低强度脉冲超声介导威灵仙干预兔膝关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原和转化生长因子β1的表达

背景:研究显示威灵仙可促进软骨细胞增殖,维持和促进软骨细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原;低强度脉冲超声能有效促进软骨细胞增殖、提高细胞膜的通透性,促进药物或基因的传递,从而提高药物的生物学效应。目的:观察低强度脉冲超声介导威灵仙对体外培养的兔膝关节软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原及转化生长因子β1表达的影响,探讨低强度脉冲超声介导威灵仙在软骨损伤修复中的作用及机制。方法:体外分离培养兔膝关节软骨细胞,取处于对数生长期的2代细胞,随机分为4组:对照组,低强度脉冲超声组,威灵仙组,威灵仙+低强度脉冲超声组,干预3 d后分别采用CCK-8比色法检测软骨细胞增殖情况,细胞化学染色法分析Ⅱ型胶原分泌情况及Western blot检测转化生长因子β1的表达情况。结果与结论:干预培养3 d后,与对照组比较,其他3组细胞数量均显著增加(P0.05),威灵仙+低强度脉冲超声组细胞数量最多;威灵仙+低强度脉冲超声组软骨细胞Ⅱ型胶原表达面积、吸光度值均显著大于对照组(P0.05),且其差值大于低强度脉冲超声组、威灵仙组与对照组差值之和;威灵仙+低强度脉冲超声组转化生长因子β1表达水平显著,其相对灰度值显著高于其他各组(P0.05)。结果提示低强度脉冲超声、威灵仙均可促进体外培养兔膝关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原、转化生长因子β1的分泌,二者联用具有一定的协同作用。     

转化生长因子β及周期性拉伸应变条件下骨髓间充质干细胞向软骨样细胞的分化

背景:研究表明转化生长因子β对骨髓间充质干细胞的软骨方向分化具有显著的诱导作用。周期性拉伸应变可以模拟软骨细胞在体内的力学环境,对细胞的增殖和分化起着重要的调节作用。目的:探讨转化生长因子β及周期性拉伸应变在诱导骨髓间充质干细胞向软骨样细胞分化过程中是否具有协同作用。方法:取2月龄新西兰大白兔10只,骨穿针穿入股骨髓腔内,抽取骨髓3.0-4.0 mL并分离培养骨髓间充质干细胞,传至3代后随机分为4组,分别为空白组、转化生长因子β组、周期性拉伸应变组以及周期性拉伸应变+转化生长因子β组,作用1,3,6 d后取出相应细胞,番红O染色观察大体形态,阿尔新蓝染色检测糖胺聚糖水平,ELISA检测上清液基质金属蛋白酶13及基质金属蛋白酶组织抑制剂1水平,RT-PCR检测Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13及基质金属蛋白酶组织抑制剂1 mRNA相对表达量。结果与结论:番红O染色可见细胞呈长梭形或不规则三角形样改变,各实验组较空白组细胞数量及基质分泌增多。作用第3天时转化生长因子β组、周期性拉伸应变+转化生长因子β组上清液糖胺聚糖水平较空白组均升高(P0.05),周期性拉伸应变+转化生长因子β组Ⅱ型胶原mRNA相对表达量较空白组增高(P0.05)。结果提示转化生长因子β及周期性拉伸应变均可诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,二者具有明显的协同作用。     

