HSPB1对H2O2诱导大鼠心肌细胞损伤中线粒体膜电位的影响

目的:观察热休克蛋白B1(heatshockproteinB1,HSPB1)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤过程中线粒体膜电位(DY)的影响,从线粒体水平阐明HSPB1保护心肌细胞抗氧化损伤机制。方法:以本室建立的稳定转染人HSPB1的大鼠心肌细胞系H9c2(HSPB1H9c2)和空载体转染的H9c2(CON)为实验对象,300μmol/LH2O2刺激2、4和8h后,倒置光学显微镜观察细胞形态学变化,荧光探针JC鄄1测定线粒体膜电位。结果:HSPB1高表达显著抑制了H2O2诱导的典型凋亡形态学改变;HSPB1高表达使线粒体膜电位升高42%以上(P<0.001);HSPB1高表达显著抑制线粒体膜电位下降,H2O2刺激2、4、8h后,HSPB1H9c2和CON的线粒体膜电位分别降至刺激前的69.5%和66.5%(P<0.05),74.4%和67.0%(P<0.05),70.7%和58.1%(P<0.05)。结论:HSPB1有效抑制了氧化应激诱导的以凋亡为主的细胞损伤和线粒体膜电位丧失,提示线粒体膜电位的稳定可能参与了HSPB1抗心肌细胞的氧化损伤机制。     

非小细胞肺癌中Caspase-8的表达及意义分析

目的:分析Caspase-8在非小细胞肺癌组织中的表达和临床意义。方法:采取免疫组织化学法进行检测非小细胞肺癌中的Caspase-8蛋白表达水平。结果:通过临床的实验分析,在患者的癌组织中检测Caspase-8的阳性率为64.7%,正常的组织中检测Caspase-8的阳性率为73.5%,其中组间的对比无明显的差异(P>0.05),统计学无意义。但是组间Caspase-8蛋白的表达强度和细胞内的定位比较存在明显的差异(P<0.05),统计学有意义;而组织中的Caspase-8蛋白表达与患者的病理类型、组织学类型、是否吸烟、性别与年龄等无明显的联系。但是Caspase-8蛋白的表达与淋巴结的转移、临床的分期以及患者的生存期等有着密切的关系,数据的比较具有明显的差异(P<0.05),统计学有意义。结论:在非小细胞肺癌的组织中Caspase-8蛋白表达强度明显,并且与非小细胞肺癌的淋巴结的转移和临床的分期以及患者的生存期有着密切的关系,可作为一种新型的非小细胞肺癌诊断标志物。     

热休克蛋白60在激活的小胶质细胞中的表达及基因调控

目的研究细菌脂多糖（LPS）激活的小胶质细胞中热休克蛋白60（HSP60）的表达情况及其基因调控。方法分离SD大鼠的小胶质细胞,经LPS激活后,应用Western-Blot方法检测细胞中HSP60蛋白的表达,real-time PCR法检测细胞中HSP60 mRNA的量,并进一步检测热休克因子1（HSF-1）表达的变化。结果在激活的小胶质细胞中,HSP60的蛋白及mRNA水平均显著升高,其转录因子HSF-1的水平也相应增高。结论在激活的小胶质细胞中,HSF-1蛋白表达显著提高,HSP60 mRNA及蛋白合成增强,参与细胞的应激反应。     

