大蒜素对大鼠肝星状细胞增殖的影响简

目的 观察大蒜素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖的影响,探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6.以四甲基偶氮唑盐（MTT）法测不同浓度大蒜素作用对大鼠肝星状细胞的影响;以碘化丙啶染色流式细胞术（PI-FCM）检测大蒜素对大鼠肝星状细胞的抑制作用.结果 HSC-T6大蒜素各浓度处理组与空白对照组及溶剂对照组比较,增殖抑制率明显增高,有显著性差异（P〈0.01）;并且大蒜素浓度增高时,HSC-T6的抑制率也逐渐增强;DATS高浓度实验组（浓度含量12 μg/ml DATS）的增殖抑制率明显高于空白对照组、试剂对照组及低浓度实验组.结论 大蒜素可以抑制HSC-T6增殖,且作用具有剂量依赖性.大蒜素抑制HSC-T6增殖的机制可能是使HSC-T6细胞周期停滞.     

γ-干扰素对肝星状细胞增殖影响研究

目的观察γ-干扰素（IFN-1）对体外培养的肝星状细胞（HSC）增殖的影响。方法采用体外培养大鼠肝星状细胞（rHSC-99）,加入不同剂量的IFN-1,并用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖。结果IFN-1对HSC细胞株（rHSC-99）有促增殖作用,其促增殖作用随着剂量的增加和培养时间的延长而增强（P〈0．05）。结论IFN-1对rHSC-99细胞的促增殖作用具有浓度-效应依赖关系和时间-效应依赖关系。     

鳖甲和三七对心肌成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的：观察以鳖甲和三七为主要成分的复方鳖甲软肝片和氯沙坦对心肌成纤维细胞(cardiac fibmblasts，CFs)增殖的影响。方法：取生后1～3d的雄性SD仔鼠心脏原代培养心肌成纤维细胞、传代，将第3代心肌成纤维细随机分为3组：空白对照组、氯沙坦组、复方鳖甲软肝片组。并根据血清药理学理论，分别以蒸馏水、10mg／kg氯沙坦、0．7g／kg复方鳖甲软肝片喂养新西兰兔获得血清，制备相应培养液干预培养的心肌成纤维细胞。结果：鳖甲片和氯沙坦能明显抑制CFs增殖(空白对照组、氯沙坦组、鳖甲片组的A值分别为0．387&;#177;0．0539，0．181&;#177;0．044，0．212&;#177;0．038，F=5．805，P=0．016)，并将细胞周期阻抑在G1期[(74．32&;#177;1．76)％，(81．02&;#177;4．15)％，(81．62&;#177;3．83)％，F=7．041，P=0．009]，处于分裂期(S期)的细胞比例减少[(18．36&;#177;2．15)％，(13．18&;#177;3．26)％，(11．60&;#177;2．23)％，F=9．290，P=0．004]，对CFs增殖和细胞周期影响的作用强度与氯沙坦相近(A值：95％CI：-0．180—1．118，P=0．662；G1和S期：95％Cl:-5．306—4．106，P=0．768；95％Cl:-1．995—5．515．P=0．355)。结论：复方鳖甲软肝片具有防治心肌纤维化的作用。     

血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞增殖的影响

肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)受到致病因子的刺激而活化过渡到肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)进而成为活化的肝星状细胞,这一过程称为肝星状细胞的激活。肝星状细胞激活是肝纤维化发生发展的中心环节。活化的肝星状细胞表现为细胞增殖明显。本实验针对外源性的血管紧     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)增殖的影响，以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养，药物血清制备，MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响，酶标仪波长为450 nm。结果：培养24h，各组HSC增殖比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；培养48，72h，高、中、低剂量药物组HSCA值(0．47&;#177;0．02，0．55&;#177;0.07：0．46&;#177;0．02,0．58&;#177;0．08；0．51&;#177;0．03，0．69&;#177;0．07)与模型组(0．66&;#177;0．05和0．96&;#177;0.05)比较。差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；高、中剂量组药物组与对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48，72h后均能降低或抑制HSC的增殖，尤以高、中剂量作用明显。     

