罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的探讨罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养骨肉瘤细胞 MG63,分为对照组、低剂量罗哌卡因组、中剂量罗哌卡因组、高剂量罗哌卡因组、 anti?miR?NC组、 anti?miR?199b?5p组、中剂量罗哌卡因 +miR?199b?5p组和中剂量罗哌卡因 +miR?NC组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,白质印迹法(Western Blot)检测细胞中细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)、 P21、B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白蛋(Bax)表达水平,实时荧光定量逆转录 PCR(RT?qPCR)检测细胞中 miR?199b?5p表达水平。结果与对照组比较,低剂量罗哌卡因组、中剂量罗哌卡因组、高剂量罗哌卡因组 MG63细胞增殖能力［(0.88±0.08)、(0.49±0.05)、(0.34±0.03)比(0.92±0.09)］、 Cyclin D1蛋白［(0.85±0.08)、(0.66±0.06)、(0.41±0.04)比(0.95±0.09)］表达降低(P＜0.05),而 P21［(0.18±0.02)、(0.37±0.04)、(0.71±0.07)比(0.14±0.01)］蛋白表达升高(P＜0.05)中剂量罗哌卡因组 Bcl?2蛋白［(0.20±0.02)比(0.76±0.07)］及 miR?199b?5p［(0.13±0.01)比(0.82±0.08)］的表达降低(P＜0.05),而,MG63细胞凋亡率［(23.51±2.42)%比(7.66±0.75)%］和 Bax蛋白［(0.89±0.09)比(0.28±0.03)］表达升高(P＜0.05)。与 anti?miR?NC组比较, anti?miR?199b?5p组 MG63细胞增殖能力［(0.64±0.06)比(0.98±0.09)］及 Cyclin D1蛋白［(0.40±0.04)比(0.95±0.09)］和 Bcl?2蛋白［(0.36±0.03)比(0.76±0.07)］的表达降低(P＜0.05),而 MG63细胞凋亡率［(19.56±1.58)%比(7.66±0.75)%］及 P21［(0.53±0.05)比(0.14±0.01)］和 Bax［(0.71±0.07)比(0.28±0.03)］的蛋白表达升高(P＜0.05)。与中剂量罗哌卡因 +miR?NC组比较,中剂量罗哌卡因 +miR?199b?5p组 MG63细胞增殖能力［(0.58±0.06)比(0.36±0.03)］及 Cyclin D1蛋白［(0.71±0.07)比(0.40±0.04)］和 Bcl?2蛋白［(0.53±0.05)比(0.21±0.02)］的表达升高(P＜0.05),而 MG63细胞凋亡率［(12.68±1.23)%比(23.35±2.34)%］及 P21［(0.37±0.03)比(0.72±0.07)］和 Bax［(0.57±0.06)比(0.88±0.09)］的蛋白表达降低(P＜0.05)。结论罗哌卡因可能通过下调 miR?199b?5p降低了骨肉瘤细胞的增殖,并促进了其凋亡。     

微小 RNA?34a调控儿童急性淋巴细胞白血病细胞 CEM/C1生长和迁移的分子机制研究

目的研究微小 RNA?34a(miR?34a)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞 CEM/C1增殖、迁移的影响以及可能作用机制。方法选取重庆市第十三人民医院血液科 2017年 10月至 2018年 12月住院 32例 ALL病儿骨髓样本。另选取该院同期 25例原发性血小板减少症病儿的骨髓样本作为对照组。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测 miR?34a在 ALL骨髓样本的表达量; CEM/C1细胞按随机数字表法分为对照组、阴性对照(NC)组、 miR?34a组;对照组细胞常规培养, NC组和 miR?34a组 CEM/C1细胞分别在 Lipofectamine 2000介导下转染阴性对照质粒以及 miR?34a模拟物, qPCR检测转染效率;细胞计数试剂盒 8(CCK?8)实验检测 CEM/C1细胞的增殖, Transwell检测细胞迁移;在线软件 TargetScan预测 miR?34a与 Krüppel样因子 4(KLF4)的靶向关系,双荧光素酶报告基因进一步进行验证。结果与对照组相比, ALL骨髓样本中 miR?34a的表达量下调［(0.33±0.05)比(1.00±0.08)t＝15.680,P＜0.001］。与对照组(1.00±0.08)相比, NC组 miR?34a的表达量(0.99±0.08)无明显变化, miR?34a组 CEM/C1细胞中,miR?34a的表达量(3.21±0.23)上调(F＝423.135,P＜0.05)。对照组、 NC组、 miR?34a组细胞培养 48 h后细胞活性分别为(0.65±0.05)、(0.69±0.06)、(0.42±0.04)F＝40.818,P＜0.001;迁移细胞数分别为(142.36±12.47)个、(137.45±13.49)个、(79.89±6.23)个, F＝57.683,P＜0.001,差异计学意义。与 NC与 KLF4?wt共转染的细胞相比, miR?34a有统,与 KLF4?wt共转染的细胞荧光素酶活性［(0.45±0.03)比(1.00±0.06)t＝20.083,P＜0.001］降低;与 NC与 KLF4?mut共转染的细胞相比, miR?34a与 KLF4?mut共转染的细胞荧光素酶活性差异无统计学,意义［(1.03±0.07)比(1.01±0.07),t＝0.495,P＞0.05)］。结论 miR?34a在 ALL中表达量下调,其可通过对靶基因 KLF4的调控影响 CEM/C1细胞增殖、迁移。     