富血小板血浆调节滑膜炎保护软骨细胞

文题释义：富血小板血浆：是自体生长因子的来源，通过自体全血梯度离心得到。富血小板血浆于1993年Hood等首先提出这一概念，并发现富血小板血浆中含有正常血浆3倍以上的血小板和丰富的生长因子，如血小板衍生生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子和血管内皮生长因子等。基质金属蛋白酶：是一类分解细胞外基质组分的锌蛋白酶。它们在有机体生长发育中的细胞外基质逆转与重塑以及疾病中的病理损害起着极为重要的作用。基质金属蛋白酶的表达和活性在不同细胞水平受到严密调控，如细胞因子、生长因子以及激素的调节，基质金属蛋白酶以酶原形式分泌，随后被其他蛋白酶如胞浆素或非蛋白酶类化学物质如有机汞所激活。 背景：研究证实，滑膜炎分泌的炎症因子通过加速关节软骨的分解代谢而成为骨性关节炎发展的主要原因，基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13在骨性关节炎中起关键作用。 目的：探究富血小板血浆治疗骨性关节炎的有效作用机制。方法：分离并提取大鼠膝关节滑膜细胞和软骨细胞分别培养，腹主动脉取血制备富血小板血浆制剂。将滑膜细胞分为空白对照组和大肠杆菌脂多糖处理组，脂多糖处理组用脂多糖刺激滑膜细胞制造滑膜炎模型；再将滑膜炎细胞分为富血小板血浆处理组和未处理组(脂多糖组)。对照组、富血小板血浆处理组和未处理组3组细胞培养24 h后，用ELISA法检测培养基中炎性细胞因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的水平，另一部分培养基分别处理软骨细胞，培养48 h后，Western blot 检测软骨细胞内Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13蛋白水平的变化，荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13 mRNA表达水平的变化。结果与结论：①ELISA检测显示，脂多糖处理组滑膜细胞培养基中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的水平显著高于对照组和富血小板血浆处理组(P < 0.01)；富血小板血浆处理组培养基中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的水平高于对照组(P < 0.05)；②Western blot检测显示，富血小板血浆处理组软骨细胞中Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白显著高于对照组和脂多糖处理组(P < 0.01)，脂多糖处理组低于对照组(P < 0.05)；③脂多糖组基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13蛋白显著高于富血小板血浆处理组和对照组(P < 0.01)；④PCR检测显示脂多糖组基质金属蛋白酶3，13 mRNA显著高于富血小板血浆处理组和对照组；⑤结果表明，富血小板血浆处理能够通过降低滑膜细胞炎性因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的水平，降低软骨细胞中基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶13的蛋白和mRNA水平，增加Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白的表达而发挥保护软骨的作用。ORCID: 0000-0002-0704-4511(陈尉) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

基质金属蛋白酶和胶原在创伤关节软骨组织中的表达

背景：研究发现,基质金属蛋白酶和胶原参与关节软骨组织机体生理重建及病理破坏。 目的：观察膝关节骨软骨缺损及表面软骨缺损动物模型关节软骨组织中胶原及基质金属蛋白酶的表达变化。 方法：雌性SD大鼠48只随机分为3组：骨软骨缺损组在双膝关节制作骨软骨缺损模型,表面缺损组在双膝关节制作表面软骨缺损,对照组双膝关节制作关节囊切开。分别于术后4、8、12周取股骨髁标本,行苏木精-伊红染色,免疫组化检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶3的表达。 结果与结论：骨软骨缺损组术后4周缺损中有少量新生组织生成,8及12周可见到纤维组织填充,修复组织细胞外基质Ⅰ型胶原免疫组化染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阴性,关节软骨组织中基质金属蛋白酶3表达增高。表面缺损组表面软骨缺损4及8周未见修复迹象,12周可见微量纤维组织填充,细胞外基质Ⅰ型胶原免疫组化染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阴性,术后表面缺损组关节软骨组织基质金属蛋白酶3表达增高。对照组关节软骨组织Ⅰ型胶原免疫组化染色阴性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,基质金属蛋白酶3低表达,无形态学异常改变。说明机械性损伤可以导致关节软骨细胞外基质成分发生改变,丧失其原有的生物学特性而退变,基质金属蛋白酶3在损伤后的软骨组织中表达增高,使细胞外基质的降解增加,是导致关节软骨退变的重要因素。     

