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1.
钙通道拮抗剂和钙调素拮抗剂对白血病耐药细胞的耐药基因和细胞内Ca~(2+)浓度的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨白血病耐药细胞的发生机制与细胞内钙离子浓度的关系。方法:分别用Fura2/Am方法测定细胞内游离钙浓度及dot杂交法测定细胞mdr1mRNA表达。结果:发现CAs(Ver或Dil)有降低肿瘤细胞内Ca2+浓度和降低mdr1mRNA表达的作用,CaMAs虽无降低Ca2+浓度的作用,但可使mdr1mRNA表达降低,从而降低了K562/VCR细胞的耐药性。结论:细胞内Ca2+浓度的变化可能与MDR产生有一定关系;CAs导致的Ca2+浓度的变化可能也是其逆转肿瘤细胞MDR的机理之一,CAs及CaMAs尚可影响耐药性肿瘤细胞的mdr1mRNA表达 相似文献
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细胞内游离Ca2+和cAMP浓度在胃癌细胞凋亡过程中的变化特点 总被引:10,自引:0,他引:10
目的:探讨胃癌细胞凋亡过程中细胞内游离Ca^2+(「Ca^2+」i)浓度和环磷酸腺苷(CAMP)浓度的变化特点及意义。方法:选择顺铂诱导胃癌细胞凋亡,采用光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡;Fura-2荧光负荷技术测「Ca^2+」i,竞争性蛋白结合法测cAMP浓度。结果:顺铂浓度为2μg/ml作用于胃癌细胞24小时出现典型的凋亡改变,即凋亡小体、细胞皱缩、染色质固缩和片段化,DNA梯状 相似文献
3.
目的 初步探讨高氧刺激下PAC1对人乳腺癌细胞株MDA-MB435的凋亡诱导作用及其机制。方法 通过脂质体法转染目的质粒pcDNA3.1(+)/PAC1进入人乳腺癌细胞株MDA MB435,筛选稳定表达PAC1的细胞克隆,并使用Westernblotting法鉴定高表达PAC1的MB435细胞克隆。应用台盼蓝染色法检测不同细胞在H2O2处理后的存活率变化,同时进一步使用Westernblotting法检测MB435/PAC1细胞克隆经H2O2处理后其ERK1/2磷酸化的水平。结果 在细胞克隆MB435/PAC1-C2和MB435/PAC1-C6中均有高水平的PAC1表达,这些高表达PAC1的肿瘤细胞经高氧化合物H2O2刺激后细胞存活率相对于对照组均明显降低(P<0.01),而且PAC1的高表达可以引起细胞内MAPK激酶ERK1/2的活性受到抑制,使磷酸化水平降低。结论 PAC1可以通过抑制ERK1/2的磷酸化水平而介导细胞对高氧刺激的反应,从而诱导细胞发生凋亡。 相似文献
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目的 探讨慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)细胞黏附分子L-selectin(CD62L)、Mac-1(CD11b)、LFA-1(CD11a)的表达与CML的发生、疗效的关系。方法 采用三色流式细胞仪检测34例CML骨髓CD34^+CD38^--+细胞表达LFA-1、Mac-1、L-selectin的表达。结果 初治的CML34^+CD38^--+细胞黏附分子L-selectin、LFA-1明显低于正常造血细胞的表达。L-selectin的表达与Ph’阳性细胞数呈负相关(r=-0.68)。8例CML经干扰素治疗后,其L-selectin、Mac-1、LFA-1的表达均正常。结论 CMLCD34阳性细胞黏附分子L-selectin、LFA-1的低表达反映了CML细胞 相似文献
6.