微小 RNA?25?3p靶向下调甘油磷酸二酯酶磷酸结构域 5基因对乳腺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨微小 RNA?25?3p(miR?25?3p)靶向甘油磷酸二酯酶磷酸结构域 5(GDPD5)对乳腺癌细胞顺铂耐药性的影响及分子机制。方法本研究起止时间为 2018年 10月至 2019年 6月,人乳腺癌细胞 MCF?7和乳腺癌顺铂耐药细胞 MCF?7/DDP购于中国科学院上海细胞研究所,采用实时荧光定量 PCR(qRT?PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测正常乳腺癌细胞 MCF?7和乳腺癌顺铂耐药细胞 MCF?7/DDP中 miR?25?3p、GDPD5和谷胱甘肽巯基转移酶 π(GST-π)的表达水平。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测过表达 miR?25?3p或过表达 miR?25?3p联合顺铂对 MCF?7/DDP细胞的增殖抑制作用,蛋白质印迹法检测 GDPD5、GST?π和细胞周期蛋白 D1(Cyclin D1)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证 miR?25?3p和 GDPD5的靶向关系。结果与 MCF?7细胞相比, MCF?7/DDP细胞中 miR?25?3p的表达显著下调, GDPD5和 GST?π的表达显著上调。过表达 miR?25?3p后, MCF?7/DDP细胞存活率显著降低［(50.36±5.04)%比(100.00±10.11)%］,CyclinD1相对表达水平降低(0.40±0.05)比(1.12±0.11)GST?π表达水平降低(0.35±0.04)比(1.15±0.12);且过表达 miR?25?3p可降低 MCF?7/DDP细胞的顺铂耐药性。 miR?25?3p可靶向,负性调控 GDPD5的表达。过表达 GDPD5可部分逆转 miR?25?3p对 MCF?7/DDP细胞增殖和顺铂耐药性的影响。结论 miR?25?3p通过靶向下调 GDPD5抑制 MCF?7/DDP细胞存活,进而降低 MCF?7/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

长链非编码 RNA脑源性神经营养因子反义 RNA靶向微小 RNA-495-3p调控脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应

目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)脑源性神经营养因子反义 RNA(BDNF-AS)对脂多糖( LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法该研究起止时间为 2018年 12月至 2019年 12月。用 1 mg/L的 LPS处理大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383细胞作为 LPS组;正常培养的细胞作为 Con组。将 BDNF-AS小分子干扰 RNA(si-BDNF-AS)及其阴性对照( si-NC)、微小 RNA(miR)-495-3p及其阴性对照( miR-NC)转染至 NR8383细胞中再用 1 mg/L的 LPS处理,记为 LPS+siBDNF-AS组、 LPS+si-NC组、 LPS+miR-495-3p组、 LPS+miR-NC组;将 si-BDNF-AS分别与 anti-miR-NC、anti-miR-495-3p共转染至 NR8383细胞中再用 1 mg/L的 LPS处理,记为 LPS+si-BDNF-AS+anti-miR-NC组、 LPS+si-BDNF-AS+anti-miR-495-3p组。实时荧光定量 PCR检测 lncRNA BDNF-AS和 miR-495-3p的表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素 -1β(IL-1β)肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)表、达;荧光素酶报告实验检测 BDNF-AS对 miR-495-3p的靶向关系。结果 LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞中 BDNF-AS高表达［( 1.00±0.06)比( 3.41±0.31)］,miR-495-3p低表达［( 1.02±0.07)比( 0.47±0.04)］IL-1β［( 22.14±2.25)ng/L比( 513.20±41.22)ng/ L］、 TNF-α［(184.33±18.65)ng/L比(1 125.65±110.36)ng/L］水平升高,细胞凋亡率［(,8.11±0.81)%比( 36.22±3.21)%］升高, Bax表达水平升高, Bcl-2表达水平降低( P<0.05)。抑制 BDNF-AS表达或过表达 miR-495-3p后, IL-1β［( 526.14±46.87)ng/L比     

长链非编码 RNA变异性浆细胞瘤异位 1通过调控微小 RNA-214-3p/人凋亡抑制蛋白 X轴影响皮肤黑色素瘤细胞的顺铂耐药性

目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)变异性浆细胞瘤异位 1(PVT1)调控微小 RNA(miR)-214-3p/人凋亡抑制蛋白 X(XIAP)对皮肤黑色素瘤( CMM)细胞的顺铂( DDP)耐药性的影响。方法该研究起止时间为 2020年 3—9月。体外培养人皮肤黑色素瘤 SK-MEL-1/DDP细胞,将细胞分为空白对照组( NG组,不做处理)、阴性转染组( NC组,转染 PVT1-inhibitor阴性对照)、抑制 PVT1表达组( PVT1-inhibitor组,转染 PVT1-inhibitor)、共转染组( PVT1-inhibitor-miR-214-3p-inhibitor组,转染 PVT1inhibitor同时转染 miR-214-3p-inhibitor)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 SK-MEL-1/DDP细胞 PVT1、 miR-214-3p水平; MTT法检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞增殖能力及对 DDP的耐药性;流式细胞仪检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞凋亡率;蛋白质印迹法( Western blotting)检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞 XIAP、细胞增殖相关核抗原 Ki-67、凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)表达水平。应用 TargetScan数据库预测 PVT1与 miR-214-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证。结果与 NG组、 NC组比较, PVT1-inhibitor组 SK-MEL-1/DDP细胞增殖抑制率［( 22.87±3.43)%比( 0.00± 0.00)%、(0.08±0.01)%］、凋亡率［( 40.05±6.06)%比( 15.69±2.35)%、(17.01±2.55)%］、 miR-214-3p及 Bax表达均显著升高( P< 0.05)PVT1、药物半数抑制浓度( IC50)值［( 15.13±0.45)μg/L比( 45.03±1.35)μg/L、(47.81±1.33)μg/L］、 Ki-67、Bcl-2蛋白、 XIAP mRNA及,其蛋白表达水平均显著降低( P<0.05);与 PVT1-inhibitor组比较, PVT1-inhibitor+miR-214-3p-inhibitor组 SK-MEL-1/ DDP细胞增殖抑制率［(15.12±2.27)%比( 22.87±3.43)%］、凋亡率［(27.88±4.19)%比( 40.05±6.06)%］、 miR-214-3p及 Bax表达均显著降低( P<0.05)IC50［(23.98±0.72)μg/L比(15.13±0.45)μg/L］Ki-67、Bcl-2蛋白、 XIAP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TargetScan,数据值库预测显示 miR-214-3p是 PVT1的潜在靶、基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。     

