rpoB基因不同突变位点结核分枝杆菌利福平体外最小抑菌浓度的变化

目的 探讨rpoB基因不同突变位点结核分枝杆菌利福平体外最小抑菌浓度(MIC)的变化.方法 收集人型的结核分枝杆菌菌株103株,利用基因芯片法筛选rpoB耐药突变基因菌株.采用绝对浓度法对所有菌株进行不同浓度的利福平药敏试验,观察不同菌株对利福平的MIC.结果 基因芯片共分离出55株rpoB突变株,48株非突变株.突变株MIC值为(459.6±205.8)μg/ml,高于非突变株的(5.0±4.5)μg/ml(P ＜0.05).55株rpoB突变株中突变位点分别为531(C→T)、526(C→G/T)和516(A→G/T),531(C→T)位点突变株的MIC值为(576.0±29.3)μg/ml,均高于516(A→G/T)的(432.9±38.2) μg/ml和526(C→G/T)的(355.5±59.5) μg/ml(P＜0.05),但526(C→G/T)、516(A→G/T)位点突变株的MIC比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 基因芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变株与其耐药表型相关性较高.不同突变位点的结核杆分枝菌菌株对利福平的耐药程度有差异,可为临床合理用药提供参考.     

河南省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征

目的:分析河南省耐多药(MDR)结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法:收集150株MDR结核分枝杆菌,应用PCR扩增利福平耐药相关基因rpoB编码区全长并测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列,分析菌株的突变特征。结果:MDR菌株rpoB基因编码区存在突变者占97.2%(140/144),突变在利福平耐药决定区(RRDR)内者占96.5%(139/144),RRDR内和RRDR外同时存在突变者占99.3%(139/140);突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB516。发现未被记录的15个突变位点和4个突变类型,其中rpoB1284位点突变可能是多态性位点,与利福平耐药无关。结论:检测河南地区结核分枝杆菌rpoB基因RRDR内位点的突变可预测MDR结核分枝杆菌的耐药性。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌，rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。方法应用绝对浓度法测定58株结核分枝杆菌对4种－线抗结核药物的药敏特性，对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌，rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序，分析rpoB基因突变与多重耐药的关系，以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果58株结核分枝杆菌中，利福平耐药株36株，敏感株22株。36株耐药株均存在，rpoB基因突变，其中88．9％(32／36)至少对利福平和异烟肼同时耐药。90．O％的利福平高度耐药株(18/20)与rpoB基因531位和526位密码子突变相关。密码子531位和526位各有1株双碱基突变，且均为多重耐药株。结论结核分枝杆菌，rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药，因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌；而rpoB基因的突变位点与利福平耐药程度之间具有一定的相关性。     

痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因，了解利福平耐药的分予机制。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物．用PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpoB基因片段，对扩增获得的rpoB基因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、单耐利福平、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpoB举因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测有rpoB基因点突变，突变位点主要为531、516或526常见密码子，且绝大多数为单碱基突变，发现1例MDR-TB出现479位和531位密码子同时突变。敏感株和标准株无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌rpoB基岗及其突变，结核分枝杆菌埘利福平的耐药性与rpoB基因点突变有关。     

广西百色地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征分析

目的分析百色地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测利福平耐药性,PCR技术检测耐药结核分枝杆菌rpoB基因序列并测序分析利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。结果分离培养获得98例MTB,98例MTB出现36株利福平耐药,耐药率为36.73%,36株耐利福平菌株中有27株rpoB基因发生突变,基因突变率为75.00%,其中516位点突变率为3.70%(1/27),531位点突变率为59.26%(16/27),526位点突变率为29.63%(8/27),533位点突变率为7.41%(2/27)。突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB533。结论百色地区耐利福平结核分枝杆菌耐药性产生的主要分子机制是因为rpoB的基因发生突变。     

某地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变特征分析

目的了解深圳地区结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼的耐药相关基因的突变特点。方法 60株结核分枝杆菌临床分离株通过全自动快速分枝杆菌培养鉴定系统(BACTEC-MGIT960)进行鉴定和药敏分析。在这60株菌株中,针对包括利福平耐药决定区(RRDR)在内的rpoB基因和异烟肼耐药相关位点katG315、inhA-15、kasA269、kasA312进行PCR扩增,并将扩增产物T-A克隆后进行测序。结果在60株结核分枝杆菌临床分离株中,检出利福平耐药株45株,敏感株15株;异烟肼耐药株41株,敏感株19株;利福平和异烟肼同时耐药的有14株。在45株利福平耐药株中,rpoB基因RRDR突变发生率为91.1%(41/45),共检测到12种突变形式,主要突变位点在531、526、516、533,以Ser531Leu突变最常见,占rpoB发生基因突变株的51.2%(21/45)。在41株异烟肼耐药株中,katG315位点有29株发生突变,包括28株katG315(AGC-ACC)和1株katG315(AGC-AAC)突变,突变发生率为70.7%(29/41);inhA-15位点有9株发生突变,均为(C-T)突变,突变发生率为21.95%(9/41)。kasA基因未发现常见突变形式。结论深圳地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变位点与国内外研究基本一致,但各位点频率有所不同。     

