慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞增殖及成熟状态的研究

目的:观察CITP患者骨髓巨核祖细胞增殖及成熟状态。方法:采用血浆凝块法进行培养,经SZ-21单抗和免疫组化染色后计数巨核祖细胞集落数,用电子计算机图像分析仪测定巨核细胞直径、面积。结果:CITP患者巨核祖细胞集落数与对照组无明显差异,但面积直径值低于对照组;分组比较,骨髓涂片巨核细胞数正常组巨核祖细胞集落数低于对照组。相关性分析,巨核祖细胞集落数与骨髓涂片巨核细胞数呈正相关,而与外周血小板计数、病程长短无相关。结论:(CITP患者巨核祖细胞存在成熟障碍,部分患者存在增殖障碍,集落数与骨髓涂片巨核细胞数多少呈正相关,与血小板计数、病程长短无相关。     

干扰素在体外对特发性血小板减少性紫癜患者巨核系集落生长的影响

在体外,干扰素对骨髓增殖性疾病巨核系祖细胞集落具有抑制作用,用于治疗血小板增多症等.近10年来,一些学者观察到,干扰素治疗慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)有效,能使血小板数上升,但机制不清.干扰素在体外对CITP骨髓巨核系祖细胞集落的影响如何,报告极少.本文体外培养CITP患者骨髓巨核祖细胞,观察不同浓度重组干扰素α-2a(rIFNα-2a)对其集落生长的影响,现将结果报告如下.     

干扰素在体外对特发性血小板减少性紫患者巨核系集落生长的影响

在体外,干扰素对骨髓增殖性疾病巨核系祖细胞集落具有抑制作用,用于治疗血小板增多症等。近10年来,一些学者观察到,干扰素治疗慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)有效,能使血小板数上升,但机制不清。干扰素在体外对CITP骨髓巨核系祖细胞集落的影响如何,报告极少。本文体外培养CITP患者骨髓巨核祖细胞,观察不同浓度重组干扰素α-2a(rIFNα-2a)对其集落生长的影响,现将结果报告如下。     

干扰素对特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞的影响

为观察重组干扰素 α２ａ（ｒ Ｉ Ｆ Ｎ α２ａ）对 Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ患者慢性特发性血小板减少性紫癜（ Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ）患者骨髓巨核祖细胞增殖和成熟的影响,采用血浆凝块法培养３３例巨核祖细胞,经 Ｓ Ｚ２１单克隆抗体和 Ａ Ｂ Ｃ试剂盒染色后计数其集落,用图象分析仪测定巨核细胞的直径、面积和黑度值,并与２５例健康人（对照组）比较。结果： Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ组患者的巨核祖细胞面积和直径均低于对照组,但集落数正常;ｒ Ｉ Ｆ Ｎ α２ａ 在体外对患者巨核祖细胞集落生成抑制率明显低于对照组;对患者骨髓涂片,巨核细胞数增高组巨核祖细胞集落抑制率明显低于巨核细胞数正常组。结果表明,ｒ Ｉ Ｆ Ｎ α２ａ 在体外对 Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ患者巨核祖细胞增殖的抑制作用较正常对照组弱;用ｒ Ｉ Ｆ Ｎα２ａ 治疗 Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ患者宜选择骨髓涂片巨核细胞数增高者     

人重组促血小板生成素对体外造血细胞增殖的作用

以前的报道认为 ,人重组促血小板生成素 (rh TPO)或巨核细胞增殖成熟因子 (MGDF)是一种特异的调节巨核细胞生长发育的因子 ,能够促进巨核细胞的增殖与分化 ,单独使用对巨核细胞系无明显作用 ,且不能促进正常人 CFU- GM的生成 [1 ,2 ]。笔者于 1999年 9月～ 2 0 0 0年 1月用 rh TPO观察对巨核细胞系和正常人骨髓细胞表面抗原及各系祖细胞形成的影响 ,结果报告如下。1　材料与方法1.1　细胞因子　 TPO为沈阳三生制药股份有限公司赠送 ,选用剂量为 1～ 40 ng/ ml,与白细胞介素 (IL ) - 3联合时用 10ng/ m l。 IL - 3、红细胞生成素 (…     

