VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

DIS3通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路促进人骨髓瘤细胞凋亡

目的 探究DIS3对人骨髓瘤细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI 8226和U266为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA,3种细胞均随机分成5组:对照组、DIS3-siRNA阴性对照(negative control,NC)组、DIS3空载组、...     

PI3K/AKT信号通路调控心肌细胞凋亡的研究进展

凋亡作为一种发生在生物体内程序性死亡的过程,受多种基因的调控,对生物的正常发育和组织细胞稳态至关重要。凋亡参与了多种心血管疾病的病理过程,并且是缺血性心功能障碍的主要原因之一。磷酸肌醇3激酶(PI3K)是一种脂质激酶,在细胞存活、心电生理和能量代谢等方面发挥着重要作用,是治疗和预防心脏疾病相关损伤的重要靶点。PI3K可产生磷脂酰肌醇-3,4,5-磷酸膜磷脂(PIP3),进而激活3-磷酸肌醇依赖激酶-1(PDK-1)和AKT,发挥对心脏疾病中心肌损伤的调控作用。通过对PI3K/AKT信号通路的干预,可减轻心肌凋亡程度,表现出对心肌细胞的保护作用。文章对此通路及其与心肌细胞凋亡关系的研究进展作一综述。     

miR-122-5p靶向FGFRL1通过PI3K/AKT信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨微小RNA-122-5p(miR-122-5p)对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能作用机制.方法:采用qRT-PCR和Western blotting检测HEB细胞及胶质瘤SHG44、U87细胞中miR-122-5p、成纤维细胞生长因子受体样1(FGFRL1)的表达;MTT、Transwell小室...     

姜黄素通过PI3K/p53信号通路调控人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡和周期

目的 探讨姜黄素(Cur)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制.方法 采用不同浓度梯度Cur(0、10、20、40μmol/L)处理正常培养的SGC-7901细胞.3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测在不同时间点(24、48、72 h)细胞增殖能力变化;H...     

miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移：通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

目的 探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。方法 qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC(miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照)、miR-inhibitor(miR-372-5p抑制剂)、miR-mimics(miR-372-5p类似物)以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN(PTEN干扰)、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12(CXCL12干扰)以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM4...     

miR-148a-3p抑制NRAS表达调控乳腺癌细胞增殖与凋亡的机制

目的 探讨miR-148a-3p在乳腺癌中的作用及可能的机制.方法 根据人乳腺癌细胞株-7(MCF-7)细胞是否转染及是否存在miR-148a-3p的模拟物分为3个组:未转染组、miR-148a-3p对照组和miR-148a-3p转染组.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测转染后miR-148a-3p在各组的信使RNA(mRNA)水平,运用四唑盐比色法(MTT)比较MCF-7细胞在3组的增殖情况,应用RT-qPCR检测各组神经母细胞瘤病毒性ras致癌因子的同原体(NRAS)的基因水平,应用Western blot检测各组RAS病毒致癌基因同源物NRAS的蛋白水平,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与NRAS之间的作用.结果 过表达miR-148a-3p显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7的增殖(P＜0.05),促进其凋亡(P＜0.05),降低NRAS基因和蛋白的表达(P＜0.05),双荧光素酶报告基因实验证明NRAS是miR-148a-3p的直接作用靶点.结论 miR-148a-3p可能通过靶向NRAS抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

miR-615-5p通过IGF2/PI3K/AKT信号通路调控胃腺癌发生发展的作用机制

目的 微小RNA-615-5p(miR-615-5p)已被报道在多种癌症中发挥重要作用,但对miR-615-5p在胃腺癌中的作用机制尚不完整。文章旨在探讨miR-615-5p在胃腺癌中的临床意义及功能相关性。方法 利用qRT-PCR技术检测miR-615-5p在临床胃腺癌组织及细胞株中的表达情况;将细胞分组：过表达对照组(转染control mimics)和miR-615-5p过表达组(转染miR-615-5p mimics)、低表达对照组(转染control inhibitor)和miR-615-5p低表达组(转染miR-615-5p inhibitor),选择表达miR-615-5p最低的HGC细胞进行过表达,表达miR-615-5p相对较高的MGC细胞进行敲减,qRT-PCR技术检测干预效率。利用细胞克隆形成实验、平板划痕实验、Transwell迁移实验等检测胃癌细胞功能的改变,蛋白质印迹法用来检测miR-615-5p对目的蛋白IGF2(IGF2)的影响以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。结果 miR-615-5p在人胃腺癌组织中表达水平明显低于癌旁正常组织[(0.42±...     