微小 RNA-141-3p靶向调控含 CUE结构域蛋白 2基因对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响

目的探讨微小 RNA-141-3p(miR-141-3p)靶向调控含 CUE结构域蛋白 2(CUEDC2)对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。方法 2018年7月至 2019年12月,从美国 ATCC购买大鼠胰腺腺泡细胞 AR42J。100 nm/L雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞 AR42J 6 h建立急性胰腺炎细胞模型。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测雨蛙素干预后AR42J细胞中 miR-141-3p和CUEDC2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证 miR-141-3p和CUEDC2的靶向关系。利用脂质体转染法将 miR-141-3p抑制物(anti-miR-141-3p)、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、CUEDC2过表达载体(pcDNA-CUEDC2)、空载体(pcDNA)分别转染 AR42J细胞,经雨蛙素干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测 B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)和Bcl-2相关 X蛋白(Bax)的表达水平,酶联免疫吸附试验(Elisa)试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素 -6(IL-6)水平。结果雨蛙素干预处理后 AR42J细胞中 miR-141-3p的表达水平显著升高［(2.43±0.24)比(1.00±0.09)］,CUEDC2的表达水平显著降低。 miR-141-3p靶向负性调控 CUEDC2表达。与转 anti-miR-NC和雨蛙素协同处理组比较,转染 anti-miR-141-3p和雨蛙素协同处理组 AR42J细胞凋亡率显著增加［(27.48±2.33)%比(15.64±1.51)%］Bax蛋白的表达显著增加, Bcl-2蛋白的表达显著降低, TNF-α［(136.54±14.58)ng/L比( 226.48±20.54)ng/L］和 IL-6［(115.89±11.65)n,g/L比( 193.47± 18.63)ng/L］的分泌显著降低;与转染 pcDNA和雨蛙素协同处理组比较,转染 pcDNA-CUEDC2和雨蛙素协同处理组 AR42J细胞凋亡率显著增加［(23.87±2.35)%比(14.23±1.44)%］,Bax蛋白的表达显著增加, Bcl-2蛋白的表达显著降低, TNF-α［(158.74±15.32)ng/L(236.87±18.66)ng/L］和IL-6［(135.77±14.97)ng/L比(189.67±17.32)ng/L］的分泌显著降低;转染 si-CUEDC2可逆转转染 anti-miR14比1-3p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。结论抑制 miR-141-3p通过靶向 CUEDC2可促进急性胰腺炎腺泡细胞的凋亡,抑制 TNF-α和IL-6分泌,从而减轻雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤。     

血管紧张素Ⅱ调控基质金属蛋白酶 9的表达在蛛网膜下腔出血发病中的机制研究

目的 探讨血管紧张素 Ⅱ(AngⅡ)调控基质金属蛋白酶 9(MMP?9)的表达在蛛网膜下腔出血( SAH)发病中的机制。方法人脑微血管内皮细胞( HBMEC)株分为 AngⅡ组、 AngⅡ+SB203580组和对照组。其中 AngⅡ组以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测; AngⅡ+SB203580组以 5 μΜ的 SB203580处理 20 min后以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;对照组加入 RPMI?1640培养液培养 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测。以酶联免疫吸附法( ELISA)检测各组细胞上清液 MMP?9水平,以实时荧光定量 PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶( p38 MAPK)的 mRNA和蛋白表达水平。结果并与对照组比较, AngⅡ组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 5.81±1.72)μg/L,P＜0.01］水平升高, AngⅡ+ SB203580组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 3.64±1.45)μg/L,P＜0.01］水平降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞上清液 MMP?9水平降低( P＜0.001)。与对照组比较, AngⅡ组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.538±0.071),P＜0.05)］和蛋白表达水平［( 0.452±0.105)比( 0.635±0.133)P＜0.001］升高, AngⅡ+ SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.375±0.066),P＜0.05］和蛋白表达,水平［(0.452±0.105)比(0.276±0.081)P＜0.001］降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA和蛋白表达水平降低( P＜0.001)。结论,AngⅡ可能通过激活 p38 MAPK信号通路上调 MMP?9表达从而促进 SAH发生发展。     

胰激肽原酶对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制

目的研究注射用胰激肽原酶对慢性高眼压大鼠眼压及视网膜神经节细胞( RGCs)的保护作用。方法 SD大鼠 30只,按随机数字表法分为空白组、模型组、治疗组,每组 10只。模型组和治疗组用巩膜静脉烧灼法制作慢性高眼压大鼠模型,造模成功 1周后,治疗组给予胰激肽原酶( 0.8 U)治疗,而空白组、模型组给予腹腔注射等剂量 0.9%氯化钠溶液( 0.2 mL),均每天 1次,连续 2周。监测大鼠眼压的变化并记录数据。苏木精 ?伊红(HE)染色观察 RGCs形态, DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)测定 RGCs凋亡情况,免疫组织化学染色法测定细胞凋亡相关基因 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白( Bax)的含量。结果造模前眼压各组无明显变化( F＝0.152,P＞0.05),造模后模型组［术后 1周:(32.85±2.06)mmHg,术后 2周:(33.27±2.24)mmHg,术后 3周( 33.00±1.09)mmHg］与治疗组［术后 1周:(32.77±2.07)mmHg,术后 2周:(31.68±2.20)mmHg,术后 3周(30.09±2.52)mmHg］眼压均升高,与空白组［术后 1周:(15.44±1.02)mmHg,术后 2周:(15.21±1.41)mmHg,术后 3周( 14.90±1.32)mmHg］比较差异有统计学意义( F＝355.429,F＝427.714,F＝315.063;均 P＜0.001)。 HE染色示空白组视网膜各层结构清晰,模型组 RGCs排列不规整,细胞缺失,有空泡形成。治疗组细胞排列稍不规整,细胞少量缺失。 TUNEL示空白组偶见凋亡细胞,模型组凋亡细胞增多,治疗组凋亡细胞减少,组间比较差异有统计学意义( F＝796.179,P＜0.001)。免疫组化示模型组 Bcl?2、Bax表达均有所增强,而治疗组较模型组 Bcl?2表达增强, Bax表达明显减弱,各组间比较差异有统计学意义( F＝389.728,F＝525.331;均 P＜0.01)。结论胰激肽原酶可以缓慢降低眼压,还可能通过升高 Bcl?2,降低 Bax的表达抑制 RGCs凋亡,达到保护视神经的目的。     

