实时荧光核酸恒温扩增技术在肺结核诊断中的价值分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT-TB)在肺结核诊断中的价值。方法纳入1121例非相同患者痰标本,其中26例为非结核分枝杆菌。570例肺结核为观察组,525例其他肺部疾病患者为对照组。对治疗前的痰标本分别进行抗酸杆菌涂片、培养及鉴定和SAT法检测。阳性检出率的比较使用卡方检验。结果临床诊断肺结核570例,痰培养结核菌阳性率46.5%(265/570),SAT法检测阳性率46.7%(266/570),痰涂片阳性率34.4%(196/570),SAT与涂片法阳性率的差异有统计学意义(χ2=17.83,P0.01)。在涂阴肺结核中,SAT阳性率达19.5%。以培养阳性作为金标准,SAT法诊断结核病的灵敏度为89.4%,特异度96.3%,阳性似然比为24.2,阴性似然比为0.11,一致率是94.6%,阳性预测值是88.4%,阴性预测值为96.6%。在非结核分枝杆菌肺病中SAT检测阳性率为零。结论 SAT-TB法在肺结核的早期诊断中是一种快速、准确、敏感的方法,值得推广。     

痰液标本结核分支杆菌RNA恒温扩增检测及临床应用

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测法（SAT）在肺结核患者实验诊断中的应用。方法设计特异性引物和探针,建立并优化SAT检测体系,对131例临床确诊并接受治疗的肺结核患者、73例非结核性肺部感染者痰液标本中的结核分支杆菌（TB）RNA进行检测,并与PCR法检测TB DNA,痰培养法、痰涂片抗酸染色法检测TB的结果进行比较。结果 131例肺结核患者痰液标本中,SAT对TB检出率为52.67%,高于痰培养法（39.69%,P=0.035）和痰涂片抗酸染色法（35.11%,P=0.004）;以PCR法为参考标准,SAT的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值依次是95.38%、90.91%、91.18%、95.24%。结论 SAT检测痰液标本中TB RNA灵敏度高,特异性强,操作简便、快速,具有临床推广应用价值。     

T-SPOT在肺结核中的诊断价值

目的探讨γ干扰素释放结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT)在结核病中的诊断价值。方法经临床证实肺结核患者85例,非肺结核患者35例,均给予T-SPOT外周血检测、痰涂片及结核菌素试验(PPD),对三种检查方法进行对比分析。结果 1 T-SPOT检测肺结核灵敏度、特异度、阳性及阴性预测值均明显高于PPD试验(P0.05),但特异度、阳性预测值低于痰涂片检测(P0.05);2 T-SPOT、痰涂片、PPD试验在肺结核中的灵敏度分别为89.41%、63.53%、72.94%(P0.01);3痰涂片检测阳性与阴性肺结核患者T-SPOT阳性率分别为88.89%、90.32%,(P0.05);4 PPD试验强阳性患者T-SPOT阳性率为100%,两者具有高度一致性,明显高于阳性、弱阳性、阴性患者的79.62%、72.72%、86.96%(P0.05)。结论 TSPOT外周血检测对肺结核具有较高的诊断及鉴别诊断价值,减少肺结核的漏诊和误诊,未来可作为肺结核普查方法。     

免疫学检测联合痰涂片和痰培养检测在活动性肺结核临床诊断中的价值

目的 分析结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核抗体、痰涂片与痰培养联合检测在活动性肺结核诊断中的临床意义。方法 收集2014年1月至2019年12月北京结核病控制研究所门诊收治的疑似活动性肺结核患者715例,最终诊断为活动性肺结核患者412例(肺结核组),非结核病患者303例(非结核组)。715例患者均行T-SPOT.TB检测、结核抗体检测及痰涂片、痰培养检查;以临床诊断结果为标准,分析4种方法单独及联合检测的临床意义。结果 肺结核组患者中,T-SPOT.TB阳性检出率为83.7%(345/412);非结核组患者中,T-SPOT.TB阳性检出率为20.8%(63/303);两组阳性检出率差异有统计学意义(χ²=2.823,P=0.000)。T-SPOT.TB对活动性肺结核检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为83.7%(345/412)、79.2%(240/303)、84.6%(345/408)、78.2%(240/307)、81.8%[(345+240)/715];4种方法联合诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为93.7%(386/412)、50.8%(154/303)、72.1%(386/535)、85.6%(154/180)、75.5%[(386+154)/715]。T-SPOT.TB检测、结核抗体检测及痰涂片、痰培养检查的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.575、0.593、0.715,四项联合检测的AUC为0.894。结论 T-SPOT.TB检测的敏感度、阴性预测值较好,T-SPOT.TB检测联合结核抗体、痰涂片和痰培养检测的敏感度、AUC较高,联合检测可提高对肺结核的诊断效能。     

