莱菔硫烷对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用

目的:研究莱菔硫烷(SF)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应,并初步探讨其作用机制。方法:通过一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型;通过测定活性氧簇(ROS)的生成、TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡和计数存活的视网膜神经节细胞(RGCs)等方法作为指标观察SF对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应;以免疫组织化学染色和Western blot法检测视网膜核因子E2相关因子2(Nrf2)的核转移和血红素加氧酶1(HO-1)的表达变化。结果:SF能抑制糖尿病大鼠视网膜ROS的生成,抑制视网膜神经细胞的凋亡并增加糖尿病大鼠视网膜RGCs的存活数量;同时SF还可促进Nrf2的激活及HO-1蛋白表达;使用HO-1抑制剂锌原卟啉可明显减弱SF对糖尿病大鼠视网膜RGCs凋亡的抑制作用。结论:SF可能通过激活Nrf2/HO-1抗氧化通路改善糖尿病大鼠视网膜氧化应激状态,减少视网膜神经细胞凋亡,减轻糖尿病大鼠的视网膜损伤。     

左归丸对成骨细胞氧化应激损伤的保护作用

背景:最新研究发现氧化应激在骨质疏松症中发挥着重要作用,衰老、雌激素缺乏、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1与活性氧的产生和骨质疏松发病有着重要的关系。目的:分析左归丸对成骨细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法:实验方案经哈尔滨医科大学附属第二医院伦理委员会批准。分离培养SD乳鼠颅骨成骨细胞,实验分为空白组、模型组(300μmol/L H2O2)、左归丸组(300μmol/L H2O2+10%左归丸含药血清)。用H2O2建立成骨细胞氧化应激损伤模型;在成骨细胞氧化应激损伤同时,用左归丸含药血清培养成骨细胞,空白组不做任何处理。测定各组成骨细胞中丙二醛和超氧化物歧化酶含量;Western blot检测成骨细胞中核因子E2相关因子2和血红素加氧酶1蛋白表达。结果与结论:①与空白组比较,模型组中丙二醛含量明显升高,超氧化物歧化酶的含量明显降低;与模型组比较,左归丸组中丙二醛含量明显降低,超氧化物歧化酶的含量明显升高;②与空白组比较,模型组成骨细胞中血红素加氧酶1和核因子E2相关因子2表达明显增加;左归丸组成骨细胞中血红素加氧酶1和核因子E2相关因子2表达明显高于模型组;③结果说明,左归丸对成骨细胞氧化损伤具有保护作用。     

黄芪甲苷Ⅳ通过激活Nrf-2/HO-1信号通路抑制氧化应激介导的人SY5Y细胞凋亡

目的 探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST4)对H₂O₂诱导的人SY5Y细胞氧化应激损伤以及细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养SY5Y细胞,用H₂O₂诱导建立氧化应激模型,分为PBS组、 H₂O₂模型组和ASTⅣ组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡。取各组细胞的上清液,比色法测定丙二醛(MAD)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量。免疫荧光细胞化学染色法检测裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)和核因子E2相关因子(Nrf-2)的表达和分布。Western blot法检测细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)和c-caspase,以及氧化应激信号通路Nrf-2在胞质内和细胞核内的表达及下游蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白水平。结果 AST4对处于氧化应激损伤状态下的SY5Y细胞具有保护作用,能够减少MAD含量,增加GSH和SOD的含量。AST4增...     

萝卜硫素对多柔比星诱导的大鼠卵巢损伤的保护作用

目的 探讨萝卜硫素(sulforaphane,SFN)对多柔比星诱导的大鼠卵巢功能损害的保护作用及机制.方法 将60只雌性Wistar大鼠随机分为空白组(不做任何处理,15只,A组)及化疗组(尾静脉注射多柔比星30mg/kg,连续14d,45只).化疗组大鼠再随机分为对照组(不再予其他处理,B组)、萝卜硫素低剂量组(尾...     