基于磷脂酰肌醇 3?激酶/蛋白激酶 B信号通路探讨针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤大鼠氧化应激损伤及骨骼肌细胞凋亡的影响

目的探究针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤大鼠氧化应激损伤及骨骼肌细胞凋亡的影响,初步了解针刺对超负荷运动致骨骼肌损伤的治疗机制。方法于 2018年 12月至 2019年 6月选取 60只 6周龄 SPF级 SD大鼠,采用随机数字表法将 SD大鼠分为四组:空白组(Control,C)、超负荷运动组(Overload,O)、针刺组(Acupuncture,A)和超负荷运动 +针刺组(Overload and Acupuncture,OA),各 15只; O组及 OA组实行超负荷运动,运动结束立即针刺 A组及 OA组足三里、阳陵泉、内关和肾俞穴,留针 20 min,持续 14 d;检测各组 SD大鼠骨骼肌中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、琥珀酸脱氢酶(SDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH?Px)活性;使用流式细胞仪检测 SD大鼠骨骼肌细胞凋亡情况,使用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase?3)活性;检测 SD大鼠血清中肌酸激酶水平并使用苏木精 ?伊红(HE)染色观察 SD大鼠骨骼肌情况;使用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇 3?激酶 /蛋白激酶 B(PI3K?Akt)信号通路相关蛋白表达情况。结果相比 C组丙二醛水平(4.75±0.29)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(9.89±1.02)%和肌酸激酶(457.54± 45.02)kU/L,O组丙二醛水平(13.97±0.55)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(32.58±3.50%)、 Bax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平(1985.50±88.87)kU/L均显著升高(P＜0.05);相比 C组 GSH?Px水平(142.25±8.39)kU/L、SOD水平(2.50±0.25)kU/L、SDH水平(35.75±8.78)kU/L,O组 GSH?Px水平(55.68±6.97)kU/L、SOD水平(1.02±0.17)kU/L、SDH水平(10.58±6.50)kU/L、Bcl?2、 PI3K、磷酸化蛋白激酶 B(p?AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m?TOR)水平均显著降低(P＜0.05)Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);相比 O组, A组丙二醛水平(4.99±0.32)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(11.52±1.02)%、B,ax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平均(557.56±54.25)kU/L显著降低, GSH?Px水平(130.25±7.14)kU/L、SOD水平(2.38±0.30)kU/L、SDH水平(31.25±5.50)kU/L、Bcl?2、PI3K、p?AKT、m?TOR蛋白水平显著升高(P＜0.05)Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);相比 A组, OA组丙二醛水平(7.89±0.41)mol/L、骨骼肌细胞凋亡水平(22.58±2.51)%、B,ax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶水平(1402.51±64.50)kU/L均显著升高, GSH?Px水平(135.58±8.14)kU/L、SOD水平(2.10±0.21)kU/L、SDH水平(24.28±4.99)kU/L、 Bcl?2、PI3K、p?AKT、m?TOR蛋白水平显著降低(P＜0.05),Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);相比 O组, OA组丙二醛水平、骨骼肌细胞凋亡水平、 Bax、Caspase?3蛋白表达水、血清肌酸激酶平均显著降低, GSH?Px水平、 SOD水平、 SDH水平、 Bcl? 2、PI3K、p?AKT、m?TOR蛋白水平显著升高(P＜0.05),Akt蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)。 HE染色观察结果显示: O组纤维弯曲,肌红蛋白溶解,肌细胞核固缩、溶解,肌束膜破裂; OA组少量肌纤维断裂溶解弯曲,余未见异常。结论针刺可以通过调控 PI3K?Akt信号通路抑制 SD大鼠氧化应激和骨骼肌细胞凋亡来实现治疗超负荷运动致骨骼肌损伤。     

miR-216a抑制 Kruppel样转录因子9调控核因子-κB信号通路对肾小管上皮细胞急性肾损伤的影响

目的探讨 miR-216a对 Kruppel样转录因子 9(KLF9)的调控作用,及其对缺氧 -复氧( H/R)诱导的肾小管上皮细胞急性肾损伤的影响。方法将 293T细胞(人肾上皮细胞系)分为 KLF9野生型载体、 miR-216a mimics(类似物) +KLF9野生型载体、 miR-216a NC(阴性对照) +KLF9野生型载体,利用荧光素酶报告基因验证 miR-216a与 KLF9的结合关系。 H/R诱导大鼠肾脏近端肾小管上皮细胞,并转染 miR-216a mimics,将大鼠肾脏近端肾小管上皮细胞系 RPTC分为对照组, H/R组, H/R+miR-216a NC组, H/R+miR-216a mimics组。检测 miR-216a、KLF9、核因子 -κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、血管生长因子 A(VEGF-A)、尿激酶型纤溶酶原激活物( uPA)mRNA表达。结果 miR-216a mimics+KLF9野生型共转染组的荧光素酶活性显著低于 KLF9野生型组、 miR-216a NC+KLF9野生型共转染组的荧光素酶活性(P＜0.05)。与对照组比较, H/R组和 H/R+miR-216a NC组 miR- 216a［(0.56±0.11)及( 0.48±0.06)比( 1.00±0.00)］表达量下调( P＜0.05)KLF9［(2.77±0.19)及( 2.79±0.10)比( 1.00±0.00)］NF-κB p65［(2.35±0.02)及(2.42±0.27)比(1.00±0.00)］、TNF-α［(2.40±0.21)及(,2.44±0.11)比( 1.00±0.00)］、 VEGF-A［( 4.17±0.0、7)及(4.19±0.11)比( 1.00±0.00)］、 uPA［(2.28±0.05)及( 2.38±0.13)比( 1.00±0.00)］mRNA表达量上调( P＜0.05);与 H/R组和 H/R+ miR-216a NC组比较, H/R+miR-216a mimics组中 miR-216a［( 31.75±2.40),F＝45.87,P＝0.000］表达量上调, KLF9［( 1.96±0.04),F＝13.98,P＝0.005］、 NF-κB p65［(2.15±0.15)F＝14.89,P＝0.001］、 TNF-α［(1.79±0.10),F＝18.90,P＝0.000］、 VEGF-A［(3.65±0.04)F＝15.94,P＝0.000］、 uPA［(2.06±0.11F＝14.22,P＝0.001］mRNA表达量下调(P＜0.05)。结论 miR-216a过),表达通过靶向下,调 KLF9表达进而抑制 NF-κB信号通路,降,低肾小管上皮细胞急性肾损伤。     