91株耐利福平结核分枝杆菌的rpoB基因突变分析

目的分析利福平耐药结核菌株rpoB基因突变特点,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法对101株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因的PCR产物进行测序分析,观察其rpoB基因突变的规律。结果 101株临床分离株中,耐利福平91株,经DNA序列分析有85.71%(78/91)菌株存在rpoB基因突变的突变,主要集中在531位(44.87%)和526位(28.21%),未检测到发生缺失或插入碱基突变的菌株,10株敏感株均无突变。结论 rpoB基因核心突变区发生突变是结核分枝杆菌对利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

结核分枝杆菌耐利福平株rpoB基因突变的研究

目的了解遵义地区结核分枝杆菌耐利福平临床分离株rpoB基因突变特点.方法采用比例法对肺结核患者痰标本分离的127株结核分枝杆菌进行药物敏感性试验,并对结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因包括耐药决定区81个碱基在内的412bp片段进行PCR扩增及序列测定.结果127株结核分枝杆菌临床分离株中49株对利福平耐药,78株对利福平敏感.49株耐利福平临床分离株中,31株rpoB基因存在突变(63.3%),突变位点为531、526和516等;511位点CTG→CAG(Leu→Pro)为新的突变位点;4株双位点联合突变,其中2例为新的联合突变:GAC516GGC,ATC572CTC和CTG511CAG,CAC526AAC.结论结核分枝杆菌耐利福平与rpoB基因突变相关,且存在地区差异.     

耐多药结核分枝杆菌利福平相关基因rpoβ突变分析

目的探讨耐多药结核分枝杆菌利福平相关基因rpoβ突变的特点。方法对临床结核病患者的痰液标本进行结核分枝杆菌的分离、培养、鉴定及药物敏感试验,对rpoβ基因进行PCR扩增及测序,分析rpoβ基因突变与利福平耐药的关系。结果 300份痰液标本中分离出结核分枝杆菌66株,药物敏感试验结果显示有21株耐利福平,耐药率为31.8%。21株结核分枝杆菌利福平耐药株中有16株发生氨基酸突变,突变率为76.2%,突变发生在密码子526、531、533上,以密码子531为主。结论 rpoβ基因突变是结核分枝杆菌利福平耐药的主要机制,但可能不是惟一机制。     

耐利福平结核分支杆菌rp0B基因突变位点的分析

目的研究上海地区耐利福平结核分支杆菌rpoB基因的突变特点,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义.方法对58株结核分支杆菌rpoB基因片段(约213bp)进行PCR扩增,其中包括核心突变区的69个碱基,并对PCR产物进行DNA测序.其中耐药株36株,敏感株22株.结果所有58株中,36株耐药株均存在rpoB基因突变,氨基酸突变率531位为47.2%,526位为25.0%,22株敏感株均无突变.结论rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点.     

Sequence analysis on drug-resistant rpoB gene of Mycobacterium tuberculosis L-form of isolated from pneumoconlosls workers

To study the characteristics of drug-resistant genetic mutation of rpoB on coal workers＇ pneumoconiosis complicated with L-form of Mycobacterium tuberculosis. Methods： A total of 42 clinical isolated strains of Mycobacterium tuberculosis L-forms were collected, including 31 drug-resistant strains. Their genomes DNA were extracted, the target genes were amplified by PCR, and the hot regions in the rpoB gene were analyzed by automated DNA sequenator. Results： No mutation of rpoB gene was identified in 11 rifampicin-sensitive strains while conformation changes were found in 31 rifampicin-resistant strains. The mutation rate was 93.55% （29/31） in resistant strains, mainly concentrated in codon 531 （51.6%, 16/31） and 526 （32.26%, 10/31）. Base substitutions happened, including 27 unit point mutation and 2 two point mutation. The mutation of codon 516 that new found wasn＇t reported by internal and overseas scholars. Conclusion： The substitution of highly conserved amino acids encoded by rpoB gene results in the molecular mechanism responsible for rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis L-forms. It also proves that rpoB gene is diversiform.     