黄芪甲苷可减轻白细胞介素1β诱导软骨细胞的炎症反应

背景：骨性关节炎是一种最常见的退行性疾病,但目前仍无延缓或逆转病情的药物,只能消炎镇痛以短期内缓解症状、改善病情。黄芪甲苷是黄芪中一种具有调节免疫、缺血保护、心脏保护、抗炎、抗病毒和抗肿瘤等作用的活性成分。目的：探讨黄芪甲苷对白细胞介素1β诱导的小鼠骨关节软骨细胞ATDC5损伤的作用及相关机制。方法：将ATDC5细胞随机分为空白对照组、模型组、单体组、实验组。空白对照组细胞不加任何干预;模型组细胞用100μg/L白细胞介素1β处理;单体组细胞用5μg/L黄芪甲苷处理,实验组细胞用100μg/L白细胞介素1β和5μg/L黄芪甲苷处理。干预18 h后,采用CCK-8检测细胞增殖活性,Western blot和qRT-PCR检测基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、Ⅱ型胶原、SDF-1、CXCR4的蛋白和mRNA表达变化,甲苯胺蓝染色检测细胞形态改变和细胞数量,锥虫蓝染色检测细胞存活率。结果与结论：(1)与空白对照组比较,白细胞介素1β(100μg/L)明显抑制ATDC5细胞的增殖活性,相关炎症标志物基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13的表达升高,Ⅱ型胶原...     

体外冲击波治疗兔膝骨关节炎:白细胞介素1β及基质金属蛋白酶13的表达

背景:白细胞介素1β和基质金属蛋白13能促进软骨细胞的分解代谢,抑制软骨细胞的合成修复能力,引起细胞外基质的降解,在骨关节炎的发生中有十分重要的作用。目的:观察体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨细胞中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13表达的影响。方法:将30只新西兰兔随机分为治疗组、模型组、对照组,每组10只。治疗组和模型组均采用改良伸直位固定6周,制备兔膝骨关节炎模型。治疗组造模后给予体外冲击波治疗1次,能流密度0.1 mJ/mm2,冲击次数1 000次。对照组不作任何处理。各组兔于治疗后4周处死,取膝关节液和关节软骨。苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色法检测各组膝关节病理学形态改变,采用酶联免疫吸附法测定关节液白细胞介素1β水平,免疫组化法检测白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达。结果与结论:治疗组和模型组关节液白细胞介素1β水平较对照组明显增高(P0.01),治疗结束后治疗组关节液白细胞介素1β水平较模型组下降(P0.05)。治疗组和模型组软骨组织Mankin评分较对照组明显增高(P0.01),治疗结束后治疗组软骨组织Mankin评分较模型组下降(P0.05)。治疗组和模型组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较对照组明显增高(P0.01),治疗结束后治疗组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较模型组下降(P0.05)。结果可见体外冲击波能下调膝骨关节炎软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达,促进Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成,从而对膝骨关节炎起防治作用。     

地黄梓醇调控ATDC5软骨细胞的衰老

背景：课题组前期体内、体外研究结果表明地黄梓醇能够显著降低膝骨关节炎大鼠滑膜组织中炎症指标水平,同时能够延缓膝骨关节炎进展,但是否通过影响软骨细胞衰老进而延缓膝骨关节炎的进展尚未明确。目的：探讨地黄梓醇能否调控ATDC5软骨细胞衰老及可能的机制。方法：将ATDC5软骨细胞分为空白组(0.1%牛血清白蛋白)、模型组(0.1%牛血清白蛋白+1μmol/L阿霉素)、地黄梓醇低剂量组(0.1%牛血清白蛋白+1μmol/L阿霉素+20μmol/L地黄梓醇)及地黄梓醇高剂量组(0.1%牛血清白蛋白+1μmol/L阿霉素+80μmol/L地黄梓醇)。应用阿霉素诱导构建ATDC5软骨细胞衰老模型,按上述分组予以对应的处理。CCK-8法检测地黄梓醇对ATDC5软骨细胞活力的影响,筛选地黄梓醇最佳给药浓度。相应处理后应用β-半乳糖苷酶染色法检测各组ATDC5软骨细胞衰老情况;实时荧光定量PCR法检测相关基因表达(P21、P53、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13、白细胞介素6);Western blot检测P21、P53、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13、白细胞介素6的表达水平;免疫荧光法检测P21、P53和Ⅱ型胶...     

