Sp1反义寡核苷酸抑制Jurkat T细胞hTERT表达而抑制端粒酶活性(英文)

目的:研究转录因子Sp1反义寡核苷酸(ODN)对Jurkat T细胞端粒酶活性和端粒酶催化亚基hTERT表达的影响。方法:设计Sp1反义ODN并用脂质体转染细胞,用端粒酶PCR-ELISA方法检测端粒酶活性;用逆转录PCR方法检测Sp1和hTERT mRNA水平,用Western blot检测蛋白水平。结果:sp1反义ODN(1μmol/L)明显抑制Jurkat T细胞Sp1 mRNA和蛋白表达,抑制率分别为44.8％(P<0.05)和57％(P<0.01),并抑制hTERT mRNA表达,抑制率为43.7％(P<0.01);当浓度从0.25到2.0μmol/L,Sp1反义ODN对端粒酶活性抑制率从27.1％到64.6％,呈明显的剂量依赖性关系。结论:Sp1反义寡核苷酸通过抑制hTERT mRNA表达而抑制端粒酶活性。     

端粒酶活性与宫颈癌演进的关系

目的：研究端粒酶表达及其活性与宫颈癌发生发展的关系。方法：应用端粒复复序列扩增－酶联免疫吸附法（TRAP－ELISA）对30例宫颈癌和15例宫颈上皮内肿瘤组织的端粒酶活性进行检测，以吸光度（A）值判断端粒酶活性，同时检测20例正常宫颈上皮的端粒酶活性作为对照。结果：宫颈癌、宫颈上皮内肿瘤和正常宫颈上皮组织中端粒酶表达的阳性率分别为93．3％、26．7％和0％，组间比较，差异有显著性（P＜0．01）。宫颈癌组织的端粒酶活性明显高于宫颈上皮内肿瘤（P＜0．01）。结论：端粒酶的表达及其活性的进行性增高与宫颈癌的发生发展密切相关。     

乳腺癌患者端粒酶活性表达与c-Myc基因的相关性

人类端粒酶逆转录酶（hTERT）是新近克隆的端粒酶催化亚单位,是端粒酶活性的限速因素。在端粒酶活性呈阳性的肿瘤中常见hTERT的高表达。研究报道大多数乳腺癌中有端粒酶活性和hTERT的表达,但是其阳性定位和调控机制尚不清楚。本研究采用PCR-ELISA法检测端粒酶的活性和RT-PCR检测端粒酶逆转录酶mRNA的表达．流式细胞术检测c-Myc蛋白的表达。探讨乳腺癌中hTERT表达的意义及其与癌基因c-Myc的关系。     

端粒酶在乳腺组织中的表达

目的：检测端粒酶在乳腺组织中的表达，探讨其在诊断和预后中的意义。方法：采用TRAP－ELISA方法，对109例乳腺癌、30例正常乳腺组织及囊性增生病、30例乳腺腺纤维瘤和10例乳腺癌前病变进行端粒酶活性检测。结果：正常乳腺组织及囊性增生病无端粒酶活性，乳腺腺纤维瘤有23．33％端粒酶呈弱表达，乳腺癌前病变有4例端粒酶表达。乳腺癌中88．07％可以检测到端粒酶活性，随着临床分期的增加，端粒酶阳性率不断上升。其中端粒酶阳性率在临床I期为64．29％，Ⅱ期及以上为91．58％（P＜0．05）。端粒酶阳性率在腋淋巴结转移阴性组中为75．56％，而转移阳性组中为96．88％（P＜0．01）。端粒酶表达在ER（－）组与ER（＋）组间无明显差别。端粒酶表达在PgR(-)为95．08％，在PgR( )组为79．17％（P＜0．01）。结论：正常乳腺组织中无端粒酶表达。从乳腺癌癌前病变至各期乳腺癌中，端粒酶表达逐渐上升，端粒酶激活可能是乳腺癌形成和发展中的关键步骤，可以为乳腺癌诊断提供重要依据，在其预后判断中有着重要作用。     

食管癌组织中端粒酶活性及PCNA的表达和意义

目的：探讨食管癌组织中端粒酶活性和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达关系及临床意义。方法：采用一杂交技术和免疫组织化学技术检测端粒酶活性，PCNA在30例食管癌中的表达情况。结果：（1）食管癌组织中端粒酶mRNA的阳性表达率为93．3％（28／30），明显高于癌旁组织（距肿瘤3cm处），正常黏膜组织（距肿瘤8cm处），经统计学处理有显著性差异（P＜0．001）；端粒酶活性的表达强度与肿瘤的分化程度，浸润深度，临床分期及淋巴结转移显著相关（P＜0．05），与性别、年龄无相关性。（2）PCNA阳性表达率为93．3％（28／30），其表达强度与肿瘤的分化程度、浸润深度显著相关（P＜0．05），与淋巴结转移无明显相关性。（3）端粒酶活性表达与PCNA密切相关（P＜0．05）。结论：端粒酶的激活在食管癌的发生发展中有一定作用，检测端粒酶活性和PCNA的表达强度对食管癌的诊断，治疗及预后判断有重要意义。二者联合检测更有价值。     

