注射用两性霉素B脂质体效价测定法的改进

目的 建立准确测定注射用两性霉素B脂质体效价含量的生物测定方法,解决现有质控标准中培养体系下无法形成抑菌圈的难点问题。方法 效价测定方法：管碟法,沙氏培养基(含1%氯化钠)pH6.0~6.2,磷酸盐缓冲液(pH7.0,含1%聚山梨醇),检定菌为啤酒酵母(ATCC9763)。桥接液相方法：色谱柱：CAPCELLPAK MG ⅡC18(250mm×4.6mm, 5μm);流动相：乙腈：磷酸溶液(pH1.00±0.05)(370:630, V/V);流速：0.8mL/min;柱温：25℃;检测波长：383nm;进样量：10μL。结果 改进后的方法：抑菌圈边缘清晰,且其抑菌圈直径大小符合生物测定法的方法学要求;在1.0~11.9u/mL浓度范围内线性良好(r=0.9995);可信限率符合中国药典要求(不大于5%);通过HPLC间接桥接方式验证,效价含量测定结果准确,可满足预期用途。结论     

HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中2-巯基苯并噻唑

摘要：目的 建立HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中2-巯基苯并噻唑基因毒性杂质含量的方法。方法 HPLC法,采用 Inertsil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以50 mmol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调pH值至6.25)-甲醇-80%乙腈(60:10:30, V/V/V) 为流动相,等度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为35℃,检测波长为320 nm,进样体积为10 μL。结果 2-巯基苯并噻唑在浓度 0.01~102.9 μg/mL范围内,呈良好的线性关系,回归方程y= 70652x+2167.2,相关系数r=0.9999;定量限为0.3 ng,检测限为 0.1 ng, 回收率均值(n=9)为91.7%。结论 本方法专属性强、准确、快捷、灵敏且耐用性良好,为测定注射用盐 酸头孢吡肟中2-巯基苯 并噻唑含量的有效补充检测与定量方法,并为该产品临床应用安全性提供保障。     

浊度法测定两性霉素B及其脂质体的效价

目的建立浊度法测定两性霉素B及其脂质体效价的方法。方法啤酒酵母为实验菌,加菌量2%～3.3%(V/V),(37±1)℃培养6～8h测定。结果抗生素线性浓度为0.04～0.10μg/ml,一剂量法、二剂量法的平均回收率分别为103.5%(n=5)、106.6%(n=2),日内RSD分别为1.64%、0.38%,日间RSD分别为2.79%(n=8)、0.87%(n=3)。结论本方法灵敏,快速,可作为测定两性霉素B及其脂质体的效价的方法。     

HPLC法测定乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液中的依地酸二钠

摘要：目的 建立乳酸左氧氟沙星氯化钠注射用中依地酸二钠的测定方法。方法 样液中依地酸二钠经氯化铁衍生化后用 HPLC检测。考察了离子对试剂浓度、磷酸盐浓度、水相pH、有机相比例以及衍生化试剂用量等对测定的影响。结果 优化的 色谱条件为：C18色谱柱,流动相：50 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含5 mmol/L的四丁基溴化铵 ,用磷酸溶液调节pH值至4.5)-乙腈 (90:10,V/V);流速：1.0 mL/min;检测波长：257 nm。该方法分析时间仅需10 min。结论 本方法前处理简单快速,具有较好 的准确度、灵敏度和精密度,适用于乳酸左氧氟沙星氯化钠注射用中依地酸二钠的质量控制。     

高效液相色谱法测定醋酸来法莫林的有关物质

摘要：目的 建立高效液相色谱法测定醋酸来法莫林的有关物质。方法 采用C18色谱柱(25 cm×4.6 mm,5 μm),流动相 A：60 mmol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH至2.5)-乙腈(80:20,V/V),流动相B：60 mmol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH至2.5)-乙腈 (50:50,V/V),梯度洗脱;流速1 mL/min;检测波长210 nm;柱温30℃;进样体积20 μL。结果 醋酸来法莫林与各有关物质分 离良好;醋酸来法莫林在0.50~75.33 μg/mL的浓度范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为1.000,醋酸来法莫林 的检测限为0.20 μg/mL。结论 该方法专属、可靠,可用于醋酸来法莫林有关物质的测定。     

