肾气丸对缺血再灌注损伤小鼠肾细胞凋亡的作用及机制研究

目的探讨肾气丸在小鼠肾缺血再灌注( I/R)诱导的急性肾损伤中的作用及机制。方法研究时间为 2018年 4—7月。健康雄性 C57BL6小鼠 40只,利用随机数字表法分为 4组(每组 10只):①假手术组; ②肾缺血再灌注组(肾 I/R组); ③肾气丸低剂量组; ④肾气丸高剂量组。分组后肾气丸低剂量组每天给予 10.5 g/kg的肾气丸灌胃,肾气丸高剂量组每天给予 21.0 g/kg的肾气丸灌胃,持续 2周;假手术组和肾 I/R组每天给予等量生理盐水灌胃。 2周后构建肾 I/R损伤模型, 24 h处死小鼠并取材。检测血清肌酐( Scr)、尿素氮( BUN)及肾脏组织中丙二醛( MDA)含量和超氧化物歧化酶( SOD)的活性; HE染色及 TUNEL染色检测肾组织损伤及凋亡水平; PCR及免疫组化检测 B淋巴细胞瘤 ?2(Bcl?2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase?3)表达水平;蛋白质印迹法检测 PI3K和 AKT蛋白表达水平。结果 HE及 TUNEL染色表明,与肾 I/R组比较,肾气丸低剂量和高剂量组小鼠肾细胞组织损伤程度减轻,肾小管的上皮细胞肿胀、脱落及凝固坏死等病变损伤减轻,高剂量组较低剂量组损伤程度更轻,明肾气丸可抑制细胞损伤及凋亡。与假手术组中 Scr(135.65±11.21)μmol/L、BUN(8.37±1.80)mmol/L、MDA(3.75±0.33)mmol/L、说SOD(175.69±16.29)U/mL、Caspase?3(0.45±0.06)、 Bcl?2(1.96±0.18)、 PI3K(0.81±0.09)和 AKT(0.86±0.11)蛋白相对表达水平检测指标比较,肾 I/R组 Scr(413.47±36.68)μmol/L、BUN(67.45±8.40)mmol/L、MDA含量( 13.21±1.39)mmol/L、Caspase?3水平(1.76±0.19)均升高( P＜0.05),SOD活性( 79.36±7.04)U/mL、Bcl?2水平( 0.61±0.09)、 PI3K(0.09±0.01)和 AKT(0.11±0.01)蛋白相对表达水平明显下降( P＜0.05);与肾 I/R组比较,肾气丸低剂量组 Scr(308.32±17.36)μmol/L、BUN(43.32±4.82)mmol/L和 MDA(11.37±1.02)mmol/L、Caspase?3水平( 1.35±0.16)均降低( P＜0.05),而 SOD活性( 95.61±9.71)U/mL、Bcl?2(0.94±0.11)、 PI3K(0.23±0.02)和 AKT(0.27±0.03)蛋白相对表达水平明显升高( P＜0.05);肾气丸高剂量组 Scr(225.59±21.05)μmol/L、BUN(20.63±2.77)mmol/L和 MDA(5.57±1.04)mmol/L、Caspase?3水平( 0.89±0.11)均降低( P＜0.05),而 SOD活性( 145.72±14.68)U/ mL、Bcl?2(1.52±0.16)、 PI3K(0.45±0.05)和 AKT(0.53±0.06)蛋白相对表达水平也明显升高( P＜0.05);与肾气丸低剂量组比较,肾气丸组高剂量组 Scr、BUN和 MDA含量、 Caspase?3水平均降低( P＜0.05)SOD活性、 Bcl?2水平、 PI3K和 AKT蛋白表达均升高(P＜0.05)。结论肾气丸可通过激活 PI3K/AKT信号通路对小鼠 I/R诱导的急性肾损伤起保护作用。     

微小 RNA?204?3p通过靶向调控 Krüppel样因子 6对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨微小 RNA?204?3p(miR?204?3p)对高糖诱导小鼠足细胞 MPC5损伤的保护作用及其分子机制。方法采用高糖(30 mmol/L D?葡萄糖)处理 MPC5细胞。实时定量 PCR(qPCR)检测细胞中 miR?204?3p与锌指蛋白 Krüppel样因子 6(KLF6) mRNA水平。 MPC5细胞分为 NG组(正常对照)HG组(高糖刺激)HG+miR?204?3p组、 HG+miR?NC组、 HG+si?KLF6组、 HG+si? NC组, HG+miR?204?3p+pcDNA?KLF6组和HG+m,iR?204?3p+pcDNA组,。蛋白质印迹法(Western Blot)检测肌动蛋白微丝偶联蛋白(synaptopodin)、结蛋白(desmin)、 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)与活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(cleaved?caspase?3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,生物学信息预测和双荧光素酶报告基因分析 miR?204? 3p和 KLF6的靶向关系。结果与正常对照相比,高糖可显著降低 MPC5细胞中 miR?204?3p表达量［(0.41±0.04)比(1.02± 0.08)］上调 KLF6 mRNA［(2.86±0.27)比(1.03±0.08)］和蛋白［(0.89±0.08)比(0.46±0.04)］水平,还可上调 KLF6、desmin［(0.81± 0.07)比(,0.34±0.03)］、 Bax、cleaved?caspase?3蛋白表达及细胞凋亡率［(22.46±2.08)%比(5.26±0.64)%］下调 synaptopodin蛋白［(0.34±0.03)比(0.76±0.07)］及 Bcl?2蛋白表达量(P＜0.05)。与 HG+miR?NC组比较, HG+miR?204?3p组明,显提高 synaptopodin［(0.67±0.06)比(0.32±0.03)］及 Bcl?2蛋白水平,降低 desmin［(0.41±0.04)比(0.83±0.08)］、 Bax、cleaved?caspase?3蛋白水平及细胞凋亡率［(11.25±1.65)%比(24.58±2.47)%］(P＜0.05)。与 HG+si?NC组比较, HG+si?KLF6组明显提高 synaptopodin［(0.62±0.06)比(0.28±0.03)］及 Bcl?2蛋白水平,降低 desmin［(0.49±0.05)比(0.86±0.08)］、 Bax蛋白水平及细胞凋亡率［(14.69±1.87)%比(25.47±2.68)%］(P＜0.05)。 miR?204?3p直接靶向 KLF6。与 HG+miR?204?3p+pcDNA组比较, HG+miR?204?3p+pcDNA?KLF6组显著增加高糖刺激小鼠肾脏足 MPC5细胞中 KLF6、desmin［(0.68±0.06)比(0.36±0.04)］、 Bax蛋白表达量和细胞凋亡率［(18.41±1.67)%比(11.05±1.02)%］,显著减少 synaptopodin蛋白［(0.38±0.03)比(0.69±0.07)］和 Bcl?2蛋白表达量(P＜0.05)。结论 miR?204?3p通过直接靶向 KLF6抑制高糖刺激的足细胞凋亡,保护细胞损伤。     