特发性血小板减少性紫癜骨髓巨核祖细胞体外培养的研究

目的 :探讨特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患者骨髓巨核祖细胞体外培养及其临床意义。方法 :采用胶原半固体培养法 ,培养 18例 ITP患者骨髓巨核祖细胞。根据骨髓涂片检查及巨核细胞 (MK)标化记数分为 MK增高 12例 ,MK不增高 6例2组 ;将 0 .1m l自身新鲜血清加入 ITP患者的另一巨核系培养基中培养 ,观察自身新鲜血清对巨核祖细胞集落的影响 ;用 A-PAAP法检测 ITP患者的外周血 T淋巴细胞亚群的表达。结果 :ITP患者巨核祖细胞集落数与对照组差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,MK不增高组巨核祖细胞集落数低于对照组 ;CD4 /CD8比值减低组巨核祖细胞集落数也低于对照组 ,巨核祖细胞集落数的多少与 CD4 /CD8减低程度呈正相关 ;其自身新鲜血清对骨髓巨核祖细胞集落形成有不同程度的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,抑制率为 (2 8.6 8± 2 7.4 0 ) %。结论 :ITP发病与免疫异常有关 ,部分患者存在巨核祖细胞增殖障碍。     

脐血巨核祖细胞的体外扩增

目的联合血小板生成素(TPO)、白细胞介素-11(IL-11)和肝素用脐血CD34 细胞定向扩增巨核祖细胞.方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34 细胞,用TPO、IL-11和肝素定向扩增巨核祖细胞,巨核祖细胞集落分析(CFU-MK)测定巨核祖细胞扩增倍数,流式细胞术检测巨核祖细胞分化过程中不同细胞组群(CD34 、CD41a 、CD61 、CD34 CD41a 和CD41a CD61 )的变化,免疫组织化学染色(CD41a)和透射电镜观察巨核细胞形态及超微结构,血小板体外活化实验及非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞功能.结果单用TPO 7 d时,CD34 CD41a 细胞扩增(4.0±1.7)倍;与IL-11联用后扩增到(10.5±4.8)倍;再加入肝素后扩增达(29.9±6.4)倍,TPO IL-11 肝素组扩增倍数为TPO组、TPO IL-11组的7.5、2.85倍,与两组相比差异均有显著性(P＜0.05).TPO IL-11 肝素组巨核祖细胞中大集落(＞50个细胞/集落)达(106.8±26.9)倍,较TPO、TPO IL-11组均有明显增加(P＜0.05).将扩增第7天的巨核细胞静脉输注于经放射预处理的非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠,可明显加速其血小板及白细胞的恢复并提高小鼠生存率.电镜显示扩增的巨核细胞有一定的界膜发育等成熟特征,体外血小板活化实验证实,扩增的巨核细胞在体外可产生血小板,有正常巨核细胞功能.结论TPO、IL-11和肝素组合的培养体系可有效扩增脐血巨核祖细胞.     

血小板生成素从CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞

目的 探讨血小板生成素(Tpo)对CD34^ 细胞增殖分化巨核细胞，体外扩增巨核祖细胞集落形成的影响。方法 采用Dynal M—45CD34免疫磁珠分离纯化再障(AA)骨髓CD34^ 细胞，应用Tpo、IL—3、IL—6等不同组合的扩增效应。结果 Tpo具有明显的体外扩增作用，含Tpo组其扩增CFU—MK的能力明显强于不含Tpo组。IL—3、IL—6单独作用时，对巨核祖细胞有不同程度的生长刺激。但该作用均低于Tpo组，其中Tpo 20ng/ml为CFU—MK培养的最佳浓度。结论 Tpo具有促使干细胞进入增殖周期的作用，对造血细胞同样具有协同扩增作用。     

