤后72h达到高峰；1周内神经营养素维持在相对较高的表达水平，2周后这几种神经营养素的表达明显减弱[伤后3h：（14．82&;#177;4．93），（9．77&;#177;4．97），（2．27&;#177;1．85），（10．35&;#177;5．56）；伤后72h：（45．22&;#177;15．61），（34．54&;#177;12．56），（13．89&;#177;7．58），（33．2&;#177;11．53）；伤后1周：（31．94&;#177;12，82），（15．69&;#177;11．53）．（7．17&;#177;4．92），（16．74&;#177;13．2）；伤后2周：（14．02&;#177;7．36），（6．97&;#177;4．05），（2．27&;#177;1．87），（9．7&;#177;5．62）]。 结论：伤后脊髓组织内源性神经营养因子的过度表达参与了伤后2周内脊髓功能的快速恢复，但内源性神经营养因子的表达是短暂的．延续内源性神经营养因子的表达有望进一步促进脊髓功能恢复。     

痉挛性脑性瘫痪脊神经后根脱髓鞘病变与免疫调节

目的：从免疫病理学角度探讨痉挛性脑性瘫痪脊神经后根脱髓鞘的病理改变。方法：选择2001-01／2002-12吉林大学第一医院骨科行选择性脊神经后根切断术者为观察对象。采集21例患者于选择性脊神经后根切断术中切取的阈值低的L5及S1脊神经后根小束，对照组L5脊神经后根取自1例22岁男性外伤性死亡的新鲜尸检材料。经处理制成电镜切片，采用光镜及透射电镜观察腰骶段脊神经后根超微结构，并应用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法，对神经标本行多克隆抗体IgG、IgM、IgA、补体C3染色；以CD20、CD45RO、CD68单克隆抗体分别标记B、T淋巴细胞及巨噬细胞；应用HPIAS-1000病理图文分析系统定量分析IgG、C3阳性染色平均灰度值。结果：21例痉挛性脑性瘫痪及1例对照组脊神经后根标本均获检测，进入结果分析。①脊神经后根标本电镜观察结果：痉挛性脑性瘫痪脊神经后根表现为以雪旺细胞病变为主的各种脱髓鞘改变。在正常对照的周围神经中未见补体C3、IgG、IgM、IgA阳性染色。在病变的神经组织中，可见棕黄色阳性染色的IgG及补体C3主要吸附于神经外膜、束膜和纤维束之间，呈点状或颗粒状，部分IgG、补体C3免疫复合物沉积于髓鞘及束内血管壁周围，B、T淋巴细胞及巨噬细胞在脑瘫脱髓鞘病变中未见表达，未见CD20 CD45RO、CD68标记的阳性染色细胞。②脱髓鞘病变中IgG及补体C3的表达：病变组织的总表达率补体C3为57．1％，IgG为61．9％，IgM为14．2％。③不同程度脱髓鞘病变中IgG及补体C3阳性染色平均灰度值：图象定量分析结果表明：IgG阳性染色脱髓鞘轻度组平均灰度值与中度组无差异(146．6&;#177;0．9，146．9&;#177;2．9，τ=0．387，P&;gt;0．05)，重度组明显低于轻度组与中度组(136．8&;#177;4．2，146．6&;#177;0．9，146．9&;#177;2．9，τ=2．45，1．97，P&;lt;0．05)。轻度、中度、重度3组的补体C3阳性染色平均灰度值组差异不显著(148．2&;#177;1．1，147.3&;#177;5．1，147．05&;#177;4．7，τ=0．29，0．12，0．89；P&;gt;0．05)。结论：痉挛性脑性瘫痪脑组织周围神经病理形态学显示，有髓神经纤维存在原发性脱髓鞘病变。病损以雪旺细胞为主，束膜内血管亦发生病变。脱髓鞘病变中体液免疫因素参与，IgG免疫复合物在神经组织中的沉积，并导致补体激活。可见免疫因素可能参与了痉挛性脑性瘫痪脊神经后根脱髓鞘的病理损伤过程。     

