地塞米松抑制核因子-κB活化增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡

目的 研究化疗药物诱导HL60—n白血病细胞核因子—κB（NF—κB)活化与凋亡的关系，并探讨地塞米松(DXM)对其的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF—κB活化水平；采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Tunel)检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导HL60—n白血病细胞NF—κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡明显相关，1μmol/L DXM能显著抑制高三尖杉酯碱(HHT)0．5μmol/L或足叶乙甙(VP—16)1μmol/L诱导的HL60—n细胞NF—κB活化，抑制率分别为49．69％和44．35％，并增强它们诱导HL60—n细胞凋亡的作用，凋亡增加率分别为57．5％和37．2％。HL60—n细胞在接触化疗药物前，NF-κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物在诱导HL60—n白血病细胞凋亡的同时活化NF—κB，DXM可通过抑制NF—κB活化以增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用。     

细胞凋亡抑制蛋白在子宫内膜癌中的表达

目的　研究细胞凋亡抑制蛋白 (survivin)与子宫内膜癌间的关系。方法　以免疫组化ABC法检测survivin、Ki6 7在 5 6例子宫内膜癌及 35例正常子宫内膜组织中的表达情况。结果　Survivin在子宫内膜癌组的阳性率为 96 4 % ,正常对照组为 2 9% ,2组相比有显著差异 (P <0 0 1)。在 5 6例子宫内膜癌中 ,按手术 -病理分期 ,Survivin在Ia、Ib和Ic期的强阳性结果分别为 14 2 9% ,4 6 6 7% ,72 73%。Ki6 7的阳性率在子宫内膜癌组和对照组分别为 98 2 % ,4 % ,2组相差显著 (P <0 0 1)。结论　Survivin在子宫内膜癌中过度表达 ,且表达程度与肿瘤肌层浸润程度有关 ,提示细胞凋亡过程的阻滞在子宫内膜癌的发生发展过程中起重要作用     

hTERT-RNAi表达载体抑制子宫内膜癌细胞生长研究

目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)的RNA干扰表达载体pSilencer-hTERT对子宫内膜癌Ishikawa-3-H-12细胞生长的抑制作用。方法:将pSilencer-hTERT转染人子宫内膜癌Ishikawa-3-H-12细胞,24、48、72、120、144 h后分别采用蛋白印迹技术检测hTERT蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,原位末端标记法检测细胞凋亡。结果:pSi-lencer-hTERT转染后48 h Ishikawa-3-H-12细胞mRNA表达36.2%±3.4%、蛋白表达44.2%±4.1%降低最明显,与空质粒对照组96.5%±2.2%、98.3%±2.0%比较差异有统计学意义(P<0.01)。pSilencer-hTERT处理后48 h细胞增殖抑制率70.8%±4.1%最高,72 h凋亡细胞阳性率69.3%±4.7%最高,与空质粒对照组8.2%±1.5%、7.4%±2.2%比较差异有统计学意义(P<0.01)。pSilencer-hTERT的这些作用可持续144 h。结论:pSilencer-hTERT能有效、持续抑制人子宫内膜癌Ishikawa-3-H-12细胞生长,可望成为其基因治疗的有效工具。     

白血病骨髓基质抑制化疗药物诱导的白血病细胞凋亡

目的探索骨髓基质细胞增强白血病细胞抗凋亡、抗药特性的可能机制.方法应用Percoll分离骨髓单个核细胞体外培养骨髓基质细胞模拟骨髓微环境功能,与白血病细胞株Jurkat细胞体外共培养.0.5μmol/L DNR处理Jurkat细胞诱导凋亡,应用Annexin V/PI双标法流式细胞仪检测白血病细胞凋亡率.PI染色流式细胞仪检测细胞周期分布.结果0.1～2.0μmol/L浓度范围DNR作用一定时间后,Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高.共培养后骨髓基质细胞抑制药物诱导的白血病细胞凋亡,与单独悬浮培养组比较白血病细胞凋亡率有显著降低(8.39±4.08)%比(16.02±1.00)%,P＜0.05.白血病骨髓基质对白血病细胞的屏蔽效应强于正常骨髓基质细胞(白血病细胞凋亡率分别是(5.73±1.78)%比(8.39±4.08)%,P＜0.05.DNR处理共培养组Jurkat细胞G0/G1期比例高于悬浮培养DNR处理组,而正常与白血病骨髓基质细胞屏蔽的白血病细胞G0/G1期阻滞现象无显著性差异(47.96±5.88)%比(39.25±3.04)%,P＞0.05.结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡.骨髓基质细胞抑制化疗药物诱导的白血病细胞凋亡,提示骨髓微环境在骨髓白血病细胞获得耐药、抗凋亡特性以及残留白血病形成过程中起着重要促进作用.细胞周期分布实验结果显示骨髓微环境对白血病细胞的保护作用可能部分通过阻滞白血病细胞于G0/G1期实现.实验结果提示,白血病骨髓基质细胞对白血病细胞的屏蔽效应可能存在较细胞周期阻滞更复杂的机制.     