基于缺氧诱导因子?1α/Bcl2/腺病毒 E1B相互作用蛋白 3通路探讨速效救心丸对冠心病大鼠的保护机制

目的探究速效救心丸对冠心病大鼠的保护作用,初步探究其可能作用机制。方法将 40只 SD大鼠分为健康组、单纯模型组、速效救心丸组、缺氧诱导因子 ?1α(HIF?1α)激活剂奥替普拉( Oltipraz)组、速效救心丸 +奥替普拉组,每组 10只大鼠。对大鼠心电图 ST段、 T波变化进行检测,采用酶法测定一氧化氮及血脂指标总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白( HDL)、低密度脂蛋白( LDL)水平,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测大鼠肿瘤坏死因子 α(TNF?α)、单核细胞趋化蛋白 ?1(MCP?1)、细胞间黏附分子?1(ICAM?1)、内皮素 ?1(ET?1)、前列环素 I2(PGI2)水平, HE染色观察心肌组织病理形态学变化情况; DNA断裂的原位末端标记法( TUNEL法)检测心肌组织细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测心肌组织中 HIF?1α、Bcl2/腺病毒 E1B相互作用蛋白 3(BNIP3)、 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白( Bax)、半胱氮酸天冬氨酸蛋白酶 ?3(caspase?3)蛋白表达。结果与健康组相比,单纯模型组 ST段( 0.36±0.05)mV、T波( 0.26±0.05)mV升高,三酰甘油( 1.08±0.14)mmol/L、总胆固醇升高, HDL(0.59±0.05)mmol/L降低, TNF?α(38.27±1.36)pg/mL、ET?1(11.63±1.84)ng/L升高,一氧化氮( 28.58±1.53)μmol/L降低,心肌组织细胞凋亡率( 46.72±4.37)%升高, HIF?1α(1.12±0.15)、 caspase?3(0.54±0.05)蛋白表达升高, Bcl?2(0.36±0.05)蛋白表达降低( P＜ 0.05)。速效救心丸组 ST段( 0.23±0.04)mV、T波( 0.15±0.04)mV、三酰甘油( 0.85±0.07)mmol/L、TNF?α(24.69±1.53)pg/mL、ET?1(7.18±1.57)ng/L、细胞凋亡率( 15.66±3.51)%、HIF?1α(0.49±0.06)、 caspase?3(0.42±0.04)蛋白表达低于单纯模型组,一氧化氮(36.43±1.65)μmol/L、Bcl?2(0.67±0.07)高于单纯模型组( P＜0.05)。奥替普拉组 ST段( 0.41±0.05)mV、T波( 0.35±0.03)mV、三酰甘油( 1.27±0.12)mmol/L、TNF?α(43.42±1.59)pg/mL、ET?1(12.76±1.45)ng/L、细胞凋亡率( 62.88±8.35)%、HIF?1α(1.37±0.26)、 caspase?3(0.91±0.09)蛋白表达高于单纯模型组,一氧化氮( 23.52±1.84)μmol/L、Bcl?2(0.25±0.04)低于单纯模型组( P＜0.05)。速效救心丸 +奥替普拉组 ST段( 0.34±0.06)mV、T波( 0.24±0.05)mV、三酰甘油( 1.06±0.13)mmol/L、总胆固醇、 TNF?α(35.23± 1.65)pg/mL、ET?1(11.24±1.73)ng/L、细胞凋亡率( 42.76±5.16)%、HIF?1α(1.06±0.17)、 caspase?3(0.52±0.06)蛋白表达低于奥替普拉组,一氧化氮( 27.24±1.32)μmol/L、Bcl?2(0.38±0.06)高于奥替普拉组( P＜0.05)。结论速效救心丸可改善冠心病大鼠血脂、内皮功能,降低机体炎症反应,其可能是通过抑制 HIF?1α/BNIP3通路、降低心肌细胞凋亡实现的。     

