抑制Notch1/Jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞"归巢"并改善哮喘

目的 观察间充质干细胞（BMSCs）归巢调节哮喘Th1/Th“2 漂移”与Notch1/Jagged1通路的关系。方法 20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组：正常对照组（NC）、模型对照组（MC）、BMSCs移植组（BMSCs）、BMSC+Notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型,尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学,酶联免疫吸附法检测肺组织白介素（IL）-5、IL-13、IFN-γ,RT-PCR法检测肺组织Notch1、Jagged1基因表达,免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达,免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、Notch1、Jagged1蛋白表达。结果 与NC组比较,MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低,IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高,Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01）。与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高,BMSCs组Notch1、Jagged1 蛋白表达降低,BMSCs+Notch抑制剂组IL-5、IL-13、Notch1、Jagged1mRNA和蛋白降低（P<0.05或P<0.01）。与BMSCs组比较,BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高,IL-13、Notch1mRNA表达降低（P<0.05）。结论 BMSCs向哮喘肺组织归巢对Th1/Th2“漂移”产生调节作用,Notch1/Jagged1通路可能参与其过程。     

基于Notch1信号通路调控巨噬细胞极化改善佐剂关节炎大鼠关节炎症的机制

目的：探讨Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号轴通过调控巨噬细胞向M2型极化对佐剂性关节炎（AA）大鼠炎症反应的影响。方法：大鼠随机分成3组（6只）：健康组（NC）、模型组（MC）及Notch1抑制剂组（FLI），在致炎后12 d开始给予药物，并于30 d后检测各组大鼠的关节炎指数（AI）、右后足关节肿胀度（E）；采用流式细胞仪测定CD80+和CD163+细胞在大鼠外周血巨噬细胞中的表达量；ELISA检测大鼠血清中IL-4、IL-10、IL-1β、及TNF-α的水平；Western Blot检测大鼠关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白的表达。结果：MC组AA大鼠的E及AI均明显高于NC组（P<0.01）;CD80+细胞的表达显著高于对照组（P<0.01），而CD163+细胞的表达显著低于对照组（P<0.01）;IL-1β、TNF-α表达水平明显升高（P<0.01）, IL-4、IL-10表达水平明显降低（P<0.01）;Notch1、RBP-Jκ、Jagged1、Hes1蛋白的表达量明显增加（P<...     

益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达的影响*

目的 观察两种中药复方对脑缺血再灌注大鼠海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法 0.26mm尼龙线,造成大鼠右侧大脑中动脉阻塞,采用随机分组法,分入假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组。脑缺血2h后,分别于再灌注7d和14d取缺血侧海马和皮质。采用Western Blot检测海马和额顶叶皮质Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组Jagged1、Notch4和Hes1蛋白7d和14d表达均显著上调（P<0.05）;与模型组比较,益气活血方组和补肾生髓方组Jagged1、Notch4和Hes1蛋白7d和14d表达表达均显著下调（P<0.05）;与补肾生髓方组比较,益气活血方组Jagged1、Notch4蛋白7d和14d表达表达均显著下调（P<0.05）。结论 益气活血方和补肾生髓方能通过下调Jagged1、Notch4和Hes1蛋白表达,调节Notch信号通路,影响脑缺血后内源性神经干细胞增殖分化,促进其向神经元分化。     

