确定抗体最佳滴度的简便方法

确定抗体最佳滴度的简便方法１曹世俭２李敬军作者单位：１北京天坛医院病理科１０００５０２北京市神经外科研究所神经病理室１０００５０作者简介：曹世俭，男，４６岁，主管技师随着技术的进步，免疫组化方法日趋简单，一般只需对一抗适当稀释，便可获得理想的染色结果...     

底物—胶原酶—抗体免疫组化方法的建立

传统的免疫组织化学方法是根据抗体与抗原的特异亲和性,利用已知的抗体检测组织中相应抗原的存在状况。酶与其相应的底物同样也具有相似的特异亲和力。根据这种底物—酶的特异亲和作用,我们     

抗体鸡尾酒法在免疫组织化学标记中的应用

肿瘤组织常含有多种抗原成分,要在一张切片上同时显示多种组织抗原,往往需要采用双标记或三标记方法。然而,反复在一张切片上进行操作容易引起脱片,从方法学角度看也颇为费时费力。为此,作者设计了抗体鸡尾酒标记法,用p53／CD34标记了325例肺、食管、胃肠、膀胱及子宫等部位的上皮性肿瘤,同步显示p53表达水平、微血管密度及脉管受累情况;用p63／α-平滑肌肌动蛋白(SMA)标记了15例乳腺病变组织,显示肌上皮细胞的基本结构。     

软组织肿瘤免疫组化诊断中常用抗体的特殊性及注意事项

随着免疫组化技术在肿瘤病理诊断中的不断深入和广泛应用 ,人们越来越多的发现所谓特异性标记物并非人们最初想的那么特异 ,而是出现了许多特殊性 (或称异常表达 ) ,并且这些特殊性在免疫组化结果分析中有着非常重要的意义 ,有必要对这些特殊性予以总结。笔者就软组织肿瘤免疫组化诊断中常用抗体的一些特殊性及注意事项简单介绍。1　上皮性标记物常用的有细胞角蛋白 (ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ)、上皮性膜抗原(ＥＭＡ)及癌胚抗原 (ＣＥＡ)。他们常用于区分上皮性肿瘤与间叶性肿瘤。但在以下情况时应注意其特殊性 :①间皮、肾小管及肾小囊壁层…     

用免疫组织化学法检测自制NPY抗体的特异性和敏感性

本实验用戊二醛作偶联剂,将神经肽Y(NPY)偶联到牛血清白蛋白(BSA),制成NPY-BSA免疫原复合物。用它免疫新西兰大白兔,成功地制备了兔抗NPY抗血清。经免疫组織化学检测,其最高使用效价为1:1000～1:2000。替代试验和吸收试验均呈阴性反应。该抗血清能显示胃肠血管壁和脑底动脉管壁的神经纤维以及大鼠脑内的神经纤维及神经元胞体。它们的分布特点与进口NPY所显示的相一致。以上结果表明,该抗血清是对NPY特异性的且有较高使用效价。     

介绍一种自制简易的防抗体试剂瓶倾倒装置

随着病理科现代化仪器设备的普及和应用,免疫组化染色实验也由传统手工制作过渡到全自动化仪器制作阶段,不仅有效地提高了制片质量,同时也使染色实验进一步流程化、标准化、系统化.为避免抗体试剂倾倒,以往手工制作过程中抗体试剂通常放置于抗体贮存架上.目前本科室所配置的Leica BOND-MAX 型全自动免疫组化染色机,需搭配使...     

组织芯片微量抗体的免疫组化染色

组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissue microarrav)技术，是由Kononen等于1998年首先建立并报道，一般是将数十至上百个甚至更多小的组织整齐有序地排列在一张载玻片上而制成缩微组织芯片，即组织切片。组织芯片蜡块可连续切片100～200张，这样用同一套组织芯片即可对上百种生物分子标记(如抗体、DNA和RNA)进行分析、检测，     

β-Trcp冷冻切片抗体应用于石蜡切片免疫组化染色的研究

目的 探讨高压热修复后将β-Trcp冷冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫组化技术.方法 在常规免疫组化技术的基础上,分别经0.3% Triton X-100/PBS溶液及0.2 mol/L甘氨酸溶液浸泡后,pH 6.0柠檬酸盐抗原修复液进行组织抗原高压热修复,观察β-Trcp冷冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫反应性.结果 经上述处理后,石蜡切片中出现β-Trcp冷冻切片抗体的阳性率为63.3%(38/60),与β-Trcp石蜡切片抗体的阳性率无统计学差异(P>0.05).结论 β-Trcp冷冻切片抗体可经过处理后应用于石蜡切片免疫组化.     