逆转录病毒载体介导的核酶基因转移有效恢复肿瘤细胞的?… 总被引:6,自引:1,他引:5
目的:为了研究抗MDRI核酶逆转肿瘤细胞中P-gp介导的多重耐药性(MDR)的作用。方法:首先,我们建立了单纯由P-gp介导的、20倍耐药的人Daudi淋巴瘤细胞的模型-Daudi/MDR20。同时我们将表达不同抗MDR1核酶的逆转录病毒载体(N2A+tRNAimet-196MDR1-Rz,N2A+tBNAimet-196MDR1-sRz和 N2A+tRNAimet-iMDRI-sRz)转染到GP+envAM12细胞中进行包装,获得了高滴度的病毒[(1,1~2.5)×10cfu/ml]。后者用于感染Daudi/MDR20。结果:通过一系列分子生物学检测证实,携带3种核酶的逆转录病毒不但整合到DNA中,而且也高水平表达相应的核酶tRNAimet-iMDR1-sRz,tRNAimet-196MDR1-sRz和tRNAimet-196MDR1-Rz。结果表明,tRNAimet-iMDR1-sRz和tRNAimet-196MDR1-sRz转导的Daudi/MDR20细胞完全逆转了对长春新碱的敏感性,并伴随着MDR1 mRNA和P-gp表达的阻断。结论:逆转录病毒载体高效介导的抗MDR1核酶的基因转移能够完全逆转肿瘤细 相似文献
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目的:观察不同浓度雌激素对卵巢癌细胞系乳腺癌/卵巢癌易感基因(BRCA1)蛋白表达的影响。方法:采用免疫组化及计算机图象分析方法,检测体外不同浓度(10^-9mol/L ̄10^-6mol/L)的17-β雌二醇(E2)对卵巢癌OVCAR3和SKOV3细胞系BRCA1蛋白表达的影响。结论:雌激素能够诱导卵巢癌OVCAR3和SKOV3细胞系MRCA1蛋白的表达,可通过该方法探索治疗卵巢癌的新途径。 相似文献
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目的 探讨特异性靶向MDR1基因的siRNA逆转耐药型卵巢癌细胞株多药耐药的可行性。方法 设计靶向于MDR1基因的3条siRNA,用脂质体转染试剂分别转染P gp阳性表达的卵巢癌SKOV3/AR细胞,RT PCR检测转染后48小时MDR1mRNA的变化,流式细胞技术检测转染后72小时P gp的表达情况;MTT法检测转染前及转染后48小时SKOV3/AR细胞对阿霉素、紫杉醇的敏感性。结果 与空白对照组相比,含靶向MDR1基因的siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组的MDR1mRNA表达水平均有显著下降(P<0.05),对MDR1mRNA的抑制率分别为43.3%、41.3%和58.5%,其中siRNA-3组对靶基因的抑制作用较强,而空白对照组、脂质体组和阴性对照siRNA组靶基因表达水平则无明显变化。将siRNA/MDR1-3转染细胞72小时后可观察到P-gp阳性表达率显著降低(P<0.05),其抑制率为37.95%,而空白对照组、脂质体组及阴性对照siRNA组P-gp表达无明显降低(P>0.05)。siRNA 3干扰SKOV3/AR细胞后,阿霉素和紫杉醇的IC50分别下降为干扰前的1/3.56和1/3。结论 RNAi在体外实验能有效逆转卵巢癌细胞的耐药,为其在实体瘤耐药逆转的运用提供了实验依据,值得进一步研究。 相似文献
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为逆转多药耐药mdr-1基因产物P-gp蛋白所介导的肿瘤细胞对多种化疗药物的耐受性,作者设计合成了一种能切割mdr-1mRNA第196密码子GUC序列的锤头状核酶(Ribozyme),并定向克隆于逆转录病毒载体。经PA317包装后,病毒上清感染BEL-7402/DOX细胞株。经Northernblot杂交证实,PA317及转化的BEL-7402/DOX细胞中均有病毒的高表达,RT-PCR结果表明,转化细胞中mdr-1mRNA与未转化细胞相比明显减少甚至不能扩增出来,流式细胞技术检测发现转化细胞表面P-gp的表达与非转化细胞相比明显下降。MTT法检测发现转化细胞对多种化疗药物重新产生较高的敏感性。结果提示,此Ribozyme转化BEL-7402/DOX细胞后能有效抑制mdr-1基因的表达,使已产生耐药的肝癌细胞的多药耐药表型发生逆转。 相似文献
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Bcl-2基因及其家族Bax,Bcl-Xl和Fas/Apo-l,P16的检测在急性白血病中的临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:为了解白血病凋亡正、负反馈网络中的问题与临床的关系,研究了抑制凋亡的基因Bcl2及其家族Bax,BclXl以及诱导凋亡的基因Fas/Apo1,P16。方法:采用细胞免疫组化,WesternBlot,以及NorthernBlot的方法。结果:发现在AML组和ALL组,Bcl2抗原表达均明显高于正常(P<001),回顾性分析AMLCR组其明显低于NR组(P<001)。蛋白印迹CR组Bcl2表达虽然降低,但和NR组比较无统计学意义(P>005)。Bcl2mRNA的表达CR组明显低于NR组(P<0.01)。Bax的表达在免疫组化中白血病明显低于正常(P<001),但在CR组与NR组,免疫组化,蛋白印迹,BaxmRNA的表达,均无差异(P>005)。但BclXlmRNA的表达两组间有明显差异(P<001)。Fas/Apo1的表达为白血病组低于正常(P<001),但在CR与NR组中,免疫组化与蛋白印迹分析均无统计差异(P>005)。P16的表达为白血病组低于正常组(P<001),但在CR组与NR组中无统计学意义(P>005)。结论:Bcl2抗原以及Bcl2mRNA,Bcl 相似文献