慢性特发性血小板减小性紫癜患者骨髓巨核细胞成熟程度探讨

采用血浆凝块法对２４例慢性特发性血小板减少性紫癜（ＣＩＴＰ）患者的骨髓巨核细胞体外培养，重点观察巨核细胞成熟度及α－干扰素对ＣＩＴＰ患者骨髓巨核细胞增殖和成熟度的影响。结果显示：ＣＩＴＰ组骨髓巨核祖细胞的ＣＦＵ－ＭＫ和总集落数明显高于对照组，巨核细胞数正常者ＢＦＵ－ＭＫ和总集落数低于对照组；图像分析发现巨核细胞的直径、面积、ＧＰⅢａ和ＧＭＰ－１４０阳性细胞的黑度值均较对照组低。由此表明ＣＩＴＰ患者的巨核细胞存在一定的成熟障碍，α－２ａ干扰素对ＣＩＴＰ患者骨髓巨核细胞的作用是抑制集落生长。     

慢性特发性血小板减小性紫癜患者骨髓巨核细胞成熟程度探讨

采用血浆凝块法对２４例慢性特发性血小板减少性紫癜（ＣＩＴＰ）患者的骨髓巨核细胞体外培养，重点观察巨核细胞成熟度及α－干扰素对ＣＩＴＰ患者骨髓巨核细胞增殖和成熟度的影响。结果显示：ＣＩＴＰ组骨髓巨核祖细胞的ＣＦＵ－ＭＫ和总集落数明显高于对照组，巨核细胞数正常者ＢＦＵ－ＭＫ和总集落数低于对照组；图像分析发现巨核细胞的直径、面积、ＧＰⅡａ和ＧＭＰ－１４０阳性细胞的黑度值均较对照组低。由此表明ＣＩＴＰ患者     

rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响

目的研究重组人生长激素（rHGH）对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响。方法雄性BALB/C小鼠45只术前24h一次性皮下注射环磷酰胺（CTX）100mg/kg,然后行人直肠癌小鼠肾被膜下移植术（SRCA）,随机分成rhGH1组、rhGH2组每日皮下注射rhGH3IU/kg,联合组、化疗组和对照组连续用药7d。各组小鼠随机留3只待其自然死亡,观察其生存期,余小鼠术后10d处死,观察小鼠外周血细胞数、体重、移植瘤末初体积差（△TS）、抑瘤率（IR）及（HE染色）组织学变化。结果联合组及化疗组移植瘤△TS及IR比前三组差异有显著性（P〈0.01）;联合组和化疗组平均生存期显著高于对照组（P〈0.05）;联合组白细胞数值显著高于化疗组（P〈0.05）;对照组和rhGH各组的组织病理形态相似,而联合组和化疗组表现为实质细胞减少,间质增多。结论rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长无明显促进作用;rhGH和化疗药联用对化疗药的抑瘤作用无明显影响、可减轻化疗药的骨髓抑制反应;二者联用可延长实验小鼠的生存期。     

重组人血小板生成素治疗化疗诱导的重度血小板减少的临床研究

目的　评价国产重组人血小板生成素 (rhTPO)对化疗后重度血小板减少 (≤ 2 0×10 9/L)患者治疗的临床疗效和安全性。方法　化疗后血小板≤ 2 0× 10 9/L的 81例实体瘤和完全缓解的白血病患者接受方案和剂量相同的两周期化疗 ,第 1个周期作对照 ,第 2个周期化疗结束后 6～2 4h皮下注射rhTPO 1.0 μg·kg-1·d-1为用药组 ,连续用药最长 14d。监测血尿常规、肝肾功能、凝血功能、胸部X线片、心电图及血清抗rhTPO抗体。结果　用药组血小板最低值及血小板恢复最高值均明显高于对照组 (最低值分别为 13× 10 9/L、12× 10 9/L ,P =0 0 0 2 ;血小板恢复最高值分别为186× 10 9/L和 12 2× 10 9/L ,P <0 0 0 1)。血小板 <5 0× 10 9/L的持续天数用药组和对照组分别为 11d和 13d(P <0 0 5 )。血小板恢复至≥ 75× 10 9/L、≥ 10 0× 10 9/L所需的天数用药组分别为 2 1d和 2 4d ,明显短于对照组的 2 4d和 2 7d(P <0 0 0 1)。血小板输注量用药组少于对照组 ,P <0 0 0 1。用药组和对照组相比 ,化疗后检测血常规、肝肾功能及凝血功能的变化无明显差异。 1例患者产生低滴度血清抗rhTPO抗体。个别患者出现发热、关节痛、头晕、头痛和寒战。结论　rhTPO可减少化疗后重度血小板减少患者血小板降低程度和持续时间 ,减     