姜黄素衍生物通过Notch1/Hes1信号通路抑制RSV感染后人肺上皮细胞MUC5AC分泌的研究

目的探讨姜黄素衍生物通过Notch1/发状分裂相关增强子1（Notch1/Hes1）信号通路对呼吸道合胞病毒（RSV）感染后人肺上皮细胞BEAS-2b黏蛋白5AC（MUC5AC）分泌的影响及其作用机制。方法建立体外RSV感染细胞模型,随机分成6组：姜黄素衍生物B6组、γ分泌酶抑制剂（DAPT）+B6组、DAPT组、地塞米松（DXM）组、RSV组和细胞对照组。B6组在RSV感染造模0.5h前予10滋mol/LB6预处理,DAPT+B6组在B6预处理前先以20滋mol/LDAPT预处理1h。造模开始前1h,DXM组加入0.01mg/mlDXM。B6组、DAPT+B6组、DAPT组、DXM组及RSV组以100倍半数感染量（TCID50）浓度的RSV感染吸附2h后加维持液培养12、24h收获细胞及上清液进行检测。应用RT-PCR、Westernblot法分别检测各组细胞Notch1、Hes1、MUC5ACmRNA与蛋白质的表达;ELISA法检测上清液中IL-25蛋白水平。结果与细胞对照组相比,B6组、DAPT+B6组、DAPT组、RSV组Notch1、Hes1、MUC5ACmRNA和蛋白表达水平及IL-25蛋白水平在12、24h两个时间点均显著升高（均P＜0.05）,其中MUC5AC表达水平在24h升高更显著。与RSV组相比,两个时间点其他组上述指标表达水平均有所降低（均P＜0.05）,以DXM组表达水平最低;而B6组、DAPT+B6组、DAPT组同一时间点上述指标表达水平相近。结论RSV感染人肺上皮细胞后,通过Notch1/Hes1信号通路促进IL-25的释放,并上调MUC5AC表达,导致气道黏液高分泌,而姜黄素衍生物对此具有抑制效应。     

阳和平喘颗粒通过TGF-β1/Smad信号通路影响慢性哮喘大鼠气道重塑的机制

目的 观察阳和平喘颗粒对慢性哮喘气道重塑的影响,并探究其作用机制。方法 将50只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、阳和平喘颗粒低剂量组和阳和平喘颗粒高剂量组,每组10只;采用卵清蛋白致敏激发复制哮喘大鼠模型。苏木素-伊红染色观察支气管肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中白细胞介素4（interleukin 4, IL-4）、白细胞介素6（interleulin 6, IL-6 ）水平;Western blot法检测支气管肺组织中转化生长因子β1（transforming growth factor-beta 1, TGF-β1）、Smad2与Smad3蛋白相对表达水平。结果 与正常组比较,模型组支气管管腔变窄,平滑肌层及基底膜层增厚,周围可见炎症细胞浸润,BALF中IL-4、IL-6水平升高（P＜0.05）,支气管肺组织中TGF-β1、Smad2与Smad3蛋白相对表达水平升高（P＜0.05）;与模型组比较,阳和平喘颗粒高、低剂量组和地塞米松组大鼠支气管肺组织病理学改变较轻, BALF中IL-4、IL-6水平下降（P＜0.05）,支气管肺组织中TGF-β1、Smad2与Smad3蛋白相对表达水平降低（P＜0.05）,与阳和平喘颗粒低剂量组比较,阳和平喘颗粒高剂量组和地塞米松组差异显著（P＜0.05）。结论 阳和平喘颗粒可以改善慢性哮喘大鼠的气道重塑,减轻气道炎症,其机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

川芎嗪调控miR-139-5p/CXCR4通路促进骨髓间充质干细胞迁移

[目的] 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)是否通过调控miR-139-5p/ 趋化因子受体4(chemokine receptor 4，CXCR4)促进骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)迁移。[方法] 采用全骨髓贴壁法培养SD大鼠BMSCs，50、100 μmol·L-1的TMP预处理BMSCs 24 h，脂质体3000转染miR-139-5p mimic、inhibitor，以细胞划痕和Transwell实验检测BMSCs迁移能力，双萤光素酶报告基因系统检测miR-139-5p与CXCR4之间的靶向性，实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR)检测miR-139-5p表达，免疫印迹法检测CXCR4蛋白表达。[结果] 与正常对照组比较，转染miR-139-5p mimic后，细胞划痕愈合减慢(P<0.01)，Transwell小室迁移的细胞数量减少(P<0.01)，CXCR4蛋白表达下调(P<0.05)，而转染miR-139-5p inhibitor的作用相反。双萤光素酶报告基因检测结果表明，CXCR4是miR-139-5p的潜在靶基因(P<0.01)。与正常对照组比较，50、100 μmol·L-1 TMP预处理均下调miR-139-5p表达(P<0.01)；与TMP组比较，TMP+miR-139-5p mimic组划痕愈合减慢(P<0.01)，Transwell 小室迁移的细胞数量减少(P<0.01)，CXCR4蛋白表达下调(P<0.01)，TMP+miR-139-5p mimic NC组无明显变化(P>0.05)。[结论] TMP可促进BMSCs迁移，其机制可能与下调miR-139-5p，增加CXCR4的表达有关。     