西格列汀对高糖诱导内皮细胞凋亡的改善作用及机制研究

目的研究西格列汀对高糖诱导内皮细胞凋亡的改善作用及机制。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并分组,对照组用含有 5.5 mmol/L葡萄糖的 DMEM处理,高糖组用含有 33.3 mmol/L葡萄糖的 DMEM处理,西格列汀组用含有 33.3 mmol/L葡萄糖及 20 μmol/L西格列汀的 DMEM处理,西格列汀 +LY组用含有 33.3 mmol/L葡萄糖、 20 μmol/L西格列汀、 10 μmol/L LY294002的 DMEM处理。检测各组细胞凋亡率及细胞中凋亡基因、人磷酸化磷酸肌醇 3激酶(p?PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B(p?AKT)的表达量。结果高糖组的细胞凋亡率及 Cleaved?caspase?9［0.91(0.71,1.12)比 0.43(0.34,0.59)］、 Cleaved?cas? pase?3［0.75(0.67,0.93)比 0.45(0.36,0.58)］的蛋白表达量明显高于对照组, B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)［0.23(0.17,0.36)比 0.60(0.45,0.72)］、 p?PI3K［0.40(0.22,0.61)比 0.94(0.78,1.21)］、 p?AKT［0.27(0.13,0.34)比 0.66(0.40,0.79)］的蛋白表达量明显低于对照组;西格列汀组的细胞凋亡率及 Cleaved?caspase?9［0.32(0.26,0.43)比 0.91(0.71,1.12)］、 Cleaved?caspase?3［0.34(0.24,0.48)比 0.75(0.67,0.93)］的蛋白表达量明显低于高糖组, Bcl?2［0.69(0.58,0.83)比 0.23(0.17,0.36)］、 p?PI3K［0.87(0.67,0.99)比 0.40(0.22,0.61)］、 p?AKT［0.65(0.48,0.73)比 0.27(0.13,0.34)］的蛋白表达量明显高于高糖组;西格列汀 +LY组的细胞凋亡率及 Cleaved?caspase?9［0.72(0.58,0.86)比 0.32(0.26,0.43)］、 Cleaved?caspase?3［0.68(0.54,0.73)比 0.34(0.24,0.48)］的蛋白表达量明显高于西格列汀组, Bcl?2［0.37(0.29,0.45)比 0.69(0.58,0.83)］、 p?PI3K［0.49(0.34,0.58)比 0.87(0.67,0.99)］、 p?AKT［0.32(0.24,0.38)比 0.65(0.48,0.73)］的蛋白表达量明显低于西格列汀组。结论西格列汀能够抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡且该作用与激活 PI3K/AKT通路有关。     

长链非编码 RNA LINC00662靶向微小 RNA-103a-3p对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响

目的探究长链非编码 RNA LINC00662对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响,以及分子机制。方法本研究于 2018年 10月至 2020年 2月进行。以体外培养的人皮肤黑色素瘤细胞 A375为研究对象,然后将其分为四组,分别为 si-NC、si-LINC00662、si-LINC00662+anti-miR-NC和 si-LINC00662+anti-miR-103a-3p转染 A375细胞。采用 RT-PCR检测皮肤黑色素瘤组织中 LINC00662和 miR-103a-3p的表达水平, CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法( western blot. ting)检测细胞周期蛋白 1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原( PCNA)的蛋白表达。结果与正常组织和正常皮肤细胞相比,在皮肤黑色素瘤组织和细胞株中 LINC00662表达［ 1.24±0.50比 4.17±1.27］上调, miR-103a-3p表达［ 1.17±0.32比 0.64±0.21］显著下调。 LINC00662与 miR-103a-3p靶向结合。与 si-NC组相比, si-LINC00662组 LINC00662表达［ 1.00±0.06比 0.48±0.06］、 OD值和 S期细胞比例［( 34.7±3.5)%比( 20.5±3.0)%］降低, G0/G1期细胞比例［( 57.4±5.2)%比( 74.7±4.8)%］增高, Cyclin D1［1.00±0.01比     

微RNA-27a介导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的研究微 RNA?27a(miR?27a)介导 3T3?L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制。方法将 3T3?L1细胞诱导分化为脂肪细胞,采用肿瘤坏死因子 ?α(TNF?α)法建立 3T3?L1脂肪细胞的胰岛素抵抗模型,检测 miR?27a对 3T3?L1细胞葡萄糖摄取的影响,蛋白质印迹法(Western Blot)检测 miR?27a对胰岛素信号通路的影响。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)及双荧光素酶报告基因检测法检测 miR?27a的作用靶点。结果 miR?27a介导了 3T3?L1脂肪细胞的胰岛素抵抗［正常对照组,模型组, miR?27a mimics+模型组, miR?27a inhibitor+模型组四组的吸光度值分别为(2.03±0.20)(1.28±0.27)(1.43±0.20)(1.97± 0.18)P＜0.01］的磷酸qPCR?27a抑过氧化物酶体增殖物激活受体 γ(PPARγ)的表达［对照组和 mir?27a组的相对值分别为(1.00±0.08)和(0.59± 蛋白质印迹法显示miR?27a抑制了胰岛素信号通路中胰岛素受体底物1(IR,S1)及Akt蛋白,化。,显示miR,制了,0.14)P＝0.0048］,双荧光素酶报告基因检测验证了 PPARγ为miR?27a的作用靶点［PPARγ WT+miR?NC,PPARγ WT+miR?27a, Mut+miR?NC,PPARγ Mut+miR?27a四组的相对荧光值分别为(5.37±0.80)、(3.17±0.57)、(4.94±0.63)、(4.68±0.74),P＜PPARγ,0.01］。结论 miR?27a通过抑制胰岛素信号通路及靶向 PPARγ介导 3T3?L1细胞胰岛素抵抗。     

