HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

干扰Yes相关蛋白表达调控Wnt/β-catenin信号通路影响膀胱癌细胞凋亡

目的:探讨干扰Yes相关蛋白(YAP)的表达对膀胱癌细胞凋亡的影响及机制。方法:以膀胱癌细胞T-24为研究对象,分为正常对照(control)组、siRNA阴性对照(siRNA-NC)组和YAP siRNA组。分别以real-time PCR和Western blot实验检测转染后各组细胞中YAP的mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc表达水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理YAP siRNA组细胞,并用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:YAP siRNA组YAP的mRNA和蛋白水平均明显低于control组(P0.05)。YAP siRNA组的细胞活力及c-Myc和β-catenin水平均明显低于control组(P0.05),而细胞凋亡率明显高于control组(P0.05)。与未经FH535处理的YAP siRNA组细胞相比,YAP siRNA组的细胞经FH535处理后细胞活力明显下降,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:干扰YAP表达能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活而抑制膀胱癌细胞活力,并促进膀胱癌细胞凋亡。     

基于Wnt/β-catenin信号通路治疗骨关节炎研究热点及应用前景

文题释义：Wnt信号通路：Wnt是Wingless/Integrated的缩写,由配体蛋白质Wnt和膜蛋白受体结合,激发的一组多下游通道的信号转导的途径,该信号通路在不同的动物物种间极为相似,遗传学上具有高度保守性。通过该途径,细胞表面受体胞内段将活化,将细胞外的信号传递到细胞内。表现为两种信号传导方式,分别是胞间交流(旁分泌)和自体细胞交流(自分泌),经典代表有：Wnt/β-catenin信号通路、平面细胞极性通路(Wnt/PCP通路)和Wnt/Ca²⁺通路。 骨硬化蛋白：由Sost基因编码,是一种分泌型半胱氨酸结蛋白,是Wnt共受体和低蛋白脂蛋白相关受体蛋白5 /低蛋白脂蛋白相关受体蛋白6相关受体的拮抗剂,作用于通路的上游,抑制Wnt 信号通路,从而起到软骨保护作用。背景：Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎的发展中起着重要的作用。 目的：基于Wnt/β-catenin信号通路,对骨关节炎的研究进展做一综述。方法：查阅PubMed、中国知网和万方数据库,以“catenin;wnt;osteoarthritis;arthritis;degenerative;arthritides;deformans;pathway;wnt signaling;signaling pathway;wnt signaling pathways;wnt beta catenin signaling pathway;canonical wnt pathway;canonical wnt;骨关节炎”为检索词,分别组合检索,查找Wnt/β-catenin信号通路治疗骨关节炎的文献,最终纳入74篇文献进行分析。结果与结论：基于Wnt/β-catenin信号通路治疗骨关节炎,主要途径有天然的拮抗剂、小分子抑制剂、激动剂、中草药和药物重新定位等方面。药物作用途径通过激活或者抑制Wnt/β-catenin信号通路,对软骨起到保护作用。通过Wnt/β-catenin信号通路治疗骨关节炎,目前处于实验性研究阶段,但具有较好应用前景。如何精准调控通路,更好的转化应用,有望成为未来研究的热点。ORCID: 0000-0002-9553-7171(贝涛) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Wnt/β-catenin信号通路相关的牙缺失基因遗传学研究进展

牙缺失是口腔临床最常见的先天性颅面发育异常疾病,由遗传因素或(和)环境因素导致。牙齿发育受多条信号通路调控,其相关基因发生变异可导致牙齿发育异常。其中,Wnt/β-catenin信号通路相关基因缺陷是造成先天性牙缺失的重要原因之一。本文就近年来导致牙缺失的Wnt/β-catenin信号通路关键基因的分子遗传学研究进行综...     

miR-640调控Wnt信号通路对腰椎间盘突出患者髓核细胞衰老及凋亡的影响

目的 探讨miR-640调控Wnt信号通路对腰椎间盘突出患者髓核细胞衰老及凋亡的影响及其机制。方法 选取我院32例腰椎间盘突出患者的腰椎间盘组织作为观察组,另选取32例外伤患者未病变的腰椎间盘组织作为对照组,qPCR检测2组miR-640表达水平。分离培养人髓核细胞,培养后将原代培养髓核细胞分为Control组、NC组和miR-640组,NC组和miR-640组分别转染NC质粒和miR-640质粒,通过SA-β-gal实验检测各组细胞衰老水平,流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平,免疫荧光检测β-连环蛋白（β-catenin）的表达水平和定位,双荧光素酶报告基因实验检测miR-640和β-catenin的靶向调控关系。结果 与对照组比较,观察组腰椎间盘组织miR-640表达水平显著升高（P<0.01）。与Control组比较,miR-640组细胞衰老水平增加,细胞凋亡率增加,差异均具有统计学意义（P<0.01）,NC组与Control组上述指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫荧光证实miR-640组细胞β-catenin的表达降低,β-catenin入核受到抑制,...     