茵陈五苓散对实验性梗阻性黄疸大鼠肝损伤的保护作用

目的探究茵陈五苓散对实验性梗阻性黄疸大鼠肝损伤的保护作用。方法 2017年 1月至 2019年 5月， 60只 SD大鼠，选取 45只制成实验性梗阻性黄疸大鼠模型，剩余 15只为对照组， 45只模型大鼠按照随机数字表法分为:模型组、低剂量茵陈五苓散组(10 g·kg-1·d-1)和高剂量茵陈五苓散组(20 g·kg-1·d-1)每组各 15只；实验组使用对应浓度茵陈五苓散灌胃，对照组和模型组使用等量生理盐水灌胃，持续 15 d。使用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)和内毒素(ET)水平；使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量水平；使用蛋白质印记法检测各组大鼠肝组织凋亡相关蛋白 B淋巴细胞瘤 ?2蛋白(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)、半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase?3)和钙蛋白酶(Calpain)蛋白表达水平。结果相比对照组，模型组大鼠体质量、肝指数、 ALT、AST、TBIL、ET、MDA、Bax蛋白、 Caspase?3蛋白、 Calpain蛋白水平均显著升高(P＜0.05)SOD、Bcl?2蛋白水平均显著降低(P＜0.05)；相比模型组，低剂量茵陈五苓散组大鼠体质量、肝指数、 ALT、AST、TBIL、ET、MDA、，Bax蛋白、 Caspase?3蛋白、 Calpain蛋白水平分别为［(0.75±0.23)g、(2.53±0.17)、(130.50±12.05)U/L、(125.55±20.95)U/L、(100.10±10.38)μmol/L、(0.52±0.03)EU/mL、(13.50±3.21)U/mg、(1.00±0.15)、(1.20±0.20)、(0.75±0.15)］，高低剂量茵陈五苓散组分别为［(0.69±0.10)g、(2.11±0.13)、(93.15±10.25)U/L、(83.47±12.27)U/L、(72.30±10.25)μmol/L、(0.40±0.03)EU/mL、(9.26±2.20)U/mg、(0.90±0.11)、(1.00±0.19)、(0.45±0.10)］均显著降低(P＜0.05)，且高剂量茵陈五苓散组显著低于低剂量茵陈五苓散组(P＜0.05)；相比模型组，低剂量茵陈五苓散组大鼠 SOD、Bcl?2蛋白水平分别为［(200.47±27.15)U/mg、(0.69±0.23)］，高剂量茵陈五苓散组大鼠分别为［(270.15±32.06)U/mg、(0.75±0.10)］，均显著升高(P＜0.05)且高剂量茵陈五苓散组显著高于低剂量茵陈五苓散组(P＜0.05)。结论茵陈五苓散通过降低脂质过氧化物水平、提高 SOD性、抑制钙蛋白酶的表达同时抑制肝活，细胞的凋亡实现实验性梗阻性黄疸大鼠肝脏的保护作用，且在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的探讨罗哌卡因对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养骨肉瘤细胞 MG63,分为对照组、低剂量罗哌卡因组、中剂量罗哌卡因组、高剂量罗哌卡因组、 anti?miR?NC组、 anti?miR?199b?5p组、中剂量罗哌卡因 +miR?199b?5p组和中剂量罗哌卡因 +miR?NC组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,白质印迹法(Western Blot)检测细胞中细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)、 P21、B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白蛋(Bax)表达水平,实时荧光定量逆转录 PCR(RT?qPCR)检测细胞中 miR?199b?5p表达水平。结果与对照组比较,低剂量罗哌卡因组、中剂量罗哌卡因组、高剂量罗哌卡因组 MG63细胞增殖能力［(0.88±0.08)、(0.49±0.05)、(0.34±0.03)比(0.92±0.09)］、 Cyclin D1蛋白［(0.85±0.08)、(0.66±0.06)、(0.41±0.04)比(0.95±0.09)］表达降低(P＜0.05),而 P21［(0.18±0.02)、(0.37±0.04)、(0.71±0.07)比(0.14±0.01)］蛋白表达升高(P＜0.05)中剂量罗哌卡因组 Bcl?2蛋白［(0.20±0.02)比(0.76±0.07)］及 miR?199b?5p［(0.13±0.01)比(0.82±0.08)］的表达降低(P＜0.05),而,MG63细胞凋亡率［(23.51±2.42)%比(7.66±0.75)%］和 Bax蛋白［(0.89±0.09)比(0.28±0.03)］表达升高(P＜0.05)。与 anti?miR?NC组比较, anti?miR?199b?5p组 MG63细胞增殖能力［(0.64±0.06)比(0.98±0.09)］及 Cyclin D1蛋白［(0.40±0.04)比(0.95±0.09)］和 Bcl?2蛋白［(0.36±0.03)比(0.76±0.07)］的表达降低(P＜0.05),而 MG63细胞凋亡率［(19.56±1.58)%比(7.66±0.75)%］及 P21［(0.53±0.05)比(0.14±0.01)］和 Bax［(0.71±0.07)比(0.28±0.03)］的蛋白表达升高(P＜0.05)。与中剂量罗哌卡因 +miR?NC组比较,中剂量罗哌卡因 +miR?199b?5p组 MG63细胞增殖能力［(0.58±0.06)比(0.36±0.03)］及 Cyclin D1蛋白［(0.71±0.07)比(0.40±0.04)］和 Bcl?2蛋白［(0.53±0.05)比(0.21±0.02)］的表达升高(P＜0.05),而 MG63细胞凋亡率［(12.68±1.23)%比(23.35±2.34)%］及 P21［(0.37±0.03)比(0.72±0.07)］和 Bax［(0.57±0.06)比(0.88±0.09)］的蛋白表达降低(P＜0.05)。结论罗哌卡因可能通过下调 miR?199b?5p降低了骨肉瘤细胞的增殖,并促进了其凋亡。     