结核分支杆菌耐利福平耐药基因检测研究

目的评价应用DNA序列分析方法和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值.方法采用DNA序列分析法和PCR-SSCP法对80株结核分支杆菌临床分离株(其中药物敏感株32株,耐RFP或含耐RFP耐多药株48株)rpoB基因核心区域的突变情况进行检测.结果以结核分支杆菌H37RV为对照,所有32株药物敏感株的rPOB基因均无突变.用DNA序列分析方法检测48株耐药株中44株发生突变,敏感性为91.7%(44/48),其中最常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸.PCR-SSCP检测48株耐RFP分离株中,45株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为93.1%(45/48).结论DNA序列分析可指导临床用药,PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌RFP耐药性.     

耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变位点的分析

目的 研究上海地区耐利福平结核分支杆菌ropB基因的突变特点,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法 对58株结核分支杆菌rpoB基因片段（约213bp)进行PCR扩增,其中包括核心突变区的69个碱基,并对PCR产物进行DNA测序。其中耐药株36株,敏感株22株。结果 所有58例中,36株耐药株均存在rpoB基因突变,氨基酸突变率531位为47．2％,526位为25．0％,22株敏感株均无突变。结论 rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

Molecular mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis clinical isolates

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｍ）ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ,ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｔｈｅβｓｕｂｕｎｉｔｏｆＲＮＡｐｏｌ...     

浙东地区耐多药结核分枝杆菌耐药特性及分子机制研究

目的 对浙东地区耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）耐药性及分子机制进行研究,为治疗耐多药结核病提供理论依据。方法 收集2018 年1 月～2019 年12 月浙江东部9 家结核病定点医院临床分离的结核分枝杆菌。采用比例法检测异烟肼（INH）、利福平（RIF）、氧氟沙星（OFL）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）、阿米卡星（AK）、对氨基水杨酸（PAS）、卷曲霉素（CM）和丙硫异烟胺（TH）对MDR-TB 的耐药性。通过基因芯片方法检测耐多药结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA 突变位点,PCR 扩增OFL 耐药的MDR-TB 的gyr 耐药基因并测序。结果 耐多药结核分枝杆菌对OFL、SM、EMB、AK、PSA、CM、TH、INH 和RIF 耐药率分别为38.1%、54.8%、28.6%、11.9%、8.3%、9.5%、13.1%、100.0%和100.0%。耐多药结核分枝杆菌的突变位点为rpoB 511（9 例）、rpoB 513（3 例）、rpoB 516（3 例）、rpoB 526（25 例）、rpoB 531（38 例）、rpoB 533（2 例）,KatG 315（71 例）,inhA-15(4 例),KatG 315 与inhA-15 同时突变（9 例）。检测到26 株gyrA 基因和2 株gyrB 基因发生突变,突变类型为Thr478Asn、Asn477Thr、Ala90Val、Ser91Pro、Asp94Ala、Asp94His、Asp94Asn 和Asp94Gly。结论 耐多药结核分枝杆菌利福平耐药以rpoB 基因531位点突变为主;异烟肼耐药以KatG 基因315 位点突变为主;MDR-TB 对喹诺酮类药物的耐药机制以gyrA 基因Ala90Val、Ser91Pro、Asp94Gly 突变类型为主。     

线性探针技术在海南省结核病诊断及耐药性检测中的应用

目的 探讨线性探针技术在海南省结核病诊断及耐药性检测中临床应用。方法 分别采用结核菌涂片、罗氏培养法、比例法药敏及线性探针技术对海南省疑似结核病患者痰液标本进行检测,并对检测结核分枝杆菌、耐药性及耐药突变特点进行分析。结果 线性探针技术检测结核分枝杆菌阳性率（58.7%）明显高于结核菌涂片（40.2%）和罗氏培养（53.8%）,线性探针法与两种传统方法比较差异有统计学意义（P<0.05）;以比例法药敏为金标准,线性探针法对结核分枝杆菌耐利福平、异烟肼和耐多药结核分枝杆菌检测的特异性为89.27%、94.95%和91.45%,敏感性为94.38%、75.00%和75.68%,阴性预测值为94.62%、80.34%和5.60%,阳性预测值为85.71%、93.32%和84.85%,符合率为90.05%、85.34%和85.34%,线性探针技术与比例法药敏检测结核分枝杆菌利福平耐药性效果比较差异无统计学意义,且具有较好一致性,检测异烟肼耐药性差异有统计学意义,且两种方法之间一致性一般,检测耐多药结核分枝杆菌两种方法差异无统计学意义,但两种方法之间一致性一般;利福平耐药基因突变类型主要是 rpoB H531L,占57.14%,异烟肼耐药基因突变类型主要是katG S315T1,占91.89%,耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变类型主要为rpoB S531L+KatG S315T1,占56.06%。结论 线性探针技术可快速准确地从海南省疑似肺结核临床标本鉴定出结核分枝杆菌及耐多药结核分枝杆菌,并可直接快速检测临床标本耐药性从而指导临床用药。