热休克预处理对大鼠脊髓损伤的影响和意义

目的探讨热休克预处理对大鼠脊髓损伤的影响。方法将96只大鼠随机分为对照组,损伤组和热休克预处理组。采用静压型脊髓损伤模型,分别在伤后6H、12H、1D、2D、3D、1周、2周和3周处死动物。用原位杂交和免疫组化LSAB法检测HSP70MRNA和蛋白在以上各时点的表达。用CBS评分来评估神经功能。结果CBS评分显示,热休克预处理组在1周、2周、3周的CBS评分分别是:35±7.29,69±9.12,76.5±6.02;而损伤组分别为:21.5±6.02,45±8.48,48±6.94;前者的神经功能明显好于后者(P<0.05)。通过原位杂交和免疫组化发现,在6H、12H预处理组的HSP70MRNA阳性细胞率分别是6.18%±1.17%,2.58%±0.89%;而损伤组分别是1.92%±1.31%,0.32%±0.41%(P<0.05)。预处理组的HSP70蛋白阳性细胞数在12H至两周分别是13±3.27,20.74±4.17,27.72±2.26,43.86±4.82,15.56±3.61,6.76±1.86;损伤组分别是7.96±2.34,11.74±2.64,16.5±4.44,22.66±3.34,10.32±3.16,3.72±2.04(P<0.05)。结论热休克预处理对脊髓损伤有一定的保护作用,其保护机理可能同内源性HSP70增加有关。     

热休克蛋白B1在主动脉夹层中的表达变化及临床意义

目的 探究热休克蛋白B1(heat shock protein B1,HSPB1)在主动脉夹层(aortic dissection,AD)中的表达变化和临床意义.方法 选取13例主动脉夹层患者的主动脉壁标本,并以11例无主动脉夹层患者的主动脉壁标本为对照.利用胸腹主动脉CTA确诊主动脉夹层患者主动脉的病变特征;通过苏木...     

糖尿病并发脑梗死的风险因素及定量分析研究

目的：分析研究糖尿病并发脑梗死的风险因素及价值。方法：回顾性分析河南大学第一附属医院收治的150例糖尿病患者临床资料,根据是否合并脑梗死分为糖尿病组130例,糖尿病并发脑梗死组20例。比较两组患者性别、年龄、病程、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)指数,采用logistic多因素分析糖尿病并发脑梗死的风险因素,分析相关因素判断脑梗死的价值。结果：单因素分析显示糖尿病合并脑梗死组年龄、病程、SBP、DBP、血清FBG、HbAlc、TG、TC、LDL-C、HMGB1水平均显著高于糖尿病组,差异有统计学意义（t=5.366、5.318、4.716、4.075、2.180、3.329、4.129、17.443、10.803、70.005,P<0.05）,HDL-C水平显著低于糖尿病组,差异有统计学意义（t=7.393,P<0.05）。多因素分析显示血清HbAlc、TC、LDL-C及HMGB1均为糖...     

肝细胞生长因子对TNF-α诱导肝细胞凋亡的保护作用及其机制的研究

目的 :探讨肝细胞生长因子对肿瘤坏死因子α(TNF -α)诱导的肝细胞凋亡的保护作用以及可能的机制。方法 :选择第 3代人类肝细胞系 (L0 2细胞 ) ,分成三组 :Ⅰ组 ,正常L0 2细胞 ;Ⅱ组 ,10 0 0 0u/mlTNF -α损伤L0 2细胞 2 4h ;Ⅲ组 ,重组肝细胞生长因子 (r -hHGF ,5ng/ml)与L0 2细胞共同孵育 30min后加入 10 0 0 0u/mlTNF -α ,2 4h后处理细胞。观察“Ladder”条带、细胞DNA断裂百分率和用Westernblot印迹分析法检测HSP70和IκB -α的表达。结果 :Ⅱ组DNA电泳出现典型的“梯状”条带 ,而Ⅲ组则未见明显的“梯状”条带。DNA断裂百分率Ⅱ组比Ⅰ组高 (分别为 17.12± 4 .0 2和 5 .0 5± 1.6 7,P <0 .0 1) ,Ⅲ组比Ⅱ组低 (分别为 8.77± 2 .0 1和 17.12± 4 .0 2 ,P <0 .0 1)。重组肝细胞生长因子预处理后再用TNF -α损伤的L0 2细胞 ,1h即可检测到HSP 70的表达 ,且持续到 4 8h。肝细胞生长因子还抑制了TNF -α引起的L0 2细胞IκB -α量的减少。结论 :重组肝细胞生长因子可减轻TNF -α诱导的L0 2细胞凋亡 ,它通过诱导L0 2细胞HSP 70的表达和抑制IκB-α的降解达到减轻L0 2细胞的凋亡。     