痰中结核杆菌的检测方法及临床意义

目的分析比较痰涂片、痰培养及FQ—PCR检测结核杆菌对肺结核的诊断价值。方法痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌;痰培养;FQ-PCR检测痰中TB-DNA。结果浓集法较直接法阳性率有大幅提高,培养阳性率较低,FQ—PCR法敏感度高且无假阳性。结论涂片检测结核杆菌提倡用浓集法,FQ—PCR检测痰中TB-DNA可以列入实验诊断的常规项目,涂片、培养及FQ-PCR法可以从不同的方面满足临床需要。     

结核分枝杆菌聚合酶螺旋反应检测方法的建立及效果评价

目的 建立聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)检测结核分枝杆菌的方法并评价效果。方法 针对结核分枝杆菌插入序列IS6110设计引物进行PSR检测。提取结核分枝杆菌基因组DNA,加入Bst DNA聚合酶的RM2×反应液中,在荧光定量PCR仪上于63℃反应45min,通过荧光信号进行检测。通过对引物序列进行优化,筛选出最佳引物序列,并对其检测特异性和最低检出限进行评估。于2019年5—8月间从郑州市第六人民医院连续收集200例肺结核患者痰液样本(同一患者收集3份),对痰标本进行痰涂片、固体痰培养和PSR检测。以痰培养结果为参照,评价PSR对结核病患者的检测效能。结果 通过引物序列优化,筛选出一套对结核分枝杆菌检测的PSR引物,使用该引物进行PSR的最低检出限可达到10³菌落形成单位(CFU)/ml;检测特异性实验表明该方法与15株非结核分枝杆菌无交叉反应。200例肺结核患者中,痰涂片检测阳性48例,阳性检出率为24.0%(48/200);痰培养检测阳性83例,阳性检出率为41.5%(83/200);PSR方法检测阳性87例,阳性检出率为43.5%(87/200)。以痰培养结果为标准,PSR检测结核病的敏感度和特异度分别为96.4%(80/83)、94.0%(110/117),阳性预测值为92.0%(80/87),阴性预测值为97.3%(110/113),与痰培养检测方法基本一致(Kappa值为0.898)。结论 PSR检测适用于结核分枝杆菌的快速筛查。     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22.5%、32.2%、54.8%、64.5%和87.1%;检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13.6%、18.6%、28.8%、37.3%和52.5%。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异(P<0.05)。检测34例非结核病人痰标本,涂片、培养均为阴性,而PCR和增菌PCR均有1例假阳性,假阳性率2.9%。比较PCR与增菌PCR对菌阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率,有显著性差异(P<0.05),而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性,可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

GeneXpert MTB/RIF试验与4种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的:比较GeneXpert MTB/RIF试验(Xpert试验)与4种结核分枝杆菌检测方法,探讨Xpert试验在肺结核快速诊断中的应用价值。方法:收集2015-08—2016-02武汉市肺科医院各病区送检的同一患者的3份痰标本共计536例,同时进行荧光抗酸染色涂片、结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测(TB-DNA PCR)、Xpert试验、罗氏固体培养及MGIT960液体培养检测,比较5种方法在诊断结核病中的敏感度与特异度。结果:荧光抗酸染色涂片、TB-DNA PCR、Xpert试验、罗氏固体培养及MGIT960液体培养检测结核分枝杆菌的敏感度分别为42.97%、57.57%、62.43%、54.59%和62.43%;特异度分别为95.27%、99.21%、98.42%、88.97%及88.19%。在涂片阳性肺结核中,Xpert检出率为99.37%(158/159),MGIT960培养检出率为98.11%(156/159);在涂片阴性肺结核中,Xpert检出率为34.60%(73/211),MGIT960培养检出率为35.55%(75/211)。在220例Xpert检测与培养均阳性的标本中,两者均耐药为32例,均敏感为179例,Xpert利福平耐药而比例法敏感为8例,Xpert利福平敏感而比例法耐药为1例。2种方法检测利福平耐药具有高的一致性(Kappa值0.85)。结论:Xpert试验在肺结核诊断中具有与金标准液体培养一致的敏感性,同时快速筛查利福平耐药结核,对控制耐药结核的传播具有重要的临床价值,值得在临床推广应用。     