隐丹参酮通过 G蛋白偶联受体 55调节 Wnt/β?catenin信号通路抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及其作用机制研究

目的探讨隐丹参酮对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法实验设置不同浓度隐丹参酮( CT)组、空白对照( NC)组、 pcDNA?con组、 pcDNA?GPR55组、 CT+si?con组、 CT+si?GPR55组。 MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡; qRT?PCR检测 GPR55 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达。结果 MTT法检测显示, 0 CT组、 2 CT组、 4 CT组、 8 CT组、 16 CT组、 32 CT组细胞增殖抑制率分别为( 0.00±0.02)%、(25.04±2.50)%、(68.56±5.86)%、(85.44±8.54)%、(88.25±8.82)%、(80.11±8.01)%,与不含隐丹参酮的细胞相比,不同浓度隐丹参酮处理组 TSCC细胞的增殖抑制率均显著升高( F＝284.028,P＜0.05)。隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 Bcl?2、β?catenin表达,促进 Bax、 GPR55表达。过表达 GPR55也抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 CyclinD1、Bcl?2表达,促进 Bax表达。低表达 GPR55逆转了隐丹参酮对舌鳞状癌细胞的增殖抑制、凋亡促进及对 β?catenin表达的抑制作用。与 NC组( 0.75±0.08)相比, CT组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.26±0.03)显著降低;与 CT+si?con组( 0.30±0.03)相比, CT+si?GPR55组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.62±0.06)显著升高( F＝176.212,P＜0.05)。结论隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控 GPR55及 Wnt/β?catenin信号通路有关。     

长链非编码 RNA LINC00346调控微小 RNA-138-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC00346影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取 2018年 1—12月于南阳市中心医院手术治疗的 28例宫颈癌病人的宫颈癌组织(实验组)及癌旁正常组织(对照组)为研究对象。根据细胞转染情况分为 si-NC组、 si-LINC00346组、 miR-NC组、 miR-138-5p组、 si-LINC00346+anti-miR-NC及 si-LINC00346+anti-miR-138-5p组;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测宫颈癌组织和宫颈癌海拉细胞中 LINC00346和微小 RNA(miR)138-5p的表达水平,蛋白质印迹法检测海拉细胞中周期素依赖激酶抑制剂 p21(P21)和胱天蛋白酶 -3(caspase-3)的蛋白含量, MTT法和流式细胞术测定细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证 LINC00346和 miR-138-5p的靶向关系。结果与正常癌旁组织相比,宫颈癌组织中 LINC00346含量显著升高［( 2.51±0.08)比( 0.99±0.05)］(P<0.001);转染 si-LINC00346(LINC00346干扰物)后,与 si-NC(阴性对照组)相比, si-LINC00346组宫颈癌海拉细胞中的 LINC00346含量显著下降［( 0.33± 0.03)比( 1.00±0.05)］P21和 caspase-3蛋白含量升高［(0.63±0.04)比( 0.22±0.02);(0.79±0.05)比( 0.30±0.03)］,海拉细胞存活率降低［(52.84±4.39)比(,100.00±6.13)］,凋亡率升高［( 23.39±1.64)比( 8.19±1.00)］,均差异有统计学意义( P<0.001),敲除 LINC00346可降低细胞存活率,提高细胞凋亡率及 P21和 caspase-3蛋白含量;转染野生型 WT-LINC00346的海拉细胞,与 miR-NC对照组相比, miR-138-5p组野生型 WT-LINC00346的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降［( 0.24±0.03)比( 0.97±0.05)］。敲除 LINC00346可显著上调 miR-138-5p含量［(2.43±0.07)比( 1.01±0.05)］(P<0.001)。结论 LINC00346通过靶向 miR-138-5p调控宫颈癌海拉细胞增殖和凋亡。     

富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠硫氧还蛋白相互作用蛋白/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3通路及视网膜血管通透性的影响

目的探究富氢水对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管通透性及硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3(NLRP3)通路的影响。方法 2020年 6—9月,SD大鼠采用随机数字表法选取 15只为空白组,其余大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)和高脂饲料喂养构建 DR模型,造模成功的大鼠采用随机数字表法分为模型组、富氢水低、高剂量组(5、10 mL/kg)每组 15只。连续给药 28 d后,记录大鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)水平;眼底照相和荧光素血管造影(FFA)观察大鼠右眼新生,血管和荧光素渗漏现象;光学相干断层扫描(OCT)检测视网膜厚度;伊文思蓝-白蛋白复合物渗漏分析视网膜血管通透性;HE染色观察视网膜病理变化;免疫荧光染色观察新生血管形成情况;TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测量视网膜匀浆中血管生成素-1(Ang-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素 1β(IL-1β)、白细胞介素 6(IL-6)水平;WB法检测视网膜 TXNIP/NLRP3通路和凋亡相关蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组大鼠 FBG［(26.49±2.18)mmol/L比(5.76±1.09)mmol/L］、血-视网膜屏障(BRB)通透性［(32.51±2.05)μg/g比(11.24±1.76)μg/g］、视网膜细胞凋亡［(23.31±2.14)%比(0.07±0.01)%］、Bcl-2相关 X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、TXNIP［(0.85±0.09)比(0.40±0.05)］、NLRP3［(0.93±0.10)比(0.48±0.07)］、IL-1β［(0.74±0.05)比(0.41±0.04)］、胱天蛋白酶-1(caspase-1)［(0.78±0.07)比(0.24±0.04)］表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中 Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.05),体质量、视网膜厚度［(148.31±12.76)μm比(223.57±17.23)μm］显著降低(P<0.05),视网膜有较多新生血管和血管曲折,血管渗漏严重,视网膜细胞明显水肿,有大量炎性渗出,神经节细胞层(GCL)细胞数量减少;与模型组相比,富氢水低、高剂量组大鼠 FBG［(20.85±3.45) mmol/L、(14.27±2.42)mmol/L比(26.49±2.18)mmol/L］、BRB通透性［(24.67±1.85)μg/g、(17.48±1.63)μg/g比(32.51±2.05)μg/g］、视网膜细胞凋亡［(14.65±1.36)%、(9.85±1.22)%比(23.31±2.14)%］、Bax、Bcl-2、TXNIP［(0.64±0.09)、(0.52±0.08)比(0.85±0.09)］、NLRP3［(0.72±0.09)、(0.61±0.08)比(0.93±0.10)］、IL-1β［(0.62±0.06)、(0.53±0.05)比(0.74±0.05)］、caspase-1［(0.57±0.06)、(0.41±0.05)比(0.78±0.07)］表达、Bax/Bcl-2比值、视网膜匀浆中 Ang-1、VEGF、IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05)体质量、视网膜厚度［(173.62±14.46)μm、(196.54±15.75)μm比(148.31±12.76)μm］明显增加(P<0.05)视网膜水肿情况减轻, CLG,细胞数量明显增加,损伤得到改善。结论富氢水可抑制新生血管形成,降低 DR大鼠视网膜血管通,透性,减轻视网膜神经元损伤;其作用机制可能与抑制 TXNIP/NLRP3通路的激活有关。     