热休克蛋白B1抑制HBV复制的研究

目的 探讨热休克蛋白B1 (heat shock protein B1,HSPB1)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响.方法 采用Western blot检测正常肝细胞系(HepRG)和HBV稳定复制细胞系(HepAD38和HepG2.2.15)中HSPB1的蛋白水平.在HBV稳定复制细胞系(HepAD38和HepG2.2.15)中转染pCMV6-HSPB1质粒及对照质粒,采用Western blot验证HSPB1过表达水平,实时荧光定量PCR和Southern blot检测HSPB1过表达对HBV复制中间体表达的影响;qRT-PCR检测HSPB1过表达对HBV3.5 kb mRNA表达的影响;ELISA检测HSPB1过表达对HBV s抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)分泌的影响.在肝癌细胞系Huh-7中共转染pCH9/3091和pCMV6-HSPB1质粒,采用Western blot验证HSPB1过表达水平,实时荧光定量PCR和Southern blot检测HSPB1过表达对瞬时转染的HBV复制中间体表达的影响.结果 HSBP1在HepAD38和HepG2.2.15中的表达明显低于HepRG.HSPB1在HepAD38和HepG2.2.15细胞中成功过表达,在过表达HSPB1的HepAD38和HepG2.2.15细胞中HBV复制中间体水平以及3.5 kb mRNA水平均降低,细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的分泌水平也降低.HSPB1在转染pCH9/3091的Huh-7细胞中成功过表达,HSPB1过表达抑制了瞬时表达的HBV的复制水平.结论 HSPB1可以抑制HBV复制.     

热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理使肺泡巨噬细胞中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力，用效放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤 。     

栀子苷对1型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用和机制研究

目的:探究栀子苷对1型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用及可能的机制.方法:将32只C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照组、1型糖尿病模型组(STZ组)、25mg/kg栀子苷给药组(GE25组)、50mg/kg栀子苷给药组(GE50组).测定血糖和体重水平,HE和Masson染色检测心肌纤维化,免疫组化检测LC3B、P62...     

达格列净对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制研究

目的 探讨达格列净对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠的肾脏保护作用及对AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路表达的影响。方法 SPF级Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组各10只。成功制备DN模型后,正常组大鼠给予普通饲料+生理盐水灌胃;模型组大鼠给予高糖高脂饲料+生理盐水灌胃;低剂量组大鼠给予高糖高脂饲料+达格列净1mg/（kg·d）灌胃;高剂量组大鼠给予高糖高脂饲料+达格列净10mg/（kg·d）灌胃。各组大鼠连续干预12周。比较各组大鼠的肾功能指标、肾脏病理组织变化、p-AMPK和p-mTOR蛋白表达、Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ,COL Ⅰ）、Ⅳ型胶原（collagen type Ⅳ,COL Ⅳ）、纤维连接蛋白（fibronectin,FN）水平。结果 模型组、低剂量组和高剂量组大鼠的血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、血肌酐（serum creatinine,SCr）、24h尿蛋白定量、p-mTOR蛋白表达、COL Ⅰ、COL Ⅳ和FN水平均显著高于正常组,p-AMPK蛋白表达显著低于正常组（P<0.05）;低剂量组和高剂量组大鼠的BUN、SCr、24h尿蛋白定量、p-mTOR蛋白表达、COL Ⅰ、COL Ⅳ和FN水平均显著低于模型组,p-AMPK蛋白表达显著高于模型组（P<0.05）;高剂量组大鼠的BUN、SCr、24h尿蛋白定量、p-mTOR蛋白表达、COL Ⅰ、COL Ⅳ和FN水平均显著低于低剂量组,p-AMPK蛋白表达显著高于低剂量组（P<0.05）。结论 达格列净对DN大鼠具有良好的肾脏保护作用,其机制可能与调节AMPK/mTOR信号通路表达有关。     

