模拟微重力对人脐静脉内皮细胞形态及NO产生的影响

目的探讨回转模拟微重力对人的血管内皮细胞形态、NO产生及一氧化氮合酶表达的影响。方法利用体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC），采用回转器模拟微重力效应，在微重力条件下培养人脐静脉内皮细胞48h，同时设1g静止培养对照。倒置显微镜下观察细胞生长形态，透射电镜观察HUVEC超微结构。检测不同转速下细胞产生NO的量，及细胞中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达。结果微重力培养后，细胞变圆且重叠生长；回转组NO产生量高于1g对照组且与一定的回转速度呈正相关。回转组细胞eNOS表达较对照组增多且表达iNOS，对照组细胞未表达iNOS。结论微重力对体外人脐静脉内皮细胞的形态，NO产量及NOS的合成都有影响。     

模拟微重力对大鼠嗜铬细胞瘤细胞形态及其生长的影响

目的研究回转是否影响PC12细胞内蛋白质的羰基化和硝基化水平,进而影响细胞骨架和形态;细胞内活性氮水平升高是否会影响PC12细胞的增殖分化。方法观察并测定了静置对照组和回转组细胞的细胞形态和细胞密度的变化,采用免疫荧光标记和RT—PCR技术研究了回转对细胞骨架蛋白Actin羰基化和Tubulin硝基化以及nNOS和iNOS的mRNA和蛋白表达的影响;并利用流式细胞术检测了细胞周期的改变,初步探讨了这些改变和一氧化氮合酶之间的关系。结果细胞骨架蛋白发生硝基化和羰基化的改变,但回转组细胞骨架形态变化不明显,PC12细胞的微丝回转后明显伸长;回转后,细胞密度显著增加,细胞周期中DNA合成的S期明显缩短。结论结果表明水平回转模拟微重力并不改变PC12细胞形态,相反还有利于细胞的生长,其机制可能与一氧化氮合酶的表达上调有关。     

模拟微重力条件下体外培养神经细胞模型的初步建立

目的研究模拟微重力条件下构建新生大鼠神经细胞培养体系的方法。方法分离新生鼠海马区原代神经细胞，接种于Cytodex3型微载体，培养3d后转移入旋转细胞培养系统，用倒置显微镜和扫描电镜观察神经细胞在微载体上的生长情况，进行神经元细胞特异性烯醇酶的免疫组织化学染色，用Image-Pro Plus软件进行神经细胞胞体面积的测量。结果微重力条件下神经细胞在微载体上均匀分布，免疫组织化学结果显示神经元被染成棕色，其胞体面积较正常重力条件培养的神经细胞有显著增加（P〈0．01）。结论神经细胞可以在微重力条件下进行培养，这个体系的建立有着广泛的应用前景。     

模拟微重力对肺微血管内皮细胞窖蛋白-1和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨回转模拟微重力对肺微血管内皮细胞(PMVEC)窖蛋白-1(caveolin-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 以肺微血管内皮细胞为研究对象,采用回转器模拟微重力效应.将细胞分为回转12h组、回转24h组(在30r/min条件下回转培养12、24h),以及对照12h组、对照24h组(放置于细胞回转器旁静置培养12、24h).采用Griess法检测细胞的NO释放量,透射电镜观察细胞胞膜窖的超微结构变化,Western blotting检测eNOS和caveolin-1的表达.结果 回转12h组较对照12h组NO产量和eNOS蛋白表达均有增加,回转24h组较对照24h组NO产量和eNOS蛋白表达也有增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).由透射电镜可见,对照12h组和对照24h组PMVEC细胞膜表面均可见典型的希腊字母Ω状胞膜窖,较丰富,结构清晰;回转12h组PMVEC细胞膜上胞膜窖的结构破坏,数量减少;回转24h组PMVEC细胞膜上很难发现胞膜窖的特征性结构,数量进一步减少.Western blotting检测发现,回转12h组与对照12h组相比,回转24h组与对照24h组相比,PMVEC中caveolin-1表达均显著下降(P＜0.05或P＜0.01).结论 回转模拟微重力可抑制肺微血管内皮细胞中caveolin-1的表达,增强eNOS表达,提高细胞内NO的释放量.     