子宫内膜癌组织中白血病抑制因子和巨噬细胞移动抑制因子的检测及意义

目的探讨白血病抑制因子(LIF)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与子宫内膜癌的关系。方法收集哈尔滨医科大学附属第四医院病理科2006年5月至2008年10月存档的113例石蜡包埋子宫内膜标本进行分类,并应用免疫组织化学方法,对组织进行LIF和MIF蛋白的检测。结果在正常子宫内膜,单纯增生、复合增生、不典型增生及子宫内膜癌中,MIF表达呈上升趋势,增生性内膜及内膜癌与正常子宫内膜比较有显著性差异(P<0.005,P<0.001),增生性内膜与内膜癌比较有显著性差异(P<0.001);LIF表达呈上升趋势,增生性内膜及内膜癌与正常子宫内膜比较有显著性差异(P<0.05,P<0.05)。增生性内膜与内膜癌比较无显著性差异(P>0.05)。子宫内膜癌中,MIF表达随细胞分化程度增高而上升。结论推测MIF与子宫内膜癌的发生有关。尚不能推测LIF与子宫内膜癌的发生有关。     

急性白血病细胞p53表达和化疗耐受的研究

目的 研究恶性血液病尤其是急性白血病患者P53表达水平及其与化疗耐受的关系。方法应用免疫组化法检测P53。结果P53蛋白阴性者骨髓缓解率高于阳性者（P〈0．05）。51例急性白血病患者P53蛋白阳性率为37．2％,不存在细胞类型不同的差别（P〉0．05）。P53蛋白表达不同与化疗耐受有影响。结论人类急性白血病细胞P53蛋白阳性率很低,检测P53蛋白可以帮助判断白血病患者对化疗的敏感程度,指导预后。     

白血病抑制因子对白血病细胞的作用及影响

白血病抑制因子(LIF)是一类具有广泛生物活性的细胞因子。LIF对某些白血病细胞具有增殖抑制、诱导分化和促进凋亡作用,白血病患者LIF体内表达与患者的病情存在一定的关系,且受很多因素影响。LIF在白血病诊断及治疗中也有一定应用前景,作者检索了本领域国内外相关文献资料并进行分析、整理和总结,对LIF在白血病发病中的作用及影响的研究进展作一综述。     

白血病抑制因子在原发不孕症患者子宫内膜的表达

目的 :探讨白血病抑制因子 ( LIF)在子宫内膜的表达与原发不孕症的关系。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术 ,检测 30例原发不孕症患者 (观察组 )和 2 0例对照组患者分泌中晚期子宫内膜 LIF m RNA的表达。结果 :对照组患者分泌中晚期子宫内膜 LIF m RNA的表达水平为 1 .872± 0 .431 ,观察组为 0 .42 6± 0 .1 0 8,两组相比 ,差异有显著性 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :LIF表达的减少或缺失 ,可能是原发不孕症的原因之一     

不孕症患者子宫内膜白血病抑制因子mRNA表达的研究

目的　研究白血病抑制因子 (LIF)mRNA在黄体功能不全、不明原因不孕及输卵管原因不孕患者子宫内膜的表达 ,了解其与各种不孕症的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)测定不孕患者和正常妇女黄体中期子宫内膜LIFmRNA的表达水平。结果　LIFmRNA在正常妇女 (对照组 )黄体中期子宫内膜的表达水平为 1.12± 0 .45 ,黄体功能不全患者子宫内膜的表达量为 0 .6 4± 0 .41,两者差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;不明原因不孕组表达量为 0 .5 2± 0 .41,与对照组之间差异有显著性 (P <0 .0 1)。输卵管原因不孕组LIF水平为 0 .99± 0 .35 ,与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　LIFmRNA在黄体功能不全和不明原因不孕患者子宫内膜中表达量降低 ,因此 ,LIF基因表达缺失可能与不孕症的发病有关。输卵管原因不孕与LIF无关     