三七总皂苷干预脊髓损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的变化

目的：观察三七总皂苷注射液对大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的作用机制。方法：实验于2005—06／1l在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。将64只SD大鼠数字表法随机分为损伤组和三七总皂苷组（n=32），2组按存活时间分为1，3，7，14d4个时间点，每个时问点8只。所有大鼠采用Allen’s法制备脊髓中度损伤模型（致伤能量为40g&;#183;cm），三七总皂苷组伤后30min腹腔注射50mg／L三七总皂苷100mg／kg，伤后2h及4h再次给予50mg／kg，以后1次／d，剂量200mg／kg，连用12d。损伤组相同时间点腹腔注射等体积生理盐水。2组均于预定对间点处死大鼠，取出伤段脊髓（以损伤处为中心，长约10mm），用苏术精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率。结果：64只大鼠全部进入结果分析。①苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂苷组明显轻于损伤组。②诱导型一氧化氮合酶阳性细胞率：三七总皂苷组在伤后1，3，7，14d均低于损伤组[（21．38&;#177;3．69）％。（36．24&;#177;3．27）％，（30．56&;#177;2．89）％．（21．64&;#177;5.31）％；（39．48&;#177;3．78）％。（58，69&;#177;5．67）％。（68．97&;#177;5．34）％，（40．35&;#177;4．36）％。t=9．692，9．701，17．893，3．171，P〈0．05]。⑧半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率：三七总皂苷组在伤后1，3，7，14d均低于损伤组[（26．29&;#177;3．21）％，（35，42&;#177;2．25）％，（48．58&;#177;2．64）％。（23．72&;#177;3．26）％：（32．43&;#177;2，69）％，（46、18&;#177;3．07）％，（60．31&;#177;5．35）％，（31，98&;#177;4、80）％，t=4．147。7．996，5．561，11．231，P〈0．05]。结论：三七总皂苷注射液能抑制脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达，从而减轻细胞损伤和凋亡。     

臂丛损伤修复中胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的：观察大鼠臂丛损伤修复中脊髓前角胶质纤维酸性蛋自的表达并探讨其意义。方法：实验于2004-09／2005-03年在中山大学中山医学院解剖教研室完成。成年雄性SD大鼠65只，其中对照组5只，实验组60只。建立3种臂丛损伤模型：右C7前根撕脱组（A组）；右C7前根撕脱＋同侧C5-T1后根离断组（B组）；右C7前根撕脱＋右C5与C6之间脊髓半横断组（C组）。术后1，3，7，14d采用联合行为评分对各组大鼠的神经缺失症状进行评分；评分后取C7节段脊髓，采用免疫组织化学方法和图像分析方法观察星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：实验选用大鼠65只，其中实验组中C组术后12d死亡1只，进入实验结果分析共64只。①臂丛损伤后脊髓星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达：A组〈B组〈C组，均比对照组明显增高（A组1，3，7，14d依次为141．5&;#177;2．1，150．1&;#177;6．4，158．4&;#177;5．0，169．3&;#177;1．6；B组为156．7&;#177;1．9，160．2&;#177;1．9，172．5&;#177;3．5，190．1&;#177;3．2；C组为162．7&;#177;5．1，183．3&;#177;1．7，191．2&;#177;3．7，228．7&;#177;4．2；对照组均为127．6&;#177;2．2；P〈0．01）。②损伤各组联合行为评分1～14d呈降低趋势。③A，B，C组胶质纤维酸性蛋白表达与对应组联合行为评分之间均呈负相关（r=-0．956 - -0．993，P〈0．01）；结论：臂丛撕脱伤诱导胶质纤维酸性蛋白表达持续升高，提示星形胶质细胞参与神经损伤和修复的全过程。     