莪术提取物介导Wnt/β-catenin信号通路对人肝癌Hep-G2细胞的影响*

目的：探讨莪术提取物介导Wnt/β-catenin 信号通路对肝癌Hep-G2 细胞的影响。方法：将浓度为20、50、 100 μg/mL 的β- 榄香烯培养液加入Hep-G2 细胞中,分别设为20 μg/mL 组、50 μg/mL 组和100 μg/mL 组,以不 加β- 榄香烯培养液作为对照组,RT-PCR、免疫印迹检测Hep-G2 细胞Wnt1、β-catenin mRNA和蛋白水平,采 用Transwell 法、MTT法检测Hep-G2 细胞的迁移和增殖情况,流式细胞仪检测Hep-G2 细胞凋亡率。结果：对照 组Wnt1、β-catenin mRNA水平均显著高于其他3 个治疗组,100 μg/mL 组Wnt1、β-catenin mRNA水平显著低于 20 μg/mL组、50 μg/mL组。对照组Wnt1、β-catenin蛋白表达高于其他3个治疗组, 100 μg/mL组Wnt1、β-catenin 蛋白表达显著低于20 μg/mL组、50 μg/mL组。对照组Hep-G2细胞凋亡率显著低于其他3个治疗组,100 μg/mL组 Hep-G2细胞凋亡率显著高于20 μg/mL组、50 μg/mL组。100 μg/mL组Hep-G2细胞迁移细胞数最低,显著低于其他3 组。对照组Hep-G2细胞增殖能力显著高于其他3 个治疗组,100 μg/mL组Hep-G2细胞增殖能力显著低于20 μg/mL组、 50 μg/mL组。结论：莪术提取物通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制肝癌细胞增殖和迁移。     

人参皂苷Rg1通过抑制Wnt/β-catenin通路促进退变人腰椎间盘髓核细胞的生长及胞外基质合成

目的:探讨人参皂苷Rg1对退变人腰椎间盘髓核细胞(HNPCs)生长的调控及其作用机制。方法:培养正常HNPCs,构建HNPCs的氧糖剥夺(OGD)模型模拟退变HNPCs的微环境。光镜观察正常HNPCs和OGD组细胞的形态。分别给予25、50和100μmol/L人参皂苷Rg1后,用real-time PCR和Western blot法分别检测II型胶原(collagen II)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达,CCK-8法检测细胞活力的变化,real-time PCR法检测增殖蛋白Ki67的转录水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路蛋白的表达。加入Wnt/β-catenin通路激活剂Li Cl后,检测其对Wnt/β-catenin通路蛋白、细胞活性、细胞凋亡及基质合成蛋白表达的影响。结果:正常HNPCs细胞贴壁快,形态呈类圆形,胞质丰富;OGD组细胞贴壁较慢,形态多为长梭形,胞质减少,初步证实了退变HNPCs模型构建成功。与HNPCs组相比,OGD组中collagen II和aggrecan的m RNA和蛋白表达均显著降低(P0.05),人参皂苷Rg1可升高collagen II和aggrecan的表达(P0.05)。与HNPCs组相比,OGD组的细胞活力显著降低(P0.05),Ki67表达下调(P0.05),而不同浓度的人参皂苷Rg1可增加细胞活力和上调Ki67的表达(P0.05)。同时,不同浓度的人参皂苷Rg1可减少OGD增加的细胞凋亡和caspase-3活性(均P0.05)。此外,100μmol/L人参皂苷Rg1可显著减弱OGD触发的Wnt/β-catenin通路的活化(P0.05)。而用Wnt通路激动剂Li Cl处理后可明显减弱人参皂苷Rg1对OGD细胞的保护作用(P0.05),提示该通路参与人参皂苷Rg1对退变HNPCs的保护作用。结论:人参皂苷Rg1可通过抑制Wnt/β-catenin通路促进HNPCs的生长和胞外基质合成。本研究将为退变HNPCs的防治提供新的思路。     