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织形态学及血清IL-17、TNF-α和IFN-γ表达的影响

[目的]探讨阳和平喘颗粒(YHPC)对哮喘大鼠肺组织形态学及血清白介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)表达的影响,从抗炎和提高免疫功能方面探讨阳和平喘颗粒治疗支气管哮喘的作用机制。[方法]SD大鼠90只随机分为6组,每组15只,分别为正常组(N组)、模型组(M组)、阳和平喘颗粒低、中、高剂量治疗组(YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H组)和地塞米松组(DXM组)。其中,M、YHPC-L、YHPC-M、YHPC-H和DXM组均采用国际通用的方法,即卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏及联合雾化吸入激发建立哮喘模型,同时,应用氢化可的松进行腹腔注射以复制肾阳虚模型,N组使用生理盐水作为对照。苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肺组织病理学变化,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组大鼠血清IL-17、TNF-α和IFN-γ表达水平的变化。[结果]与N组相比,M组大鼠血清IL-17、TNF-α显著升高(P<0.01),IFN-γ明显降低(P<0.01);与M组相比,YHPC-L、YHPC-M、YHPC-H和DXM组大鼠血清IL-17、TNF-α均发生下降(P<0.01),IFN-γ则明显上升(P<0.01);与DXM组相比,YHPC-L、YHPC-M、YHPC-H组对IL-17和TNF-α的作用效果小于DXM(P<0.01),而对IFN-γ的作用效果强于DXM(P<0.01)。[结论]阳和平喘颗粒可通过抗炎及增强机体免疫力而达到支气管哮喘标本兼治的目的。     

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织AQP1和AQP5表达的影响

目的 通过研究阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP1）和水通道蛋白5（AQP5）表达的影响,旨在从水液代谢及气道黏液分泌的角度探讨阳和平喘颗粒治疗支气管哮喘的作用机制。方法 SD大鼠90只随机分为正常组（N）、模型组（M）、阳和平喘颗粒低、中、高剂量治疗组（YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H）和地塞米松治疗组（DXM）,每组15只。其中,M、YHPC-L、YHPC-M、YHPC-H和DXM组采用卵蛋白（OVA）腹腔注射致敏及雾化吸入的方法建立哮喘大鼠模型,同时应用氢化可的松腹腔注射复制肾阳虚模型,N组则均使用生理盐水作为对照。采取HE染色检测各组大鼠肺组织形态学改变,应用Real-time PCR和Western blot检测各组大鼠肺组织AQP1和AQP5 mRNA及蛋白表达水平的变化,采用免疫组化法检测AQP1和AQP5在肺组织的分布及表达水平变化。结果 与N组相比,M组AQP1和AQP5在mRNA及蛋白表达水平均发生显著下降（P<0.01）;与M组相比,YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H组AQP1和AQP5的表达水平均显著上升（P<0.05~0.01）,且具有一定的剂量依赖效应;与DXM相比,YHPC-L对AQP1和AQP5的作用效果低于DXM（P<0.05）,而YHPC-M和YHPC-H则与之具有相当的作用效果（P>0.05）。结论 阳和平喘颗粒可通过上调AQP1和AQP5的表达而调控水液代谢平衡及气道黏液分泌,进而发挥其治疗支气管哮喘的作用。      

Notch1信号通路通过调控Th17细胞参与实验性自身免疫性甲状腺炎的发生和发展

目的 探讨Notch1信号通路是否通过调控辅助性T细胞17 (Th17)参与实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）的发生和发展。方法 将24只小鼠随机平均分为NC组、EAT-A组（给予猪甲状腺免疫球蛋白多点皮下注射）、EAT-B组（猪甲状腺免疫球蛋白多点皮下注射前给予γ分泌酶抑制剂腹腔注射）。HE染色观察甲状腺内淋巴细胞浸润程度;流式细胞术检测小鼠脾脏单核细胞（SMC）悬液中Th17细胞比例;ELISA法检测血清甲状腺球蛋白（TgAb）滴度和SMC培养上清白细胞介素-17A (IL-17A)浓度;实时PCR分析脾细胞中Notch1、Hes1、RORγt和IL-17A mRNA表达水平;Western blotting检测脾脏组织中IL-17A蛋白表达水平。结果EAT-A组和EAT-B组小鼠甲状腺中有不同程度淋巴细胞浸润,与NC组相比血清TgAb滴度显著升高（P <0.01）。EAT-A组和EAT-B组小鼠Notch1、Hes1、RORγt和IL-17A mRNA表达,以及SMC中Th17细胞比例、IL-17A浓度、IL-17A蛋白表达水平均高于NC组（均P <0.01）。EAT...     