结核感染T细胞斑点试验、Xpert Mtb/RIF检测技术在老年肺结核中的诊断价值

目的评价结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT)、结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)在老年肺结核中的诊断价值。方法纳入2016年9月至2016年12月在广州市胸科医院住院的老年可疑肺结核患者81例。采集痰标本同时送检抗酸染色涂片、金标准培养并行金标准比例法传统药敏试验、荧光定量PCR和Xpert Mtb/RIF检测,并抽血送检血T-SPOT。以临床最终诊断结果为金标准,分析各种方法诊断老年肺结核的敏感度、特异度。结果 81例老年可疑肺结核患者中,最终诊断肺结核患者44例,非结核肺病患者37例。以临床最终诊断结果为金标准~([10]),血T-SPOT、痰Xpert MTB/RIF、痰荧光定量PCR、痰涂片和痰培养诊断老年肺结核的灵敏度分别为93. 18%、45. 45%、42. 22%、22. 73%和50. 00%;特异度分别为63. 89%、100%、94. 59%、83. 78%和81. 08%。结论血T-SPOT在诊断老年肺结核中有较高的灵敏度,但特异度稍差;痰Xpret MTB/RIF较痰涂片灵敏度提高,特异度达100%。     

肺结核病的快速实验室诊断

检出痰中含有结核杆菌是临床诊断肺结核或鉴别肺结核与其他肺病的重要依据。痰中结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）的检测方法常规采用痰涂片及痰培养。涂片虽简单易行，但阳性率低，培养虽为金标准，但周期太长，均难以满足临床需要。近年来，作为直接检测分枝杆菌、种系鉴定和药敏试验的许多分子学方法得到长足发展，这些方法能将诊断时间从几周大大缩短到几天、几小时。其中，实时动态荧光定量PCR（FQ-PCR）因其技术成熟具有较高的灵敏度和特异性，已逐渐应用于临床。为明确使用FQ—PCR技术检测患者痰液、血液标本时在诊断肺结核病中的意义，我们对102例肺结核患者的痰和外周血标本进行MBDNA检测．其结果报道如下。     

肺结核病患者痰涂片及痰培养检测结果分析

目的 分析肺结核患者痰涂片及痰分离培养抗酸杆菌检验情况,为确诊和控制结核病提供科学诊断依据。方法 2008-06/2011-05四川省双流县结核病门诊就诊的可疑肺结核（可疑者）2 418例及化疗期间肺结核患者（治疗者）649例,总计3 067例,分别对每例就诊者进行痰涂片和培养检测。结果 3 067例就诊者中查出抗酸杆菌阳性777例,总阳性率为25.33%（777/3067）,其中痰涂片阳性（涂阳）524例,痰培养阳性（培阳）651例,阳性率分别为17.09%和21.23%。2 418例可疑者涂阳383例,培阳619例,阳性率分别为15.84%（383/2418）和25.60%（619/2418）,培阳高于涂阳,差异有统计学意义（P〈0.01）。649例肺结核治疗者涂阳141例,培阳32例,阳性率分别21.73%（141/649）和4.93%（32/649）,涂阳高于培阳,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 可疑肺结核者痰培阳高于涂阳,而肺结核治疗者涂阳高于培阳,痰涂片抗酸杆菌检测特异性高而敏感性低,分离培养敏感性、特异性均较高。     