辅酶Q10能有效抑制鱼藤酮诱导的细胞毒性作用

目的:探讨辅酶Q10对鱼藤酮介导的多巴胺能神经元损伤是否具有保护作用并研究其机制.方法:原代培养孕 14 d的胎鼠中脑多巴胺能神经元.以不同剂量的鱼藤酮建立细胞凋亡模型.通过 TH 免疫细胞化学进行鉴定,测定LDH值以了解细胞活力.以罗丹明123染料进行流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψm).结果:鱼藤酮干预多巴胺能神经元24 h后,细胞活力及△Ψm均明显下降,与0 nmol/L鱼藤酮组比较,15 nmol/L及30 nmol/L鱼藤酮组的LDH值(U/ml)显著增加(P<0.05),其△Ψm(%)则明显下降(P<0.05);辅酶Q10 12 h能显著缓解细胞△Ψm的下降,与15 nmol/L鱼藤酮组比较,50 μmol/L 及100 μmol/L 辅酶 Q10预处理组的△Ψm(%)明显上升(P<0.05).结论:辅酶 Q10能有效抑制鱼藤酮诱导的细胞毒性作用.     

糖尿病鼠肾组织损伤机制及格列齐特的保护作用

目的探讨糖尿病鼠肾组织损伤的可能机制及格列齐特的保护作用.方法腹腔注射链脲佐菌素建立动物模型,采用RT-PCR法测定各组实验鼠肾组织RAGEmRNA的表达.结果糖尿病模型组实验鼠肾组织RAGEmRNA表达增加,其RAGE/β-actin相对值明显高于对照组（p＜0.01）.应用格列齐特治疗后,其肾组织RAGEmRNA表达较模型组显著性降低,其RAGE/β-actin相对值显著低于模型组（p＜0.01）.结论RAGEmRNA的高表达可能参与了糖尿病鼠高血糖及糖基化终产物造成的肾组织损伤,而格列齐特可降低RAGEmRNA的表达可能对其介导的糖尿病鼠肾组织损伤有一定的保护作用.     

通腑法通腑利肺作用机制的实验研究

目的 从整体、细胞及分子3个层面探讨通腑法通腑利肺的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机等分为正常对照组、模型组、解扎组及治疗组，每组各10只，采用体外直肠不全结扎法造模。然后用放射免疫分析法检测各组血清IL-8含量，RT-PCR法检测肺组织TNFα mRNA水平，检测各组支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中肺泡巨噬细胞（pulmonary alveolar macrophage，PAM）死亡百分率，并将通腑治疗组、解扎组与模型组及正常对照组对照。结果 模型组血清IL-8含量明显高于正常对照组（P〈0．01），肺组织TNF-α mRNA表达明显增高（P〈0．01）；通腑法治疗后IL-8含量和TNF-α mRNA表达均低于模型组（P〈0．01）。且肺损伤程度减轻。结论 IL-8、TNF-α在肠源性肺损伤过程中起重要作用。通腑法对损伤肺组织起保护作用。     

2，5 二羟苯磺酸钙对糖尿病大鼠心肌保护作用的研究

目的观察2,5 二羟苯磺酸钙对链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导的糖尿病大鼠心肌病变的保护作用。方法将24只Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和羟苯磺酸钙治疗组,每组8只。给药8周后处死大鼠,观察心肌组织病理变化和超微结构,并用免疫组化法测定心肌纤溶酶原激活物抑制物 1(PAI 1)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)的表达。结果糖尿病大鼠心肌纤维排列紊乱,线粒体肿胀、聚集。VG染色显示,糖尿病大鼠心肌间质胶原纤维明显增多,免疫组化示PAI 1表达明显增多,MMP 9降低。羟苯磺酸钙治疗组大鼠上述趋势均明显好转。结论羟苯磺酸钙可能通过抑制糖尿病大鼠心肌间质纤维化,延缓糖尿病心肌病变的发展。     