杀念菌素微生物检定法的研究

七烯抗生素类是目前临床上常用的抗真菌药剂,并有许多生物效价测定方法的报道。我们在研究杀念菌素(抗生素414)的过程中,曾试用过Trichomycin、两性霉素等效价测定方法,由于抑菌圈模糊,边缘不整齐,因而结果不准确。本文提出一种既适合于杀念菌素的生物效价测定,又适用于其他七烯抗生素如:Trichomycin、pe-rimycin和两性霉素B的生物效价测定方法。     

柱前衍生HPLC法测定硫酸阿米卡星及其制剂中基因毒性杂质肼的研究

摘要：目的 建立柱前衍生HPLC法测定硫酸阿米卡星及其制剂中基因毒性杂质肼的含量。方法 以5%苯甲醛甲醇溶 液为衍生化试剂,采用Agilent Zobax Eclipse XDB-C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,5 μm),流动相A为0.1%甲酸溶液,流动相B 为乙腈,进行线性梯度洗脱,流速1.0 mL/min,DAD紫外检测器,检测波长300 nm,柱温25℃,进样量20 μL。结果 肼在 0.5022~12.5543 μg/mL浓度范围与峰面积的线性关系良好(r=0.9994),硫酸阿米卡星、注射用硫酸阿米卡星、硫酸阿米卡星注射 液的平均回收率分别为94.8%、94.1%和94.3%。国内企业硫酸阿米卡星、注射用硫酸阿米卡星、硫酸阿米卡星注射液中的肼分 别为未检出~1.8 μg/g、未检出~0.2 μg/g、未检出~3.1 μg/g;日本Nichiiko公司的注射用硫酸阿米卡星和硫酸阿米卡星注射液均未 检出肼。结论     

柱后衍生化 -HPLC 法测定硫酸卡那霉素注射液 及滴眼液的含量

目的 新建硫酸卡那霉素注射液及滴眼液含量的高效液相色谱 - 柱后衍生化 - 荧光检测方法。方法 色谱柱为 Zorbax Eclipse Plus C18 (4.6mm×100mm, 3.5μm);流动相为 pH3.4 的缓冲液 ( 取庚烷磺酸钠一水合物 4.35g 和无水硫酸钠 16g,加水 溶解并稀释至成 1000mL,用冰醋酸调节 pH 值至 3.4±0.1)- 甲醇 (74:26);柱温为 35℃;流速为 1mL/min。柱后衍生化试液为邻苯 二甲醛溶液;流速为 0.3mL/min;衍生化反应温度为 45℃;荧光激发波长为 340nm,发射波长为 455nm。结果 卡那霉素 A 在 0.0973~583.8μg/mL 浓度范围内线性关系良好 (r=0.9999),硫酸卡那霉素注射液和滴眼液的平均回收率分别为 99.6% 和 99.3%, RSD 为 0.63% 和 0.66%(n=9)。结论 本方法检测灵敏度高,重复性好,简便快速,结果准确可靠,可作为硫酸卡那霉素注射液 及滴眼液的含量测定方法。     

中空纤维离心超滤-HPLC法测定注射用两性霉素B脂质体的包封率

目的建立新型的中空纤维离心超滤法分离脂质体中游离药物,并结合HPLC法用于注射用两性霉素B脂质体的包封率的表征。方法采用新型中空纤维微量离心超滤(HF-CF-UF)装置,在离心力的作用下,利用中空纤维超滤膜分离游离药物和包封药物。色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-20 mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠(体积比38∶62),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为405 nm,柱温为30℃。结果两性霉素B质量浓度在0.670²1.4 mg·L-1内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 7),回收率均在97%以上,RSD不大于2%。结论中空纤维离心超滤装置基本保持了脂质体处方的原始的、稳定的存在环境(物理化学环境),最大限度地减少了脂质体的泄露,结果准确且简便快速,为脂质体包封率的表征提供了一种新方法。     

