多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶研究

目的 研究临床分离所得多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶情况,以指导临床合理使用抗菌药物. 方法 用改良三相水解实验检测药敏试验筛选出的30株多重耐药铜绿假单胞菌产β内酰胺酶情况,然后对产酶菌株进行等电聚焦电泳,判断产酶情况. 结果 30株细菌均未检测到金属酶;26株细菌产β内酰胺酶,其中25株为持续高产AmpC酶,1株同时持续高产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs).多重耐药铜绿假单胞菌的产酶率为86.7%. 结论 多重耐药铜绿假单胞菌以持续高产AmpC酶为主;改良三相水解实验能消除外膜通透性降低,主动外排泵过度表达和产酶等因素干扰,从而准确、有效地检测出产ESBLs铜绿假单胞菌株.     

铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药机理的研究

目的:检测铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药性,为临床合理应用抗生素提供参考依据。方法:采用K-B扩散法测定亚胺培南等7种抗菌药物对46株铜绿假单胞菌的体外抗菌活性,采用冻融法粗提铜绿假单胞菌酶液,用改良三维试验分析β-内酰胺酶类型。结果:46株铜绿假单胞菌均对3种以上抗生素耐药,表现为多重耐药。三维试验阳性率52.2%(24/46),其中单一产AmpC酶菌株15株,单一产ESBLs菌株6株,同时产AmpC酶及ESBLs菌株2株,1株产其它β-内酰胺酶。结论:产生β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的主要机制之一,其中β-内酰胺酶以产AmpC酶为主,是造成临床上铜绿假单胞菌对头孢菌素第3、4代耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制

目的 探讨临床分离的铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制.方法 收集该院58株耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌,①在M-H琼脂平板中分别加入β内酰胺酶抑制剂和外排泵抑制剂,形成改良K-B法,进行药敏试验;②用改良三相水解试验检测β内酰胺酶;③用聚合酶链反应(PCR)检测金属酶基因(IMP、VIM)以及外膜膜孔蛋白基因(OprD2).结果 58株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌中,53株主动外排系统过度表达合并持续高产AmpC酶,其中15株伴有外膜膜孔蛋白OprD2缺失,1株产超广谱β内酰胺酶;在5株既不过度表达主动外排系统又不产β内酰胺酶细菌中,有1株OprD2基因缺失;未检出产金属酶菌株.结论 该院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制是主动外排系统的过度表达并伴有持续高产AmpC酶,其中16株菌株伴有外膜膜孔蛋白OprD2基因缺失.     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制

目的探讨临床分离的铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制。方法收集该院58株耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌,①在M-H琼脂平板中分别加入β内酰胺酶抑制剂和外排泵抑制剂,形成改良K-B法,进行药敏试验;②用改良三相水解试验检测β内酰胺酶;③用聚合酶链反应(PCR)检测金属酶基因(IMP、VIM)以及外膜膜孔蛋白基因(OprD2)。结果58株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌中,53株主动外排系统过度表达合并持续高产AmpC酶,其中15株伴有外膜膜孔蛋白OprD2缺失,1株产超广谱β内酰胺酶;在5株既不过度表达主动外排系统又不产β内酰胺酶细菌中,有1株OprD2基因缺失;未检出产金属酶菌株。结论该院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制是主动外排系统的过度表达并伴有持续高产AmpC酶,其中16株菌株伴有外膜膜孔蛋白OprD2基因缺失。     

多重耐药的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的检测及耐药性研究

目的 对286株铜绿假单胞菌（PA）持续高产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的检测及耐药性分析，揭示其耐药机制，指导临床合理用药。方法 采用VITEK-32和ATB自动微生物分析仪进行286株铜绿假单胞菌的鉴定与药敏试验，对可疑产金属β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的菌株，用改良酶提取物三维试验法和双纸片协同试验进行三种酶表型的确证。结果 286株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的总检出率为17．8％（511286），其中，金属酶的检出率为8．7％（25／286），ESBLs的检出率为5．2％（151286），AmpC酶的检出率为3．8％（111286），金属酶＋AmpC酶的检出率为0．7％。产酶菌株的耐药性比非产酶菌株的耐药性明显严重，产酶菌对第3、第4代头孢菌素、单环β-内酰胺类、氟喹诺酮类、磺胺类及酶抑制剂复合抗生素的耐药率均高于50％，结论 产生AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶是PA对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制，产酶菌株对多种抗生素耐药，应加强对3种β-内酰胺酶的检测，合理使用抗生素，减少耐药菌株的产生及播散。     