初发、复发性高原肺水肿血清NO、NOS、iNOS研究

目的：了解初发、复发性高原肺水肿（pHAPE、rHAPE）在治疗前、后的一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的变化。方法：实验分为三组：①对照组（C组、16．例）,②pHAPE组（18例）,③HAPE组（10例）;紫外线分光光度计测定NO、NOS、iNOS。结果：C组高于pHAPE和rHAPE组,P〈0．05-P〈0．01;两组治疗前低于治疗后,P〈0．01;NO两组前前相比,P〉0．05,两组后后相比,P〈0．05;NOS、iNoS两组前前、后后相比,P〈0．01。结论：缺氧引起了NO、NOS、iNOS的下降,以rHAPE更明显,治疗后分泌增加。这些改变提示它们在HAPE的发病机理中起了重要作用。     

L-NAME对小肠上皮细胞辐射防护作用机理的探讨

目的探讨硝基左旋精氨酸甲基酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）对小肠上皮细胞辐射防护的机理。方法实验用大鼠ＩＥＣ－６细胞，６０Ｃｏγ射线照射；荧光分光光度法测定培养液上清中一氧化氮（ＮＯ）含量；ＮＡＤＰＨ黄递酶组化法（ＮＤ组化法）和免疫细胞化学法观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性变化；ＭＴＴ法检测细胞的生存力。结果ＩＥＣ－６细胞经射线照射后，其培养液上清中ＮＯ含量明显增加，细胞内结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）活性升高，诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）活性降低，Ｌ－ＮＡＭＥ能明显提高细胞的生存力，ＮＯ底物－左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）部分逆转其作用。结论ＮＯ参与了ＩＥＣ－６细胞的辐射损伤，Ｌ－ＮＡＭＥ对ＩＥＣ－６细胞具有辐射防护作用。     

尿毒症患者血浆氧化修饰低密度脂蛋白一氧化氮内皮素的测定及相关性分析

目的：探讨尿毒症患者并发心血管疾病与氧化修饰低密度脂蛋白（ox—LDL）、一氧化氮（NO）、内皮素（ET）的关系。方法：测定46例正常对照及48例尿毒症患者（其中21例无心血管疾病，27例有并发心血管疾病）的ox—LDL、NO、ET及TC、TG、HDL—C、LDL—C的含量。结果：尿毒症患者组血浆ox—LDL和ET水平明显高于正常对照组，尿毒症患者组NO水平明显低于正常对照组。有心血管病变的尿毒症患者血浆OX—LDL和ET水平明显高于无心血管病变尿毒症患者组，而血浆NO水平明显低于无心血管病变尿毒症患者组。在有心血管病变的尿毒症患者中，ox—LDL水平与ET水平呈正相关，ox—LDL与NO水平呈负性相关。尿毒症患者TC、TG、LDL—C水平与正常对照组比较明显升高。（P〈0．01），HDL—C水平明显降低（P〈0．01）。结论：尿毒症患者中oX—LDL和ET升高，同时NO降低，三者协同作用，进一步导致血管内皮细胞损伤，促进了心血管疾病的发生和发展。     

潜艇艇员血小板L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路变化

目的观察潜艇人员血小板L-精氨酸（L-Arg）转运动力学，一氧化氮合酶（NOS）活性，血浆、血小板一氧化氮（NO）含量，探讨潜艇人员内皮功能变化，为预防心血管疾病提供依椐。方法48名健康男性潜艇人员及18名健康男性陆勤人员为对照者，静脉血制备血小板血浆，用放射性同位素标记法测定^3H-L-Arg在血小板转运中的动力学特征；测定血小板NO产物——亚硝酸盐量及NOS活性。结果潜艇艇员血小板L-Arg转运功能明显减低，L-Arg最大转运速度（Vmax）较同期陆勤人员低31．4％（P〈0，01），米氏常数（Km）值增加11．4％（P〈0．01），NOS活性较陆勤组减少51．1％（P〈0．01），血浆及血小板NO2^-水平分别低于陆勤组35．2％（P〈0.01）、82．8％（P〈0．01）。结论由于特殊环境，潜艇艇员存在血小板L-Arg／NOS／NO系统功能异常，L-Arg转运障碍，NOS活性显著减低，血浆及血小板NO生成明显减少，提示潜艇艇员有血管内皮功能受损征象，其特殊职业可影响心血管疾病发病学基础。     

尾悬吊模拟失重大鼠肺组织一氧化氮合酶mRNA的研究

为探讨尾悬吊模拟失重大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOS mRNA)的变化，采用尾悬吊模拟失重法，将大鼠分为悬吊7天和21天及相应对照组4组，并采用原位杂交技术检测肺组织iNOS mRNA的表达情况，发现同正常对照组相比，7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平明显增高（P＜0．01），21天悬吊组模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平仍显著增高（P＜0．01），提示NO参与了在模拟失重条件下的肺组织损伤的过程。     