重组人促红细胞生成素在COS-7细胞内表达的研究

目的：研究不同真核载体对人促红细胞生成素ｃＤＮＡ的表达效率。方法：人促红细胞生成素ｃＤＮＡ分别用真核表达载体ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＩ、ｐＡｄＣＩ进行重组，脂质体法转化ＣＯＳ ７细胞，以ＴＦ １细胞检测ＥＰＯ的表达活性。结果：感染ｐｃＤＮＡ３ ＥＰＯ，ｐｃＤＩ ＥＰＯ，和ｐＡｄＣＩ ＥＰＯ的ＣＯＳ ７细胞培养上清中人促红细胞生成素活性分别为０５×１０２，１５×１０３和２２×１０２。结论：已构建成可表达具生物活性的重组人促红细胞生成素的真核表达克隆，嵌合内含子序列可增强人促红细胞生成素ＣＤＮＡ的表达效率     

重组人血管内皮抑制素(恩度)联合化疗治疗骨肉瘤的临床研究

目的骨肉瘤是好发于青少年的恶性肿瘤,预后较差。目前的化疗效果不能提高患者的5年生存率。近年来内皮抑素抑制肿瘤血管生成的作用受到重视,文中评价重组人血管内皮抑制素(恩度)治疗骨肉瘤的近期疗效和安全性。方法明确诊断为骨肉瘤的患者随机分为试验组(即恩度组)和对照组。试验组采用恩度联合化疗治疗,对照组单用化疗药物治疗,观察2组的临床受益率、生活质量评分和不良反应。结果 22例骨肉瘤患者纳入本研究。试验组和对照组的临床受益率分别为100%和71.4%,不良反应差异无统计学意义(P>0.05)。无预期以外的不良事件发生。结论初步研究结果表明,恩度对骨肉瘤显示出一定的抗肿瘤活性,安全性较好,值得进一步研究。     

促红细胞生成素在早产儿贫血中的应用

目的:探讨重组人类红细胞生成素(rh-EPO)防治早产儿贫血的疗效。方法:将68例早产儿按入院顺序随机分为治疗组和对照组各34例,治疗组用rh-EPO每周750IU/kg,隔日1次,皮下注射共6周,加常规治疗,必要时输血,对照组仅用常规方法治疗。结果:治疗组治疗后网织红细胞计数(Ret)较对照组明显升高(P<0.01),两组早产儿出生后血红蛋白(HB)均逐渐下降,但治疗组下降缓慢,治疗结束后两组差异非常显著(P<0.001);血清铁(SI)水平在治疗期间治疗组明显低于对照组(P<0.01);治疗结束后差异缩小(P<0.05);治疗组输血率(11.76%)较对照组(38.23%)明显减少(P<0.05)。观察期末治疗组体重增长的速率较对照组高。结论:rh-EPO能有效防治早产儿贫血,无明显副作用。     

重组人血小板生成素治疗白血病化疗后血小板减少的初步观察

目的评价国产重组人血小板生成素（rhTPO）对白血病患者化疗后血小板减少的临床疗效和安全性。方法化疗后血小板≤20×10^9／L的10例白血病患者接受方案和剂量相同的两周期化疗,第1个周期作对照;第2个周期化疗结束后24h皮下注射rhTPO15000u为用药组,连续用药最长14d（血小板≥50×10^9／L停用）。监测血及尿常规、肝肾功能、凝血功能、骨髓象。结果用药组血小板最低平均值及血小板恢复最高平均值均明显高于对照组（最低值分别为15×10^9／L、5×10^9／L;血小板恢复最高值分别为450×10^9／L和256×10^9／L,P〈0．001）。血小板〈50×10^9／L的持续天数用药组和对照组分别为12d和16d（P〈0．05）。血小板恢复至≥100×10^9／L所需的天数用药组分别为16d,明显短于对照组的22d（P〈0．001）。血小板输注量用药组少于对照组,P〈0．001。用药组和对照组相比,化疗后检测血常规、肝肾功能及凝血功能的变化无明显差异。个别患者出现发热、寒战、关节痛和头痛。用药后未见原始细胞增多者。结论rhTPO可减少白血病化疗后血小板的降低程度和持续时间,减少血小板的输注,且毒副反应少。     