血T-SPOT.TB联合肺泡灌洗液TbDNA检测对诊断肺结核的应用价值

目的分析血T-SPOT.TB联合肺泡灌洗液(BALF)Tb DNA检测对肺结核诊断的价值。方法选择2013.3~11月86例疑似肺结核患者,经确诊后分为肺结核组46例、肺炎组40例,均行T-SPOT.TB、BALF-Tb DNA、BALF涂片、痰涂片、PPD、结核抗体检测,对各检测结果进行对比,并行T-SPOT.TB与BALFTb DNA联合检测与单用检测、涂片法、PPD、结核抗体对比分析。结果血T-SPOT.TB、BALF-Tb DNA敏感性分别为84.8%、80.4%,特异性分别为80.0%、77.5%,两者联合检测敏感性为100.0%,阳性预测值为97.1%,阴性预测值为100.0%,与单用检测对比,差异有统计学意义(P0.05),与涂片法、PPD、结核抗体对比,存在显著差异(P0.01)。结论血T-SPOT.TB与BALF-Tb DNA联合检测提高了肺结核的诊断阳性率,弥补对方不足,减少肺结核的漏诊、误诊,是一个有前途的检测方法。     

53例肺结核患者规律治疗中痰菌转阳的临床分析

目的 分析肺结核患者规律治疗过程中痰菌转阳的原因。 方法 回顾性分析53例临床规律治疗过程中痰菌转阳病例。 结果53例病人中,菌阴转阳病例18 例：第2个月转阳的8例（44.4%）,其中原始耐药3例（16.7%）;第3个月转阳的2例（11.1%）;第5个月转阳8例（44.4%）。菌阳病例35例：第3个月转阳的13例（37.1%）;第5个月转阳的12例（34.3%）;第6个月转阳的8例（22.9%）,其中3例病灶恶化（7.7%）,1例由于免疫疾病服用大量激素,且耐药;第8个月及以后转阳的2例（5.7%）。支气管结核、耐药、合并糖尿病、复治是肺结核痰涂片转阳的主要原因。 结论 结核病治疗中要加强痰菌观察,及时发现转阳病例。     

ELISPOT辅助临床结核病诊断价值分析

目的探讨ELISPOT在结核病诊断中的应用价值。方法分离TB患者54例和非TB患者52例的外周血单个核淋巴细胞,并采用以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT-6和CFP-10为抗原的ELISPOT试验技术进行结核分枝杆菌（Mtb）特异性T淋巴细胞免疫反应的检测,同时做痰涂片、痰培养、PPD试验和胶体金法检测。以临床明确诊断为标准,比较分析评价不同检测方法的敏感度和特异度。结果 TB-ELISPOT的敏感度（Se）90.7%、特异度（Sp）96.15%、阳性预测值（PPV）0.96、阴性预测值（NPV）0.91、阳性似然比（＋LR）23.55和阴性似然比（-LR）0.1;胶体金法的Se 59.26%、Sp 88.46%、PPV0.84、NPV 0.68、＋LR 5.14和-LR 0.46;PPD试验的Se 64.81%、Sp 82.69%、PPV 0.80、NPV 3.74、＋LR 0.69和-LR 0.43;痰涂片的Se 40.74%、Sp 100.00%、PPV 1.0、NPV 0.62、＋LR〉10和-LR0.52;痰培养的Se 25.93%、Sp 100.00%、PPV 1.0、NPV 0.57、＋LR〉10和-LR0.77。统计结果显示ELISPOT检测的敏感度明显高于其它常用结核病诊断方法。ELISPOT在痰涂片和痰培养阴性的TB患者中的阳性检出率分别为84.38%和87.5%。结论 ELISPOT是一种敏感度和特异度均较高的结核病免疫学辅助诊断方法,有助于提高诊断结核感染的阳性检出率,且耗时短,可作为临床结核病诊断尤其是菌阴结核病的重要辅助手段之一,具有较高的临床推广价值。     

抗酸染色对肺结核的诊断价值

目的 了解结核分枝杆菌抗酸染色对肺结核的诊断价值。方法对98例确诊为继发型肺结核和血行播散型肺结核患者,统计分析痰液及纤支镜刷检液涂片抗酸染色情况。结果98例中抗酸染色阳性38例,阴性60例。10例经纤支镜刷检液涂片抗酸染色中,阳性6例。结论抗酸染色是诊断肺结核的常规方法,纤支镜刷检液涂片明显高于痰涂片法。     

荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究

目的评价荧光定量PCR技术在肺结核病诊断中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、金胺O染色荧光镜检和培养法同时检测860例肺结核患者的痰标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR检测灵敏度可达10~100 cfu/ml,重复性好,对其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。肺结核患者痰标本荧光定量PCR检测阳性率要高于金胺O染色荧光镜检和培养法的阳性率,差异有统计学意义(P0.01)。结论应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的方法之一。     