Nrf2/HO-1通路在甘草查尔酮A诱导的小鼠心肌损伤保护中的作用

目的探讨甘草查尔酮A(Lico A)对急性心肌梗死(AMI)模型小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、心肌梗死(心梗)组和低、中、高剂量药物组以及核因子红系2-相关因子2(Nrf2)特异性抑制剂(ML385)组, 每组5只。造模3 d测各组小鼠心功能后, 取心肌组织进行苏木素伊红(HE)染色评估心肌组织坏死程度;免疫荧光法检测心肌组织活性氧(ROS)生成, 酶标法检测心肌组织中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MAD)含量, 以及过氧化氢酶(CAT)活力;免疫印迹检测心肌组织中血红素加氧酶-1(HO-1)及Nrf2的表达, 免疫组织化学方法进一步验证心肌组织中Nrf2的表达及定位情况。结果与假手术组相比, 手术组小鼠心肌组织坏死显著, 但给予Lico A治疗后, 各剂量组小鼠心肌组织坏死程度及梗死面积明显减小。检测心肌局部氧化应激情况显示, Lico A治疗后, 心肌组织ROS水平较心梗手术组显著降低, GSH含量升高、CAT活力增加同时MAD含量降低(P均<0.05)。免疫印迹分析显示, 与假手术组相比, 心梗组小鼠心肌组织总蛋白中HO-1和核...     

小豆蔻素调节Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路对妊娠糖尿病大鼠氧化应激损伤的影响

目的 探究小豆蔻素（CAR）调节核因子e2相关因子2/血红素加氧酶-1/核因子-κB(Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路对妊娠糖尿病（GDM）大鼠氧化应激损伤的影响。方法 实验分为对照组（Control组）、妊娠糖尿病模型组（GDM组）、低剂量CAR组（L-CAR组）、高剂量CAR组（H-CAR组）,高剂量CAR+Nrf2抑制剂Brusatol组（H-CAR+BR组）,每组12只。采用血糖仪测定大鼠空腹血糖（FBG）;胰岛素放射免疫分析试剂盒检测大鼠胰岛素（FINS）水平;试剂盒检测血清天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）以及总抗氧化能力（T-AOC）;试剂盒测定肝脏组织谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）水平;ELISA法测定血清炎性因子-肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-6)水平;H-E染色法检测肝脏组织病理变化;western blot法检测大鼠肝脏组织Nrf2、HO-1、NF-κB p65、p-...     

Nrf2激动剂萝卜硫素通过抑制肝组织铁死亡减轻小鼠脓毒症肝损伤

目的探讨核因子E2相关因子2（nuclearfactorE2-relatedfactor2,Nrf2）激动剂萝卜硫素（sulforaphane,SFN）对脓毒症小鼠肝脏铁死亡的影响及其分子机制。方法用盲肠结扎穿孔术（cecalligationandpuncture,CLP）复制C57BL/6小鼠的脓毒症模型。将动物随机分成4组：假手术（sham）组、CLP组、CLP+SFN组和CLP+去铁胺（DFO）组,每组4只。检测CLP术后12h各组小鼠肝组织非血红素铁、白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）mRNA、HAMP（hepcidinantimicrobialpeptide;编码铁调素）mRNA、前列腺素内过氧化物合成酶2（prostaglandin-endoperoxidesynthase2,PTGS2）mRNA和铁输出蛋白1（ferroportin1,FPN1）水平,以及血清IL-6、铁调素等铁代谢和铁死亡相关指标;检测血清丙氨酸转氨酶（alanineaminotransferase,ALT）和天冬氨酸转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）活性,以及肝组织脂质过氧化水平如还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPH）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）的变化,并观察肝组织形态学改变;培养巨噬细胞证实SFN对Nrf2活性的影响。结果与sham组相比,CLP组12h可见肝组织炎性浸润,血清中ALT和AST活性升高;肝组织非血红素铁含量增高,HAMPmRNA增多,FPN1蛋白量降低;电镜可见线粒体缩小和嵴消失,并伴随血清IL-6含量和铁调素含量的增加,证明CLP可导致肝组织铁超载和铁死亡。在证实SFN可恢复被脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）下调的巨噬细胞Nrf2表达的基础上,证明给予SFN可明显降低CLP组小鼠血清IL-6含量,减轻肝组织铁超载,缓解上述CLP小鼠的铁代谢障碍,恢复肝细胞线粒体结构,减轻铁死亡;并减少肝组织炎细胞浸润,降低血清ALT和AST活性。结论Nrf2激活剂SFN可减轻CLP引起的小鼠肝组织铁死亡,保护肝功能;其作用可能与调节CLP小鼠肝组织的IL-6/铁调素/FPN1通路活性有关。     