Notch1、Notch3及Hes1在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

目的 探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者肿瘤组织中Notch信号通路相关蛋白Notch1、Notch3及Hes1表达水平及临床意义.方法 采用实时定量PCR (Q-PCR)和Western blot方法检测135例新鲜GIST标本及临近非肿瘤组织中Notch1、Notch3及Hes1 mRNA和蛋白表达情况.同时采用免疫组织化学方法检测Notch1、Notch3及Hes1蛋白表达情况,并分析各蛋白表达与GIST患者临床病理因素的关系.另将野生型小鼠(WT)和Notch1基因敲除小鼠(KO) 40只,分为WT组、KO组、WT+ GIST组和KO+GIST组,检测各组Notch1、Notch3及Hes1蛋白表达情况.结果 与临近非肿瘤组织相比,GIST组织中Notch1、Notch3及Hes1 mRNA和蛋白表达均上调(P＜0.05).GIST标本的Notch1、Notch3、Hes1阳性率(5926％、65.19％、62.22％)均高于临近非肿瘤组织(17.78％、22.22％、17.78％),差异有统计学意义(P＜0.05).统计分析证实Notch1蛋白表达与GIST的NIH分级密切相关(x2=8.532,P=0.002);Notch3蛋白表达与GIST的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Hes1蛋白表达与GIST的肿瘤大小密切相关(x2=6.781,P=0.012).各组小鼠Notch1、Notch3及Hes1蛋白表达情况显示,与WT组相比,WT+ GIST组小鼠体内3种蛋白表达升高(P＜0.05);与KO组相比,KO+GIST组小鼠体内3种蛋白表达无明显变化(P＞0.05);与WT+ GIST组相比,KO+ GIST组小鼠体内3种蛋白表达降低(P＜0.05).结论 Notch信号通路相关蛋白Notch1、Notch3及Hes1在GIST患者组织中表达升高,Notch信号通路的激活可能在GIST发生、发展过程中起重要作用.     

五步蛇毒蛋白C激活剂在脓毒症大鼠早期适应性免疫应答中的作用

目的 探讨五步蛇毒蛋白C激活剂（PCA）在脓毒症大鼠早期适应性免疫应答中的作用。方法 采用SPF级SD大鼠78只,用随机数字表法分组：对照组（n=6,腹腔注射生理盐水）;通过腹腔注射脂多糖（LPS 10 mg/kg）复制脓毒症大鼠模型,模型组以LPS注射后4、6、8、12、16、24 h时的标本采集时间分为6组,6只/组;余36只大鼠于LPS注射30 min后使用药物干预,分为1-磷酸鞘氨醇受体1（S1PR1）激动剂SEW2871干预组（0.5 mg/kg,腹腔注射）和PCA干预组（0.1 mg/kg,腹腔注射）,各干预组以LPS注射后6、12、24 h时的标本采集时间分为3组,每组6只。采用ELISA法检测血浆IL-4、S1P、IL-12和IFN-γ水平,应用免疫荧光法检测肠系膜淋巴结S1PR1和CD103表达的变化。结果 与对照组比较,脓毒症大鼠在注射LPS后的24 h内,血浆S1P、IL-12、IL-4和IFN-γ水平明显增高（P<0.05）,LPS注射后6 h内IFN-γ/IL-4比值逐渐增高,之后逐渐降低;肠系膜淋巴结中S1PR1和CD103的表达明显增高（P<0.05）。SEW2871明显增加血浆S1P、IL-12和IFN-γ的浓度,降低血浆IL-4水平（P<0.05）,且明显减少淋巴结中S1PR1和CD103的表达（P<0.05）。蛇毒PCA干预后,血浆IL-4水平明显增高,淋巴结S1PR1表达显著增多（P<0.05）。结论 五步蛇毒PCA对维持脓毒症早期机体炎症和免疫反应的平衡具有调节作用,其机制可能与S1P-S1PR1通路有关。     

miR-324-5p通过抑制Syk/Ras/c-fos通路降低脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖

目的 探讨miR-324-5p调控Syk/Ras/c-fos信号通路对大鼠肾小球系膜（HBZY-1）细胞增殖能力的影响。方法 体外培养HBZY-1 细胞;设计并合成 miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-NC 片段;采用 Lipo3000 试剂盒瞬时转染 miR-324-5pmimics,miR-324-5p mimics-NC片段至脂多糖（LPS）诱导的HBZY-1细胞内,RT-qPCR验证转染效率;将HBZY-1细胞分为对照组（生理盐水）,LPS 组（LPS 0.5 μg/mL）,LPS+mimics 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics）,LPS+mimics-NC 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics-NC）;MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性;RT-qPCR法检测各组细胞miR-324-5p及Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达;Western blot和免疫荧光法检测各组细胞p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白的表达。结果 MTT结果显示,LPS组细胞增殖水平较正常组显著升高,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组细胞增殖能力降低;RT-qPCR结果显示,LPS+mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组及LPS+mimics-NC组,且LPS+mimics组中Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组及LPS+mimics-NC组,差异具有统计学意义（P<0.05）;Western Blot结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比LPS+mimics组中p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;免疫荧光结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白标记细胞数目明显减少。结论 miR-324-5p可通过抑制Syk/Ras/c-fos信号通路降低LPS诱导的慢性肾小球肾炎细胞的增殖活性,miR-324-5p有望成为慢性肾小球肾炎诊断和治疗的潜在靶标。     

苦参碱对肝卵圆细胞增殖模型大鼠Notch1,Jagged1 mRNA表达的影响

目的:研究肝卵圆细胞增殖模型大鼠Notch1, Jagged1 mRNA表达的变化及苦参碱对其的影响.方法:雄性SD大鼠48只按体重随机分为4组:模型组(A组);苦参碱小剂量(B组);苦参碱组大剂量(C组);D组即正常对照组.用免疫组化方法观察造血干细胞标记(Thy-1)表达的变化、半定量RT-PCR方法观察肝组织中Notch1, Jagged1 mRNA表达的变化.结果:与D组比较,A组Thy-1蛋白, Notch1mRNA, Jagged1 mRNA表达显著升高(P＜0.01),与A组比较,C组Thy-1蛋白, Notch1mRNA, Jagged1 mRNA表达显著下调(P＜0.01).结论:苦参碱可有效的调节Notch信号通路、下调Thy-1蛋白表达,可能是其抑制卵圆细胞过度增殖、诱导卵圆细胞向肝细胞方向定向分化的机制之一.     

地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经样细胞分化中对Notch信号通路的影响

目的 探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞过程中对Notch信号通路的影响。方法 以大鼠BMSCs为研究对象,取P3～P5代细胞随机分为正常对照组(CON组)与地黄多糖诱导组(RGP组),诱导后连续培养7d。以免疫细胞化学法和Western blotting检测诱导后0、1、3、7d各时点Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD蛋白的表达,Real-time PCR检测Notch信号通路相关分子mRNA。结果 免疫荧光法检测显示,RGP组与CON组比较各时点Notch1蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.01),且随时间变化Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;Jagged1蛋白阳性细胞率从诱导结束0d到诱导后1d具有明显的上升趋势,1d到7d显著下降,各时点比较差异有统计学意义(P＜0.05), CON组与RGP组各时点比较差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果相似。Real-time PCR检测显示,RGP组Notch1 mRNA随时间变化表达下降,Presenilin1表达先降低后略有回升,Hes1表达下降,Mash1表达升高,Jagged1表达先升高后降低,各时点与CON组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 地黄多糖在诱导BMSCs向神经样细胞分化过程中抑制Notch1蛋白的表达,并影响Notch信号通路相关基因的表达。     