117例HIV／AIDS病人合并肺结核的临床特点

目的分析艾滋病病毒（HIV）感染者／艾滋病（AIDS）病人合并肺结核的临床特点,提高诊疗水平。方法对1997年7月至2011年7月间,住院的HIV／AIDS合并肺结核的病人,回顾分析其末梢血CD＋T淋巴细胞（简称CD4细胞）计数与结核菌素纯蛋白衍生物试验（PPD试验）、痰涂片、结核抗体以及纤维支气管镜灌洗液涂片的关系。结果117例病人中,cD。细胞计数〈50个／mm3时,PPD试验无阳性反应,痰涂片阳性率为20．0％（3／15）,结核抗体阳性率为26．7％（4／15）;CD4细胞计数在50～200个／mm3时,PPD试验阳性率为25．0％（16／64）,痰涂片阳性率为40．6％（26／64）,结核抗体阳性率为35．9％（23／64）;CD4细胞计数在200～500个／mm3时,PPD试验阳性率为55．3％（21／38）,痰涂片阳性率为60．5％（23／38）,结核抗体阳性率为52．6％（20／38）,其中65例痰涂片阴性患者经纤维支气管镜灌洗液涂片有29例（44．6％）抗酸杆菌阳性;CD4细胞计数〉500个／mm3时,痰涂片阳性率为71．4％（5／7）,结核抗体阳性率为57．1％（4／7）。结论CD4细胞计数在500个／mm3以上时,痰涂片阳性率、结核抗体阳性率与HIV阴性肺结核检测相近,CD4细胞计数在200个／mm3以下时,临床表现较为复杂,数值越低合并肺结核症状越重,PPD试验反应、痰涂片、结核抗体以及纤维支气管镜灌洗液涂片阳性率越低。     

实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对肺结核诊断价值的研究

目的 检测实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对结核病诊断的作用。 方法 收集172例疑似肺结核患者的痰液标本2份/例,1份进行涂涂片金-胺染色,另一份进行罗氏培养基培养与菌种鉴定及SAT法检测结核分枝杆菌,如SAT法和培养结果不符合则使用痰荧光定量PCR法（FQ-PCR)进行复核。 结果 172例入组患者中有156例根据临床及实验室结果确诊为肺结核病。如果以Mtb培养鉴定结果和荧光PCR结果作为判定金标准,SAT检测的敏感度和特异度分别为97.8%（89/91）和97.5%（79/81）。如以临床诊断为标准,SAT诊断结核的敏感度为58.3%（91/156）,特异度为100.0％（16/16）。对于痰菌阳性肺结核患者,SAT 阳性率为84.9%（79/93）;对于痰菌阴性患者,SAT的阳性率为19.0%（12/63）。 结论 SAT法可以作为临床对结核病的辅助诊断方法。     

结核抗体lgG/lgM检测在肺结核和肺外结核中的诊断价值

目的 探讨异种血清抗体检测技术在结核病诊断中的应用价值。方法 采用IgG/IgM抗体试剂盒分别检测102例结核病患者(包括73例肺结核和29例肺外结核)、223例其他肺部疾病患者和100例对照者结核感染情况,以临床诊断为标准评价该方法的敏感度和特异性,同时分别与痰菌培养及痰涂片平行检验的结果作比较,统计学分析采用χ²检验。结果 结核抗体IgG/IgM检测结核病患者的敏感度为74.51%、特异度为91.64%。结核抗体IgG/IgM检测肺结核和肺外结核的敏感度分别为82.19%、55.17%,肺内和肺外结核的敏感度差异有统计学意义(P＜0.05),结核抗体lgG/IgM检测结核患者阳性检出率明显高于痰培养法和痰涂片法(P<0.05)。102例结核病患者年龄段分组分析,少年组和老年组检出率分别为58.33%、36%,远低于青年组和中年组的96.15%和89.74%。不同年龄组间进行卡方比较分析显示,P＜0.05,差异有统计学意义。425例标本中,共发现8例非结核分枝杆菌,其中6例胞内分枝杆菌, 2例脓肿分枝杆菌,lgG/lgM抗体检测均为阴性。结论 IgG/IgM血清抗体检测肺内、外结核具有快速方便、经济和较高的敏感度,适合用于临床结核筛查。