三白草酮通过调控海马Nrf2/HO-1表达减少酒精戒断大鼠抑郁样行为

目的探讨三白草酮（sauchinone,Sau）对酒精戒断大鼠抑郁样行为可能的影响及其机制。方法取成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为正常对照组、酒精戒断模型组、低剂量Sau治疗组和高剂量Sau治疗组,每组8只。正常对照组腹腔注射等体积生理盐水,其余3组每日1次腹腔注射酒精3g/kg,连续28d,然后戒断3d诱导酒精戒断模型。在戒断期间,Sau低、高剂量治疗组分别每日1次腹腔注射5和25mg/kgSau,连续3d。末次给药30min后通过蔗糖偏好实验、悬尾实验（tailsuspensiontest,TST）和强迫游泳实验（forcedswimmingtest,FST）检测大鼠行为学变化;采用商品化试剂盒测定海马组织中总超氧化物歧化酶（totalsuperoxidedismutase,T-SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）和谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平;Westernblot检测海马核因子E2相关因子2（nuclearfactorE2-relatedfactor2,Nrf2）和血红素加氧酶1（hemeoxygenase-1,HO-1）蛋白表达。使用H₂O₂（200μmol/L）诱导小鼠海马神经元HT22细胞氧化应激模型后,分别给予低、高剂量（3和30μmol/L）Sau干预,通过MTT法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;采用试剂盒测定细胞内T-SOD活性和MDA含量;免疫荧光法检测细胞核和细胞质Nrf2蛋白的表达。结果与酒精戒断模型组比较,低、高剂量Sau治疗组大鼠蔗糖偏好率显著升高（P<0.05或P<0.01）,TST和FST的不动时间均显著降低（P<0.05或P<0.01）,大鼠海马中T-SOD、CAT和GSH水平显著升高而MDA含量显著降低（P<0.05或P<0.01）,同时大鼠海马中Nrf2和HO-1蛋白表达显著升高（P<0.05或P<0.01）。体外实验显示,与氧化应激模型组比较,低、高剂量Sau组HT22细胞活力显著升高（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡水平显著降低（P<0.05或P<0.01）,细胞内T-SOD活性显著升高而MDA含量显著降低（P<0.05或P<0.01）,同时高剂量Sau组细胞核Nrf2蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论Sau减少酒精戒断大鼠的抑郁样行为,其机制与通过调控海马中Nrf2/HO-1的表达来抑制氧化应激有关。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎小鼠肺组织的影响北大核心CSCD

目的:基于核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路探讨lncRNA H19对支原体感染肺炎(MPP)小鼠肺组织的影响。方法:将60只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为对照组、MP组、si-NC组和si-H19组。si-NC组、si-H19组鼻腔分别滴入阴性对照siRNA、lncRNA H19 siRNA。除对照组外,其余组鼻腔滴入MP菌液构建MPP模型,对照组滴入等量培养基。1次/d,连续3 d。同时构建支原体感染A549细胞模型,将A549细胞分为对照组、MP组、si-NC组、si-H19组、pcDNA-NC组和pcDNA-H19组。各组分别转染对应的RNA及质粒。除对照组外,其余组使用MP菌液感染A549细胞。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变;qRT-PCR检测肺组织和细胞中lncRNA H19 mRNA的表达;ELISA检测肺组织和细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;免疫组化染色观察小鼠肺组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达;细胞单克隆形成、MTT法及Annexin V-FITC/PI染色检测细胞增殖、凋亡能力;Western blot检测肺组织和细胞中Nrf2、HO-1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达。结果:支原体感染肺炎小鼠实验中:与对照组相比,MP组、si-NC组双肺塌陷呈灰白色,镜下肺泡大量增生,内有充血及炎症细胞浸润;lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组情况较MP组肺部损伤有所改善,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、MMP-9蛋白水平降低,CyclinD1、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05)。同时支原体感染A549实验与支原体感染小鼠肺组织实验结果一致。与对照组相比,MP组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nrf2、HO-1蛋白水平升高,CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05);敲减lncRNA H19后,si-H19组细胞增殖能力提高,凋亡能力降低,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平降低,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05);过表达lncRNA H19后,pcDNA-H19组细胞增殖能力降低,凋亡能力提高,lncRNA H19 mRNA水平、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平升高,CyclinD1、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05)。结论:lncRNA H19在支原体感染肺炎小鼠肺组织中表达上调,敲降lncRNA H19能够减轻小鼠肺部炎症反应,促进细胞增殖并抑制其凋亡,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

