miR-378通过靶向RAB11A促进乳腺癌细胞系的增殖和迁移

目的 探究miR-378在乳腺癌细胞系中的表达及作用机制。方法 利用TargetScan分析miR-378的作用靶基因RAB11A。利用RT-PCR检测乳腺癌细胞系中miR-378和RAB11A的mRNA水平表达。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞miR-378,NC(normal control)对照,采用MTT法和Transwell法检测乳腺癌细胞增殖和迁移能力的变化;采用RT-PCR和Western blot检测RAB11A的表达。荧光素酶报告分析miR-378与靶基因RAB11A之间的信号。结果 miR-378在乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231中表达上调;RAB11A在乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231中表达下调;在MCF-7,MDA-MB-231细胞中敲降miR-378后,乳腺癌细胞增殖和迁移能力与对照组相比被显著抑制,RAB11A的mRNA和蛋白表达水平明显增加,荧光素酶活性增加。结论 在乳腺癌细胞中,miR-378可通过靶向RAB11A促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。     

miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

目的 探讨miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用.方法 采用实时荧光定量PCR检测8株乳腺癌细胞系(MCF7、BT474、SK-BR-3、MDA-MB-453、MDA-MB-468、HCC1937、BT549和MDA -MB -231)中miR-506的表达量,以正常乳腺上皮细胞MCF10A为对照.通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231和BT549细胞系中瞬时过表达miR-606模拟物(设阴性对照),通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞运动能力的变化;观察MDA-MB-231和BT549细胞系转染miR-506前后细胞形态学变化;Western blotting法检测E-cadherin、Vimemin和Slug蛋白表达的变化.荧光素酶报告基因分析实验检测M DA-MB-231细胞中miR-506过表达对野生型荧光素酶活性的影响.结果 miR-506在各乳腺癌细胞中的表达量相对于正常乳腺上皮细胞MCF10A显著降低(P＜0.01).miR-506过表达显著抑制MDA-MB-231和BT549细胞的迁移和侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P＜0.01).MDA-MB-231和BT549细胞瞬时转染miR-506 48 h后发生明显的形态学改变;Western blotting结果显示miR-506过表达在MDA-MB-231和BT549细胞中均上调E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达.Western blotting检测结果显示MDA-MB-231细胞转染miR-506后Slug蛋白水平明显低于阴性对照;荧光素酶报告基因分析结果显示miR-506过表达显著抑制野生型荧光素酶的活性.结论 在乳腺癌中,miR-506可以通过靶向转录因子Slug诱导细胞发生上皮间充质转化,进而抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-506参与乳腺癌发生和发展的可能途径之一.     

miRNA-191对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-191在人乳腺癌细胞中的表达情况,研究其对乳腺癌细胞的增殖、侵袭的影响。方法 real-time PCR检测乳腺癌细胞[MDA-MB-231(雌激素受体阴性,ER-)、MCF-7(雌激素受体阳性,ER+)]和正常乳腺上皮细胞(HBL-100)中miR-191表达水平的差异;利用Lipofectamine2000将miR-191抑制体瞬时转染乳腺癌MCF-7,并用real-time PCR检测转染效果;分别用CCK-8法检测MCF-7细胞增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞的细胞周期,Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力。结果与正常乳腺细胞相比,miR-191在乳腺癌细胞中高表达(P<0.01),且在ER(+)乳腺癌细胞MCF-7中的表达水平高于ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-231(P<0.01),转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖能力(0.65±0.04)较阴性对照组(1.18±0.05)明显受到抑制(F=122.238,P<0.01),侵袭能力(56.67±2.58)较阴性对照组(82.5±5.79)减弱(F=18.734,P<0.01),G0/G1期的细胞比例(73.39±1.10)%较阴性对照组(69.28±2.11)%增加(F=61.060,P<0.01),S期细胞比例(20.9±1.17)%较阴性对照组(25.48±1.19)%减少(F=46.937,P<0.01)。结论 miR-191在人乳腺癌细胞中,特别是ER(+)乳腺癌中高表达,转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制。     

非分泌型CXCL16在乳腺癌细胞系中的表达及对其生物学特性的影响

目的 通过检测非分泌型CXCL16在不同侵袭性乳腺癌细胞系(SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S)及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达,探讨非分泌型CXCL16表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响。 方法 采用RT-PCR检测CXCL16 mRNA在MCF-10A、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S细胞系的表达,将pEGFP-CXCL16真核表达质粒转染到低表达CXCL16的MDA-MB-231细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blot验证CXCL16过表达,采用体外迁移、侵袭实验及甲基四唑蓝(MTT)法分别检测过表达CXCL16对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭和增殖活性的影响。 结果 CXCL16 mRNA在高侵袭性的MDA-MB-231细胞低表达,在低侵袭性的MCF-7细胞高表达,过表达CXCL16使得MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭减弱,而增殖未受到影响。 结论 非分泌型CXCL16表达与乳腺癌细胞系的侵袭性相关,其表达可以抑制乳腺癌细胞的体外迁移、侵袭。     