颈癌细胞增殖和凋亡lncRNA HOXD-AS1通过靶向miR-133a-3p调控PI3K/AKT/mTOR轴影响宫

目的 探究lncRNA HOXD-AS1对宫颈癌细胞的影响及其机制.方法 qRT-PCR检测宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞lncRNA HOXD-AS1表达水平.合成lncRNA HOXD-AS1 siRNA(si-HOXD-AS1)及negative control(si-NC)并转染至HeLa细胞.MTT法和流式细胞术检...     

miR-190b通过PTEN/PI3K/AKT信号通路对肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖、迁移和凋亡的影响

目的:探讨miR-190b通过PTEN/PI3K/AKT信号通路对肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖、迁移和凋亡的影响.方法:采用qRT-PCR法检测miR-190b在肾母细胞瘤和相应的癌旁正常组织(n=20)中的表达,免疫组化法检测组织中PTEN、PI3K、p-AKT蛋白的表达.TargetScan预测miR-190...     

miR-16-5p靶向PTEN/PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌细胞活性和迁移能力的影响

目的 探讨AS-miR-16-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞活性和迁移能力的影响及潜在的作用机制.方法 将NSCLC A549细胞分为3组,分别为Black组、miR-NC组和AS-miR-16-5p组.miR-NC组和AS-miR-16-5p组分别转染阴性对照miRNA(miR-NC)及AS-miR-1...     

新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞,transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达;采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）;相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01）,PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）;加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）;Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）;miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）;XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。     

黄芩素通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路诱导膀胱癌细胞凋亡

目的 研究黄芩素对膀胱癌细胞的作用及机制。 方法 膀胱癌细胞T24和5637经黄芩素(处理组)或二甲基亚砜(对照组)处理后,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)以及胸腺嘧啶核苷类似物(EdU)插入实验检测细胞增殖和DNA复制速率;划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞技术检测细胞周期和细胞凋亡水平;Western blotting检测PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)等蛋白的表达水平;裸鼠成瘤实验检测黄芩素对于体内膀胱癌细胞增殖能力的影响。 结果 黄芩素可以在体内和体外抑制膀胱癌细胞的增殖速率,高浓度黄芩素体外抑制率可达80%以上,体内抑制率约50%。黄芩素可以减缓DNA复制并降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,诱导细胞停滞在G₀/G₁期,发生细胞凋亡,与对照组相比差异有统计学意义。黄芩素处理后,PI3K的表达以及AKT和mTOR的磷酸化水平降低,Bax/Bcl-2的比值升高。 结论 黄芩素通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制膀胱癌细胞增殖,发生周期阻滞,诱导细胞凋亡。     

吴茱萸碱抑制PI3K/AKT通路诱导小细胞肺癌H1688和H446细胞凋亡

目的 探讨PI3 K/AKT通路在吴茱萸碱(evodiamine,EVO)诱导小细胞肺癌H1688和H446细胞凋亡中的作用.方法 分别以不同浓度(1、5、20 μmol/L)和不同作用时间(3、6、12、24、48 h)的EVO处理H1688和H446细胞,Western blot检测p-AKT的表达水平.以EVO分别作用于经过PI3 K/AKT通路激活剂IGF-1或抑制剂LY294002预处理后的H1688和H446细胞,Western blot检测p-AKT蛋白的表达.将EVO作用于IGF-1预处理的H1688细胞后,Annexin-V/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达水平.以不同浓度的EVO处理H1688细胞,Western blot检测t-AKT、PTEN蛋白表达,RT-PCR检测AKT mRNA表达.结果 与对照组相比,不同浓度和不同作用时间的EVO处理后H1688和H446细胞中p-AKT表达水平下降(P＜0.05).而IGF-1可减弱EVO下调H1688和H446细胞p-AKT的作用(P＜0.05),并降低EVO在H1688中的增殖抑制和凋亡诱导作用.EVO与LY294002下调p-AKT蛋白的效果差异无统计学意义(P＞0.05).EVO对H1688细胞t-AKT蛋白和AKT mRNA的表达无影响,EVO可明显上调PTEN的表达(P＜0.05).结论 抑制PI3 K/AKT通路活性是EVO诱导H1688和H446细胞凋亡的重要机制之一.     