固醇调节元件结合蛋白2在软骨细胞退变过程中的表达（英文）

背景:近期研究证实了固醇调节元件结合蛋白2基因在骨关节炎发生过程中起重要作用,但其具体发病机制尚未完全清楚。目的:通过白细胞介素1β体外诱导关节软骨细胞退变,观察固醇调节元件结合蛋白2在软骨细胞退变过程中的表达变化。方法:体外分离培养C57BL/6J小鼠关节软骨细胞,将第2代软骨细胞随机分为4组:对照组、白细胞介素1β24,48,72 h组。后3组细胞分别以10μg/L白细胞介素1β干预细胞。结果与结论:软骨细胞经白细胞介素1β刺激后呈肥大化表现,软骨细胞活性随白细胞介素1β刺激时间的延长而逐渐降低。与对照组相比,白细胞介素1β24,48,72 h组软骨细胞中固醇调节元件结合蛋白2与固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白mR NA表达水平增加,而蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mR NA表达水平降低。提示白细胞介素1β能抑制软骨细胞增殖和细胞重要基质成分表达,诱导其出现肥大化退行性改变,且在退变的过程中,固醇调节元件结合蛋白2表达逐渐上调,与软骨关键基因的表达呈负向变化关系。     

大鼠膝关节软骨与不同强度跑台运动的影响*

背景：适量的运动是维持正常关节组织形态结构及生理功能的必要条件,过度运动或制动均可导致关节软骨退变。 目的：观察不同强度跑台运动对大鼠膝关节软骨的影响。 方法：将18只雄性成年Wistar大鼠随机分安静组、低强度运动组、高强度运动组。6周后 ELISA法测定血清基质金属蛋白酶3水平,并行蕃红-O染色、基质金属蛋白酶3与Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及Mankin评分,反转录聚合酶链反应检测软骨基质金属蛋白酶3的mRNA表达。 结果与结论：高强度运动组Mankin评分、血清及软骨中基质金属蛋白酶3表达均显著高于安静组与低强度运动组(P < 0.05),基质糖氨多糖及Ⅱ型胶原含量均显著低于安静组与低强度运动组(P < 0.05);低强度运动组与安静组差异无显著性意义。说明高强度运动可造成大鼠膝关节软骨退行性变,且软骨运动性损伤可能与基质金属蛋白酶3表达增强有关。      

机械牵张对兔角膜成纤维细胞细胞外基质基因表达的影响

目的 研究机械牵张与白介素-1β（IL-1β）联合作用对兔角膜成纤维细胞细胞外基质相关基因表达的影响。方法 对原代提取的兔角膜成纤维细胞进行牵张幅度15%、频率0.1 Hz的周期性牵张12、24、36 h,同时给予IL-1β处理,采用实时荧光定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶（MMPs）、基质金属蛋白酶的组织抑制剂（TIMP-1）和I型胶原α1（Collagen Iα1）mRNA表达变化水平。结果 IL-1β单独作用可以诱导角膜成纤维细胞MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达;MMP-1和MMP-3 mRNA表达随时间而降低,MMP-9、TIMP-1、Collagen Iα1 mRNA则随时间而增加;IL-1β与机械牵张联合作用使MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平上调,TIMP-1和Collagen Iα1 mRNA表达下调,且具有时间依赖。单独机械牵张使Collagen Iα1 mRNA表达下降,IL-1β与机械牵张联合作用使其表达进一步下调,且具有时间依赖性。结论 机械牵张与炎性因子联合作用可加剧角膜组织破坏,促进角膜膨隆的发生发展。     