辐射板强化喷管换热与红外抑制效果试验研究

目的 通过检测非分泌型CXCL16在不同侵袭性乳腺癌细胞系(SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S)及正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达,探讨非分泌型CXCL 16表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法 采用RT-PCR检测CXCL16 mRNA在MCF-10A、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S细胞系的表达,将pEGFP-CXCL16真核表达质粒转染到低表达CXCL 16的MDA-MB-231细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blot验证CXCL16过表达,采用体外迁移、侵袭实验及甲基四唑蓝(MTT)法分别检测过表达CXCL16对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭和增殖活性的影响.结果 CXCL16 mRNA在高侵袭性的MDA-MB-231细胞低表达,在低侵袭性的MCF-7细胞高表达,过表达CXCL16使得MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭减弱,而增殖未受到影响.结论 非分泌型CXCL16表达与乳腺癌细胞系的侵袭性相关,其表达可以抑制乳腺癌细胞的体外迁移、侵袭.     

长链非编码RNAAC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的检测长链非编码RNAAC003973.4在人乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测20例乳腺癌组织及配对的癌旁组织,以及检测乳腺癌细胞株（BT-549、MDA-MB-231、MCF-7、T47D）和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AC003973.4的表达。取AC003973.4表达水平最低的乳腺癌细胞株转染过表达质粒以上调AC003973.4的表达,分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测AC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;生物信息学法预测AC003973.4互补结合的miRNA及下游靶基因,qRT-PCR法检测miRNA和下游靶基因mRNA的表达,Westernblot检测相关蛋白的表达。结果乳腺癌组织AC003973.4表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.01）。乳腺癌细胞株AC003973.4表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞（均P＜0.05）,MCF-7细胞中AC003973.4的表达水平最低（P＜0.01）。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）。AC003973.4可互补结合miR-224-5p,miR-224-5p可互补结合PTEN。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,miR-224-5p的表达均下调（P＜0.01）,PTENmRNA和蛋白的表达均上调（均P＜0.01）,细胞增殖相关蛋白CDK4、CyclinD1与细胞迁移相关蛋白Zeb-1、N-cadherin表达均下调（均P＜0.01）。结论乳腺癌组织和细胞株中AC003973.4表达水平降低,上调AC003973.4表达可减弱乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与调节miR-224-5p与PTEN基因的表达有关。     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

MiR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移

目的 探讨miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1对乳腺癌侵袭和转移的影响。方法 生物信息学数据库查询miR-204在乳腺癌患者中的表达情况和 miR-204对乳腺癌患者生存率的影响;RT-qRCR检测miR-204在乳腺癌细胞系中的表达情况;利用 GV369-miR-204过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中的miR-204;Transwell实验检测miR-204对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的影响;生物信息学方法确定miR-204的关键基因（Hub基因）;双荧光素酶实验检测miR-204和HNRNPA2B1的靶向关系;Western blot实验检测过表达miR-204后HNRNPA2B1的表达情况;Transwell实验检测MDA-MB-231/miR-204+NC、MDA-MB-231/miR-204+HNRNPA2B1细胞的侵袭和迁移能力的变化。结果 miR-204在乳腺癌组织中表达降低（P<0.05）,低表达水平的miR-204与患者不良预后相关（P<0.05）;miR-204在乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞系中表达量低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达（P<0.0001）。通过过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中miR-204的表达,结果显示上调miR-204可抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力（P<0.05）;HNRNPA2B1为miR-204的Hub基因,starbase网站发现miR-204-5p 和HNRNPA2B1表达呈负相关且HNRNPA2B1在乳腺癌患者中表达升高（P<0.05）;生存分析证明高表达HNRNPA2B1的乳腺癌患者预后不良（P<0.05）;双荧光素酶实验证明miR-204和HNRNPA2B1可靶向结合（P<0.05）。Western blot和Transwell实验证明,miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和迁移,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-204在乳腺癌组织和细胞中表达降低,且miR-204可通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移。     