子宫内膜癌的化疗

近年来世界各国子宫内膜癌发病率均显著上升，已跃居妇科恶性肿瘤之第一或第二位。沿用的治疗方法以手术为主，或辅加放疗或孕激素，但疗效一直停滞不前，因而引起临床广泛关注并进行研究。晚近在分期标准、诊断方法、影响预后因素等方面已取得较大进展，为加强辅助性化疗的使用提供了重要依据。1非激素治疗（细胞毒抗肿瘤药物的治疗）随着抗肿瘤新药不断出现，分子生物学、细胞遗传学、细胞增殖动力学及肿瘤生物行为等知识的丰富，使肿瘤化疗有了很大进步，因此应用抗肿瘤药物治疗子宫内膜庙也越来越受到人们重视。在手术和（或）放疗控制…     

肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体C-met的表达,了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用RT-PCR的方法检测HEC-2B中HGF受体C-met有表达。对HEC-2B进行24 h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC-2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果C-met在HEC-2B细胞中稳定表达,HGF促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系,各处理组与对照组相比,P<0.05。当HGF浓度达到60 ng.mL-1时,增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/C-met能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

LIF受体胞内功能域调节白血病细胞增殖分化

目的:探讨白血病抑制因子受体(LIFR)ɑ亚基胞内游离功能域gp190CT3对启动靶细胞内信号转导通路(JAK/STAT3),使白血病细胞HL-60向粒细胞方向分化的作用. 方法:采用免疫细胞化学、RT-PCR以及流式细胞术等技术和方法,观测pcDNA3.0-gp190CT3重组质粒稳定转染CHO细胞中靶基因的表达;以及稳定转染的CHO细胞与HL-60细胞共培养后,HL-60细胞的形态学、STAT3磷酸化水平、细胞表面抗原CD15表达的变化. 结果:(1)重组质粒转染的CHO细胞表达目的基因gp190CT3,并获得稳定表达目的基因的细胞株;(2)重组质粒转染的CHO细胞与野生型HL-60细胞共培养可使HL-60细胞体积变大,形态不规则,STAT3磷酸化水平和细胞表面抗原CD15表达升高.结论:LIF受体α亚基胞内游离片段表达的功能蛋白gp190CT3能够启动靶细胞内JAK/STAT3信号转导通路,从而发挥其调节白血病细胞增殖分化的效能.     

全反式维甲酸对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的 通过观察全反式维甲酸(ATRA)、肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及检测子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体c-met的表达,了解ATRA对子宫内膜癌细胞的作用及其可能机制.方法 体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用60 ng·ml-1HGF及10-5、10-6、10-7、10-8mol·L-1的ATRA作用于HEC-2B,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法分析细胞的增殖力,实时定量PCR检测ATRA作用前后细胞中HGF受体c-met的表达.结果 单独使用ATRA(10-6mol·L-1)处理HEC-2B,并不能够影响细胞的增殖能力.如果与具有明显促细胞增殖作用的60 ng·ml-1HGF共处理,10-7mol·L-1的ATRA即能够明显抑制前者的促增殖作用(P<0.01),而且表现出一定的量效关系.ATRA能够有效抑制HEC-2B细胞中c-met的转录水平,10-7mol·L-1的ATRA即有明显作用(P<0.01),10-6mol·L-1的作用最为显著(P<0.01),呈现一定的量效关系.经ATRA处理0.5 h后,c-met的转录水平即开始下降,随着处理时间的延长,ATRA的抑制作用趋于明显(P<0.01),有明显的时间依赖性.结论 通过抑制c-met的表达调控细胞的增殖可能是ATRA对子宫内膜癌细胞作用的通路之一.     

血清白血病抑制因子在体外受精-胚胎移植中的预测价值

<正>体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)是辅助生殖技术的核心部分,也是治疗不孕症的有效方法之一,但IVF-ET存在低妊娠率及高流产率。白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一种分泌型糖蛋白,在分泌期的中、晚期子宫内膜中,LIF呈短暂性、爆发性增高,水平增至增生期的4~5倍。LIF在大量表达的同     

丙戊酸钠增强阿霉素的体外抗乳腺癌作用

目的观察丙戊酸钠对阿霉素体外抗乳腺癌Hs578T细胞作用的影响。方法Western blot 检测缝隙连接蛋白Cx43 的表
达;MTT法检测阿霉素的细胞毒性;Annexin V/PI双染法观察阿霉素对细胞早期凋亡的影响;Hochest 33258荧光染色法检测阿
霉素对细胞晚期凋亡的影响。结果Western blot结果显示丙戊酸钠可以显著增强缝隙连接蛋白Cx43的表达（P<0.01）;MTT结
果表明在细胞间缝隙连接功能形成的条件下,丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞存活率显著低于阿霉素组（P<0.01）;Annexin V/PI
双染法显示丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞早期凋亡率显著高于阿霉素组（P<0.01）;Hochest 33258荧光染色结果显示丙戊酸钠
联用阿霉素组的细胞晚期凋亡率显著高于单用阿霉素组（P<0.01）。结论丙戊酸钠可显著增强阿霉素的细胞毒性及其诱导的
细胞凋亡作用,其机制可能与增强缝隙连接通讯功能有关。
     