中介素对急性肾衰竭的肾脏保护作用

目的探讨中介素在急性肾衰竭病人血清中的表达及其对肾脏的保护机制。方法选取焦作市第二人民医院 2015年 12月至 2018年 6月间确诊的急性肾衰竭病人 45例和健康对照组 30例,采用酶联免疫吸附试验检测血清中介素水平,寻找血清中中介素水平与急性肾衰竭的相关性。另外,建立大鼠肾小管上皮细胞( NRK?52E)缺氧 /复氧模型,模拟急性肾衰竭肾脏缺血再灌注过程, MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况, RT?PCR和蛋白质印迹法检测自噬标志蛋白 beclin?1、微管相关蛋白轻链 3(LC3)和磷脂酰肌醇 3?激酶 /蛋白激酶 B/雷帕霉素靶蛋白( phosphatidylinositol 3?kinase/protein kinase B/mam? malian target of rapamycin,PI3K/Akt/mTOR)信号相关蛋白表达水平,以进一步探索中介素对肾脏的保护作用。结果急性肾衰竭病人血清中中介素表达水平明显高于健康对照组者。大鼠肾小管上皮细胞经过缺氧 /复氧处理后,细胞的存活率为( 45.3± 4.5)%,与对照组( 100±1.4)%相比显著下降( P＜0.05)。采用不同浓度的中介素( 2 μmol/L、4 μmol/L、6 μmol/L)对细胞进行干预后,细胞存活率分别为( 55.9±2.6)%,(75.4±3.2)%,和( 86.7±2.9)%,与缺氧 /复氧模型组相比显著上升( P＜0.05)。细胞在缺氧再复氧后发生了严重的细胞凋亡现象,凋亡率为( 42.3±3.6)%,与对照组( 10.2±1.7)%相比显著上升( P＜0.05)而经过中介素( 4 μmol/L)预孵育 4h的细胞凋亡率为( 27.6±3.1)%,与缺氧 /复氧模型组相比显著下降( P＜0.05)。随着中介浓度升高, PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白磷酸化水平显著降低( P＜0.05),beclin?1、LC3?Ⅱ/LC3?Ⅰ表达量升高,细胞自噬水平显著升高;与中介素单独处理组相比, PI3K抑制剂 LY290042与中介素( 2 μmol/L)联合用组, PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平极显著下降(P＜0.05)beclin?1、LC3?Ⅱ/LC3?Ⅰ表达量极显著上升,细胞自噬水平极显著升高。结论中介素在急性肾衰竭病人血清中高度表达,抑制 PI3K/Akt/mTOR信号通路,上调细胞的自噬水平,实现直接保护肾脏作用。素,通过,     

隐丹参酮通过 G蛋白偶联受体 55调节 Wnt/β?catenin信号通路抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及其作用机制研究

目的探讨隐丹参酮对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法实验设置不同浓度隐丹参酮( CT)组、空白对照( NC)组、 pcDNA?con组、 pcDNA?GPR55组、 CT+si?con组、 CT+si?GPR55组。 MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡; qRT?PCR检测 GPR55 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达。结果 MTT法检测显示, 0 CT组、 2 CT组、 4 CT组、 8 CT组、 16 CT组、 32 CT组细胞增殖抑制率分别为( 0.00±0.02)%、(25.04±2.50)%、(68.56±5.86)%、(85.44±8.54)%、(88.25±8.82)%、(80.11±8.01)%,与不含隐丹参酮的细胞相比,不同浓度隐丹参酮处理组 TSCC细胞的增殖抑制率均显著升高( F＝284.028,P＜0.05)。隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 Bcl?2、β?catenin表达,促进 Bax、 GPR55表达。过表达 GPR55也抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 CyclinD1、Bcl?2表达,促进 Bax表达。低表达 GPR55逆转了隐丹参酮对舌鳞状癌细胞的增殖抑制、凋亡促进及对 β?catenin表达的抑制作用。与 NC组( 0.75±0.08)相比, CT组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.26±0.03)显著降低;与 CT+si?con组( 0.30±0.03)相比, CT+si?GPR55组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.62±0.06)显著升高( F＝176.212,P＜0.05)。结论隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控 GPR55及 Wnt/β?catenin信号通路有关。     

苯丁酸钠对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察分析苯丁酸钠( Sodium phenylbutyrate,NaPB)对乳腺癌 MDA?MB?231细胞增殖和凋亡的影响,初步探究其可能的作用机制。方法以不同剂量 NaPB(0 mmol/L、2 mmol/L和 4 mmol/L)处理乳腺癌 MDA?MB?231细胞株并进行实验分组:对照组, 2 mmol/L NaPB组 4 mmol/L NaPB组。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT法)检测各组乳腺癌细胞的增殖情况,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用蛋白质印迹法(Western Blot)检测凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、Bcl?2相关 X蛋白( Bax)和乳腺癌易感基因 1(BRCA1)蛋白表达的水平。结果 NaPB能显著抑制乳腺癌 MDA?MB?231细胞的生长增殖,并可诱导乳腺癌细胞凋亡,对照组、 2 mmol/L NaPB组和 4 mmol/L NaPB组乳腺癌细胞的凋亡率分别为( 4.25±0.89)%、(14.11±2.98)%和( 32.73±1.89)%,两两比较均差异有统计学意义( P＜0.05)NaPB可诱导凋亡相关蛋白 Bcl?2表达水平下降,而 Bax表达水平升高, NaPB的抗肿瘤作用在高剂量组中表现得更明显。与对相比 NaPB可显著下调 BRCA1蛋白的表达,差异照组,有统计学意义(P＜0.05)。结论 NaPB可抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与 NaPB下调 BRCA1表达有关。     

脂联素对急性呼吸窘迫综合征大鼠炎性因子及细胞凋亡因子的影响

目的研究脂联素(Adiponectin,APN)对内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠炎性因子及细胞凋亡因子的影响。方法采用随机数字表法,将 45只健康雄性 Wistar大鼠分为三组(每组 15只):对照组、 LPS组和 APN组。对照组和 LPS组分别经腹腔注射 0.9％氯化钠溶液和 LPS(7.5 mg/kg),APN组在造模前 12 h经腹腔注射鼠重组 APN 6 mg/kg。造模 12 h后留取血标本和肺组织标本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血浆及肺组织肿瘤坏死因子 α(Tumor necrosis factor α,TNF?α)和白细胞介素 ?10(Interleukin 10,IL?10)的含量,采用蛋白质印迹法(Western Blot)测定各组大鼠肺组织中的 B细胞淋巴瘤 /白血病?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase?3)蛋白相对含量,并对比组间各指标的差异。结果 APN组与 LPS组的血浆和肺组织中 TNF?α和 IL?10水平均高于对照组,且 APN组指标低于 LPS组［血浆 TNF?α:9.27(8.55,16.53)ng/L比 25.36(22.41,36.34)ng/L,IL?10:95.85(77.35,116.01)ng/L比 158.51(119.60, 346.16)ng/L;肺组织 TNF?α:9.27(8.55,16.39)ng/L比 24.56(18.00,31.11)ng/L;IL?10:135.63(127.31,153.21)ng/L比 184.94(161.66,203.51)ng/L,均 P＜0.016 7］; LPS组和 APN组肺组织中 Bax、Bcl?2、Caspase?3蛋白含量均高于对照组,其中 APN组的 Bcl?2高于 LPS组［0.41(0.33,0.43)比 0.32(0.29,0.36)P＜0.016 7］而 Caspase?3低于 LPS组［0.23(0.18,0.29)比 0.34(0.27,0.45), P＜0.016 7］。结论 APN不仅通过抑制炎症反应降低ARDS大鼠的肺部损伤程度,还可能通过影响组织细胞凋亡来达到肺保护作用。     