环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞侵袭和转移的研究

目的探讨环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞发生侵袭和转移的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR技术检测乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞转染miR-7模拟物、sh-Cdr1as、转录因子SP1siRNA前后,正常乳腺MCF-10A细胞及乳腺癌组织中环状RNACdr1as、miR-7、SP1mRNA的表达水平;MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）mRNA的表达水平;采用Transwell实验分析MDA-MB-231、MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;Westernblot法检测MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-cadherin及Vimentin蛋白的表达情况。结果与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞环状RNACdr1as表达上调,miR-7表达下调,SP1mRNA表达上调（均P＜0.05）。与转染前相比,MCF-7、MDA-MB-231细胞转染sh-Cdr1as后,miR-7表达上调（均P＜0.05）,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）;而转染miR-7mimics后,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）。与转染前相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞转染sh-Cdr1as后,侵袭细胞数明显减少（均P＜0.05）。与乳腺导管原位癌患者相比,乳腺浸润性导管癌环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;与无腋窝淋巴结转移患者相比,有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;Pearson相关性分析显示环状RNACdr1as与miR-7的表达存在负相关（r=-0.541,P＜0.05）,miR-7与SP1mRNA的表达也存在负相关（r=-0.467,P＜0.05）。MDA-MB-231、MCF-7细胞转染SP1siRNA后,E-cadherinmRNA、蛋白表达均上调（均P＜0.05）,VimentinmRNA、蛋白表达均下调（均P＜0.05）。结论乳腺癌细胞环状RNACdr1as表达上调,通过环状RNACdr1as/miR-7/SP1调控轴促使癌细胞发生上皮间质转化,使乳腺癌细胞发生侵袭和转移。环状RNACdr1as可能成为乳腺癌治疗的新靶点。     

SOCS3受miR-183-5p调控影响乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的 探究细胞因子信号传送阻抑物3 (SOCS3)调节乳腺癌进展的分子机制。方法 生物信息学方法分析TCGA数据库中乳腺癌患者的数据;体外培养乳腺癌细胞系,定量反转录聚合酶链式反应检测SOCS3和miR-183-5p的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测SOCS3的蛋白表达水平;对MDA-MB-231、T47D细胞进行过表达或敲低SOCS3和miR-183-5p处理,双萤光素酶报告实验检测SOCS3和miR-183-5p的靶向结合关系;CCK-8和克隆形成实验检测MDA-MB-231和T47D细胞的增殖能力;Transwell实验检测MDA-MB-231和T47D细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测MDA-MB-231和T47D细胞的凋亡率。结果 SOCS3在乳腺癌组织和细胞系中低表达,而miR-183-5p在乳腺癌组织和细胞系中高表达。细胞功能实验证明了SOCS3抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭以及促进细胞凋亡。starBase和Targetscan数据库生物信息分析发现miR-183-5p与SOCS3有结合位点,双萤光素酶报告实验证明miR-183-5p与SOCS3具有靶向结合关系,...     

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制.方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell...     

miR-99b-5p通过靶向TRIB1基因调控乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-99b-5p靶向Tribbles同源蛋白1(Tribbles pseudokinase 1,TRIB1)基因调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。方法采用RT-PCR检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达水平,采用Western blotting检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中TRIB1蛋白表达量。在MCF-7细胞中转染miR-99b-5p mimics或mimics对照,分别记为miR-99b-5p组和miR-NC组,RT-PCR检测细胞中miR-99b-5p表达变化,Western blotting检测TRIB1蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-99b-5p和TRIB1的靶向关系。结果与人乳腺上皮细胞HBL-100比较,乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量明显降低(P < 0.01),而TRIB1蛋白的表达明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-99b-5p组MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量升高(P < 0.05),TRIB1蛋白表达水平降低(P < 0.05),细胞增殖能力减弱(P < 0.05),细胞凋亡率升高(P < 0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-99b-5p能够明显降低TRIB1-Wt MCF-7细胞相对荧光素酶活性(P < 0.01),而对TRIB1-Mut MCF-7细胞相对荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论miR-99b-5p在乳腺癌MCF-7细胞中呈低表达,TRIB1蛋白呈高表达,过表达miR-99b-5p能够靶向抑制TRIB1阻碍MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡。     

MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株（BT549和MDA-MB-231）以及正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响,并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物,靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区（3'-UTR）直接结合。结果 与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比,miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞（P<0.01）中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关（P<0.01）。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关（P<0.01）,双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达（P<0.01）,向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达（P<0.01）。此外,过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.01）。结论 乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失,导致靶基因ARHGAP36的异常高表达,促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