两性霉素B含量的HPLC测定

建立了两性霉素B与注射用两性霉素B含量的HPLC测定法方法：采用ODS柱,以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（66:34）为流动相,检测波长为410nm,流速为1.0ml/min,柱温为室温,进样量为10ul。结果,线性范围1.25～3.75ug,日内RSD为0.3%,日间百分偏差为0.3%,提示本法快速简便,适用于两性霉素B与注射用两性霉素B的含量测定。     

HPLC法测定注射用头孢匹胺钠中苯甲酸钠含量方法研究

目的建立HPLC法测定注射用头孢匹胺钠中苯甲酸钠含量的方法。方法 HPLC法,采用资生堂MGII C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.03mol/L的乙酸铵(用氨水调节pH至7.5)-甲醇(75:25)为流动相,流速为1m L/min,柱温为35℃,检测波长为254nm,进样量为20μL。结果苯甲酸钠在浓度5.963~149.080μg/m L范围内,呈良好的线性关系,回归方程y=6034.2x+1581.9,相关系数r=1.0000;定量限为0.15μg/m L,平均回收率(n=9)为101.5%。结论该方法专属性良好、准确、快捷,精密度及耐用性好;可用于注射用头孢匹胺钠中苯甲酸钠含量测定,并对其药品质量控制提供了参考依据。     

曲安奈德新霉素贴膏中硫酸新霉素含量测定方法的建立

目的 建立HPLC法测定曲安奈德新霉素贴膏中新霉素含量测定的方法。方法 首先,通过正己烷溶解膏剂,水萃取的方法提取贴膏剂中的硫酸新霉素,然后建立HPLC法测定其含量,色谱条件为：Apolllo C18色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm),流动相：0.1mol/L三氟醋酸溶液-乙腈(80:20,V/V),流速：0.5mL/min,进样量：20μL,柱温为30℃;蒸发光散射检测器：漂移管温度：80℃,载气流速：2.0L/min,增益为1。结果 硫酸新霉素在1.0~5.0μg范围内,峰面积与样品浓度呈良好的log-log线性关系,线性方程为：Y=1.87X+7.12(r=0.999),定量限为：0.260μg,平均回收率为88.99%,重复性RSD为1.9%。结论 所建立的方法简便、准确且快速,可用于曲安奈德新霉素贴膏中硫酸新霉素含量测定。     

高效液相色谱法测定盐酸莫西沙星原料药中的有关物质#br#

目的 建立盐酸莫西沙星原料药有关物质的HPLC测定方法。方法 采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6mm×250mm, 5μm)对有关物质A~H进行定量分析,以0.1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH值至3.5)-乙腈(70:30)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长293nm(检测杂质A、B、C、D、F),280nm(检测杂质G和H),243nm(检测杂质E),柱温30℃,进样量10μL。结果 盐酸莫西沙星与各杂质峰及各杂质峰之间的分离度均大于1.5,杂质A~H的线性范围分别是0.153~1.534、0.506~1.517、0.252~1.510、0.393~1.474、0.486~1.458、0.153~1.526、0.095~1.426和0.160~1.602μg/mL,各杂质在线性范围内均与峰面积成良好的线性关系(r>0.99),杂质A~H的检测限分别为0.0511、0.1517、0.1006、0.1474、0.2430、0.0509、0.0285和0.0481μg/mL,定量限分别为0.1534、0.5056、0.2516、0.3932、0.4859、0.1526、0.0950和0.1602μg/mL,分别加入80%、100%和120%指标浓度的杂质考察回收率,结果各个杂质的回收率均在80%~120%范围内,定量限和回收率的RSD均符合验证要求。3批样品有关物质测定的结果显示,已知杂质的含量均低于0.1%。结论     