即用型抗体再稀释在全自动免疫组化染色中的应用

全自动免疫组化染色仪使实验室技术人员从繁琐的手工操作中解放出来,大大提高了免疫组化的工作效率,由于其都有相应的加强二抗相匹配,所以染色强度和染色阳性率均相应提高[1].即用型抗体的优点在于使用方便,一般不需要使用者重新摸索稀释的比例[2].但在实际工作中我们发现部分即用型抗体在全自动免疫组化染色仪上染色后组织切片背景有着色,因此我们尝试把即用型抗体再稀释后,再进行全自动免疫组化染色,取得较为满意的效果.     

免疫组织化学标记结果的判断方法

免疫组织化学在肿瘤病理诊断和鉴别诊断中广泛应用 ,但对其标记结果的认定判断尚不一致 :同一染色切片 ,有的说是阳性 ,也有的说是阴性 ;或同一阳性结果 ,可有不同程度的判断结果 ;在阳性程度划分上也分歧较大 ,而且因判断标准不同 ,得出的结果则相反。这是目前免疫组织化学检测中十分重要的问题。目前对免疫组化染色阳性标准尚不一致 ,有的以阳性细胞数目计算 ,有的以染色强度判断 ;具体在阳性细胞百分率和阳性程度认同上也存在的差异 ,给临床医师对其结果的理解带来了困难。肿瘤病理诊断以 ( - )、( )表示免疫组化结果 ,临床医师不难理…     

晶状体前囊膜上皮细胞上标记PCNA的方法

由于人晶状体上皮组织薄且透明,做冷冻切片和石蜡切片均非常困难,且只能观察到少量细胞。因此,我们通过对常规方法进行改进,即对人晶状体上皮细胞组织不经过组织切片而直接进行免疫组化PCNA标记,取得了较满意的效果。1材料与方法1.1材料收集浙江大学医学院附属第二医院眼科中心     

鉴定单克隆抗体F(ab'''')2段及其结合物抗体活性方法的建立

鉴定单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）的抗体活性通常采用免疫组化法或免疫印迹法。因为失去了Fc段，mAb的F（ab’）2片段的抗体活性不适合用常规免疫组化法或免疫印迹法进行鉴定。尤其是当鉴定mAbF（ab’）2段与其他蛋白质结合物的抗体活性时更为困难。我们用SPDP化学胶联法制备了抗人原发性肝细胞癌（以下简称肝癌）的mAb HAb18的F（ab’）2段与超抗原葡萄球菌肠毒素A（SEA）的结合物HAb18F（ab’）2-SEA，以用于肝癌导向免疫治疗的研究。为了鉴定HAb18F（ab’）2-SEA的抗肝癌抗体活性，本实验建立了用于鉴定mAbF（ab’）2及其结合物抗体活性的专用间接免疫组化法。     

抗人膀胱癌/抗VEGF双功能基因抗体导入治疗荷瘤鼠膀胱癌的研究

目的：探讨抗人膀胱癌，抗VEGF双功能基因抗体对膀胱癌生长的抑制作用。方法：应用双功能抗体作用荷瘤鼠模型，观察抑瘤作用；应用免疫组化技术检测体内生长肿瘤中微血管密度。结果：双功能抗体对体内生长的肿瘤有明显的抑制作用，经双功能抗体治疗的瘤体中微血管密度明显低于对照组。结论：双功能抗体可以抑制肿瘤血管生成，有望为膀胱癌的治疗提供新的方法。     