DEAD?box解螺旋酶 46基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的分析短发夹 RNA(shRNA)介导 DEAD?box解螺旋酶 46(DDX46)基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量逆转录 PCR(RT?qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)测定人正常乳腺上皮细胞系和乳腺癌细胞系中 DDX46表达差异。以慢病毒介导的 shRNA敲低乳腺癌 SK?BR?3细胞中 DDX46的表达，实验分为空白对照组、阴性对照组和 sh?DDX46组。 RT?qPCR检测各组细胞 DDX46 mRNA的表达水平，蛋白质印迹法检测 DDX46蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平，克隆形成和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞生长增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 DDX46 mRNA在各乳腺癌细胞系中的表达量均高于正常乳腺上皮细胞(P＜0.05)。 sh?DDX46组细胞 DDX46 mRAN和蛋白表达水平均明显低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05)。 sh?DDX46组的细胞生长增殖能力明显低于两对照组(P＜0.05)。空白对照组、阴性对照组和 sh?DDX46组 SK?BR?3细胞凋亡率分别为(4.21±1.65)%、(5.36±1.23)%和(10.21±2.39)%，与空白对照组和阴性对照组相比， sh?DDX46组 SK?BR?3细胞凋亡率明显增加(P＝0.007；P＝0.016)。沉默 DDX46后凋亡通路蛋白 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)的表达量明显降低(P＜0.05)Bcl?2相关 X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶 ?3剪切体(cleaved Caspase?3)表达明显增高(P＜0.05)。结论 DDX46在乳腺癌中高表达，沉默 DDX46基因能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进凋亡，凋亡信号细胞，通路可能是其作用机制之一。     

利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡及转录活化因子6通路的影响

目的探究利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及对转录活化因子 6(ATF6)通路的影响。方法按照利拉鲁肽浓度 0、10、100、1 000 nM培养人结肠癌 HCT116细胞 24、48、72 h,人胆囊收缩素 /缩胆囊素八肽(CCK?8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测作用后细胞中 21KD蛋白(Bax)半胱胺酸蛋白酶 ?3(Caspase?3)及 ATF6通路蛋白 ATF6 p50、CCAAT?增强子结合蛋白( C/EBP)同源蛋白( CHOP)的表达水平。结果、与对照组相比,利拉鲁肽各浓度间增殖率均有显著变化( P＜0.05)同一时间点随着利拉鲁肽浓度的增加, 0、10、100、1 000 nM各组细胞的增殖率分别为( 97.16±35.67)%、(81.69±33.37)%、(76.12,±30.23)%、(70.65±28.89)%;(86.17±33.98)%、(58.68±26.77)%、(39.74±10.67)%、(30.17±9.24)%;(83.82±31.19)%、(38.77±10.19)%、(22.98±6.78)%、(16.63±6.12)%,均呈下降趋势。同一浓度随着时间推移, 24、48、72 h各时间点细胞增殖率分别为( 97.16±35.67)%、(86.17±33.98)%、(83.82±31.19)%;(81.69±33.37)%、(58.68± 26.77)%、(38.77±10.19)%;(76.12±30.23)%、(39.74±10.67)%、(22.98±6.78)%;(70.65±28.89)%、(30.17±9.24)%、(16.63± 6.12)%。不同浓度利拉鲁肽作用于 HCT116细胞 72 h后, 10、100、1 000 nM浓度的利拉鲁肽组的 G2/M期细胞比例较 0 nM组显著减少( P＜0.05),且随着浓度的增加 G2/M期细胞呈现下降趋势。 0、10、100、1 000 nM利拉鲁肽作用下细胞凋亡率分别为(9.06±0.98)%、(10.45±1.12)%、(13.89±1.54)%、(56.08±14.33)%,依次升高( P＜0.05)。与 0 nM组比较, 10、100、1 000 nM浓度的利拉鲁肽组细胞的凋亡率依次显著升高( P＜0.05);与 10 nM组比较, 100、1 000 nM组凋亡率依次显著升高( P＜0.05);与 100 nM组比较, 1 000 nM组凋亡率显著升高( P＜0.05)。蛋白质印迹法结果显示, 10、100、1 000 nM利拉鲁肽作用后细胞中 Bax蛋白表达量分别为( 0.69±0.13)、(0.93±0.24)、(1.19±0.25)显著升高( P＜0.05)1 000 nM组 Bax蛋白表达量显著高于 10 nM组( P＜0.05),100、1 000 nM两组间差异无统计学意义( P＞005); Caspase?3蛋白表达量分别为( 0.26±0.06)、(0.76±0.15)、(1.15±0.16)依次显著升高(P＜0.05),100、1000 nM组Caspase?3蛋白表达量显著高于 10 nM组(P＜0.05),1 000 nM组Caspase?3蛋白表达量显著高于 100 nM组( P＜0.05); ATF6 p50蛋白表达量分别为( 0.69±0.11)、(0.96±0.09)、(1.20±0.08); CHOP蛋白表达量分别为( 0.27±0.06)、(0.79±0.08)、(0.99±0.09)均显著升高( P＜0.05)100、1 000 nM组 ATF6 p50、CHOP蛋白表达量显著高于 10 nM组( P＜0.05)1 000 nM组 ATF6 p50、 CHOP 蛋白表达量显著高于100 nM组( P＜0.05)。结论 利拉鲁肽对结肠癌 HCT116 细胞具有增殖抑制和凋亡促进作用,且呈时间?剂量的依赖性,其可能通过激活 ATF6通路发挥促凋亡作用。     