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本文测定了615近交小鼠肝癌腹水瘤Hca-F25/CL-A2细胞经DMSO促分化前后胞液磷酸化酶a活性和Ca^2+浓度。结果发现,经DMSO诱导分化后,胞液磷酸化酶a活性明显升高,而胞液Ca^2+浓度则显著下降。结果提示,肿瘤细胞分化前后,激活磷酸化酶a的磷酸化酶b激酶对Ca^2+的敏感性不同,使磷酸化酶a活性不能与胞液Ca^2+浓度同时升降。 相似文献
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目的:设计切割ki-ras^G12V mRNA的特异性ribozyme(Rz217),明确其对癌基因ki-ras^G12VmRNA的细胞内外切割活性,为以ki-ras^G12VmRNA为特异性靶分子的基因治疗及癌基因ki-ras的功能研究提供一种新的途径。方法:依Symons总结的“锤头结构”原理,设计一种能特异性切割ki-ras^G12VmRNA的ribozyme,利用DNA重组技术构建ki-ras^G12V外显子1mRNA,在含Mg^2+溶液中ribozyme Rz217对其靶RNA分子进行切割。以RT-PCR对感染ribozyme Rz217真核表达质粒的细胞kiras^G12V mRNA进行半定量分析。结果:ki-ras^G12V外显子1体外转录mRNA分子,能被ribozyme Rz217定点切割而野 相似文献
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反义转染细胞HL^R60—9的c—myc基因表达及其生物大分子的… 总被引:1,自引:0,他引:1
作者构建了体外能双向转录c-myc基因的重组质粒PGC,以制备RNA探针用于检测c-myc反义RNA转染细胞HL^R60-9的c-myc及反义RNA表达,结果显示,Cd^2+诱导的HL^R60-9细胞的c-myc反义RNA表达随Cd^2+浓度及作用时间的增加而增强,但c-mycmRNA表达在诱导过程中逐渐减少,两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出c-mycP62蛋白的表达,^3H-TdR,^3H 相似文献
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实体肿瘤MDR1多药抗药基因表达RT—PCR检测的临床意义 总被引:3,自引:0,他引:3
多药耐药性是化疗失败的主要原因。采用RT-PCR核酸扩增技术检测了18例实体肿瘤,16例恶性胸腹水肿瘤细胞多药抗药基因mRNA的表达水平,并分析了表达水平与化疗药物治疗反应的关系。34例中MDR1不表达(—)3例,低表达12例,中度表达10例和高表达9例。CR3例MDR1表达均为(+)和(-),并初步观察到,肿瘤组织中MDR1中、高表达临床无效(NR)的占88.9%(16/18例);MDR1不或低表达临床反应CR/PR的81.1%(13/16);MDR1阴性临床CR的2例,PR的1例。本组病例中有8例无化疗史,其中2例检测示中度表达(++),临床治疗无效,为原发耐药。2例NR的MDR1表达为(+)。结果提示,RT-PCR法检测肿瘤组织MDR1的mRNA表达水平,对临床预测化疗反应及判断预后可能有所裨益。 相似文献
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肝癌耐药细胞的诱导及其生物学特性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的诱导肝癌耐药细胞。研究其生物学特性。方法用“剂量递增筛选法”诱导肝癌耐药细胞;斑点杂交法等研究MDR1mRNA的表达及GST的活性。结果经过近9个月的连续培养和137次的传代,诱导出耐ADR28倍的BEL┐7402/ADR细胞,并对5┐FU及VCR亦有不同的耐药性。生物学特性研究结果发现,BEL┐7402/ADR细胞GST含量,较另两种细胞的GST明显增高(P<0.01)。BEL┐7402/ADR细胞内的MDR1mRNA表达,与BEL┐7402相比具有统计学差异(P<0.05)。结论诱导的肝癌耐药细胞BEL┐7402/ADR具有明显的多药耐药性 相似文献
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维甲类化全物Ro13—7410对HL—60细胞的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨合成的第三代维甲类化合物(E)-4「2-5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2-naphthalenyl-1-propenyl」benzoic acid(Rol3-7410)对白血病细胞HL-60的影响。方法:采用NBT还原能力测定检测细胞分化,电和程序性细胞死亡检测试剂盒鉴别凋亡细胞,Fura-2/AM荧光法测定胞浆内Ca^2+浓度,PCR-E 相似文献
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目的:探讨合成的第三代维甲类化合物(E)4[25,6,7,8tetrahydro5,5,8,8tetramethyl2naphthalenyl1propenyl]benzoicacid(Rol37410)对白血病细胞HL60的影响。方法:采用NBT还原能力测定检测细胞分化,电镜和程序性细胞死亡检测试剂盒(PCDasaykit)鉴别凋亡细胞,Fura2/AM荧光法测定胞浆内Ca2+浓度,PCRELISA试剂盒检测端粒酶活性,流式细胞术测定细胞周期分布。结果:Rol37410诱导HL60细胞分化的同时伴随细胞凋亡的发生。在HL60细胞凋亡和分化的过程中胞浆内Ca2+浓度增高,端粒酶活性明显受抑,多数细胞被阻止在G2/M期。结论:Rol37410可诱导HL60细胞凋亡和分化的同时发生。胞浆内Ca2+浓度的增高,端粒酶活性的降低以及细胞周期的阻止与细胞凋亡和分化的诱导有关 相似文献