茵陈五苓散对实验性梗阻性黄疸大鼠肝损伤的保护作用

目的探究茵陈五苓散对实验性梗阻性黄疸大鼠肝损伤的保护作用。方法 2017年 1月至 2019年 5月， 60只 SD大鼠，选取 45只制成实验性梗阻性黄疸大鼠模型，剩余 15只为对照组， 45只模型大鼠按照随机数字表法分为:模型组、低剂量茵陈五苓散组(10 g·kg-1·d-1)和高剂量茵陈五苓散组(20 g·kg-1·d-1)每组各 15只；实验组使用对应浓度茵陈五苓散灌胃，对照组和模型组使用等量生理盐水灌胃，持续 15 d。使用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)和内毒素(ET)水平；使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量水平；使用蛋白质印记法检测各组大鼠肝组织凋亡相关蛋白 B淋巴细胞瘤 ?2蛋白(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)、半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase?3)和钙蛋白酶(Calpain)蛋白表达水平。结果相比对照组，模型组大鼠体质量、肝指数、 ALT、AST、TBIL、ET、MDA、Bax蛋白、 Caspase?3蛋白、 Calpain蛋白水平均显著升高(P＜0.05)SOD、Bcl?2蛋白水平均显著降低(P＜0.05)；相比模型组，低剂量茵陈五苓散组大鼠体质量、肝指数、 ALT、AST、TBIL、ET、MDA、，Bax蛋白、 Caspase?3蛋白、 Calpain蛋白水平分别为［(0.75±0.23)g、(2.53±0.17)、(130.50±12.05)U/L、(125.55±20.95)U/L、(100.10±10.38)μmol/L、(0.52±0.03)EU/mL、(13.50±3.21)U/mg、(1.00±0.15)、(1.20±0.20)、(0.75±0.15)］，高低剂量茵陈五苓散组分别为［(0.69±0.10)g、(2.11±0.13)、(93.15±10.25)U/L、(83.47±12.27)U/L、(72.30±10.25)μmol/L、(0.40±0.03)EU/mL、(9.26±2.20)U/mg、(0.90±0.11)、(1.00±0.19)、(0.45±0.10)］均显著降低(P＜0.05)，且高剂量茵陈五苓散组显著低于低剂量茵陈五苓散组(P＜0.05)；相比模型组，低剂量茵陈五苓散组大鼠 SOD、Bcl?2蛋白水平分别为［(200.47±27.15)U/mg、(0.69±0.23)］，高剂量茵陈五苓散组大鼠分别为［(270.15±32.06)U/mg、(0.75±0.10)］，均显著升高(P＜0.05)且高剂量茵陈五苓散组显著高于低剂量茵陈五苓散组(P＜0.05)。结论茵陈五苓散通过降低脂质过氧化物水平、提高 SOD性、抑制钙蛋白酶的表达同时抑制肝活，细胞的凋亡实现实验性梗阻性黄疸大鼠肝脏的保护作用，且在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

枇杷叶提取物通过激活磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶 B信号通路减轻脂多糖诱导的肺细胞损伤