模拟微重力对大鼠皮层神经元蛋白羰基化的影响

目的研究回转模拟微重力效应对Wistar大鼠皮层神经元蛋白质羰基化的影响。方法利用回转器模拟微重力 ,将原代培养的Wistar大鼠皮层神经元分别回转 0h、1 2h、2 4h、36h、48h。提取细胞总蛋白 ,酶联免疫吸附法 (EILSA)检测羰基化蛋白的水平。结果与 1G对照组相比 ,回转 2 4h、36h、48h显著增加皮层神经元羰基化蛋白的水平 (P <0 .0 5 )。结论回转显著增加皮层神经元羰基化蛋白的水平 ,这可能是神经元损伤的重要原因之一。     

模拟微重力对猕猴肺组织JNK／c－Jun和c－Fos信号通路的影响

目的：探讨模拟微重力对猕猴肺组织结构和JNK／c－Jun和c－Fos信号通路的影响。方法在特殊装置上采用猕猴头低位－10°模型模拟微重力,15只猕猴分为3组,每组5只：对照组（ A组）、模拟微重力组（ B组）、模拟微重力后恢复组（ C组）。 HE染色观察各组猕猴肺组织大体结构,Western blotting检测肺组织JNK、c －Jun、c－Fos及磷酸化表达水平。结果 HE显示,与A组相比,B组和C组猕猴肺组织可见肺泡间隔不同程度的增宽,部分肺泡融合,肺间质内可见炎细胞浸润。 C组病理改变较B组稍减轻。 Western blotting 结果提示,与A组相比,B组和C组JNK、c－Fos和p－c－Fos及p－c－Jun表达增多。结论长期处于微重力状态可引起猕猴肺组织损伤,肺组织中JNK、c－Fos磷酸化和c－Jun磷酸化表达增加,微重力激活JNK／c－Jun和c－Fos信号通路调控其下游特定基因的表达可能是肺损害的机制之一。     

模拟微重力对NIH-3T3细胞clock及bmal1基因表达的影响

目的探讨模拟微重力对NIH-3T3细胞节律基因clock与bmal1 mRNA表达的影响。方法 NIH-3T3细胞采用回转器分别回转培养6 h,12 h,18 h,24 h,30 h,36 h,42 h和48 h,同时设置1 G静置培养为对照组。Trizol试剂提取细胞总RNA,实时定量PCR法检测节律基因clock及bmal1 mRNA在各时间点的相对表达量。通过余弦法获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果 clock及bmal1基因mRNA的表达趋势相近。对照组clock与bmal1 mRNA相对水平呈现节律性表达,而回转组表达无节律性。回转组mRNA相对水平最大值出现于约6 h时间点,最小值出现在约18 h,而对照组分别出现于约18 h与24 h。与对照组比回转组的周期延长了约16 h。回转后clock与bmal1的峰值相位前移。结论 NIH-3T3细胞中clock与bmal1的表达存在同步化的转录特征。模拟微重力可影响clock与bmal1节律的周期长度及峰值相位。     

模拟失重对成骨样细胞细胞周期变化的影响

目的 探讨空间骨丢失的机理,研究模拟失重时人成骨样细胞细胞周期的变化。方法 利用回转器模拟失重,观察测定了成骨样细胞增殖、周期的变化及其恢复作用和中药三花接骨散对细胞周期的影响。结果 模拟失重作用后,成骨细胞增殖受到明显抑制,Ｇ１期细胞显著增多、Ｓ与Ｇ２＋Ｍ期细胞显著减少,模拟失重１２ｈ后再经１２ｈ以上正常生长,细胞周期可恢复至对照水平。三花接骨散能促进Ｇ１期细胞减少,Ｓ与Ｇ２＋Ｍ期细胞增多,具有     

模拟失重对骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导的ROS17/2.8细胞中ERK活性的影响