圣草酚对高脂饮食诱导的糖尿病大鼠肝损伤的保护作用及机制探讨

[目的] 探讨圣草酚对高脂饮食诱导的糖尿病（DM）大鼠肝损伤的保护作用,以及与氧化应激、胰岛素抵抗相关的机制探讨。[方法] 将50只雄性SD大鼠分为5组,即空白组、模型组、低剂量组（2.5 mg/kg）、中剂量组（5 mg/kg）、高剂量组（10 mg/kg）,建立高脂饮食联合低剂量链脲佐菌霉素诱导的DM模型。评估胰岛素抵抗相关指标,包括空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;试剂盒检测肝功能生化指标水平,包括天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）;苏木精-伊红（HE）染色观察肝组织病理形态;试剂盒检测氧化应激标志物水平,包括超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）;原位末端标记技术（TUNEL）观察肝细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达;免疫组化法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。[结果] 与正常组相比,模型组大鼠出现DM典型症状“三多一少”,病理形态炎性浸润严重,各指标提示模型组大鼠造模成功。与模型组相比,各给药组胰岛素抵抗相关指标FBG、FINS、HOMA-IR降低;肝功能指标AST、ALT、LDL水平降低,HDL水平升高;氧化应激相关指标SOD活性增强,MDA含量减少;凋亡细胞及相关蛋白Bax、Bcl-2表达下降;炎症因子TNF-α阳性表达减少。[结论] 圣草酚改善高脂饮食诱导的DM肝损伤,发挥对DM大鼠肝脏的保护作用,其机制可能与调节转氨酶水平、促进脂质代谢、减轻氧化应激反应、减少肝细胞凋亡相关蛋白表达、缓解肝脏组织炎性浸润等途径有关。     

普罗布考对高脂血症大鼠脑缺血再灌注的脑保护作用及机制研究

目的 探讨普罗布考对高脂血症大鼠脑缺血再灌注的脑保护作用及可能机制。方法 140只SD大鼠随机分为普通组(20只)和高脂组(120只),分别给予普通饲料、高脂饲料喂养8周,全自动生化分析仪检测其血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平以判断高脂血症大鼠造模成功与否。100只造模成功的高脂血症大鼠采用随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组、低剂量普罗布考组、高剂量普罗布考组,每组各25只。普罗布考低剂量组、普罗布考高剂量组分别给予0.5%羧甲基纤维素(CMC)配制的普罗布考混悬液100 mg/kg、500 mg/kg灌胃,假手术组、缺血再灌注组同时给予相同剂量0.5%CMC灌胃,1次/天,连续4周。缺血再灌注组、普罗布考低剂量组、普罗布考高剂量组采用改良Longa法建立大脑中动脉阻断模型,假手术组大鼠除不插鱼线外,其余手术步骤同前。造模成功大鼠缺血2 h后,于不同再灌注时间点(6、12、24、48、72 h)对大鼠进行神经功能缺损评分(mNSS);再灌注24 h后2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗...     

谷氨酰胺对急性肺损伤患者的保护作用与机制研究

目的:探讨谷氨酰胺对急性肺损伤患者外周血单核细胞表面Toll样受体(TLR4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。方法:80例急性肺损伤患者随机分为观察组和对照组,每组各40例。对照组实施常规治疗及护理,观察组在此基础上给予谷氨酰胺注射治疗。检测两组不同时间点血浆中TLR4、TNF-α和IL-1β的水平。结果:治疗7 d和14 d后,观察组血浆TLR4、TNF-α和IL-1β水平均低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:谷氨酰胺能够降低急性肺损伤患者体内TLR4、TNF-α及IL-1β水平,对急性肺损伤患者具有一定程度的保护作用,并同时缓解促炎性细胞因子介导的多器官组织损害。