丹参酮ⅡA对肝星状细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对大鼠肝星状细胞增殖及分泌细胞外基质分泌的影响。方法：用不同浓度的丹参酮ⅡA处理大鼠肝星状细胞，以MTT比色法测定细胞的增殖；放射免疫法测定透明质酸和层粘连蛋白；酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅰ型胶原的水平。结果：丹参酮ⅡA可剂量依赖性地抑制HSC增殖，不同程度抑制Ⅰ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白分泌。结论：丹参酮ⅡA可显著抑制HSC的增殖及分泌细胞外基质。     

靶向性血小板衍生生长因子siRNA对肝星状细胞增殖的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）降低血小板衍生生长因子B链（PDGF-B）基因对肝星状细胞（HSCs）增殖与细胞外基质表达的影响。方法构建PDGF-B靶向siRNA重组表达质粒pSilencer3.l-Hlhygro-PDGF-B siR-NA,将重组质粒转染HSCs细胞,噻唑蓝（MTT）法测定转染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h的增殖抑制率;半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）与免疫印迹检测转染后36 h HSCs细胞PDGF-B表达。放免法检测HSCs细胞株上清液中透明质酸和Ⅲ型前胶原的表达。结果经酶切鉴定和测序结果证实PDGF-B靶向siRNA重组表达载体构建成功,转染重组质粒36 h后,PDGF-B siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3干预组的HSCs增殖抑制率明显高于对照质粒转染组（34.04%、14.89%、25.53%VS 3.19%;均P〈0.01～0.05）;RT-PCR和免疫印迹显示：各siRNA表达质粒阳性HSCs细胞PDGF-B mRNA和蛋白表达明显降低,与空脂质体组及对照质粒组比较,差异具有统计学意义（均P〈0.05）,放免法显示：siRNAs干预组HSCs细胞透明质酸和Ⅲ型前胶原表达明显降低,与空脂质体组及对照质粒组比较,差异具有统计学意义（均P〈0.05）。结论靶向PDGF-B链的siRNA可降低HSCs的PDGF-B基因表达,具有抑制HSCs增殖和分泌细胞外基质的能力。     

中药复方861对肝星状细胞的增殖和胶原合成的影响

目的 研究中药复方861对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起的肝星状细胞增殖、细胞内钙浓度及胶原合成的影响。方法 体外实验对象为肝星状细胞系(HSC—T6)。细胞增殖采用甲基-^3H胸腺嘧啶核苷(-^3H—TdR)掺人法，细胞内钙浓度测定用Fluo-3／AM(乙酰氧甲基酯)标记后共聚焦显微镜下测定荧光光密度值。培养上清液中I型胶原(CoL—I)用酶联免疫吸附(ELISA)法测定，Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)的浓度用放免法检测。HSC-T6细胞CoL—Ⅰ及Ⅲ型胶原(CoI一Ⅲ)mRNA的水平用RT—PCR方法检测。结果 AngⅡ可促进HSC-T6细胞的增殖和细胞内钙浓度的增加，复方861可阻断这些变化。复方861也可降低HSC—T6细胞CoL—Ⅰ及PⅢP的分泌和CoL—Ⅰ及CoL—Ⅲ mRNA的水平。结论 复方861通过作用于血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)抑制肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成，这可能是其抗纤维化的机理之一。     

肝星状细胞的研究进展

早在1876年德国学者Kupffer即报道肝窦的内皮细胞近血流侧存在枯否细胞,而在肝窦的内皮细胞近肝细胞的一侧即狄氏(Disse)腔有星状或纺锤状细胞,其功能不明,当时命名为星状细胞(hepaticstellate cell,HSC),又称贮脂细胞(fat-storing cell,FSC),lipocyte或Ito细胞,是在肝纤维化时及正常情况下肝脏中细胞基质(Extracellular matrix,ECM)的主要来源细胞,HSC的活化、增殖及胶原产生的增加是肝纤维化发生发展的中心环节.本文就HSC的分离、生物学特性、以及与肝纤维化形成关系的研究进展作一综述.     