脊髓损伤大鼠关节软骨转化生长因子β和肿瘤坏死因子α表达的变化

目的：观察脊髓损伤模型大鼠膝关节软骨组织中转化生长因子β和肿瘤坏死因子α的表达变化，分析其在软骨代谢变化中的意义，为关节软骨的修复重建方面提供理论基础。 方法：实验于2004-05／12在西安交通大学医学院骨病教研室完成。选择清洁级健康成年SD雌性大鼠36只，按随机数字表法分为脊髓损伤组和对照组，各18只。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓中度损伤模型，对照组仅行T10椎板切除术。伤后1，3，6周麻醉下处死，两组每时间点均为6只。用AβC法进行转化生长因子β、肿瘤坏死因子α免疫组化染色及通过倒置光学显微镜及成像系统行灰度值扫描，对大鼠膝关节软骨组织中转化生长因子β、肿瘤坏死因子α的表达变化进行观察并采用SPSS 12．0软件对结果进行统计分析。 结果：脊髓损伤组在术后6d因泌尿系感染死亡1只，对照组组术后3d因硬膜外血肿死亡1只，后补齐进入结果分析大鼠36只。①免疫组化观察阳性表达信号为红色颗粒状，主要定位于胞浆和胞膜部位。肿瘤坏死因子α、转化生长因子β主要分布关节软骨表层中，阴性对照均呈现弱表达状态。②脊髓损伤后第1，3周时肿瘤坏死因子α阳性表达强度高于对照组（181．13&;#177;7．34，193．19&;#177;8．64；178．02&;#177;5．05，190．78&;#177;8．59；P〈0．05），第6周时与对照组比较，差异有非常显著性意义（175．56&;#177;6．05，192．98&;#177;8．26，P〈0．01）。③在脊髓损伤1周时转化生长因子β表达与对照组相比差异无显著性意义（P〉0．05），第3，6周时表达差异有显著性意义（182．25&;#177;4．73，191．40&;#177;6．87；176．85&;#177;7．68，191．41&;#177;8．53；P〈0．05）。 结论：脊髓损伤后肿瘤坏死因子α的表达具有时间上的早期性，转化生长因子β的表达则随着脊髓神经功能的恢复而增强，两者在第3周时关节软骨中表达均增强。     

直流电场与汉防已甲素联合应用对急性脊髓损伤的保护作用及其机制

背景：直流电场能促进脊髓再生，但伤后6h置入电刺激器的疗效比伤后立即置入电刺激器的疗效为差，可能与脊髓损伤后出现脊髓水肿有关。目的：探讨直流电场与汉防己甲素联合应用治疗完全性急性脊髓损伤的疗效。设计：随机对照的实验。单位：海南省人民医院骨病外科。材料：实验在海南省人民医院完成。33只中国家犬，体质量10-12kg，犬龄1．5-2岁，由海南省动物中心提供。干预：将33只家犬随机分成3组，用Allen D法致脊髓完全损伤。A组为对照组；B组汉防己甲素治疗组；C组脊髓损伤2h静滴汉防己甲素，脊髓损伤6h再置入电刺激器组。主要观察指标：伤后各组1，2，3个月神经功能、皮质体感诱发电位、神经元数量、神经元截面积和内氏体密度恢复情况。结果：B，C组神经功能早期恢复，P1潜伏期明显缩短，波幅明显升高，神经元计数明显增多，神经元截面积增大及内氏体密度深[B组1，2，3个月时各组数值分别为(27．65&;#177;1．19)，(20．48&;#177;1．02)，(17．45&;#177;1.08)ms；(724&;#177;52)。(877&;#177;41)，(1035&;#177;50)rIV，(37．7&;#177;3．4)，(45．6&;#177;3．2)，(52．5&;#177;2．9)个；(154．96&;#177;6．01)，(181．40&;#177;6．86)，(237．47&;#177;7．38)μm^2，(0．4694&;#177;O．0261)。(O．5996&;#177;0．0302)，(O．6351&;#177;O．0326)pixel，C组则分别为(21．25&;#177;O．83)，(14．63&;#177;O．90)，(13．35&;#177;O．84)ms；(915&;#177;61),(1146&;#177;36)，(1262&;#177;49)nV，(49．3&;#177;3．5)，(60．6&;#177;3．3)，(68．3&;#177;3．3)个；(231．81&;#177;7．38)，(322．67&;#177;8．45)，(386．82&;#177;10．42)μm^2，(0．6476士0．0251)．(O．7611&;#177;O．0305)。(O．8285&;#177;O．0226)pixel]，与A组相比差异有显著性意义[2，3个月时各组数值分别为(37．29&;#177;2．02)．(31．07&;#177;2．06)，(26．60&;#177;1．51)ms；(409&;#177;80)，(667&;#177;66)，(720&;#177;67)nV,(26．3&;#177;2．8)，(31．O&;#177;3．0)，(36．O&;#177;3．4)个；(98．12&;#177;4．93)。(113．50&;#177;6．74)，(122．59&;#177;8．03)μm^2，(O．2112&;#177;O．0069)，(O．2773&;#177;O．O117)，(O．3248&;#177;O．0082)pixel]。此外，C组优于B组，差异有显著性意义。结论：汉防己甲素能改善微循环，减轻组织继发性损伤，对实验性脊髓损伤有保护作用。直流电场与汉防己甲素联合应用能更有效地协同治疗脊髓损伤，特别是促进神经功能早期、较好的恢复。     