自噬基因在骨关节炎软骨细胞凋亡过程中的保护和平衡效应

背景：软骨细胞在低营养供给下可发生细胞自噬,细胞自噬和细胞坏死、凋亡不同,可以使软骨细胞在营养供给不足时,能够存活下来,可能是软骨细胞自身的重要保护机制之一。 目的：综合阐述自噬基因保护关节软骨及抑制骨关节炎等方面的机制和作用。 方法：应用计算机检索中国知网、万方数据库及PubMed数据库2000年1月至2015年1月关于自噬基因与骨关节炎的相关研究的文章,中文检索词为“自噬基因、骨关节炎、关节软骨、软骨细胞”,英文检索词为“autophagy、osteoarthritis、beclin1、LC3”。选择自噬基因与骨关节炎的相关文章,初检得到269余篇文献,根据纳入标准选择其中的38篇进行综述。  结果与结论：软骨细胞的损伤凋亡是软骨退变的主要机制,不予控制,就可能会进一步发展为骨性关节炎。细胞的损伤凋亡是软骨退变的重要机制之一,因此防止软骨细胞的损伤凋亡,可能有利于损伤软骨的修复,以此来缓解骨关节炎的病情发展。自噬现象能够抑制受损软骨细胞凋亡,发现其可将改变传统治疗骨关节炎的局限,但目前自噬基因与骨关节炎相关的研究还处于初级阶段,特别是对自噬途径在软骨中如何被诱导,如何进行信号转导,如何对软骨细胞生存产生影响等方面的认识还不够全面,有待进一步的研究。     

Autophagy in osteoarthritis

Osteoarthritis is characterized by continuous degeneration of articular cartilage resulting in disability. The death of chondrocytes and the loss of the extracellular matrix are the central peculiarities in cartilage degeneration during osteoarthritis pathogenesis. Autophagy is an essential cellular homeostasis mechanism whereby cellular organelles and macromolecules are recycled to maintain cellular metabolism. Autophagy is reported to be cytoprotective effects for articular cartilage, and osteoarthritis is associated with decreased autophagy. While autophagy is known to be cytoprotective to chondrocytes, its role may vary with differing stages and models of osteoarthritis. Therefore, more in-depth studies on autophagy are needed to determine its impact on cell survival and death in articular cartilage under various in vitro and in vivo conditions. Application of autophagy on osteoarthritis therapeutics will be possible after a profound understanding is established on the role of autophagy in osteoarthritis pathogenesis.     

骨性关节炎患者退变软骨及滑膜组织中细胞因子的表达

背景：骨性关节炎的炎症反应是由软骨细胞、滑膜组织分泌的细胞因子所介导的。关节软骨和滑膜组织内含有多种细胞因子,在关节软骨的损伤修复中起着重要的调节作用。 目的：分析软骨细胞、滑膜组织分泌的细胞因子与骨性关节炎发病的关系及影响。 方法：由第一作者应用计算机检索万方数据库(www.wanfangdata.com.cn),PubMed数据库(www.ncbi.nlm.nih.guv/pubmed)检索时间：2005至2010年。检索词为“骨性关节炎,退变,软骨组织,细胞因子”。计算机初检得到146篇文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关的86篇,内容重复性的研究40篇,保留21篇骨性关节炎患者退变软骨及滑膜组织中各种细胞因子作用及影响的相关文献作进一步分析。 结果与结论：细胞因子主要是指活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的一类非特异调节免疫应答和介导炎症反应的小分子蛋白质,包括由淋巴细胞产生的淋巴因子,单核巨噬细胞产生的单核因子及其他细胞因子等。关节滑膜细胞分泌的细胞因子可部分解释骨性关节炎的病理过程,在炎症关节中起着重要的作用。虽然越来越多的学者重视到滑膜细胞、软骨细胞分泌细胞因子的作用,但主要是研究外源性细胞因子对软骨细胞或滑膜细胞的影响,而其内源性细胞因子在骨性关节炎发病中的作用却未广泛开展研究。     