Zeste基因增强子同源物2通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:以RT-q PCR和Western blot检测胶质瘤U87、H4和U251细胞及正常人脑星形细胞(NHA)中EZH2的表达水平。在H4细胞中转染EZH2 siRNA和siRNA control,MTT测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,分光光度计法检测caspase-3的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和下游靶分子c-Myc的蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染EZH2 siRNA的H4细胞,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定β-catenin和c-Myc的表达。结果:胶质瘤U87、H4和U251细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平均明显高于NHA(P0.05),并且H4细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平高于U87和U251细胞(P0.05)。EZH2 siRNA可以明显下调H4细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平。EZH2表达下调后的H4细胞从48 h开始细胞活力降低,并且细胞凋亡率也明显升高,细胞中caspase-3活性也明显升高(P0.05),同时EZH2表达下调还可以抑制β-catenin和c-Myc的表达。Wnt/β-catenin信号通路的激活剂可以减少EZH2诱导的H4细胞凋亡,降低细胞中caspase-3的活性。结论:EZH2在脑胶质瘤细胞中过度表达,下调其表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导胶质瘤细胞凋亡。     

siRNA干扰URG11表达对骨肉瘤细胞系MG63的生物学功能和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨siRNA干扰URG11表达后骨肉瘤细胞系MG63的生物学功能和Wnt/β-catenin信号通路的变化。方法:将体外培养的MG63细胞分为Control组（未转染）、NC-siRNA组（转染非特异性NC-siRNA）和URG11-siRNA组（转染URG11-siRNA）,采用逆转录聚合酶链式扩增（RT-P...     

乳腺癌中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达及意义

目的:本研究旨在探讨乳腺癌组织和细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1和β-catenin的表达及意义。方法:选取我院于2015年1月~2017年1月间收治的150例乳腺癌患者作为研究对象。150例乳腺癌的肿瘤组织样本(实验组)来源于手术切除的、临床病理资料保存完整的乳腺癌石蜡切块;相应的临近非肿瘤组织样本(对照组)取自距离肿瘤组织0.5~1 cm的上述乳腺癌患者相应癌旁组织。采用real-tme PCR和Western blot法检测Wnt-1和β-catenin的表达情况。将乳腺癌细胞MCF-7分为3组:阴性对照组(MCF-7细胞)、激动剂组[MCF-7细胞+Wnt3a(1 mg/L)]和拮抗剂组[MCF-7细胞+DKK1(16μmol/L)]。采用real-time和Western blot检测Wnt-1和β-catenin表达情况。结果:与对照组相比,实验组患者Wnt-1和β-catenin的mRNA和蛋白表达量均升高(P0.05)。实验组患者肿瘤组织的Wnt-1表达阳性率和β-catenin表达阳性率均高于对照组(P0.05)。Wnt-1表达与乳腺癌患者肿瘤转移(x~2=5.352,P=0.021)、肿瘤分期(x~2=9.412,P=0.002)及肿瘤直径(x~2=9.412,P=0.002)密切相关(P0.05)。β-catenin表达与乳腺癌患者肿瘤转移(x~2=9.851,P=0.002)、肿瘤分期(x~2=5.661,P=0.017)密切相关(P0.05)。与对照组相比,激动剂组Wnt-1和β-catenin mRNA和蛋白表达量升高(P0.05);与对照组相比,拮抗剂组Wnt-1和β-catenin mRNA和蛋白表达量降低(P0.05)。结论:乳腺癌中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1和β-catenin表达上调,且其表达与肿瘤恶性状态密切相关。     

人工假体磨损颗粒作用下Wnt/β-catenin信号通路对成骨细胞的影响

背景:随着人工关节置换后中远期随访研究的推进发现,置换后中远期出现假体周围松动是限制人工假体使用年限、制约人工关节置换发展的重要因素.目的:通过梳理磨损颗粒诱导下Wnt/β-catenin信号通路主要信号因子对成骨细胞及成骨细胞来源细胞功能方面的研究成果,以进一步深入理解Wnt/β-catenin信号通路,并为药物治疗...     

Wnt/β-catenin通路在动脉粥样硬化发生发展中的作用

Atherosclerosis is a multifactorial process associated with endothelial cell injury and dysfunction, inflammation, oxidative stress, cell proliferation, angiogenesis and so on, all of which play a crucial role in atherosclerosis. Wnt/β-catenin signaling pathway is highly conservative in the development of body, abnormal activation of which is related to types of diseases including cancer. Accumulating studies have shown that Wnt/β-catenin signaling pathway is involved in inflammation, oxidative stress and so on. This article would make a review about the role of Wnt/β-catenin signaling pathway in atherosclerosis based on the pathogenic mechanisms underlying atherosclerosis as mentioned above.     