铜绿假单胞菌高突变性耐药与产β-内酰胺酶的关系

目的:了解铜绿假单胞菌高突变功株的耐药性与产β-内酰胺酶的关系.方法:对分离出的细菌采用API 20NE系统进行鉴定,药敏试验采用K-B法,用内汤稀释法检测高突变菌株,用改良三维试验检测高突变菌株产β-内酰胺酶的情况,用2-巯基丙酸抑制试验筛选金属酶.结果:在120株铜绿假单胞菌中,有45株突变频率超过参考菌株20倍以上,占37.5%.高突变铜绿假单胞菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星和环丙沙星的耐药率均接近或超过60.0%.45株高突变菌株中有18株(40.0%)产ESBLs,25株(55.6%)产AmpC酶,6株(13.3%)产金属酶.结论:高突变性铜绿假单胞菌对临床常用的抗生素耐药率较高,产ESBLs,AmpC酶和金属酶是其对多种抗生素高度耐药的主要原因之一.     

三维试验检测高产AmpCβ内酰胺酶和ESBLs的方法探讨

目的探讨三维试验检测鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌AmpCβ内酰胺酶和ESBLs的方法：方法采用冻融法破碎细菌释放菌体内的B内酰胺酶，用头孢西丁和头孢噻肟为水解底物，氯唑西林和克拉维酸为其抑制剂进行检测。结果19株鲍曼不动杆菌中1株产生ESBL，5株产生AmpC酶，1株同时产生ESBL和AmpC酶；14株铜绿假单胞菌中2株产生AmpC酶。结论成功改良了三维试验检测AmpCβ内酰胺酶和ESBLs方法，适用于临床常规检验。     

铜绿假单胞菌产AmpC酶和ESBLs的研究

目的:研究我院多重耐药铜绿假单胞菌产ESBLs与AmpC酶的耐药表型和基因型,了解两种酶的分布情况。方法:用K-B法进行ESBLs试验,3-氨基苯酚硼酸(APB)纸片增强法检测AmpCβ-内酰胺酶表型阳性菌;IPM和多底物纸片法进行诱导产AmpC酶定性试验;PCR检测AmpC酶和ESBLs基因并进行测序分析。结果:70株菌检测出产AmpC酶阳性菌51株,其中33株诱导产AmpC酶试验阳性,诱导率依次氨曲南和头孢他啶-克拉维酸>哌拉西林>头孢他啶>头孢吡肟>头孢噻肟>头孢噻肟-克拉维酸,1株扩增出DHA型AmpC酶,经测序为DHA-1型;ESBLs阳性1株,扩增为tem基因。结论:我院存在产ESBLs与AmpC酶的多重耐药铜绿假单胞菌。     

三维实验法检测耐亚胺培南的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶

[目的]了解耐亚胺培南的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的分布及分离率。[方法]采用K-B法进行药物敏感试验,筛选耐亚胺培南的铜绿假单胞菌;再进行改良三维实验,对菌株所产β-内酰胺酶进行分析。[结果]临床分离耐亚胺培南的铜绿假单胞菌40株中,单产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）9株（22.5%）,单产高产染色体头孢菌素酶（AmpC）2株（5.0%）,5株为超超广谱β-内酰胺酶（SSBL）（12.5%）,3株产酶量过高或其他原因（7.5%）,21株无酶活性（52.5%）。[结论]产β-内酰胺酶是耐亚胺培南铜绿假单胞菌的主要耐药机制之一。     

产ESBLs、AmpC、KPC酶的葡萄糖不发酵细菌的耐药性分析及临床分布

目的 了解本地区葡萄糖不发酵细菌中泛耐药菌(代表株铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌)在临床标本中的分离与耐药情况,为临床合理使用抗生素提供指导.方法 对临床分离的180株葡萄糖不发酵细菌进行分类鉴定和药敏试验,并用纸片扩散法筛选出产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)及碳青霉烯类水解酶(KPC酶)的耐药菌株.结果 在葡萄糖不发酵细菌的梅成比中,其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)56株(31.1％),产AmpC酶22株(12.2％),KPC酶2株(1.1％);同时产ESBLs和AmpC酶16株(8.9％),同时产ESBLs、AmpC、KPC酶1株(0.6％).3种主要葡萄糖不发酵细菌对头孢他啶、头孢三嗪、头孢噻肟、哌拉西林的耐药率最高,其中铜绿假单胞菌对阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星耐药率较低,鲍曼不动杆菌对亚胺培南、左氧氟沙星耐药率较低,嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明、环丙沙星耐药率较低.结论 葡萄糖不发酵细菌中泛耐药菌特别是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌均有较高的多重耐药性,临床上应重视葡萄糖不发酵细菌引起的感染,根据药敏试验结果合理使用抗生素.     