目的探讨枇杷叶提取物对脂多糖( LPS)诱导的人 Ⅱ型肺泡上皮细胞 A549增殖、凋亡及氧化应激的影响及其可能作用机制。方法 2019年 6月至 2020年 7月,采用 LPS诱导的 A549细胞建立肺损伤模型( LPS组)同时将正常培养的细胞作为对照组。不同剂量( 1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L)的枇杷叶提取物处理细胞( LPS+枇杷叶 -L组、 LPS+枇,杷叶 -M组、 LPS+枇杷叶 -H组),添加磷脂酰肌醇 3激酶( PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)信号通路抑制剂 LY294002与枇杷叶提取物处理细胞( LPS+枇杷叶 -H+ LY294002组);采用 MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用 2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛的含量;蛋白质印迹法( Western blotting)检测磷酸化磷脂酰肌醇 -3-激酶( p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B(p-Akt)、 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X(Bax)蛋白蛋白表达量。结果与对照组比较, LPS组吸光度［( 1.38±0.06)比( 0.55±0.02)］及 SOD的含量［( 81.66±5.36)U/L比(14.65±1.06)U/L］降低,凋亡率［(6.41±0.25)%比( 27.43±1.00)%］、 Bax蛋白水平及 LDH［(242.86±6.09)U/L比( 875.92±15.01)U/ L］、丙二醛［( 121.55±3.17)μmol/g比( 424.46±6.48)μmol/g］的含量升高, Bcl-2、p-PI3K［( 0.60±0.04)比( 0.13±0.01)］、 p-Akt［( 0.51±0.04)比( 0.09±0.01)］蛋白水平降低,差异有统计学意义( P<0.05);与 LPS组比较, LPS+枇杷叶 -M组、 LPS+枇杷叶 -H组吸光度［( 0.55±0.02)比( 0.86±0.03)、(1.18±0.05)］及 SOD［( 14.65±1.06)U/L比( 36.84±2.08)U/L、(70.97±3.03)U/L］的含量升高,凋亡率［( 27.43±1.00)%比( 22.24±0.81)%、(14.78±0.49)%］、 Bax蛋白水平及 LDH［( 875.92±15.01)U/L比( 641.95±9.81)U/L、(365.47±7.02)U/L］、丙二醛［( 424.46±6.48)μmol/g比( 277.94±6.90)μmol/g、(156.30±3.26)μmol/g］的含量降低, Bcl-2、p-PI3K［( 0.13±0.01)比( 0.32±0.01)、(0.54±0.03)］、 p-Akt［( 0.09±0.01)比( 0.25±0.02)、(0.42±0.03)］蛋白水平升高,均差异有统计学意义( P<0.05);添加 LY294002可明显逆转枇杷叶提取物对 LPS诱导的 A549细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论枇杷叶提取物可通过激活 PI3K/Akt信号通路减轻 LPS诱导的 A549细胞增殖抑制、凋亡和氧化应激效应,为探究枇杷叶治疗细菌感染     

溴莫尼定对低氧诱导的 PC12细胞神经损伤的保护作用

目的探讨溴莫尼定对缺氧诱导的 PC12细胞神经损伤的保护作用及其机制。方法 实验于 2018年 5月至 2019年 8月进行,建立缺氧诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤 PC12细胞损伤模型,实验分为对照组、缺氧组(缺氧损伤)、缺氧 +0.25 μmol/L溴莫尼定组、缺氧 +0.5 μmol/L溴莫尼定组、缺氧 +1 μmol/L溴莫尼定组。采用 MTT法检测各组细胞活力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;根据检测试剂盒测定乳酸脱氢酶( LDH)、丙二醛、超氧化物歧化酶( SOD)含量;蛋白质印迹法检测细胞中 B细胞淋巴瘤 -2( Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)及蛋白激酶 B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)/信号转导及转录活化因子 3(STAT3)信号通路相关蛋白表达。结果缺氧处理后,细胞活力较对照组降低［(0.35±0.04)比( 0.69±0.08)］(P<0.05)溴莫尼定不同剂量组细胞活力较 Hypoxia组升高［(0.37±0.05)、(0.40±0.06)、(0.44±0.05)、(0.53±0.07)、(0.60±0.09)比( 0.35±0.04),］(P<0.05); Hypoxia组细胞凋亡率增加［(32.89±3.46)%比( 3.58±0.34)%］(P<0.05),溴莫尼定干预后细胞凋亡率降低［(7.41±0.75)%比( 32.89±3.46)%］(P<0.05)Bax蛋白表达量降低［( 1.48±0.16比 3.76±0.31)］(P<0.05)而 Bcl-2蛋白表达量升高［( 0.89±0.12)比( 0.29±0.04)］(P<0.05);Hypoxia组细胞 SOD含量较对照组降低［( 50.43±5.36)U/mg比(173.39±18.21)U/mg］(P<0.05),溴莫尼定干预后可提高缺氧诱导的细胞 SOD含量降低［( 143.28±15.43)U/mg比( 50.43±5.36)U/mg］(P<0.05); Hypoxia组细胞 LDH［(62.31±6.82)U/mL比( 19.07±1.65)U/mL］、丙二醛含量［(4.29±0.43)μmol/g比( 1.35±0.12)μmol/g］较对照组增高(P<0.05)溴莫尼定处理后可降低缺氧引起的 LDH［( 31.35±3.21)U/mL比( 62.31±6.82)U/mL］、丙二醛含量［( 1.76±0.19)μmol/g比( 4.29±0.43μmol/g］增加(P<0.05); Hypoxia组细胞 Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、STAT3、p-STAT3表达降低( P<0.05)溴莫尼定处理后可提高细胞 Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、STAT3、p-STAT3的表达( P<0.05);抑制 Akt/mTOR/STAT3信号通路转溴莫尼定对缺氧诱导的 PC12细胞增殖、凋亡及 LDH、丙二醛、 SOD水平的影响。结论溴莫尼定可通过激活 Akt/mTOR/STAT3信号通路促进缺氧诱导的 PC12细胞增殖、抑制细胞凋亡及增强其抗氧化能力进而对缺氧诱导的神经细胞损伤发挥保护作用。     

下调微小 RNA-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白调控宫颈癌细胞侵袭和迁移的分子机制

目的研究下调微小 RNA(miR)-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶 -张力蛋白( PTEN)调控宫颈癌 Caski细胞侵袭和迁移的分子机制。方法本研究起止时间为 2018年 12月至 2019年 11月。以宫颈癌 Caski细胞为探讨对象,转染 miR-425-5p抑制剂( inhibitor),PTEN siRNA和 miR-425-5p inhibitor共转染到宫颈癌 Caski细胞; MTT法测定细胞增殖, Transwell小室测定细胞侵袭和迁移;在线靶基因预测软件发现 PTEN与 miR-425-5p可能互为靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系;蛋白质印迹法( Western blotting)测定上皮钙黏素( E-cadherin)、神经钙黏素( N-cadherin)蛋白表达。结果转染 miR-425-5p inhibitor后的宫颈癌 Caski细胞 miR-425-5p表达量降低［( 0.96±0.15)比( 0.32±0.04)］,增殖［( 0.47±0.05)比( 0.23±0.04)］、侵袭［( 95.32±7.86)比( 63.17±5.22)］及迁移［( 140.88±13.94)比( 89.64±9.57)］能力降低, E-cadherin表达上调［( 0.29±0.05)比( 0.65±