八肽胆囊收缩素抑制大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶的表达

目的：观察八肽胆囊收缩素（CCK-8)对大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)表达的影响，进一步探讨CCK-8对脊髓损伤后的神经功能及其组织的保护作用。方法：实验于2003-09／2004-02在解放军总医院神经外科实验室进行。将36只SD大鼠随机分成3组，参照改良的Gruner法建立大鼠T9脊髓损伤模型，用免疫组化研究损伤后不同时间点iNOS的表达变化；选取3个表达最强时间点应用CCK-8腹腔内注射观察iNOS的表达变化。结果：正常脊髓组织内iNOS表达为(4．34&;#177;1．15)％，脊髓损伤后3d明显上升，7d表达最强，为(47．57&;#177;8．62)％，高于正常(P&;lt;0．01)，14d时表达减弱；应用CCK-8后iNOS在7d时的表达明显减低为(30．50&;#177;5．17)％，与损伤组比差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：脊髓损伤后iNOS表达增高，与继发性的炎症反应相关；CCK-8能够抑制这种炎症反应，具有保护作用。     

尼莫地平对大鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元的保护作用

目的：研究尼莫地平对大鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元的保护作用。方法：将50只成年SD大鼠，随机分成4组：假手术组(A组，n=5)；坐骨神经切断未干预组(B组，n=15)；生理盐水组(C组，n：15)；尼莫地平组(D组，n=15)。B，C及D3组又按切断右侧坐骨神经后4，9及16d取材时间分为3个时间组，每组5只大鼠，各时间组取大鼠的脊髓L5段．以TUNEL法检测细胞凋亡数，以免疫组化技术检测Bax的表达，苏木精一伊红染色计算脊髓内神经元的数目。结果：坐骨神经损伤后4，9及16d，C组凋亡细胞数目为(8．4&;#177;1．8)，(13．1&;#177;2．1)，(15．4&;#177;1．8)个／前角视野，明显多于D组(2.3&;#177;1．3)，(8．2&;#177;1．7)，(10．1&;#177;2．2)个／前角视野(P&;lt;0．01)；D组神经元存活率为(94．3&;#177;3．1)％。(85．4&;#177;3．1)％，(76，3&;#177;3．2)％，明显高于C组(84．1&;#177;4．5)％。(77．52．9)％，(67．0&;#177;3．5)％，差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)；D组Bax表达(-～+，+～++，+～++)低于c组(+，+～++，+++)；B与C组凋亡细胞数目、神经元存活率及Bax表达差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：尼莫地平可以减少坐骨神经损伤后脊髓神经元的凋亡及Bax的表达．因此，对脊髓神经元具有保护作用。     