铜绿假单胞菌纸片扩散药敏试验中抑菌环内细菌耐药分析

目的分析铜绿假单胞菌纸片扩散药敏试验中抑菌环内出现菌落原因,并为其进行耐药分析,使结果正确解释提供依据。方法采用K—B法进行药物敏感试验,筛选出抑菌环内出现的菌落,进行重复细菌鉴定药敏试验,通过改良三维试验法对其所产β-内酰胺酶进行分析。结果在65株铜绿假单胞菌中产ESBLs有15株（23．1％）,26株高产AmpC（40．0％）,14株（21．5％）为SSBLsβ-内酰胺酶,1株（1．5％）显示碳青酶烯酶活性,9株（13．8％）未检测出任何活性酶。结论铜绿假单胞菌纸片扩散药敏试验中β-内酰胺类抗生素抑菌环内细胞是其失去抑制产生突变,产ESBLs和（或）高产AmpC变异予个体。医院感染中铜绿假单胞菌抑菌环内出现的菌落现象,在排除污染后对其结果应解释为耐药。     

下呼吸道分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制探讨

目的探讨下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及可能的作用机制。方法收集下呼吸道标本中分离的铜绿假单胞菌58株。采用纸片扩散法检测铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性,采用改良三维试验方法检测超广谱-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）,采用外膜蛋白图谱紫外吸收法测定外膜蛋白OprD2含量。结果22株对亚胺培南耐药,其中检出单产ESBLs8株,单产AmpC酶6株,同时产AmpC酶和ESBLs3株。亚胺培南耐药株OprD2相对含量明显低于敏感株（P〈0.01）。结论ESBLs和AmpC酶的产生以及外膜蛋白OprD2的减少是患者下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的主要原因。     

产超广谱β-内酰胺酶铜绿假单胞菌体外耐药性分析

目的了解产超广谱β-内酰酶（EsBk）铜绿假单胞菌的体外耐药性。方法运用ATB Expression鉴定仪鉴定临床分离细菌;用K—B法做常规药敏试验,用改良三维水解酶试验检测产ESBLs菌株。结果在297株铜绿假单胞菌中产ESBLs株的检出率为24％;产ESBls菌株对亚胺培南、头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林,他唑巴坦、阿米卡星的耐药率分别为14％、7％、21％,21．1％,对其余抗生素也有不同程度的耐药。结论产ESBLs的铜绿假单胞菌呈现多重耐药,目前对产ESBLs铜绿假单胞菌敏感性较高的药物是头孢哌酮／舒巴坦。     

铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶检测与分析

目的分析安徽医科大学第一附属医院铜绿假单胞菌(PA)的感染分布、耐药性及β-内酰胺酶检测情况,为临床治疗提供依据。方法用琼脂稀释法检测120株PA的最小抑菌浓度(MIC),用2-巯基丙酸抑制试验和改良三维试验检测120株PA中的金属酶β-内酰胺酶(MBL)、超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和AmpC酶。结果PA在临床上的感染主要以上呼吸道为主(痰液及咽拭子),14种临床常用抗生素表现为多重耐药,耐药率达80%以上的抗生素有7种,依次为头孢曲松95.8%、头孢噻肟89.2%、加替沙星86.7%、氨曲南、庆大霉素和环丙沙星耐药率均为85%、左氧氟沙星的耐药率为83.3%。120株PA中65株产β-内酰胺酶,改良三维试验检出其中产ESBLs酶、AmpC酶、MBL酶分别为9株、4株和37株;10株同时产MBL酶和ESBLs;5株未检出β-内酰胺酶型别。结论PA对多种抗菌药物的耐药率高,多重耐药性明显。产β-内酰胺酶复杂,以产MBL为主,临床应根据药敏试验结果及产酶情况,综合考虑合理选用抗生素,以减少耐药菌株产生和控制医院感染。     

SHV、TEM基因介导的铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶的检测

目的 了解铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的产生情况及基因型别，并寻求一种适合临床使用的检测铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶的方法。方法 使用PCR法和NCCLS推荐的表型确证试验检测20株多重耐药的铜绿假单胞菌的ESBLs。结果 PCR法共检测出15株TEM型ESBLs，其中1株同时携带有SHV基因组。用NCCLS推荐的表型确证试验未检出ESBLs。结论 我院临床分离株铜绿假单胞菌产ESBLs多为TEM型，NCCLS推荐的表型确证试验不适用于铜绿假单胞菌ESBLs的检测。     