胰激肽原酶对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制

目的研究注射用胰激肽原酶对慢性高眼压大鼠眼压及视网膜神经节细胞( RGCs)的保护作用。方法 SD大鼠 30只,按随机数字表法分为空白组、模型组、治疗组,每组 10只。模型组和治疗组用巩膜静脉烧灼法制作慢性高眼压大鼠模型,造模成功 1周后,治疗组给予胰激肽原酶( 0.8 U)治疗,而空白组、模型组给予腹腔注射等剂量 0.9%氯化钠溶液( 0.2 mL),均每天 1次,连续 2周。监测大鼠眼压的变化并记录数据。苏木精 ?伊红(HE)染色观察 RGCs形态, DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)测定 RGCs凋亡情况,免疫组织化学染色法测定细胞凋亡相关基因 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白( Bax)的含量。结果造模前眼压各组无明显变化( F＝0.152,P＞0.05),造模后模型组［术后 1周:(32.85±2.06)mmHg,术后 2周:(33.27±2.24)mmHg,术后 3周( 33.00±1.09)mmHg］与治疗组［术后 1周:(32.77±2.07)mmHg,术后 2周:(31.68±2.20)mmHg,术后 3周(30.09±2.52)mmHg］眼压均升高,与空白组［术后 1周:(15.44±1.02)mmHg,术后 2周:(15.21±1.41)mmHg,术后 3周( 14.90±1.32)mmHg］比较差异有统计学意义( F＝355.429,F＝427.714,F＝315.063;均 P＜0.001)。 HE染色示空白组视网膜各层结构清晰,模型组 RGCs排列不规整,细胞缺失,有空泡形成。治疗组细胞排列稍不规整,细胞少量缺失。 TUNEL示空白组偶见凋亡细胞,模型组凋亡细胞增多,治疗组凋亡细胞减少,组间比较差异有统计学意义( F＝796.179,P＜0.001)。免疫组化示模型组 Bcl?2、Bax表达均有所增强,而治疗组较模型组 Bcl?2表达增强, Bax表达明显减弱,各组间比较差异有统计学意义( F＝389.728,F＝525.331;均 P＜0.01)。结论胰激肽原酶可以缓慢降低眼压,还可能通过升高 Bcl?2,降低 Bax的表达抑制 RGCs凋亡,达到保护视神经的目的。     

枇杷叶提取物通过激活磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶 B信号通路减轻脂多糖诱导的肺细胞损伤

目的探讨枇杷叶提取物对脂多糖( LPS)诱导的人 Ⅱ型肺泡上皮细胞 A549增殖、凋亡及氧化应激的影响及其可能作用机制。方法 2019年 6月至 2020年 7月,采用 LPS诱导的 A549细胞建立肺损伤模型( LPS组)同时将正常培养的细胞作为对照组。不同剂量( 1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L)的枇杷叶提取物处理细胞( LPS+枇杷叶 -L组、 LPS+枇,杷叶 -M组、 LPS+枇杷叶 -H组),添加磷脂酰肌醇 3激酶( PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)信号通路抑制剂 LY294002与枇杷叶提取物处理细胞( LPS+枇杷叶 -H+ LY294002组);采用 MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用 2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛的含量;蛋白质印迹法( Western blotting)检测磷酸化磷脂酰肌醇 -3-激酶( p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B(p-Akt)、 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X(Bax)蛋白蛋白表达量。结果与对照组比较, LPS组吸光度［( 1.38±0.06)比( 0.55±0.02)］及 SOD的含量［( 81.66±5.36)U/L比(14.65±1.06)U/L］降低,凋亡率［(6.41±0.25)%比( 27.43±1.00)%］、 Bax蛋白水平及 LDH［(242.86±6.09)U/L比( 875.92±15.01)U/ L］、丙二醛［( 121.55±3.17)μmol/g比( 424.46±6.48)μmol/g］的含量升高, Bcl-2、p-PI3K［( 0.60±0.04)比( 0.13±0.01)］、 p-Akt［( 0.51±0.04)比( 0.09±0.01)］蛋白水平降低,差异有统计学意义( P<0.05);与 LPS组比较, LPS+枇杷叶 -M组、 LPS+枇杷叶 -H组吸光度［( 0.55±0.02)比( 0.86±0.03)、(1.18±0.05)］及 SOD［( 14.65±1.06)U/L比( 36.84±2.08)U/L、(70.97±3.03)U/L］的含量升高,凋亡率［( 27.43±1.00)%比( 22.24±0.81)%、(14.78±0.49)%］、 Bax蛋白水平及 LDH［( 875.92±15.01)U/L比( 641.95±9.81)U/L、(365.47±7.02)U/L］、丙二醛［( 424.46±6.48)μmol/g比( 277.94±6.90)μmol/g、(156.30±3.26)μmol/g］的含量降低, Bcl-2、p-PI3K［( 0.13±0.01)比( 0.32±0.01)、(0.54±0.03)］、 p-Akt［( 0.09±0.01)比( 0.25±0.02)、(0.42±0.03)］蛋白水平升高,均差异有统计学意义( P<0.05);添加 LY294002可明显逆转枇杷叶提取物对 LPS诱导的 A549细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论枇杷叶提取物可通过激活 PI3K/Akt信号通路减轻 LPS诱导的 A549细胞增殖抑制、凋亡和氧化应激效应,为探究枇杷叶治疗细菌感染     