挤压伤后脊髓腹角和背角中神经营养因子-3和神经营养因子-4表达的时间演变规律

背景：神经营养因子-3和神经营养因子-4对体内、外神经元的发育、存活及功能维持具有重要的作用，是否对在挤压伤后脊髓神经元有保护和修复作用。目的：观察脊髓挤压伤模型大鼠伤后不同时间脊髓腹角和背角神经元神经营养因子-3和神经营养因子-4的表达，并分析其变化规律。设计：随机对照实验，单因素方差分析单位：北京联合人学继续教育学院，昆明医学院人体解剖学教研室。材料：实验于2003—01／03在昆明医学院神经科学研究所完成，选择成年SD大鼠24只，随机分为4组，对照组，挤压伤24h组，挤压伤7d组及挤压伤21d组，每组6只方法：挤压伤各组大鼠麻醉后，在T11行椎板切开后挤压大鼠T13脊髓节段。分别于术后24h，7d及21d断头处死动物，迅速取脊髓L1-L3节段制作20μm厚冰冻横切片。对照组不进行任何处理，和挤压伤24h组同时间点处死大鼠，制备切片过程相同：观察神经营养因子-3和神经营养因子-4样免疫反应阳性细胞在成年大鼠脊髓腹角和背角的分布，并计数两者相同面积内腹角和背角阳性有核细胞数。主要观察指标：①神经营养因子-3和神经营养因子-4在各组大鼠脊髓腹角和背角的分布。②神经营养因子-3和神经营养因子-4在各组大鼠脊髓腹角和背角神经元数量。结果：24只大鼠全部进入结果分析。①神经营养因子-3免疫阳性反应物主要在胞核着色，神经营养因子-4则胞浆及胞核均着色。②各组大鼠脊髓腹角和背角神经营养因子-3阳性神经元数量：挤压伤7d组和挤压伤21d组腹角阳性神经元数明硅高于对照组和挤压伤24h组[10．2&;#177;1．1，11．4&;#177;3．2，6．2&;#177;1．8，7．4&;#177;2．4，P〈0．01）]；背角阳性神经元数仅挤压伤21d组高于对照组[86．4&;#177;9．8，71．3&;#177;8．3，（P〈0．01）1，而挤压伤24h组及7d组低于对照组[48．5&;#177;5．1，41．5&;#177;3．7，71.3&;#177;8．3，（P〈0．01）1。③各组大鼠脊髓腹角和背角神经营养因子-4阳性神经元数量：挤压伤24h组，挤压伤7d组和挤压伤21d组的腹角阳性神经元数高于对照组[9．4&;#177;2．8，10．8&;#177;2．7，15．1&;#177;4．0，（P〈0．05）1，并且随时间的延长呈增加趋势（P〈0．05）；挤压伤7d组和挤压伤21d组背角的阳性神经元数较对照组和挤压伤24h组显著增加[28．1&;#177;3．1，35．1&;#177;4．4，23．3&;#177;2．3，24．1&;#177;1.8，（P〈0．01）]，亦有随时间的延长呈增加趋势（P〈0．01）。结论：脊髓挤压伤后，神经营养因子-3和神经营养因子-4神经元数量在脊髓腹、背角神经元中均有增加，但随时间的变化规律不完全一致．提示神经营养因子-3和神经营养因子-4在脊髓损伤修复中，对感觉和运动神经元发挥作用的时间可能不同．     

坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达变化

目的 探讨大鼠坐骨神经切断后，胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA在两侧断端的表达变化及其意义。方法 采用Trizol一步法提取坐骨神经总RNA，取少量作紫外扫描分析和琼脂糖电泳分析，切断SD大鼠左侧坐骨神经，不同时间、半定量RT—PCR方法，观察两侧断端GDNF mRNA的表达变化。结果 坐骨神经切断前，GDNF mRNA在两侧坐骨神经微量表达，为(6．5&;#177;1．3)％，坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加，伤后1d(7．8&;#177;1．9)％，伤后7d(10．3&;#177;2．1)％，伤后14d(11．9&;#177;2．3)％，伤后28d(12．3&;#177;2．4)％，近断端表达逐渐减少，伤后1d(5．8&;#177;1．3)％，伤后7d(4．0&;#177;1．0)％，伤后14d(3．6&;#177;1．1)％，伤后28d(3．1&;#177;1．0)％。伤后1d与伤前比较(P&;gt;0．05，t=1．193，0．879)，伤后7，14，28d与伤前比较(P&;lt;0．01，t=3．762，3．565，5．059，4．083，5．164，4．905)。结论 GDNF在损伤信号的刺激下表达急剧增加，起到修复神经元的作用，为外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。     