Effects of dexmedetomidine pretreatment on heme oxygenase-1 expression and oxidative stress during one-lung ventilation

Purpose: This study aimed to explore effects of dexmedetomidine pretreatment on heme oxygenase-1 (HO-1) expression and oxidative stress during one-lung ventilation (OLV) in lung cancer patients. Methods: Fifty patients with lung carcinoma (ASA I-II, 40-65 years old, body mass index [BMI] < 30 kg/m²) undergoing pulmonary lobectomy were enrolled. They were divided randomly into two equal groups before anaesthesia induction to receive either intravenous injection of 1 μg/kg dexmedetomidine for 20 min (Dexmedetomidine) or not (Control). Results: The results showed no difference in heart rate (HR), mean arterial pressure (MAP) and bispectral index (BIS) between the two groups, as well as liquid intake and output volume (LIO), duration of OLV and time from surgery beginning to excision of pathological tissues (P > 0.05). Levels of tumor necrosis factor (TNF-α) and malondialdehyde (MDA) in Dexmedetomidine group were lower than that of Control at OLV 60 and 90 (P < 0.05). Superoxide dismutase (SOD) activity and the expression level of HO-1 were higher in Dexmedetomidine group than in Control (P < 0.05). Conclusions: Dexmedetomidine pretreatment could upregulated expression of HO-1 in lung tissue and reduce oxidative stress and inflammation during OLV. Thus dexmedetomidine played a role in protecting lung injury by promoting HO-1 expression.     

绞股蓝皂苷减轻H2O2诱导大鼠成骨细胞氧化应激损伤的机制

文题释义：绞股蓝皂苷：来源于葫芦科植物绞股蓝的全草,具有抗氧化、神经保护、降血压和降血脂等作用。研究发现,绞股蓝皂苷对多种细胞的氧化损伤具有保护作用,还可以通过调节NF-κB、AKT和MAPK信号通路抑制RANKL诱导的破骨细胞的形成,抑制骨量丢失,有可能成为治疗骨质疏松等骨代谢相关疾病的潜在药物。 氧化应激：机体受到刺激时氧化和抗氧化系统的平衡被破坏,对细胞和组织产生氧化损伤,氧化应激被认为和机体衰老密切相关。研究发现,绝经后骨质疏松症的发生也与氧化应激有关,是目前骨代谢疾病研究的新热点。 背景：绞股蓝皂苷具有抗氧化作用,多应用于降血压、抗衰老、抗肿瘤等,但其具体保护机制尚不明确,对氧化应激损伤的成骨细胞增殖、分化的影响亦未知。 目的：探讨绞股蓝皂苷减轻大鼠成骨细胞氧化应激损伤的机制,以及对氧化损伤的成骨细胞的增殖、分化的影响。 方法：采用分离乳鼠颅骨细胞的单层培养法培养成骨细胞,实验分为3组,以普通生长培养基为空白组,以普通生长培养基+氧化损伤为对照组,以含绞股蓝皂苷的培养基+氧化损伤为实验组。实验组和对照组成骨细胞经含150 μmol/L H₂O₂的生长培养基诱导氧化损伤模型。干预3,5 d CCK8法检测绞股蓝皂苷对氧化损伤的成骨细胞活性的影响;在诱导后第7天采用碱性磷酸酶染色检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性;诱导第21天采用茜素红染色观察成骨细胞矿化情况;Western blot检测NOX4、骨形态发生蛋白2和Smad4的蛋白表达量。实验方案经广州中医药大学动物实验伦理委员会批准。 结果与结论：①绞股蓝皂苷可促进氧化损伤的成骨细胞增殖;②碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果表明绞股蓝皂苷对受氧化应激损伤的成骨细胞的分化有一定促进作用;③与对照组相比,绞股蓝皂苷可下调实验组NOX4蛋白的表达,上调实验组骨形态发生蛋白2和Smad4蛋白的表达(P < 0.05);④结果说明,绞股蓝皂苷对H₂O₂诱导的成骨细胞氧化应激损伤具有一定的保护作用,并且对损伤的成骨细胞有促进增殖分化的作用,其机制可能与抑制NOX4蛋白表达并激活BMP/Smad通路有关。 ORCID: 0000-0002-0713-8120(林燕平) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Tpc1808对H2O2诱导的C6细胞氧化应激性损伤的保护作用

目的:研究Tpc1808对H2O2诱导的C6细胞氧化应激性损伤的保护作用。方法:采用细胞培养、基因转染、MTT、LDH、免疫荧光组织化学、Western印迹等技术,以星形胶质瘤C6细胞为研究对象,以H2O2作为氧化应激刺激物,建立细胞损伤模型。结果:当终浓度为100μmol/L的H2O2作用于C6细胞24h后,MTT减小,LDH增加,细胞出现明显凋亡;转染Tpc1808基因的细胞受到保护,grp75表达量增加,与对照组相比有显著差异。结论:Tpc1808基因可以保护H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤,该保护作用可能是通过增加grp75表达实现的。     

Fimasartan,a Novel Angiotensin-Receptor Blocker,Protects against Renal Inflammation and Fibrosis in Mice with Unilateral Ureteral Obstruction: the Possible Role of Nrf2

Objectives: A newly developed angiotensin II receptor blocker, fimasartan, is effective in lowering blood pressure through its action on the renin-angiotensin system. Renal interstitial fibrosis, believed to be due to oxidative injury, is an end-stage process in the progression of chronic kidney disease. Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) is known to regulate cellular oxidative stress and induce expression of antioxidant genes. In this study we investigated the role of Nrf2 in fimasartan-mediated antioxidant effects in mice with renal fibrosis induced by unilateral ureteral obstruction (UUO).Materials and Methods: UUO was induced surgically in mice, followed by either no treatment with fimasartan or the intraperitoneal administration of fimasartan (3 mg/kg/day). On day 7, we evaluated the changes in the renin-angiotensin system (RAS) and the expression of Nrf2 and its downstream antioxidant genes, as well as renal inflammation, apoptosis, and fibrosis in the obstructed kidneys. The effect of fimasartan on the Nrf2 pathway was also investigated in HK-2 cells stimulated by tumor necrosis factor-α.Results: The mice with surgically induced UUO showed increased renal inflammation and fibrosis as evidenced by histopathologic findings and total collagen content in the kidney. These effects were attenuated in the obstructed kidneys of the fimasartan-treated mice. Fimasartan treatment inhibited RAS activation and the expression of Nox1, Nox2, and Nox4. In contrast, fimasartan upregulated the renal expression of Nrf2 and its downstream signaling molecules (such as NQO1; HO-1; GSTa2 and GSTm3). Furthermore, it increased the expression of antioxidant enzymes, including CuSOD, MnSOD, and catalase. The fimasartan-treated mice had significantly less apoptosis on TUNEL staining, with decreased levels of pro-apoptotic protein and increased levels of anti-apoptotic protein. In the HK-2 cells, fimasartan treatment inhibited RAS activation, decreased expression of mitogen-activated protein kinases (MAPKs), and upregulated the Nrf2 pathway.Conclusions: These results suggest that fimasartan has beneficial effects in reducing renal oxidative stress, inflammation, and fibrosis. Possible mechanisms to explain these effects are inhibition of RAS and MAPKs and upregulation of Nrf2 signaling, with subsequent induction of antioxidant pathways.     

Protective effects of HGF gene-expressing human mesenchymal stem cells in acetaminophen-treated hepatocytes

Abstract

Mesenchymal stem cells (MSC) secrete a great variety of cytokines that have beneficial paracrine actions. Hepatocyte growth factor (HGF) promotes proliferation in several cell types. The aim of the present study was to investigate the protective effect of HGF gene-transfected MSC (HGF–MSC) in acetaminophen (AAP)-treated hepatocytes. We transfected the HGF gene into MSCs and confirmed HGF expression by RT-PCR and western blot. The concentration of HGF in HGF–MSC conditioned media (HGFCM) was upregulated compared with that in control MSCCM samples. Cell viability was increased in HGFCM-treated hepatocytes. Expression of Mcl-1, an anti-apoptosis protein, was increased and expression of pro-apoptosis proteins (Bad, Bik and Bid) was decreased in HGFCM-treated hepatocytes. HGF–MSC had protective effects on AAP-induced hepatocyte damage by enhancing proliferation. These results suggest that HGF-expressing MSCs may provide regenerative potential for liver cell damage.     

雌激素对H2O2诱导的氧化应激的保护作用及机制

为了探讨雌激素17β-estradiol对H2O2诱导的氧化应激的影响及其可能机制。本研究将H2O2作用于大鼠皮层神经元,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测单独H2O2或者17β-estradiol存在时其对细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响;检测单独H2O2或者17β-estradiol存在时其对糖原合成激酶-3β(GSK-3β)活性的影响及其对磷酸化和非磷酸化GSK-3β表达的影响;检测GSK-3β抑制剂LiCl对H2O2诱导的细胞活力的影响;检测雌激素受体抑制剂ICI-182780存在时17β-estradiol对GSK-3β表达的影响。结果显示:(1)H2O2作用于大鼠皮层神经元后显著降低细胞的活力,各种浓度的17β-estradiol预处理细胞后均能部分阻断H2O2对细胞活力的影响;(2)H2O2作用后显著增加细胞乳酸脱氢酶的释放,而17β-estradiol则部分拮抗此种作用;(3)H2O2增加了GSK-3β的活性,而提前加入17β-estradiol则可以降低H2O2诱导的GSK-3β活性增加;(4)H2O2降低了GSK-3β的磷酸化,而17β-estradiol则部分拮抗了这种作用;(5)GSK-3β抑制剂LiCl也可以拮抗H2O2诱导的细胞活力下降;(6)与对照组相比,17β-estradiol本身亦可增加GSK-3β的磷酸化,此作用可被雌激素受体抑制剂ICI-182780部分拮抗,而ICI-182780本身对GSK-3β的磷酸化无显著影响。以上结果提示,17β-estradiol可以拮抗H2O2诱导的氧化应激作用,17β-estradiol通过与其受体结合而抑制GSK-3β的活性可能是其发挥保护作用的机制之一。     

NF-E2相关因子2对糖尿病模型小鼠视网膜内细胞及血管的保护作用

目的 探讨NF-E2相关因子2（Nrf2）对糖尿病视网膜细胞及血管的保护作用。方法 8周龄雄性Nrf2^+/+（野生型）和Nrf2^-/- C57BL/6小鼠60只随机分为模型组和对照组,共4组,每组各15只。模型组小鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ,45mg/kg）,连续注射5 d;对照组小鼠注射同体积的枸橼酸缓冲液。模型组和对照组小鼠初次注射后每周测空腹血糖及体重,至第10周取视网膜。采用免疫印迹法检测视网膜内Nrf2激活的下游蛋白血红素加氧酶-1（HO-1）的表达情况;免疫荧光染色检测具有多种剪接形式的RNA结合蛋白（RBPMS）阳性的视网膜节细胞（RGCs）及胆碱乙酰转移酶（ChAT）阳性的无长突细胞（ACs）并计数;采用过碘酸-希夫和苏木素染色,观察视网膜内无细胞毛细血管并进行定量分析。 结果 STZ诱导1周后,野生型和Nrf2^-/-模型组小鼠血糖急剧升高,体重开始显著下降,随着周龄的增长体重无明显增加;对照组小鼠血糖值无明显升高,体重呈正常缓慢增长趋势。STZ诱导糖尿病10周后,RBPMS和ChAT染色发现,Nrf2^-/-糖尿病小鼠视网膜内RGCs和ACs数量显著降低（P<0.05）;过碘酸 希夫和苏木素染色显示,Nrf2^-/-糖尿病小鼠视网膜内出现无细胞毛细血管;免疫印迹法显示,野生型小鼠模型组中Nrf2激活的下游蛋白HO-1表达升高。 结论 Nrf2对糖尿病视网膜细胞及血管具有保护作用,其可能是通过诱导HO-1上调发挥作用。