目的观察回转器模拟失重对骨形态发生蛋白2（BMP-2）诱导的大鼠骨肉瘤成骨样细胞（ROS17／2．8）中蛋白激酶ERK活性及c-fos／c-jun mRNA表达的影响。方法在地面1G和回转器模拟失重条件下培养ROS17／2．8细胞，按培养时间再分为24h和48h组，各组又分为有或无BMP-2（500ng／ml）组。提取细胞总蛋白，应用免疫沉淀和Western Blotting法检测磷酸化Elk（P-Elk）含量的变化，以反映蛋白激酶ERK的活性。提取细胞总RNA，采用反转录PCR法检测c-fos和c-jun的mRNA表达量。结果BMP-2诱导组的p-Elk表达量明显高于无BMP-2组，各时间点模拟失重组p—Elk表达量均低于1G重力对照组。模拟失重条件下24h和48h组的c-fos mRNA表达较1G对照显著降低（分别为P〈0．05，P〈0．01）。模拟失重条件下48h组的c-jun mRNA的表达显著低于1G对照水平（P〈0．01）。结论模拟失重降低了ROS17／2．8细胞中BMP-2诱导的ERK的活性，且抑制了c-fos和c-jun的基因表达。     

随机定位模拟微重力促进人前破骨细胞增殖和分化

目的观察随机定位模拟微重力对人前破骨细胞FLG29.1增殖和分化的影响。方法 FLG29.1细胞分为正常对照组与随机定位处理组,分别培养72 h后收集细胞。采用细胞计数法检测细胞总数和活细胞数;流式细胞术检测细胞周期;Griess法检测培养基中NO(nitric oxide,NO)浓度;抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色计算TRAP阳性细胞比例;对硝基苯磷酸(pNPP)法检测胞内TRAP活性。结果随机定位处理后,FLG29.1细胞增殖能力与活细胞比例均较对照组明显增加;细胞周期分布发生变化,处于G1期的细胞比例增加;培养基中NO浓度有增加趋势;在回转处理的同时添加诱导剂12-氧-十四烷酰佛波醋酸酯-13乙酸酯(TPA),发现TRAP阳性细胞数量增多;胞内TRAP活性较对照组明显增加。结论随机定位模拟微重力提高了FLG29.1细胞活力并促进其向破骨细胞分化。     

模拟失重对流体剪切应力诱导MG-63细胞ERK2激活的影响

目的 研究成骨细胞力学信号转导功能中酪氨酸磷酸结合结构域适应蛋白(Shc)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK2)的关系,并观察模拟失重条件下流体剪切应力(FSS)诱导ERK2活性的变化,以期从信号转导水平探讨模拟失重对成骨细胞力学信号转导功能的影响.方法 将负性缺失突变体质粒Shc-SH2和活性ERK质粒Myc-ERK2共同转染入MG-63细胞中,同时将真核表达载体pcDNA3和Myc-ERK2也共同转染入MG-63细胞中作为转染平行对照组,对转染细胞进行1.5 Pa流体剪切应力处理15 min.利用回转器模拟失重60 h,对转染细胞进行1.5 Pa FSS处理15 min.结果 在转染平行对照组中,FSS组中的Myc-ERK2的活性显著升高;在Shc-SH2转染组中,Myc-ERK2的活性与转染平行对照组相比显著降低(P＜0.05),在FSS组中未见Myc-ERK2活性的变化.转染了真核表达载体pcDNA3和Myc-ERK2的细胞在模拟失重条件培养及FSS作用15 min后,Myc-ERK2的活性升高,但与未进行模拟失重的对照组相比,Myc-ERK2的活性显著降低(P＜0.05).结论 在力学信号转导通路中,Shc可以介导力学信号以激活ERK2.模拟失重对细胞的力学信号转导功能具有不良影响.     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞iNOS表达及NO生成的影响

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达和一氧化氮(NO)生成的影响。方法体外培养大鼠巨噬细胞NR8383,分别加入LPS(终浓度1μg/ml)和不同浓度(10-10、10-8和10-6mol/L)的CCK-8进行干预,并设空白对照组(加入PBS)和丙谷胺干预组(丙谷胺终浓度2μg/ml,CCK-8浓度10-8mol/L,LPS浓度1μg/ml)。各组细胞培养24h后收集上清液,Griess法检测NO含量;取培养24h后的细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR法检测iNOS基因表达情况;裂解培养24h后的细胞,离心取上清,生化法检测细胞内iNOS活性。结果 LPS可明显促进大鼠肺泡巨噬细胞iNOS的表达和NO的生成;预先加入不同浓度的CCK-8均可抑制LPS诱导的iNOS mRNA水平上升和活力增强,减少NO生成,且呈现剂量依赖性(P<0.05或P<0.01)。CCK受体拮抗剂丙谷胺可逆转CCK-8的抑制作用。结论 CCK-8可能通过降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞iNOS表达和NO产生来实现其对内毒素休克动物的保护效应。