颈部挥鞭伤仿真发生装置及其模拟实验

目的：验证自行设计的颈部挥鞭伤仿真发生装置的可操作性及稳定性，一通过模拟实验分析颈部挥鞭伤的伤情特点以及损伤程度和牵引加速度之间的关系。方法：实验于2003—09／2004—05在第三军医大学新建的实车碰撞实验室完成。选取健康成年杂种犬21只，随机分为4组：重度伤组、中度伤组、轻度伤组各6只，分别施加（40&;#177;1．5）g，（25&;#177;1．5）g，（15&;#177;1．5）g的牵引加速度；对照组3只，用于检查正常颈段脊髓的病理切片。采用自行设计的颈部挥鞭伤仿真发生装置，建立犬颈部挥鞭伤的实验模型，通过联合行为评分（分为五级：0级：弛缓性瘫痪；1级：肌紧张和膀胱控制失调；2级：受伤后肢的负重作用；3级：表现为1或2个后肢跛行；4级：能短时间行走、跑，不能走直行路线；5级：正常，完全恢复）对实验犬的运动、感觉、反射以及肢体动作协调等脊髓功能进行综合评定。检测伤前和伤后皮质体感诱发电位和运动诱发电位的变化以及损伤程度。结果：实验纳入21只犬全部进入结果分析，中途无脱落。①颈部挥鞭伤仿真发生装置的建立：此装置可以根据落锤重量和下落高度差的调节产生比较稳定、不同大小的牵引力和牵引加速度，能较好的模拟汽车追尾碰撞中乘员的头颈部运动特点，可用于仿真汽车追尾碰撞过程中颈部挥鞭伤的发生过程。②行为学观测（联合行为评分）：不同的加速度组其损伤的程度不同。重度伤组、中度伤组和轻度伤组在致伤后各时相点的评分均小于正常值（5分），且3组评分依次递增。③皮质体感诱发电位的变化：伤后即刻重度伤组出现了波形基本消失，没有明显的NPN波形。与各自伤前比较，中度伤组和轻度伤组伤后即刻的N1，P1波均明显升高[（37．2&;#177;2．7），（12.4&;#177;1．3）μV；（58．9&;#177;3．1），（48．6&;#177;2．0）μV；（18．2&;#177;2．1），（12．4&;#177;2．0）μV；（55．5&;#177;2．0），（48．7&;#177;2．3）μV，P均〈0．01]。与重度伤组伤后24h比较，中度伤组和轻度伤组的N1，P1波均明显降低[（21．4&;#177;1．4），（17．9&;#177;1．9），（17．0&;#177;2．5）μV，P均〈0．01；（53．9&;#177;4．8），（51．7&;#177;4、4），（51．5&;#177;8．4）μV，P均〉0．05]。④运动诱发电位的变化：伤后即刻重度伤组出现了波形基本消失，没有明显的NPN波形。与各自伤前比较，中度伤组和轻度伤组伤后即刻的N1，P1波均明显升高[（20.5&;#177;2．5），（7．7&;#177;0．8）μV：（25．85&;#177;1．4），（17．8&;#177;2．6）μV：（12．1&;#177;1．9）。（7．85&;#177;1．3）μV；（22．6&;#177;1．7），（17．6＋2．0）μV，P均〈0．01]。与重度伤组伤后24h比较，中度伤组和轻度伤组的N1，P1波均明显降低[（18．5&;#177;2．5），（13．1&;#177;3．9），（8．75&;#177;0．7）μV，P均〈0．01；（21．7&;#177;2．4），（19．7&;#177;1．8），（19．8&;#177;2．3）μV，P均〈0．05]。⑤脊髓C4-7段病变情况：大体观察除了重度伤组出现颈部皮下出血，肺部出血水肿外，其余组皆无异常。光镜检测下重度伤组可见神经元数量较少，绝大多数发生变性、坏死，中度伤组可见大部分的神经元变性，轻度伤组形态基本正常。结论：自制的颈部挥鞭伤致伤装置能较好地模拟汽车追尾碰撞中乘员的头颈部运动特点，可用于仿真汽车追尾碰撞过程中颈部挥鞭伤的发生过程。对犬施加的致伤牵引加速度越大，则引起犬的颈段脊髓损伤程度也越严重。