独活寄生汤拆方通过Wnt/β-catenin信号通路抑制软骨细胞炎症反应

文题释义：Wnt/β-catenin信号通路：是一条在生物进化中极为保守的通路。在正常细胞中,β-catenin只是作为一种细胞骨架蛋白在胞膜处与E-cadherin形成复合体对维持同型细胞的黏附、防止细胞的移动发挥作用。只有当细胞外Wnt信号分子与细胞膜上特异性受体Frizzled蛋白结合激活胞内散乱的蛋白导致GSK-3β失活,进而使β-catenin磷酸化降解,当解离的β-catenin达到一定浓度时细胞功能发生异常,表现为病理状态。独活寄生汤拆方：由中药独活、桑槲寄生、防风、秦艽、细辛、肉桂心组成具有祛风湿、止痹痛的祛湿止痛方,处方比例为3︰2︰2︰2︰2︰2。背景：Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎的炎症反应病理过程中扮演着重要角色,而独活寄生汤拆方可有效抑制软骨细胞的炎症反应,但其具体作用机制尚不明确。有待进一步深入研究。目的：探讨独活寄生汤拆方是否可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应。方法：①取SD雄性大鼠,采用机械Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞,倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构,Ⅱ型胶原免疫组化鉴定软骨细胞。②用不同质量浓度的独活寄生汤拆方(300,400,500 mg/L)干预由脂多糖(10 μg/L)诱导的软骨细胞炎症模型,干预8 h后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组软骨细胞培养液中白细胞介素1β、肿瘤坏子因子α水平,确定独活寄生汤拆方干预浓度。③将第2代软骨细胞分为4组：空白组含正常培养液;模型组培养液中含10 μg/L脂多糖;独活寄生汤拆方组培养液中含10 μg/L脂多糖和400 mg/L独活寄生汤拆方;抑制剂组培养液中含10 μg/L脂多糖和10 mg/L Dickkopf-1。干预8 h后,采用Western blot法检测β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、GSK-3β、CKI-ε的蛋白表达量。结果与结论：①软骨细胞鉴定：获取的软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色胞浆呈棕黄色,具备软骨细胞典型特征;②ELISA结果显示：模型组培养液中白细胞介素1β和肿瘤坏子因子α水平均高于空白组,400 mg/L独活寄生汤拆方干预后两种炎症因子水平较模型组显著降低,所以确定独活寄生汤拆方干预浓度为     400 mg/L;③Western blot结果显示：模型组β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε的蛋白表达量均高于空白组,而GSK-3β蛋白表达量低于空白组;独活寄生汤拆方组和抑制剂组β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε蛋白表达量低于模型组,而GSK-3β蛋白表达量高于模型组。④结果表明：独活寄生汤拆方可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应。ORCID: 0000-0003-3530-5683(李慧)中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤与骨重建及血管生成中的多重话题

文题释义：肿瘤微环境：是指肿瘤的发生、生长及转移与肿瘤细胞所处的内外环境有着密切关系,它不仅包括肿瘤所在组织的结构、功能和代谢,而且亦与肿瘤细胞自身的(核和胞质)内在环境有关。肿瘤细胞可以通过自分泌和旁分泌,改变和维持自身生存和发展的条件,促进肿瘤的生长和发展。上皮间质转化：指上皮到间质细胞的转化,它赋予细胞转移和入侵的能力,包括干细胞特征、减少凋亡与衰老,和促进免疫抑制,不仅在发育过程中起着关键的作用,而且还参与组织愈合、器官纤维化和癌症发生等过程。 背景：Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤的肿瘤发生和骨重建中起的关键作用,及其在血管生成和免疫监视中的意义,是转移性播散的2个关键机制。 目的：文章就Wnt/β-catenin通路在骨肉瘤发生发展中的作用及其对特定微环境的调控进行综述。方法：检索2000年至2020年为止的PubMed数据库,以“Wnt/β-catenin;bone tumors”为英文检索词,得到Wnt/β-catenin通路与骨肿瘤关系的相关研究。结果与结论：典型的Wnt/β-catenin信号通路通过直接作用于骨肉瘤细胞和间接调节骨肉瘤细胞活性2种方式在骨肉瘤生长和转移过程中起着重要作用。Wnt/β-catenin通路也参与了骨肉瘤细胞对骨肿瘤微环境的劫持,促进细胞外基质的调节,使肿瘤细胞具有侵袭性,诱导肿瘤细胞的免疫耐受和血管生成,最终导致转移扩散的增加。另外,骨肉瘤细胞中典型Wnt信号通路的异常激活似乎与细胞增殖、上皮间质转化样过程的诱导、骨肉瘤促肿瘤细胞干细胞特性的获得以及转移扩散密切相关。ORCID: 0000-0003-0353-4895(刘畅) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

长链非编码RNA MEG3对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的调控

背景:椎间盘髓核细胞损伤是引起椎间盘退行性病变的重要原因之一,长链非编码RNA在椎间盘退行性病变中的作用机制尚未阐明.目的:探讨长链非编码RNA MEG3对大鼠椎间盘髓核细胞增殖、凋亡的影响及其对磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinas...