白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 研究白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡及侵袭的影响.方法 MTT法和增殖细胞核抗原(PCNA)测定法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术和TdT酶介导的dUTP缺口末端标记法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;黏附实验、运动实验和侵袭实验检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭能力的影响.结果 白藜芦醇浓度＞25μmol/L可抑制肝癌细胞Bel-7404增殖,并诱导凋亡(P＜0.01);浓度＞100 μmol/L正常肝细胞L02的增殖也受到抑制,并产生凋亡(P＜0.01).25,50μmol/L的白藜芦醇可抑制Bel-7404细胞黏附细胞外基质纤连蛋白(FN)及降解基质的能力(P＜0.01),对该细胞的运动能力无明显抑制作用.结论 一定浓度的白藜芦醇可抑制肝癌Bel-7404细胞增殖,诱导其凋亡,并可能通过抑制Bel-7404细胞与细胞外基质FN的黏附及对基质的降解来抑制Bel-7404细胞的侵袭能力;在较高浓度下(≥100 μmol/L),白藜芦醇对正常肝细胞株也产生抑制增殖和诱导凋亡的毒性作用.     

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭影响机制研究

目的:观察白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并研究其内在分子机制。方法:采用MTT法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;Transwell法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭的影响。结果:白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞增殖,也可以诱导Bel-7404细胞凋亡,均呈浓度依赖性,与下调Procaspase3和PARP蛋白表达有关。白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞侵袭性,呈浓度依赖性,与下调MMP-9、VEGF蛋白表达有关。结论:白藜芦醇可以抑制肝癌Bel-7404细胞增殖,通过剪切Procaspase3、PARP蛋白而诱导凋亡,通过下调MMP-9和VEGF蛋白表达水平而抑制Bel-7404细胞侵袭性。     

AFP、AFB1对HepG2和Bel-7404细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 该实验旨在研究AFP和AFB1对人源性肝癌细胞HepG2和Bel-7404细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 选取未做任何处理的HepG2和Bel-7404细胞作为空白对照组(NC组),以AFP药物处理组即为AFP组,以AFB1药物处理组即为AFB1组,以联合用药组为AFP+AFB1组。采用CCK8试剂盒检测各组细胞增殖能力的变化,划痕实验检测各组细胞迁移能力的改变,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力的变化。结果 与空白组比较,自第4天开始,在HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭实验中均表现为NC组相似文献   

过表达UCHL1-AS1及联合雷帕霉素对人肝癌细胞Bel-7404增殖的影响

目的慢病毒转染人肝癌细胞株Bel-7404,研究过表达UCHL1-AS1,以及与雷帕霉素联合处理对肝癌细胞株增殖的影响,为肝癌治疗提供新方向。方法慢病毒转染人肝癌细胞株Bel-7404,建立过表达UCHL1-AS1稳转株,用MTT实验检测过表达UCHL1-AS1的肝癌细胞增殖能力。设置control组(空白对照组)、NC组(阴性对照组)、UCHL1-AS1组(实验组)、雷帕霉素+control组、雷帕霉素+NC组、雷帕霉素+UCHL1-AS1组。不同浓度雷帕霉素(0 nmol/L、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、100 nmol/L、200nmol/L、500nmol/L、1000 nmol/L)单独处理组,处理细胞48h后用MTT实验检测雷帕霉素对细胞增殖的抑制作用。结果未见UCHL1-AS1组与control组和NC组细胞的生长速率有差异。过表达UCHL1-AS1联合雷帕霉素作用细胞48h后,在200nmol/L和500nmol/L雷帕霉素联合UCHL1-AS1处理组与control组和NC组的抑制率存在明显的差异。结论过表达UCHL1-AS1对Bel-7404肝癌细胞增殖的无明显影响,过表达UCHL1-AS1与雷帕霉素联合作用对人肝癌细胞Bel-7404的增殖有明显的抑制作用,且此作用强于过表达UCHL1-AS1、雷帕霉素单独对细胞的作用。     

蜈蚣提取液治疗肝癌Bel-7404细胞后的差异表达蛋白研究

目的 筛选蜈蚣提取液(ECP)治疗肝癌Bel-7404细胞后的相关差异表达蛋白,探讨其药物治疗机.方法 一步抽提法制备肝癌Bel-7404细胞株治疗组ECP浓度(10 mg/mL)和对照组(RPIM1640完全培基培养)的总蛋白质,双向凝胶电泳建立两组总蛋白的双向凝胶电泳图谱,PDQuest软件对其图谱比较,MALDI-TOF-MS对差异表达的蛋白质进行分析并获取肽质量指纹图谱,数据库搜索鉴定主要差异表达蛋白质.结果 共发现76个差异表达蛋白点(P<0.05).治疗组中41个表达下调,35个表达上调.选择最明显的14个蛋白质斑点作质谱分析,其中肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)、核纤层蛋白-Bl(Lamin-B1)、黄素还原酶(FRase)、转铁结合蛋白2(Tbp2)、唾液酸合成酶(SAS)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),周期素依赖激酶抑制蛋白1(P21)和半乳凝素(Gal-7)在治疗组中表达上调,角蛋白(CK-19)、肌动蛋白(Actin)、转内质网ATP(三磷酸腺苷酶)酶(TER AIPase)、ω-1谷胱甘肽转移酶(GSTOl-1)、抑制蛋白(PFNl)及碱性磷酸酶(ALP)在治疗组中表达下调.结论 ECP能诱导肝癌Bel-7404细胞内某些蛋白异常表达,能多途径抑制肝癌细胞的生长,诱导其凋亡或直接死亡.     

蝎毒对人肝癌Bel-7404 细胞端粒酶活性的影响

目的：观察蝎毒(BMK)对人肝癌Bel-7404细胞端粒酶活性的影响。方法：不同浓度的BMK处理体外培养的人肝癌Bel-7404细胞72h，聚合酶链反应一端粒重复扩增(PCR-TRAP)法测定端粒酶活性，四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖抑制。结果：BMK可抑制Bel-7404细胞端粒酶活性，随BMK浓度增大，端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示BMK抑制Bel-7404细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论：端粒酶活性的抑制可能是BMK发挥抗癌活性的作用机制之一，并可作为评价BMK抗肝癌冶疗效果的指标之一。     

反义寡核苷酸抑制整合素αv亚基表达对喉癌细胞侵袭和增殖的影响

目的应用反义寡核苷酸体外细胞转染技术抑制喉癌细胞整合素αv(integrin αv,ITGAV)表达,探讨ITGAV表达抑制对喉鳞癌Hep-2细胞侵袭和增殖能力的影响。方法设计合成特异性靶向整合素αv的反义寡核苷酸序列(antisense oligonucleotides sequence,ASONs),用阳离子脂质体包被并转染喉鳞癌Hep-2细胞,免疫荧光技术检测转染前后整合素αv亚基的蛋白表达,MTT法检测转染后Hep-2细胞的增殖情况,Boyden小室法检测转染前后喉癌细胞的侵袭能力。结果靶向整合素αv的ASONs对喉鳞癌细胞株的侵袭和增殖能力具有明显的抑制作用,并具有剂量-时间依从性。结论靶向整合素αv的ASONs能够抑制喉鳞癌细胞株生长,并使其侵袭能力减弱,整合素αv可能成为喉鳞癌基因治疗的新靶点。     

蝎毒对人肝癌细胞Bel-7404凋亡及端粒酶逆转录酶基因的作用

目的观察蝎毒对人肝癌Bel-7404细胞增殖的影响及对端粒酶逆转录酶基因(hTERTmRNA)活性的影响。方法以人肝癌细胞株Bel-7404为研究对象,以不同浓度的蝎毒处理体外培养的人肝癌Bel-7404细胞72 h,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制,采用RT-PCR法检测细胞hTERTmRNA的表达情况。结果MTT结果显示蝎毒抑制Bel-7404细胞增殖、诱导细胞凋亡且抑制有浓度依赖性。同时,蝎毒可抑制hTERTmRNA的表达。结论抑制端粒酶逆转录酶基因(hTERTmRNA)表达而抑制端粒酶的活性、诱导细胞凋亡,可能是蝎毒的抗癌细胞机制之一。     

人参皂甙对肝癌Bel-7402细胞侵袭和转移能力的影响

[目的]探讨人参皂甙Rh2对肝癌Bel-7402细胞侵袭和迁移的影响及其机制.[方法]采用MTT法检测人参皂甙Rh2对肝癌Bel-7402细胞活力的影响;Transwell小室测定侵袭和迁移能力;应用Western blot方法检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白水平的变化.[结果]给予人参皂甙Rh2处理后肝癌Bel-7402细胞生长受到抑制,细胞侵袭和迁移能力明显降低;肝癌Bel-7402细胞MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均明显减弱.[结论]人参皂甙Rh2可抑制肝癌Bel-7402细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与降低MMP-2和MMP-9蛋白表达水平有关.     

下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。     

银杏叶提取物下调SPHK1、MMP-2、MMP-9表达抑制胃癌MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭能力

目的探讨银杏叶提取物(EGB761)对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别采用0 mg·L~(-1)、10 mg·L~(-1)、20 mg·L~(-1)、50 mg·L~(-1)、100 mg·L~(-1)EGB761处理胃癌MGC-803细胞12h、24h、48h、72h,采用MTT实验检测细胞增殖能力,采用Transwell实验及细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白印迹方法检测鞘氨醇激酶1(SPHK1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。结果 EGB761可明显抑制胃癌MGC-803细胞增殖,且呈现一定剂量依赖性;10mg·L~(-1)EGB761可明显抑制胃癌MGC-803细胞迁移及侵袭能力;EGB761可明显下调SPHK1、MMP-2、MMP-9表达,且呈现一定剂量依赖性。结论 EGB761对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭能力具有明显抑制作用,推测其作用机制为下调SPHK1、MMP-2、MMP-9基因表达。     

肿节风注射液对人肝癌细胞株Bel-7404的抑制作用

目的体外观察肿节风注射液对人肝癌细胞株的抑制作用。方法用人肝癌细胞株Bel-7404为供试体,氟尿嘧啶作为阳性对照,以抑制细胞增殖作为指标,采用四甲基唑蓝(MTT)法检测肿节风注射液对人肝癌细胞株的抑制作用。结果肿节风注射液对人肝癌细胞的48h抑制率为19.40%,72h的抑制率为41.90%。结论体外实验表明肿节风注射液对人肝癌细胞有抑制作用。     

过表达BTAF2对肝癌Bel-7402细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨碱性亮氨酸拉链转录因子2(BATF2)过表达对肝癌Bel-7402细胞侵袭迁移的影响.方法 利用Lipofeetamine 3000 Reagent脂质体转染法进行肝癌Bel-7402细胞转染,以转染pcDNA3.1空载体的Bel-7402细胞和转染pcDNA3.1-BATF2的Bel-7402细胞为研究对象...     

DADS下调Cathepsin D抑制人胃癌MGC803细胞侵袭转移

目的研究二烯丙基二硫（ DADS ）是否通过下调组织蛋白酶D （ Cathepsin D ）的表达抑制人胃癌MGC803细胞侵袭转移。方法 RT-PCR和Western blot检测DADS及干扰Cath-D对人胃癌MGC803细胞Cath-D mRNA与蛋白表达变化;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测DADS及干扰Cath-D对人胃癌MGC803细胞侵袭转移能力的变化。结果 DADS作用人胃癌MGC803细胞24 h后,Cath-D mRNA与蛋白表达水平明显下降（ P〈0.05）,划痕距离明显增宽（P〈0.05）,穿膜细胞数明显减少（P〈0.05）;siRNA干扰Cath-D后,Cath-D mRNA与蛋白的表达水平明显下降（P〈0.05）,划痕距离明显增宽（P〈0.05）,穿膜细胞数明显减少（P〈0.05）。结论DADS能抑制人胃癌MGC803细胞的侵袭转移能力,其机制可能与下调Cath-D 的表达有关。     