口服复方甘草酸苷片联合静脉注射川芎嗪对酒精性肝病病人 T淋巴细胞的影响

目的探讨复方甘草酸苷片联合川芎嗪对酒精性肝病病人 T淋巴细胞亚群的影响和临床疗效。方法选择 2016年 9月至 2018年 9月在石家庄市第五医院治疗的酒精性肝病病人 116例,按照随机数字表法分为两组,各 58例。对照组病人均采用川芎嗪治疗( 120 mg川芎嗪加入至 250 mL葡萄糖注射液中,静脉滴注, 1次/日),观察组病人均在对照组基础上采用复方甘草酸苷片治疗(饭后口服,每次 50 mg,3次/日)。两组均接受 28 d的连续治疗,用药剂量依据病人年龄、症状等酌情加减。比较++两组 T淋巴细胞亚群［成熟 T淋巴细胞( CD3)、诱导性 T细胞 /辅助性 T细胞( CD4)、抑制性 T细胞 /细胞毒性 T细胞( CD8)］、肝纤维化指标［层粘连蛋白( LN)、透明质酸( HA)、 Ⅳ型胶原( CL?Ⅳ)］、细胞因子水平［肿瘤坏死因子 ?α(TNF?α)、转化生长因子 ?β(TGF?β1)、白细胞介素 ?6(IL?6)、瘦素( LP)］与肝功能指标［天门冬氨酸氨基转移酶( AST)、 γ?谷氨酰基转移酶( GGT)、丙氨酸氨基转移酶( ALT)］。结果治疗 28 d后,观察组 CD3(63.71±9.92)%与 CD4(38.99±8.26)%高于对照组(59.37±9.68)%、(35.75±6.12)%,CD8(28.63±5.62)%水平低于对照组( 31.35±6.17)%,LN(52.44±13.65)μg/L、HA(39.75±10.69)μg/L、CL?Ⅳ(69.88±14.55)μg/L、TNF?α(235.95±67.28)pg/L、TGF?β1(94.35±20.76)mg/L、IL?6(54.99±12.08)pg/L、LP(4.38±1.59)μg/L、AST(40.96± 12.08)U/L、GGT(36.28±14.53)U/L与 ALT(39.24±10.97)U/L水平均低于对照组 LN(52.44±13.65)μg/L、HA(39.75±10.69)μg/L、 CL?Ⅳ(69.88±14.55)μg/L、TNF?α(235.95±67.28)pg/L、TGF?β1(94.35±20.76)mg/L、IL?6(54.99±12.08)pg/L、LP(4.38±1.59)μg/L、 AST(40.96±12.08)U/L、GGT(36.28±14.53)U/L与 ALT(39.24±10.97)U/L水平,差异有统计学意义( P＜0.05)。结论酒精性肝病病人在川芎嗪治疗基础上,采用复方甘草酸苷片治疗,可有效改善 T淋巴细胞亚群水平,利于控制肝纤维化,调节细胞因子水平,改善肝功能。     

微RNA-29b在心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的探讨微 RNA?29b(miR?29b)在心肌缺血 /再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤过程中是否发挥保护作用并探讨其可能的调控机制。方法通过 100 μmol/L叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导 H9C2心肌细胞损伤构建 I/R细胞模型;分别设立正常对照组, TBHP处理组, NC miRNA处理组, miR?29b类似物(mimic)处理组。通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测各组心肌细胞内 miR?29b表达量;人胆囊收缩素 /缩胆囊素八肽(CCK?8)检测各组心肌细胞的存活率;蛋白质印迹法(West? ern Blot)检测心肌细胞中凋亡蛋白和蛋白激酶 B(Akt)蛋白磷酸化水平的改变。另一方面,将 30只 C57/B6小鼠(6~7周龄)逐个编号,通过随机数字表法抽样,随机分为三组,设立 I/R组、 NC miRNA处理组和 miR?29b激动剂(agomir)处理组,其中 miR? 29b agomir组小鼠预先给予 miR?29b agomir治疗。结扎冠状动脉左前降支 30 min,然后再灌注 4h建立心肌缺血再灌注动物模型。通过埃文斯蓝(Evans)和 2,3,5?氯化三苯基四氮唑(TTC)双重染色评估三组小鼠心肌梗死面积; qPCR检测各组小鼠心肌组织内 miR?29b表达量;蛋白质印迹法检测心肌组织内凋亡蛋白改变。结果细胞层面:与 TBHP处理组相比(65±3)%,上调 miR?29b表达可增加心肌细胞的存活率(85±3)%,下调心肌细胞凋亡蛋白表达(0.86±0.07)。进一步的蛋白质印迹法实验结果表明:与 TBHP处理组(0.81±0.05)相比,上调 miR?29b能够抑制 Akt蛋白磷酸化(0.41±0.02)。动物层面: miR?29b agomir处理组小鼠心肌梗死面积(24±3)%与 I/R组(62±2)%相比明显减少,且心肌组织凋亡蛋白表达明显减少(0.32±0.04)。结论上调 miR?29b表达可以减少缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡。 miR?29b可能是通过调控靶基因 Akt磷酸化水平,下调心肌细胞凋亡水平,从而保护心脏。     

紫草素通过激活自噬相关的 E1连接酶 7信号通路诱导结肠癌细胞自噬

目的研究紫草素对人结肠癌细胞系 SNU?407增殖和自噬的影响,及其潜在的分子机制。方法通过细胞计数试剂盒 ? 8(CCK?8)检测细胞存活率,用 Hoechst 33258染色法和流式细胞术分析细胞生长情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)分析不同紫草素浓度(0μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L和 30 μmol/L)处理前后自噬相关的 E1连接酶 7(ATG7)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和死亡受体(Caspase?8,Caspase?3,PARP)蛋白表达情况。结果紫草素以时间和剂量依赖性方式诱导 SNU?407细胞凋亡和自噬,在紫草素处理的 SNU?407细胞中观察到 ATG7表达水平显著升高;与 0 μmol/L的紫草素相比, 10 μmol/L、20 μmol/L和 30 μmol/L紫草素处理后 SNU?407细胞的 ATG7/自噬相关的 E1连接酶 5(ATG5)相对表达量分别显著增加［(176±9)%、(212±13)%和(293±11)%］。与 GFPi(阴性对照质粒 pSUPER_GFP siRNA)阴性对照组相比, ATG被沉默的 shATG7(ATG7的 RNA干扰质粒 pSUPER_ATG7 siRNA)组 LC3?Ⅱ/LC3?Ⅰ比值显著低于 GFPi阴性对照组［(8.25±1.36)比(97.45±1.98),P＜0.001］ATG7沉默后抑制了紫草素诱导的 SNU?407细胞自噬;荧光显微镜结果和流式细胞术分析证实紫草素诱导结肠癌细胞凋亡;质印迹法印迹分析显示紫草素通过 MAPK活化诱导结肠癌细胞凋亡,激活死亡受体(FADD)调节细胞凋亡蛋白(Caspase?8,Caspase?3,PARP)表达。此外,紫草素通过增加 ATG7的表达水平,进而下调促进细胞自噬的 p62表达。结论紫蛋白,草素通过激活 ATG7信号通路诱导人结肠癌细胞系 SNU?407细胞凋亡和自噬。     