人食管鳞癌端粒酶活性的临床研究

目的：探讨端粒酶活性与食管癌临床生物学行为关系及临床应用价值。方法：采用端粒重复扩增－酶免疫吸附法检测人食管鳞癌组织、癌旁组织及正常食粘膜上皮组织中端粒酶活性表达。结果：35例食管组织中端粒酶阳性者占86．6％（31／35），癌旁组织中阳性率为17．1％（6／35），正常食管组织端粒酶活性均为阴性。当癌侵及肌层及外侵后，其阳性表达率高于局限于粘膜及粘膜下层者（P＜0．01）。伴淋巴结转移标本中其阳性率高于无淋巴结转移者（P＜0．05）。端粒酶活性与肿瘤组织类型，分化程度等无明显相关（P＞0．05）。结论：端粒酶活性在人食鳞癌的发生、发展进程中发挥重要作用，端粒酶有可能成为食管癌诊断和判断预后的生要生物标志物和治疗新靶点。     

端粒酶逆转录酶基因hTERT知膀胱癌组织中的表达及意义

为研究端粒转录酶基因hTERT在膀胱移行细胞癌（TCC）组织中的表达，探讨其与TCC生物学行为的关系，应用免抗人hTERT多克隆抗体及S－P免疫组化法检测其在56例TCC及10例下膀胱粘膜组织的表达情况。结果,hTERT在TCC中阳性表达率为64．3％，与正常膀胱粘膜组织表达率0％相比，差异有显著性（P＜0．05）。hTERT阳性表达率与TCC病理分级、临床分期及复发显著相关性（P＜0．05）。结论：端粒酶逆转录酶基因hTERT表达异常可能与膀胱肿瘤的发生、发展有关，检测hTERT表达可作为预测膀胱肿瘤预测复发的潜在指标。     

联合干扰人端粒酶催化亚基对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的探讨基因的联合干扰对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法将转染细胞分为共四组:psi-control对照组(A组)、psi-端粒酶催化亚基(hTERT)1组(B组)、psi-hTERT1和psi-hTERT2共转染组(C组)、psi-hTERT1和psi-端粒酶调节相关蛋白(TRAP)1共转染组(D组)。采用RT-PCR及Western blot分别检测hTERT mRNA和蛋白表达,端粒重复序列扩增-PCR法检测端粒酶活性,MTT法检测SGC-7901细胞增殖。结果与A组相比,B组、C组hTERT mRNA和蛋白表达、端粒酶活性降低(P<0.05),细胞增殖减慢,细胞凋亡增加;而D组各指标与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合干扰的效果可能与剂量和目的基因有关。     

端粒酶原位杂交在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的研究端粒酶在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达,探讨它们在卵巢肿瘤发生发展中的作用及临床意义。方法采用S-P免疫组织化学法原位杂交检测端粒酶在8例卵巢良性上皮肿瘤、26例卵巢恶性上皮肿瘤组织中的表达情况。结果26例卵巢恶性上皮肿瘤组织中,端粒酶阳性表达率为85%,显著高于卵巢上皮良性肿瘤（P〈0.01）,端粒酶的表达强度与卵巢上皮恶性肿瘤的病理分级与临床分期无相关性（P〉0.05）。结论端粒酶在卵巢上皮性恶性肿瘤组织中有广泛表达,端粒酶活性与卵巢癌的发生发展密切相关。     

胰腺癌组织端粒酶逆转录酶的表达与临床病理的关系研究

目的研究胰腺癌组织端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达与临床病理的关系。方法回顾性分析我院在2009年6月至2014年2月间收治的46例胰腺癌患者的临床资料,对胰腺癌病灶大小、具体部位与临床分明、组织分级进行描述。利用SABC免疫组化,对hTERT表达进行检测。同时取46例患者癌旁组织进行对照。结果经研究发现,患者肿瘤部位和hTERT表达无关联(P>0.05)。通过对胰腺癌患者胰腺组织观察可得知,有39例患者呈现hTERT表达为阳性,阳性率为84.8%,在癌旁组织中,有12例标本呈现为阳性,阳性率为26.1%。hTERT表达在临床分期中具有统计学意义(P<0.05),其在Ⅰ期的hTERT表达阳性率最低,明显低于Ⅲ期和Ⅳ期。它与肿瘤分级、大小、位置无关联。结论人端粒酶逆转录酶在胰腺癌组织中表达较高,它的表达与肿瘤临床分期有很大关联,这表明hTERT表达在肿瘤组织与癌旁组织中的表达差异非常大。     