高效液相色谱法测定盐酸莫西沙星原料药中的有关物质#br#

目的 建立盐酸莫西沙星原料药有关物质的HPLC测定方法。方法 采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6mm×250mm, 5μm)对有关物质A~H进行定量分析,以0.1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH值至3.5)-乙腈(70:30)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长293nm(检测杂质A、B、C、D、F),280nm(检测杂质G和H),243nm(检测杂质E),柱温30℃,进样量10μL。结果 盐酸莫西沙星与各杂质峰及各杂质峰之间的分离度均大于1.5,杂质A~H的线性范围分别是0.153~1.534、0.506~1.517、0.252~1.510、0.393~1.474、0.486~1.458、0.153~1.526、0.095~1.426和0.160~1.602μg/mL,各杂质在线性范围内均与峰面积成良好的线性关系(r>0.99),杂质A~H的检测限分别为0.0511、0.1517、0.1006、0.1474、0.2430、0.0509、0.0285和0.0481μg/mL,定量限分别为0.1534、0.5056、0.2516、0.3932、0.4859、0.1526、0.0950和0.1602μg/mL,分别加入80%、100%和120%指标浓度的杂质考察回收率,结果各个杂质的回收率均在80%~120%范围内,定量限和回收率的RSD均符合验证要求。3批样品有关物质测定的结果显示,已知杂质的含量均低于0.1%。结论 方法学验证结果显示,可作为检测盐酸莫西沙星的有关物质的方法。     

TSK凝胶色谱系统测定头孢丙烯干混悬剂中的高分子杂质

目的 建立针对头孢丙烯干混悬剂中高分子杂质的检测方法。 方法 采用HPLC法,色谱柱为TSK-GEL G2500 PWXL(7.8mm×30mm, 7μm),以0.1mol/L pH6.8磷酸盐缓冲液为流动相,流速0.8mL/min,波长254nm,进样体积为20μL。结果 高分子杂质峰与头孢丙烯(Z)异构体峰能有效分离,辅料不产生干扰,方法专属性良好;头孢丙烯溶液在4.6944~93.8880μg/mL浓度范围内线性关系良好,线性回归方程为y=24226.5x-19.3(r=1.0000);检测限为0.183μg/mL;定量限为0.549μg/mL;方法精密度良好(RSD=0.9%),中间精密度良好(RSD=0.6%);头孢丙烯干混悬剂中高分子杂质均低于1.5%。结论 该方法操作简便、检测灵敏度高、方法重现性好,适用于头孢丙烯干混悬剂高分子杂质的检测。     

高效凝胶色谱法测定头孢替唑钠及其注射剂中的聚合物类杂质

目的 建立高效凝胶色谱法测定头孢替唑钠及其注射剂中的聚合物杂质,并采用二维液质联用法对聚合物杂质的结构进行推断。方法 采用TSK-Gel 2000SWXL凝胶色谱柱(7.8mm×300mm, 5μm),0.005mol/L磷酸盐缓冲液[0.005mol/L磷酸氢二钠-0.005mol/L磷酸二氢钠(61:39)]-乙腈(95:5)为流动相,流速为0.7mL/min,检测波长254nm,进样量20μL;二维色谱采用Waters HSS T3(100mm×2.1mm, 1.8μm),以0.1%甲酸水溶液为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱;质谱采用ESI离子源,正离子模式检测。结果 主成分前后共分离得到6个杂质峰;头孢替唑检测浓度的线性范围为0.5~20μg/mL(r=1.0000),检测限与定量限分别为0.015和0.05μg/mL,重复性试验各杂质含量的RSD均在合理范围内(n=6);采用LC-MS推定了3个聚合物类杂质的结构。结论 本方法灵敏度和准确度好,适用于头孢替唑钠及其制剂中聚合物杂质的控制。