姜黄素抑制肝癌细胞HepG2增殖及干细胞标志物表达

目的:探讨姜黄素能否抑制肝癌细胞HepG2的增殖及干细胞标志物的表达。方法:不同剂量梯度的姜黄素(0、20、40和60μmol/L)作用肝癌细胞系HepG2 48 h后,MTT实验和克隆形成实验检测HepG2的增殖情况,划痕实验检测其迁移情况,成球实验检测姜黄素对HepG2干细胞的抑制情况,Real-time PCR检测姜黄素处理HepG2干细胞标志物CD133的表达情况,Western blot检测干细胞转录因子OCT4的表达情况。结果:姜黄素可抑制肝癌细胞HepG2的增殖[60μmol/L剂量时抑制率达(68.12±3.09)%],并抑制其克隆形成和迁移能力;姜黄素还可抑制HepG2的成球能力;同时可导致HepG2干细胞标志物CD133的表达降低[60μmol/L剂量时下降率达(48.36±2.04)%],并导致干细胞相关转录因子OCT4的表达降低。结论:姜黄素通过抑制肿瘤干细胞从而降低肝癌复发和转移,有望成为肝癌治疗的辅助性药物。     

金雀异黄素下调Gli1表达抑制MHCC97H细胞系肝癌干细胞样细胞侵袭

目的:研究金雀异黄素能否和如何抑制肝细胞癌MHCC97H细胞系肝癌干细胞样细胞侵袭。方法:干细胞条件培养基悬浮培养MHCC97H细胞系球形成细胞,作为肝癌干细胞样细胞。不同浓度金雀异黄素处理后,Transwell小室侵袭试验检测体外细胞侵袭能力;Western blot分析Gli1和Snail1蛋白表达。结果:干细胞条件培养基悬浮培养MHCC97H细胞能形成肿瘤球。金雀异黄素(5、10和20μM)作用第3代球形成细胞即肝癌干细胞样细胞72 h降低肿瘤球形成率和细胞侵袭率;呈浓度依赖性。金雀异黄素(5、10和20μM)孵育肝癌干细胞样细胞24 h下调Gli1和Snail1蛋白表达。结论:金雀异黄素可能通过调控Gli1抑制Snail1蛋白表达抑制肝癌干细胞样细胞侵袭。     

miR-26a下调TET抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭

目的探讨TET对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其调控机制。方法siRNA敲低宫颈癌HeLa细胞中TET的表达。细胞计数法、克隆形成实验、Transwell侵袭实验检测TET对宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力的影响。TargetScan软件预测TET与miR-26a之间的结合位点,qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验检测TET与miR-26之间的关系。结果TET敲低抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力。经预测miR-26a与TET1、TET2和TET3之间均存在结合位点;共转染野生型TET和miR-26a模拟物可降低荧光素酶活性;转染miR-26a抑制HeLa细胞中TET的表达。结论miR-26a通过下调TET1、TET2和TET3的表达而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭能力。     

小鼠肾发育中整合素α2、α3及α5的表达

目的:观察细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)受体-整合素α2、α3及α5在小鼠肾发育过程中的时空性表达,探讨其与肾发育的关系.方法:应用免疫组织技术结合体视学方法对不同胚龄及生后日龄小鼠肾组织中的整合素α2、α3及α5的表达进行系统观察和定量分析.结果:从胚龄12 d整合素α2、α3及α5即开始表达;整合素α2在发育各期肾小体表达较弱,在肾小管和集合管表达较强;整合素α3在发育各期肾小体表达较强.体视学分析结果显示它们的含量均随肾的发育逐渐增加.结论:推测整合素α2、α3及α5在小鼠肾发育中起一定作用,α2主要与肾小管和集合管发育相关,α3与肾小体发育相关最密切.