汉黄芩素对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤生长及端粒酶活性的抑制作用

目的端粒酶在多种肿瘤细胞中高表达,可能是肿瘤分子靶向治疗的一个理想靶点。已有的研究表明,汉黄芩素体外具有抑制肿瘤细胞端粒酶活性和肿瘤细胞增殖的作用。该研究旨在评价汉黄芩素对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长及端粒酶活性是否具有抑制作用。方法将移植人卵巢癌SKOV3细胞的裸鼠随机分为5组:汉黄芩素高剂量组(600mg·kg-1)、汉黄芩素低剂量组(300mg·kg-1)、空白对照组、顺铂治疗组(3mg·kg-1)和联合用药(顺铂+汉黄芩素)组,定期检测裸鼠的体重及肿瘤体积,裸鼠移植瘤组织分别提取DNA、RNA和蛋白质,用Southern印迹杂交法测定端粒长度、RT-PCR扩增观察端粒酶基因hTERT的表达、TRAP-PCR-银染法测定端粒酶活性。结果动物实验表明,汉黄芩素对SKOV3移植瘤有明显的抑瘤作用,高剂量组抑瘤率达56.67%(与对照组比较,P=0.002);低剂量组抑瘤率达38.10%(P=0.019),化疗组抑瘤率达50.83%(P=0.004),联合用药(顺铂+汉黄芩素)组的抑瘤率为66.9%,优于单独使用组(P=0.002);不同浓度汉黄芩素组肿瘤组织的端粒长度与空白对照组比较差异无显著性,汉黄芩素对瘤体端粒酶基因hTERT表达、端粒酶活性均有抑制作用,而且作用强度与剂量有关。结论汉黄芩素在体内具有抗肿瘤和抑制端粒酶活性的作用,抑制强度与剂量成正比,抑瘤率与顺铂合用有相加的作用。     

hTERT mRNA在胃癌中表达及其与预后的关系

目的 了解人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA在胃癌中的表达情况及其与胃癌侵袭、转移和预后的相关性.方法 以52例胃癌患者为研究对象,应用RT-PCR技术检测hTERT mRNA在胃原发癌、癌旁正常胃黏膜及淋巴结转移癌中的表达,并对所有病例进行随访,分析其与胃癌侵袭、转移和预后的相关性.结果 hTERT mRNA在胃原发癌和淋巴结转移癌中表达明显增高,而在癌旁正常胃黏膜中表达极低或不表达,差异有统计学意义（P＜0.05）.hTERT mRNA表达在浸润癌,癌浸透浆膜面,浆膜侵犯面积＞20 cm2、淋巴结分期（7th TNM分期）晚者（N3）中明显增高（P＜0.01）.hTERT mRNA高表达组患者5年生存率为17.41％,低表达组为60.04％,差异有统计学意义（X2=14.20,P=0.0002）.结论 胃癌原发灶中hTERT mRNA表达与其恶性生物学行为有关,是反映其侵袭、转移和预后较好的分子指标.     

反义hTERT体外诱导肺癌细胞凋亡的研究

目的研究反义hTERT基因体外诱导肺癌细胞凋亡。方法体外通过SuperFect(QIAGEN)转染正、反义hTERT真核表达载体至人肺腺癌细胞株GLC82,再经过G418及PCR筛选鉴定获得分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞GLC82s和GLC82as。然后采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析了反义hTERT对肺癌细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡;同时还运用实时荧光定量RTPCR技术及TRAP银染法对各组细胞内源性hTERTmRNA的表达情况及端粒酶的活性进行了检测。结果当各组细胞传至第25代后,与GLC82、GLC82s比较,GLC82as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加;与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低GLC82细胞内源性hTERTmRNA的表达(P<0.01)和下调端粒酶活性。结论反义hTERT体外确实能明显地诱导肺癌细胞的凋亡及抑制瘤细胞的生长增殖能力。     

人端粒酶逆转录酶mRNA在喉鳞状细胞癌患者外周血中的表达及临床意义

目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在喉鳞状细胞癌(LSCC)患者外周血中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测37例LSCC患者(LSCC组)及35例喉良性病变患者(对照组)外周血中hTERT mRNA的表达。结果 LSCC组患者外周血中hTERT mRNA表达高于对照组(P<0.05)。hTERT mRNA的表达与临床分期、有无颈部淋巴结转移无明显相关(P>0.05)。结论 hTERT mRNA在LSCC患者外周血中高表达,可作为LSCC诊断和治疗的指标。     

膀胱移行细胞癌中人类端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的检测人类端粒酶逆转录醇（hTERT）在膀胱肿瘤中的定量表达，探讨其与膀胱肿瘤生物学行为的关系及在膀胱肿瘤中表达的价值与临床意义。方法采用免疫组织化学法和高清晰彩色医学图文分析系统，对45例膀胱移行细胞癌（BTCC）中的hTERT表达进行定量检测，并用13例正常膀胱组织标本作为对照。结果BTCC组织标本中均可见有hTERT的表达，正常膀胱组织中未见表达，表达强度随病理分级、临床分期的增高以及肿瘤的复发而相应增高，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论hTERT在膀胱肿瘤中表达上调，可以作为诊断、监测复发的指标。