肝星状细胞增殖与p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系

背景：肝星状细胞的激活、增殖导致肝纤维化,p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路可参与调控细胞增殖。目的：探讨SB203580作用于乙醛刺激的大鼠肝星状细胞后p38丝裂原活化蛋白激酶活性变化和细胞增殖变化。方法：体外培养大鼠肝星状细胞株,在乙醛干预的基础上加入不同浓度的p38特异性抑制剂SB203580进行培养,并设置对照。以Westernblot检测磷酸化p38蛋白表达水平变化,MTT比色法检测细胞增殖。结果与结论：乙醛刺激后大鼠肝星状细胞内磷酸化p38水平增强,细胞增殖明显。使用5,10,20μmol/L SB203580能明显抑制乙醛刺激的肝星状细胞增殖（P〈0.05）,加大浓度至30μmol/L时,抑制作用更明显（P〈0.01）,抑制率为43.9%,而磷酸化p38水平也降低（P〈0.05）。结果证实,抑制p38丝裂原活化蛋白激酶活性可能影响肝星状细胞的增殖。     

肝星状细胞增殖与p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系

背景:肝星状细胞的激活、增殖导致肝纤维化,p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路可参与调控细胞增殖。目的:探讨SB203580作用于乙醛刺激的大鼠肝星状细胞后p38丝裂原活化蛋白激酶活性变化和细胞增殖变化。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株,在乙醛干预的基础上加入不同浓度的p38特异性抑制剂SB203580进行培养,并设置对照。以Westernblot检测磷酸化p38蛋白表达水平变化,MTT比色法检测细胞增殖。结果与结论:乙醛刺激后大鼠肝星状细胞内磷酸化p38水平增强,细胞增殖明显。使用5,10,20μmol/L SB203580能明显抑制乙醛刺激的肝星状细胞增殖(P<0.05),加大浓度至30μmol/L时,抑制作用更明显(P<0.01),抑制率为43.9%,而磷酸化p38水平也降低(P<0.05)。结果证实,抑制p38丝裂原活化蛋白激酶活性可能影响肝星状细胞的增殖。     

4种莪术有效成分对肝星状细胞-T6基因表达的影响

目的：研究莪术4种有效成分(莪术油、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素)对肝星状细胞-T6(HSC—T6)基因表达的影响。方法：从基因库中查询50种肝纤维化相关基因的mRNA序列，用寡核苷酸探针设计软件设计探针，在PE8909DNA合成仪上合成寡核苷酸，用OGR-04点样仪及醛基化玻片制备成基因芯片。以秋水仙碱、莪术油、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素不同浓度含药培养液培养HSC—T6细胞。根据细胞毒性实验，确定细胞存活率在50％以上的药物浓度作为实验所用浓度，每组设空白对照组，分别按1、6、12和24h4个时间段收集细胞。按操作步骤提取细胞总RNA，经逆转录荧光标记、杂交和洗涤，用Genepix4000B扫描仪扫描芯片和Ima Gene4．2软件进行数据分析并归一化处理，使用看家基因和阳性对照对Cy3和Cy5扫描结果进行校正。结果：秋水仙碱6．25μg／ml作用HSC—T6细胞12h，可使基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMPl)表达下调220％；莪术油78．125μg／ml作用HSC—T6细胞24h，可使基因TIMP2、白细胞介素-6表达分别下调230％和220％；莪术醇1．5625μg／ml作用HSC—T6细胞12h，可使转化生长因子-β1、P450a基因表达下调230％和210％。结论：本研究从分子水平揭示了莪术有效成分莪术油、莪术醇的抗肝纤维化机制。     

甘草酸对肝星状细胞增殖、活化和细胞外基质合成的影响

目的：探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、活化与细胞外基质合成的影响。方法：体外分离、培养大鼠肝星状细胞，甘草酸与HSC共同孵育。用m法、LDH测定法检测甘草酸对HSC增殖及活性的作用。Western印迹法检测1-1000 μmol／L甘草酸对HSC中α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的蛋白表达水平。结果：MTT实验显示1-1000μmol／L甘草酸能明显抑制肝星状细胞增殖但，不同浓度甘草酸并不影响肝星状细胞的活力。1～1000μmol／L甘草酸逐渐抑制α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的蛋白表达。结论：甘草酸可能通过干预大鼠HSC增殖、活化、减少胶原合成，发挥抗纤维化作用。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)增殖的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响,酶标仪波长为450nm。结果:培养24h,各组HSC增殖比较,差异无显著性意义(P>0.05);培养48,72h,高、中、低剂量药物组HSCA值(0.47±0.02,0.55±0.07;0.46±0.02,0.58±0.08;0.51±0.03,0.69±0.07)与模型组(0.66±0.05和0.96±0.05)比较,差异有显著性意义(P<0.05);高、中剂量组药物组与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48,72h后均能降低或抑制HSC的增殖,尤以高、中剂量作用明显。     