威灵仙提取物干预膝骨关节炎软骨细胞的生长活力

背景：近年来研究显示关节软骨细胞过度凋亡是骨性关节炎开始和进展的关键因素,利用药物抑制软骨细胞凋亡来控制骨性关节炎的进展是现在的研究热点。而威灵仙在国内临床治疗骨关节炎时取得了较确切的疗效,但是其具体的作用机制是否通过抑制软骨细胞凋亡来实现尚未见相关报道。 目的：观察中药威灵仙提取物对膝骨关节炎软骨细胞生长活力的影响。 方法：取骨关节炎晚期行膝关节置换的关节软骨,剪碎后,采用酶消化法消化细胞,将处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组分别加入0.01,0.05,0.1,0.5,1.0 g/L威灵仙提取物培养基,对照组仅加入普通培养基进行培养。Live/Dead染色法测定人软骨细胞活力指数,TUNEL染色法测定人软骨细胞凋亡指数。 结果与结论：0.05,0.1 g/L威灵仙提取物能明显提高软骨细胞活力,而0.5,1.0 g/L威灵仙提取物反而降低了软骨细胞活力,其活力指数与对照组比较差异均有显著性意义(P < 0.05);0.01,0.05,0.1 g/L威灵仙提取物能有效抑制软骨细胞凋亡,1.0 g/L威灵仙提取物反而促进了软骨细胞凋亡,其凋亡指数与对照组比较差异均有显著性意义(P < 0.05)。结果可见威灵仙提取物在合适的质量浓度时能有效提高人软骨细胞活力,抑制人软骨细胞凋亡,尤以0.1 g/L时效果最佳。     

Osteoarthritis in the context of ageing and evolution. Loss of chondrocyte differentiation block during ageing

Ageing is the main risk factor of primary osteoarthritis (OA) and OA is the disease most strongly correlated with ageing. Both in humans and other animals OA development appears to be not strictly time-dependent but to hold pace with ageing processes. A characteristic of OA is deviant behaviour of chondrocytes in articular cartilage. These chondrocytes resemble terminal differentiated chondrocytes in growth plates and actively produce matrix degrading enzymes. The latter results in cartilage degeneration and eventually OA. We postulate that at a young age progression of chondrocyte differentiation is actively blocked in articular cartilage. This block declines when the evolutionary pressure to maintain this block, after reproductive life, is minimized. The loss of this differentiation block, maybe as a result of changes in chondrocyte TGF beta signalling, results in combination with normal joint loading in cartilage degeneration and OA.     

双醋瑞因干预体外培养关节软骨结缔组织生长因子的表达

背景：在骨关节炎软骨退变中结缔组织生长因子作为一种重要的效应分子在软骨细胞的增殖、分化方面发挥重要作用。临床应用双醋瑞因治疗骨关节炎已取得了良好的效果,但其治疗的确切机制尚不清楚。 目的：观察不同浓度双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导下软骨细胞中结缔组织生长因子的影响。 方法：体外培养SD大鼠关节软骨细胞,重组人白细胞介素1β刺激软骨细胞制备体外骨关节炎模型。实验分组：正常对照组不给予任何处理因素;模型对照组给予重组人白细胞介素1β;实验组给予不同浓度双醋瑞因+10 μg/L重组人白细胞介素1β。利用MTT比色法观察软骨细胞的增殖情况,Western Blot法检测结缔组织生长因子的表达。以上实验均重复3次。 结果与结论：MTT结果显示,与正常对照组比较,双醋瑞因能促进软骨细胞MTT增殖活性,以浓度为10-5 mol/L更明显(P < 0.01),白细胞介素1β作用后各实验组软骨细胞增殖能力下降(P < 0.05);但与正常对照组比较,无论是否加白细胞介素1β,浓度为10-4 mol/L和10-5 mol/L双醋瑞因仍能促进软骨细胞MTT增殖活性(P < 0.05)。Western Blot检测结果显示,白细胞介素1β能够降低结缔组织生长因子的表达(P < 0.01),浓度为    10-5 mol/L双醋瑞因能够显著促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的表达,显著高于模型对照组(P < 0.01)。提示双醋瑞因可以促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的高表达,其可能是双醋瑞因促进软骨细胞的分化增殖,治疗骨关节炎的作用机制之一。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞的共培养