阴沟肠杆菌高产AmpC酶和ESBLs的检测及其耐药性研究

目的:了解本地区阴沟肠杆菌高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行状况及其耐药性。方法:收集154株临床分离无重复阴沟肠杆菌,通过改良三维实验检测阴沟肠杆菌高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),运用K-B琼脂扩散法进行药物敏感性试验。结果:在154株菌中,18.83%的菌株单产ESBLs,22.73%的菌株单产AmpC酶,5.19%的菌株同时产AmpC酶和ESBLs,53.25%的菌株AmpC酶和ESBLs均不产生。产不同类型β-内酰胺酶其耐药性有所不同。结论:本地区阴沟肠杆菌产AmpC酶和ESBLs的流行处于一个相对较高的水平。高产AmpC酶菌株对一、二、三代头孢菌素、头孢西丁、酶抑制剂复合制剂等高度耐药,对头孢吡肟敏感,而产ESBLs菌株对三代头孢菌素、头孢吡肟均不同程度耐药,而对各种酶抑制剂复合制剂保持较高的敏感性,因此,产Ampc酶及ES-BLs酶的细菌的耐药性不完全相同,产酶类型不同需选用不同类型的抗生素。     

肠杆菌属细菌高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表达状况研究

目的 研究超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和高产AmpC酶在肠杆菌属细菌的表达状况以及ESBLs的基因型,了解肠杆菌属细菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制。方法 采用酶提取物三维及抑制试验检测121株肠杆菌属细菌高产AmpC酶和产ESBLs的情况;采用聚合酶链反应检测产ESBLs菌株的基因型。结果 在121株肠杆菌属细菌中,酶提取物三维及抑制试验共检出产ESBLs菌株29株（24.0%）,高产AmpC酶并产ESBLs菌株14株（11.5%）,高产AmpC酶并产ESBLs的菌株占总高产AmpC酶菌株的43.8%（14/32）。在25株PCR扩增阳性菌株中,TEM型为7株,SHV型10株,CTX-M-1组6株,CTX-M-13组7株,OXA组为阴性,其中有5株同时检测出两种ESBLs基因型。结论 除高产AmpC酶外,产ESBLs也是肠杆菌属细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要因素之一。肠杆菌属细菌产ESBLs的基因型包括TEM、SHV、CTX-M型,以CTX-M型为主。     

多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因型研究

目的:了解我院临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因分布情况。方法:用三维试验检测15株多重耐药鲍曼不动杆菌ESBLs、AmpC、MBL(金属β-内酰胺酶)产酶情况;用PCR方法检测各种β-内酰胺酶基因。结果:三维试验检出2株菌产ESBLs;9株菌产AmpC;3株菌合产ESBLs和AmpC酶;3株菌产MBL(均同时产AmpC)。PCR检出15株菌均携带blaTEM基因;2株菌携带blaPER-1基因;14株菌携带AmpC基因;未检出产金属β-内酰胺酶基因。结论:我院多重耐药的鲍曼不动杆菌多含有blaTEM基因和AmpC基因,也首次发现部分产PER型ES-BLs鲍曼不动杆菌。     

急性有机磷中毒医院肺炎致病菌多重耐药研究

目的研究急性有机磷中毒医院肺炎患者多重耐药性致病菌(multi-drug resistant bacteria,MDR)的种类、分布状况以及耐药特点。方法采用实验方法筛选多重耐药菌株,研究其分布特点和耐药规律。结果2002年1月-2006年7月共分离出多重耐药性致病菌31株,其中以铜绿假单胞菌最多,其次为鲍曼不动杆菌;各株MDR呈现出多重耐药性。MDR中,以产ESBLs(Extented spectrurn beta lactamases,超广谱β-内酰胺酶)菌为主,其后依次为产金属酶细菌、产AmpC酶(头孢菌素酶)和SSBLs菌(既产AmpC酶,又产ESBLs的菌株称为SSBLs),革兰氏阳性MDR为MRS。结论急性有机磷中毒医院肺炎患者的MDR感染率较高,造成治疗上的困难,因此必须科学合理地使用抗菌药物,减少MDR的感染率。     

亚胺培南耐药鲍氏不动杆菌AmpC酶、ESBLs及金属酶检测和耐药分析

目的 分析我院亚胺培南耐药鲍氏不动杆菌(IRABA)临床分离株头孢菌素酶(AmpC酶)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和金属β-内酰胺酶(MBLs)的产生情况及其耐药特点.方法 应用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,采用改良三维试验方法同时检测2008年1月-2009年9月我院临床分离的63株IRABA的ESBLs和AmpC酶,2-巯基丙酸协同试验检测MBLs.结果 63株IRABA中,45株(71.4 %)AmpC酶阳性,13株(20.6 %)ESBLs阳性,其中8株(12.7 %)同时产AmpC酶和ESBLs,未检出产MBLs 菌株.AmpC酶阳性菌对12种抗生素的耐药率明显高于AmpC酶阴性菌,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 本组IRABA主要产AmpC酶,且多重耐药现象严重.