三叶苷对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用

目的研究三叶苷( Trilobatin)对 N?甲基 ?D?天冬氨酸( N?methyL?D?aspartate,NMDA)诱导的人神经母细胞瘤细胞( SH? SY5Y)损伤的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立 SH?SY5Y细胞 NMDA损伤模型。分设对照组( 0 mmol/L NMDA)、 NMDA损伤模型( 0 μmol/L三叶苷)组、三叶苷组( 10,50,100 μmol/L)。对照组正常培养, NMDA损伤模型组以 2 mmol/L的 NMDA为造模浓度,三叶苷组在 NMDA损伤模型组的基础上分别以 10,50,100 μmol/L的三叶苷为细胞活性测试浓度。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT法)测定三叶苷对 SH?SY5Y细胞活性的影响;通过 MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)释放量检测三叶苷对 NMDA诱导 SH?SY5Y细胞损伤的保护作用,用蛋白质印迹法( Western Blot)检测细胞内促凋亡蛋白 Bax,抗凋亡蛋白 Bcl?2及 NMDA受体调节亚单位 NR2B蛋白表达水平,研究其作用机制。结果三叶苷在 1～100 mmoL/L范围内不影响 SH?SY5Y细胞的存活率。与对照组相比, NMDA损伤模型组细胞存活率为( 53.13±3.31)%,细胞存活率明显降低,细胞凋亡明显增高。与对照组相比,三叶苷组( 10,50,100 μmol/L)细胞存活率分别为( 56.28±2.05)%、(68.64±1.74)%及     

程序性细胞死亡因子 4基因对川崎病血清诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的研究程序性细胞死亡因子 4(PDCD4)对川崎病病人血清诱导的血管内皮细胞凋亡的作用。方法研究时间为 2017年 3月至 2018年 4月。采集邵阳学院附属第一医院川崎病病人血清,处理血管内皮细胞,实时荧光定量 PCR(realtime PCR)和蛋白质印迹法检测细胞中 PDCD4 mRNA和蛋白表达水平。在血管内皮细胞中转染 PDCD4 siRNA,用川崎病血清培养,以 Realtime PCR和蛋白质印迹法检测细胞中 PDCD4表达水平。 MTT方法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(C?Caspase?3)、活化型 Caspase?9(C?Caspase?9)蛋白水平。结果川崎病病人血清处理后的血管内皮细胞中 PDCD4表达上调［mRNA:(1.00±0.01)比( 3.51±0.36);蛋白:(0.26±0.08)比(0.57±0.06)］。 PDCD4 siRNA可以下调川崎病病人血清诱导的血管内皮细胞中 PDCD4表达水平［mRNA:(0.91±0.09)比( 0.41±0.06);蛋白:     

JNK信号传导通路在赭曲毒素A体外诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的探讨赭曲毒素A(OA)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的作用机制。方法体外培养HKC,随机分为空白对照组、溶剂(0.04%乙醇)对照组、OA 1μmol·L-1处理组及c-Jun氨基端激酶(JNK)阻断剂SP600125 0.5μmol·L-1预处理+OA组。细胞处理24h后,分别采用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色和Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(caspase)3蛋白的表达以及JNK的磷酸化水平(p-JNK)。结果OA组细胞凋亡率明显高于溶剂对照组〔(4.24±0.17)%vs(1.06±0.14)%〕,SP600125预处理+OA组HKC凋亡率〔(2.44±0.38)%〕明显低于OA组。OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平明显升高,SP600125预处理+OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平较OA组明显降低。结论OA可能通过激活JNK,上调caspase 3蛋白的表达而诱导HKC凋亡。     

实验性吸烟大鼠氧化抗氧化指标的研究

目的探讨吸烟在慢性阻塞性肺疾病(COPD)氧化/抗氧化失衡发病机制中的作用,为进一步开发COPD的抗氧化药物治疗提供理论依据。方法Wistar大鼠32只,随机分为不吸烟组和吸烟1个月组、2个月组、3个月组,每组8只。采用化学发光法检测各组血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中超氧化物歧化酶(SOD)、还原性谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化物(MDA)含量。结果①吸烟1个月、3个月组血清GSH(327±199)μmol/L,(392±136)μmol/L均较不吸烟组(294±156)μmol/L增高,但差异无统计学意义;吸烟3个月组血清GSH(392±136)μmol/L较2个月组(174±7)μmol/L增高,差异有统计学意义(P<0.05);各组BALF中GSH含量的变化差异无统计学意义。②吸烟2个月组血清SOD活力(116±36)kU/L较不吸烟组(104±13)kU/L、吸烟1个月组(100±13)kU/L、吸烟3个月组(100±12)kU/L均增高,差异有统计学意义(P<0.05);各组BALF中SOD活力的变化差异无统计学意义。③吸烟各组血清及BALF中MDA含量均较不吸烟组增高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同吸烟时间引起机体氧化抗氧化指标的变化不同。抗氧化能力减弱所致氧化/抗氧化失衡是吸烟导致COPD的重要发病机制。