肝星状细胞在肝纤维化中的作用

众所周知,肝纤维化（HF）是对各种病因所致的慢性肝损伤的一种修复反应,其实质是肝内细胞外基质（ECM）合成大于降解导致大量ECM过度沉积。研究证实,肝星状细胞（HSC）是ECM的主要来源,在HF的形成、发展和恢复过程中发挥着关键的作用。现就近年来有关HSC在肝纤维化中的作用作一综述。     

铁调素在肝纤维化中的表达特点及对肝星状细胞的作用

目的 观察铁调素在肝纤维化过程中的表达特点,评估铁调素对肝星状细胞(HSC)的作用及其机制。方法腹腔注射四氯化碳与橄榄油混合物诱发肝纤维化,于第0、4、8、12周后处死大鼠,动态观察铁调素在血清和肝组织中的表达特点。用不同浓度的铁调素-25多肽刺激大鼠星状细胞系(HSC-T6) 48 h,检测纤维化相关指标如α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和I型胶原在基因和蛋白质水平的表达。数据比较采用单因素方差分析与Tukey检验。结果 成功建立四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型。对铁调素的检测发现,随着纤维化进展,肝组织中铁调素的基因水平在四氯化碳注射后逐渐降低(P 0. 05);四氯化碳混合物注射后第4、8、12周铁调素的相对表达分别为0. 75±0. 12、0. 52±0. 20、0. 20±0. 10。血清中铁调素在四氯化碳混合物注射0、4、8、12周分别为(351. 45±51. 12) pg/ml、(254. 24±49. 41) pg/ml、(211. 45±42. 28) pg/ml、(189. 23±30. 24) pg/ml。体外实验表明,外源性补充铁调素(10 ng/ml、100 ng/ml)可以直接抑制HSC中纤维化相关基因(α-SMA,TIMP-1和I型胶原)的表达,且具有剂量依赖性。进一步我们发现铁调素可以通过抑制TGFβ1信号中SMAD4的表达阻断TGFβ1诱导的星状细胞活化和I型胶原的分泌。结论 铁调素水平与纤维化进展负相关,体外补充铁调素能够抑制HSC的活化并减少I型胶原的分泌。     

“清肝活血方”对肝星状细胞增殖及胶原生成的影响

目的　研究“清肝活血方”药物血清对体外培养肝星状细胞增殖及胶原生成的影响。方法　原位分离大鼠肝细胞、肝星状细胞 ,3H TdR掺入法测定细胞增殖能力 ,ELISA法测定I型胶原含量。结果　乙醛可以直接促进肝星状细胞增殖和I型胶原的分泌 ,乙醛损伤肝细胞条件培养液培养下的肝星状细胞出现相同的改变 ,不同剂量的清肝活血方药物血清能产生正向调节作用 ,有效地抑制肝星状细胞增殖和I型胶原分泌。结论　清肝活血方既可以通过拮抗乙醛引起的肝脏脂质过氧化损伤 ,还可以直接阻止乙醛引起的肝星状细胞的活化增殖Ⅰ型胶原分泌 ,从而有效预防肝纤维化的发生和发展     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)结蛋白、突触素表达的影响，以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术，将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24，48，72h后，免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达，并经图像分析系统作定量分析。结果：培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78．93&;#177;18．56，396．29&;#177;78．56；58．95&;#177;5．21，138．92&;#177;20．21；63．83&;#177;12．97，190．87&;#177;52．97；75．46&;#177;26．72，284．54&;#177;66．72)与模型组(119．69&;#177;23．84，528．79&;#177;26．84)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；培养48，72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较。差异也有显著性意义(P&;lt;0．05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达，其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。     

肝星状细胞与肝纤维化

慢性肝脏疾患是一类世界性的严重危害人们健康的主要疾病,其中肝纤维化（HF）是这个过程的中间及关键环节。肝景状细胞（HSC）是启动整个事件的开端,在HF过程中扮演着重要的角色。在进展期的HF中,活化HSC在肝损伤部位移行、增殖,表达各种细胞外信号转导通路蛋白,产生大量以胶原为主的细胞外基质（ECM）成分和细胞因子（CK）,是HF形成的中心环节;但在HF的恢复期,