MiR-671-5p通过负向调控SMAD3抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-671-5p影响骨肉瘤的迁移侵袭的相关机制。方法 通过NCBI在线数据库筛选骨肉瘤中差异表达的微小RNA（miRNA）、预测miRNA的靶蛋白并进行功能分析;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）用于检测转染过表达miR-671-5p质粒后con组和miR-671-5p组骨肉瘤细胞中miR-671-5p的表达情况;通过Transwell实验检测转染质粒后骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力;Western blot实验检测相关蛋白在骨肉瘤细胞中的表达情况;荧光素酶报告基因检测重组人SMAD家族成员3（SMAD3）的 3’UTR中是否含有miR-671-5p的结合位点。结果 MiR-671-5p在骨肉瘤组织和细胞中表达下调（P<0.05）。qRT-PCR证明转染过表达miR-671-5p质粒后,细胞转染成功（P<0.05）。过表达骨肉瘤细胞中的miR-671-5p后细胞的迁移和侵袭能力明显降低（P<0.05）,并且miR-671-5p能够抑制骨肉瘤细胞的上皮间质转化（EMT）（P<0.05）;Western blot结果显示SMAD3在骨肉瘤细胞中表达上调（P<0.05）;荧光素酶报告基因检测证实miR-671-5p与SMAD3的3’UTR之间存在结合位点（P<0.05）;Western blot结果显示转染过表达SMAD3质粒后,SMAD3表达明显升高（P<0.05）,而miR-671-5p能明显抑制SMAD3的表达（P< 0.05）;Transwell实验证明SMAD3能够促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）,而miR-671-5p则能够逆转这种促进作用（P<0.05）。结论 MiR-671-5p能够通过负向调控SMAD3抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力。     

外泌体介导的miR-18b-5p调控NEDD9对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-18b-5p调控神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制.方法:qRT-PCR检测人正常乳腺癌上皮细胞MCF-10A与2株乳腺癌细胞株(SKBR-3和SKBR-3/PR)中miR-18b-5p的表达水平;Western blotting检测SKBR-3/PR细胞...     

ACL的构建及其对结直肠癌HCT116细胞增殖和迁移的作用

目的探讨miR-363-5p靶向三结构域蛋白14(TRIM14)对3种乳腺癌细胞系凋亡的影响。 方法采用实时荧光定量PCR法比较不同化疗药物诱导3种乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-435、MCF-12A)中miR-363-5p和TRIM14 mRNA表达水平,采用免疫组化法检测不同亚型乳腺癌组织TRIM14表达情况。采用Western blotting检测TRIM14蛋白表达。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用生物信息学方法预测miR-363-5p与TRIM14的结合位点,通过干扰miR-363-5p和TRIM14研究miR-363-5p对3种乳腺癌细胞中TRIM14的调控作用。Pearson相关分析各亚型乳腺癌组织中miR-363-5p与TRIM14的相关性。 结果3种化疗药物均能促进细胞凋亡,化疗药物处理3种亚型乳腺癌细胞后miR-363-5p表达上升,TRIM14 mRNA表达下降。荧光素酶报告基因实验发现TRIM14是miR-363-5p的靶基因。过表达miR-363-5p后,3种亚型乳腺癌细胞凋亡率上升,TRIM14蛋白和mRNA下降。敲低TRIM14后3种亚型乳腺癌细胞凋亡率上升,过表达TRIM14后3种亚型乳腺癌细胞凋亡率下降。3种亚型乳腺癌组织miR-363-5p与TRIM14表达呈负相关。 结论化疗药物诱导3种亚型乳腺癌细胞后miR-363-5p表达上升,miR-363-5p靶向抑制TRIM14表达,促进3种乳腺癌细胞系凋亡。     

miR-363-5p靶向TRIM14对化疗药物诱导的乳腺癌细胞系凋亡的影响

目的探究抑制IL-17A的表达对脓毒血症小鼠急性肾脏损伤的影响。 方法24只小鼠按照随机数字表法均分为对照组、模型组和抑制剂组。模型组和抑制剂组小鼠腹腔注射高剂量LPS(10 mg/kg)建立脓毒血症急性肾损伤模型,抑制剂组给与IL-17A抑制剂SGC-CBP30(30 mg/kg)。检测血清肌酐、尿素氮和炎症因子水平,分析肾功能的变化,通过HE染色和过碘酸雪夫染色分析肾脏病理变化,分析肾脏炎症因子水平和细胞凋亡蛋白的变化。 结果IL-17A抑制剂处理能够显著下调脓毒血症小鼠血清肌酐、尿素氮和炎症因子IL-6和TNF-α水平(P＜0.05);抑制IL-17A的表达能够显著改善脓毒血症小鼠肾脏的损伤,下调肾脏炎症因子和细胞凋亡蛋白的表达。 结论抑制IL-17A的表达能够改善脓毒血症小鼠急性肾损伤。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。