抗β-连环蛋白抗体的制备及其在乳腺癌诊断中的应用

目的制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在乳腺癌细胞和乳腺良、恶性组织中的表达。方法应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Westernblot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及乳腺癌细胞株MCF-7和T-47D中β-catenin蛋白的表达。用免疫组织化学SP法检测β-catenin在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的不同表达。结果用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔6周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1：204800(A450nm=1．01)。将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92000的蛋白条带,与文献报道相符。用抗β-catenin血清做Westernblot分析显示,在Mr为92000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体。从人乳腺癌细胞株MCF-7和T-47D提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均观察到β-catenin蛋白的表达。人乳腺组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常乳腺组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在乳腺癌组织的细胞浆或细胞核中可见棕黄色颗粒。结论制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体。用该抗体检测证实,正常乳腺组织β-catenin表达在细胞膜中,而乳腺癌组织β-catenin则在细胞浆或细胞核中表达,提示乳腺癌发生后β-catenin由细胞膜易位入细胞浆或细胞核中表达,这有助于乳腺癌的临床早期诊断。     

组织标本固定方法与免疫组织化学染色效果的关系

免疫组织化学技术是免疫学与分子生物学技术和病理形态学相结合的一门新兴学科 ,它是用已知抗体 (或抗原 )检测组织细胞中的未知抗原 (或抗体 )的技术。具有操作简单 ,敏感性高 ,特异性强 ,能将形态和机能密切结合起来等优点 ,已广泛用于病理诊断 ,鉴别诊断及组织胚胎 ,神经解剖等相关学科的研究之中。由于免疫组织化学试剂商品化进程加快 ,特别是即用型试剂和试剂盒的使用 ,使抗体的质量控制有可能规范化、标准化。然而在实际工作中 ,显示抗原抗体结合反应质量不稳定的情况时有发生 ,虽然影响免疫组织化学染色结果的因素较多 ,但作者认为如…     

高分子量角蛋白抗体(34βE12)在前列腺癌诊断中的应用价值

目的：研究高分子量角蛋白抗体（３４βＥ１２）在前列腺癌诊断中的作用。方法：采用微波ＥｎＶｉｓｉｏｎ免疫组织化学方法,观察３４βＥ１２抗体在不同前列腺病变中的染色情况。结果：基底细胞特异性细胞角蛋白抗体３４βＥ１２与所有的前列腺良性病变的基底细胞胞浆特异性染色。１５例前列腺癌中１２例３４βＥ１２染色为阴性,有３例出现阳性反应。原发性前列腺导管癌的癌巢外周有连续或不连续的基底细胞围绕。结论：３４βＥ１２染色阳性不是诊断良性前列腺病变的绝对指标。前列腺癌的诊断必须综合考虑临床、常规组织学检查及免疫组织化学结果才能做出正确的诊断。     

初步探求酶标记抗体的合适比例

目的探求酶标记抗体时的最佳比例,以用于体外诊断的实践。方法辣根酶与CEA抗体按照质量比10∶1~1∶10进行连接,着重考察各酶结合物的样品检测情况和在洗涤过程中游离酶的干扰规律,最终找出了酶标记抗体的适宜趋势。结果当抗体与辣根酶的质量比达到5到10倍时,计数高于S0的样品的个数最多,实现了通过标准曲线方程反算出浓度的理想状态。结论在标记抗体的过程中,只需五分之一甚至十分之一的酶量已能够满足需求,过多反而会增加干扰的风险。     

神秘的肽,神秘的抗体:正确进行免疫组织化学对照实验的指导

在进行神经形态学研究时,免疫组织化学染色是最常用的方法。然而,该方法到底显示的是什么、缺陷是什么、特异性如何、怎样对该方法正确地设立对照实验?这些问题可能长期困扰着我们或者我们根本就没有意识到。最近,《比较神经学杂志》(Journal of Comparative Neurology)的主编Saper教授和形态学专家Sawchenko教授在该杂志上联合发表述评,对上述问题进行了专门的阐述,对正确设立免疫组织化学方法的对照实验提出了指导性的意见。本刊编辑部认为该述评富于指导作用,故嘱专人译出,奉献于此,以飨读者,希望借此帮助大家进一步正确地认识免疫组织化学方法。