促红细胞生成素联合前列地尔治疗急性肾损伤疗效观察

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)联合前列地尔治疗急性肾损伤(AKI)的疗效.方法 将2009年6月至2013年10月间昆明医科大学附属甘美医院血液净化中心住院患者120例,符合AKI的AKIN诊断标准而入组.对照组30例,仅常规血液透析(HD)治疗;观察组分为:(1)联合用药组30例:在对照组基础上加用EPO 3 000 U皮下注射3次/周,前列地尔20 μg静脉滴注,1次/d,用药14d; (2) EPO组30例:在对照组基础上予EPO 3 000 U皮下注射,3次/周,用药14d; (3)前列地尔组30例:在对照组基础上予前列地尔20μg静脉滴注,1次/d,用药14d.以上4组共观察28 d,记录每组患者尿量变化情况,分别在入组第4天、第8天、第15天送检血肌酐(Crea),尿NGAL、尿IL-18.结果 (1)与对照组相比较,联合用药组少尿期持续时间较短(5±0.8) dvs (10±2.3)d,血肌酐恢复至正常所需时间较短(10±1.1) dvs (16±2.3)d,P＜0.05;尿NGAL、尿IL-18亦均存在统计学意义(P＜0.05); (2)与对照组相比,前列地尔组、EPO组尿NGAL、尿IL-18在统计学意义(P＜0.05);但EPO组与前列地尔组间尿NGAL、尿IL-18无统计学意义(P＞0.05); (3)联合用药组与EPO组、前列地尔组比较,尿NGAL有统计学意义(P＜0.05).但尿IL-18无统计学意义(P＞0.05).结论 (1) EPO联合前列地尔治疗AKI,较单纯HD治疗可缩短少尿期时间和肾功能恢复所需时间,促进受损肾小管上皮细胞的增生修复,可在临床推荐; (2)在HD基础上,单独应用EPO或前列地尔疗效优于单纯应用HD治疗AKI.(3)联合应用EPO与前列地尔治疗AKI疗效优于单独应用EPO或前列地尔.     

重组人血小板生成素治疗肿瘤化疗后血小板减少的临床观察

目的:评价重组人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin,rhTPO)对肿瘤化疗后血小板减少的疗效和不良反应。方法:采用自身对照交叉研究方法,对第1周期(对照周期)化疗后PLT≤75×109/L的38例实体肿瘤患者于第2周期采用相同化疗方案,随机分为A、B两组,每组19例患者。A组:第2周期化疗前3天开始皮下注射rhTPO(15 000μ),每日1次,连用7 d;B组:第2周期化疗结束后6~24 h注射rhTPO(15 000μ),1次/d,连用7 d。结果:与对照周期相比,A、B两组血小板减少程度和持续时间差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组比较,血小板最低值、血小板≤50×109/L持续时间及血小板恢复至≥100×109/L时间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:rhTPO可减少PLT降低程度和持续时间,提前给药效果更佳,且无严重不良反应。     

重组人血管生长素的纯化

目的 建立表达重组人血管生长素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ，ｒｈＡＮＧ）的简便纯化工艺，为扩大生产及临床应用打下基础。方法 工程菌经超声破碎，离心洗涤后，变性萃取ｒｈＡＮＧ的包涵体，通过ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－２００柱层析分离，再经ＣｕＣｌ２复性，得到ｒｈＡＮＧ纯品。结果 所获取ｒｈＡＮＧ的纯度达９６％以上，蛋白回收率为８０％，活性测定经鸡胚绒毛尿囊膜（ｃｈｏｒｉｏａｌｌ     

抵克力得预防重组人类促红细胞生成素诱发顽固性高血压和血栓症的临床研究

用抵克力得预防重组人类促红细胞生成素(rHuEPO)治疗尿毒症的血栓并发症共17例。并讨论其机理。证实药品改善了血小板聚集功能,能使rHuEPO导致的高血压与血栓症的不良作用得到改善。