背景：软骨细胞移植等组织工程方法已经成为非常有潜力的骨关节炎治疗措施,软骨下骨的成骨细胞对软骨细胞的作用不仅参与骨关节炎的发生和发展,而且与细胞移植治疗预后有着密切的关系。 目的：培养人膝关节软骨下骨成骨细胞和软骨细胞,构建两者共培养的细胞培养模型,探讨软骨下骨成骨细胞对软骨细胞的作用。 方法：收集骨关节炎患者行全膝关节置换和严重创伤患者行截肢后遗弃的胫骨平台组织,采用Ⅰ型胶原酶连续消化后进行贴壁培养的方法,培养软骨下骨的成骨细胞,应用Ⅱ型胶原酶消化方法,培养软骨细胞,然后应用多孔插入器细胞培养池构建成骨细胞和软骨细胞三维共培养模型。 结果与结论：通过免疫组化,NBT/BCIP染色,茜素红染色等检查,证实成功培养出成骨细胞和软骨细胞。实时定量RT-PCR显示,在与骨关节炎的软骨下骨成骨细胞共培养的软骨细胞中,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达明显下降。可见骨关节炎患者的成骨细胞能促进软骨细胞的退变。     

周期性张应力对骨性关节炎软骨细胞p38 MAPK表达及其磷酸化的影响

目的: 观察周期性张应力(cyclic tensile strain,CTS)对兔骨性关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表达及其磷酸化的影响,探讨力学载荷在骨性关节炎的病理过程中的作用。方法: 实验动物行一侧前交叉韧带切断术(ACLT)制作OA动物模型,术后10周消化分离兔膝软骨细胞体外培养,非手术侧软骨细胞为正常组, OA细胞随机分为低应力组、高应力组以及对照组,分别加载0.1 Hz、1.0 Hz、0 Hz的周期性张应力。加载应力24 h、1周和2周后RT-PCR和Western blotting测定各组p38 MAPK及其磷酸化产物表达水平。结果: 在各时点各组p38 MAPK均有不同程度的表达,其中加载CTS前,正常组与OA对照组相比差异非常显著(P<0.01);加载CTS 1周后,高应力组与低应力组差异有统计学意义(P<0.05);加载CTS 2周后,低应力组与对照组差异非常显著(P<0.01)。Western blotting显示p38 MAPK磷酸化产物在对照组和OA+高应力组持续表达,而OA+低应力组在24 h、1周、2周3个时点的表达逐渐下降。结论: 力学载荷可影响p38 MAPK的表达及磷酸化程度,骨性关节炎的发展发生与应力在细胞分子水平上相互影响。     

信号通路在膝骨关节炎实验研究中的进展

BACKGROUND: Studies have shown that signaling pathway plays an important role in the pathogenesis of knee osteoarthritis. OBJECTIVE: To elaborate the experimental progress of signal transduction pathway in knee osteoarthritis METHODS: A computer-based retrieval of PubMed, CNKI, VIP and Wanfang databases was performed to find the relevant literatures concerning experimental studies of signaling pathway in knee osteoarthritis. All data were primarily screened to exclude repeated and irrelevant articles. Articles about association between knee osteoarthritis and signal pathway were included.   RESULTS AND CONCLUSION: A total of 51 articles were collected, including 20 in Chinese and 31 in English. It is concluded that the signal transduction pathway related to knee osteoarthritis is mainly concentrated in the two aspects: the proliferation of chondrocytes and the apoptosis of chondrocytes. The signal transduction pathways related to the proliferation of chondrocytes mainly include Notch signaling pathway and Wnt signaling pathway. SDF-1/CXCR4 signaling pathway, TLR4 signaling pathway, and MAPKs signaling pathway are associated with apoptosis in chondrocytes. Hippo-YAP signaling pathway and ERK1/2 signaling pathway have a double role in the regulation of proliferation and apoptosis of chondrocytes.