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

芸香苷通过 PI3K/AKT 信号通路抑制 H2 O2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的：探讨 PI3K/ AKT 信号通路是否参与芸香苷对过氧化氢(H2 O2)诱导人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的抑制作用。方法将培养的 HLEC 分为4组：空白对照组、H2 O2组、芸香苷组、LY294002组;采用 MTT 法测细胞存活率,Western blot 法检测 p-AKT 及 AKT 的表达,Annexin V-FITC/ PI 双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果H2 O2可诱导 HLEC 发生凋亡,与 H2 O2组相比,芸香苷组不仅使 AKT 的磷酸化水平显著升高,还降低了细胞凋亡率(P<0．01);在 LY294002干预组, PI3K/ AKT 信号通路的特异性阻断剂 LY294002明显抑制了芸香苷组中各项指标的变化,差异有统计学意义(P <0．01),但与 H2 O2组比较,差异无统计学意义。结论芸香苷抑制 H2 O2诱导的 HLEC 凋亡可能与 PI3K/ AKT 信号通路有关。     

基于PI3K/Akt通路沉默miR-26b对妊娠期高血压胎盘滋养细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析沉默微小RNA-26b（Micro RNA-26b,miR-26b）对妊娠期高血压胎盘滋养细胞增殖、凋亡及磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide-3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）通路的影响。 方法 购买人胎盘滋养细胞,使用100 μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞模拟妊娠期高血压微环境,分为细胞空白组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞）、过表达组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞后做miR-26b过表达质粒转染）、沉默组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞后做miR-26b沉默质粒转染）。检测3组细胞增殖、细胞凋亡、细胞PI3K/Akt通路蛋白表达情况。 结果 与空白组相比,过表达组miR-26b表达量升高,沉默组miR-26b表达量降低（P＜0.05）,说明miR-26b转染成功。过表达组24 h、48 h、72 h细胞增殖率逐渐降低,沉默组逐渐升高,3组在组间、时点间、组间·时点间差异均有统计学意义（P＜0.05）。与空白组相比,过表达组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量降低,Bax蛋白表达量升高（P＜0.05）;与空白组相比,沉默组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量升高,Bax蛋白表达量降低（P＜0.05）;与过表达组相比,沉默组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量升高,Bax蛋白表达量降低（P＜0.05）。 结论 沉默miR-26b可抑制妊娠期高血压胎盘滋养细胞凋亡、促进增殖,其作用机制可能与PI3K/Akt通路被激活相关。     

尼古丁通过PI3KAKT信号通路抑制MIA诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡

摘要：目的 探讨尼古丁通过PI3KAKT信号通路抑制碘乙酸钠（MIA）诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡。方法 实验分为正常组,模型组（4 μM MIA）,尼古丁给药组（10-8,10-7,10-6,10-5 M）,MTT法检测各组软骨细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式双染细胞术检测各组软骨细胞凋亡;分光光度法检测各组软骨细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase 3）活性;Western blot分析磷脂酰脂醇3激酶（PI3K）/AKT激活状况及下游靶分子Bax,Bcl-2的表达情况。结果 10-7,10-6 M尼古丁显著促进大鼠软骨细胞活力（P<0.05）,10-5 M尼古丁显著降低大鼠软骨细胞活力（P<0.05）,10-8 M尼古丁对大鼠软骨细胞活力无影响（P>0.05）。10-8,10-7,10-6 M尼古丁能剂量依赖性的提高MIA诱导的大鼠软骨细胞活力,并抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡及Caspase 3活性（P<0.05）;10-7,10-6 M尼古丁能提高PI3K表达及AKT磷酸化水平,并下调促Bax表达,上调Bcl-2表达（P<0.05）。 结论 一定剂量尼古丁可通过PI3K/AKT信号通路抑制MIA诱导的大鼠软骨细胞凋亡。