沉默长链非编码RNA HIF1A-AS2可抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移

目的 探究长链非编码RNA HIF1A-AS2诱导宫颈癌细胞的上皮间质转换和肿瘤干细胞样特性的机制。方法 设计3种可以沉默HIF1A-AS2的shRNA转染caski细胞株,选出干扰效果最好的shRNA进行后续研究;将caski细胞分为：Control组、shRNA-NC组和Sh-HIF1A-AS2组;检测各组细胞活力、侵袭能力、上皮间质转换及相关蛋白表达情况、肿瘤细胞成球情况和干细胞标记物情况;结果 各组细胞活性差异无统计学意义（P>0.05）;干扰结果确认使用HIF1A-AS2-shRNA1为shRNA;相比Control组,shRNA-NC组所有指标均无显著改变（P>0.05）;相比shRNA-NC组,Sh-HIF1A-AS2组单位面积侵袭细胞数目、Vimrntin和N-cadherin、细胞成球数目、成球细胞直径、ABCG2阳性细胞率、Nanog、OCT4、SOX2蛋白和mRNA相对表达均显著降低,E-cadherin相对表达显著升高（P<0.05）。结论 沉默长链非编码RNA HIF1A-AS2可以抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

垂体肿瘤转化基因1在系统性硬化症中的表达及作用

目的 研究垂体肿瘤转化基因（PTTG1）在系统性硬化症（SSc）中的表达及其对成纤维细胞的作用。方法 收集皮肤活检组织,其中SSc患者组21例,正常组22例。分别应用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测皮肤组织中PTTG1基因表达水平;应用免疫组化方法检测皮肤组织中PTTG1蛋白表达水平;应用小干扰RNA（siRNA）降低成纤维细胞中PTTG1基因表达,通过 Real-time PCR 方法检测细胞中 PTTG1 及与细胞纤维化密切相关的几个基因α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1的表达变化;通过细胞实时增殖检测系统检测细胞增殖。结果 与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中PTTG1的表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中阳性细胞增多,PTTG1蛋白表达明显升高;原代皮肤成纤维细胞中PTTG1表达水平和α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1均存在正相关,差异具有统计学意义（R²=0.8192,P<0.05;R²=0.6398,P<0.05;R²=0.316,P<0.05;R²=0.3723,P<0.05）;同时,原代皮肤成纤维细胞中PTTG1干扰后,细胞增殖被显著抑制,纤维化相关基因（COL1A1、COL1A2、PAI-1）表达下降,胶原蛋白的基因表达降低。结论 SSc患者中存在PTTG1过度表达,干扰PTTG1可降低成纤维细胞活性,提示PTTG1与SSc纤维化程度密切相关。     

大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏Notch1／Jagged1的表达及其意义

目的:观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后不同时期Notch1/Jagged1、纤维连接蛋白(FN)表达的变化,探讨在肾脏间质纤维化发病机制中的意义。方法:建立大鼠UUO模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和westernblotting动态观察(第1、3、7、14天)梗阻侧肾脏及假手术对照组Notch1/Jagged1mRNA、蛋白和FN的表达。结果:UUO模型梗阻侧肾脏Notch1/Jagged1mRNA蛋白及FN蛋白在输尿管结扎后第1、3、7、14天不同时间点均显著高于对照组和非梗阻侧肾脏(P<0.05或P<0.01),Notch1/Jagged1mRNA在第7天达高峰,但Jagged1于第1天达高峰,Notch1、FN在第14天达高峰。结论:在整体条件下,随着肾间质纤维化程度的加重,FN聚积也随之增加,同时Notch1/Jagged1表达增强,提示Notch1/Jagged1信号通路在肾间质纤维化发病机制中起重要作用。     

骨髓间充质干细胞移植对脑动脉栓塞大鼠VEGF165、Notch1表达的影响

为探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑损伤大鼠的改善作用机制,本实验通过建立脑损伤大鼠模型,观察BMSCs移植对脑动脉栓塞大鼠血管内皮生长因子(VEGF) 165、Notch1表达的影响。将45只SD大鼠随机分为假手术对照组、动脉栓塞(MCAO)组、BMSCs移植组。检测脑组织栓塞区微血管数量,及各组大鼠VEGF165、Notch1蛋白和mRNA的表达。结果发现MACO组、BMSCs移植组大鼠的脑组织中微血管数量明显多于假手术对照组;MACO组和BMSCs移植组的VEGF165与Notch1的蛋白表达、VEGF165与Notch1的mRNA表达均高于假手术对照组;BMSCs移植组较MACO组更高。根据结果推测BMSCs移植可能通过激活Notch信号通路促进VEGF165的表达,而促进脑动脉栓塞区的血管新生。