转染反义MIF对人胃癌细胞的影响

目的 探讨反义巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对人胃癌MGC-803细胞的影响.方法 将胃癌MGC-803细胞分为pcDNA3.1-Anti MIF组与空白对照组.pcDNA3.1-Anti MIF组采用转染技术将MIF反义RNA真核表达质粒(pcDNA3.1-AntiMIF)转入MGC-803细胞;空白对照组转染pcDNA3.1-sh-MIF质粒.qRT-PCR与蛋白质印迹法检测转染效率;采用MTT法、侵袭实验、AnnexinV-FITC和PI染色法分别检测反义MIF对MGC-803细胞增殖、侵袭、凋亡的影响.结果 qRT-PCR结果显示,pcDNA3.1-Anti MIF组MIF mRNA表达量(2.086±0.248)较空白对照组(6.992±0.342)明显下调;Western blot显示,pcDNA3.1vAntiMIF组MIF蛋白表达水平量(0.361±0.043)较空白对照组(1.171±0.091)明显下调;MTT实验结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组MGC-803细胞的OD值(0.436±0.017)较空白对照组(0.563±0.019)明显下降;侵袭实验结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组穿过基质胶的MGC-803细胞数(73.67±8.54)较空白对照组(137.30±11.91)明显减少;AnnexinV-FITC和PI染色法结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组MGC-803细胞的凋亡率(21.61±4.62)%较空白对照组(7.67±0.63)%明显增加.以上各项指标比较差异均具有显著统计学意义(P<0.01).结论 反义MIF能抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖与侵袭,并能诱导凋亡.     

小鼠胚胎白血病抑制因子基因表达研究

目的 探索白血病抑制因子（ＬＩＦ）基因在小鼠胚泡着床后有无表达。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ技术对孕龄５ｄ、７ｄ、１０ｄ、１２ｄ和１５ｄ的小鼠胚胎（共５０个，每组１０个）ＬＩＦ基因表达进行检测。结果 在孕龄５ｄ的二个胚胎和孕龄７ｄ的一个胚胎中检测到ＬＩＦ基因弱表达。而在孕龄１０ｄ以上的胚胎中均未发现有ＬＩＦ基因表达。结论 推测ＬＩＦ基因的表达在小鼠胚胎组织中受到限制。     

孕酮对离体在位及异位子宫内膜细胞巨噬细胞移动抑制因子分泌的影响

目的:探讨孕酮对离体在位及异位子宫内膜细胞巨噬细胞移动抑制因子(MIF)分泌的影响。方法:采用 ELISA方法,检测10μmol/L、0.1μmol/L孕酮作用24h后,体外培养的在位及异位子宫内膜细胞上清液中MIF水 平。结果:与空白组比较,高、低浓度孕酮作用24h后的在位及异位子宫内膜细胞MIF分泌量减少;异位内膜组的 下降程度大于在位内膜组(P<0.01);高浓度孕酮作用强于低浓度孕酮组(P<0.05)。结论:孕酮对子宫内膜细胞 分泌MIF具有明显抑制作用,对异位内膜分泌能力的抑制作用更为显著。     

类胚体中残留细胞分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子的关系

目的 研究小鼠胚胎干细胞体外类胚体分化后残留未分化细胞的分化能力,探讨其分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子(LIF)的关系.方法 小鼠R1胚胎干细胞体外经20 d的类胚体诱导分化后,胰酶消化为单细胞悬液,在不含LIF的DMEM培养液中贴壁培养.扩增后的细胞用流式细胞仪分析未分化及分化表面标志(CD9、 SSEA1和Flk-1)的表达情况.分别于再次类胚体诱导分化前后,RT-PCR检测Oct-4、 Nanog、Rex1、FGF5、Nestin、Brachyury、Flk-1和GATA6表达.将扩增后的残留细胞注射至裸鼠皮下,检测畸胎瘤形成能力.Oct-4/GFP 转基因小鼠胚胎干细胞在半固体培养基上作单细胞分化,20 d后统计分化残留率.结果 在不含LIF的DMEM培养液中的残留细胞呈克隆样生长,表达未分化胚胎干细胞标志CD9、SSEA1、Oct-4、Nanog和Rex1.残留细胞体外可再次诱导分化,表达3个胚层的分化标志.残留细胞裸鼠皮下注射6周后形成畸胎瘤.单细胞分化实验表明,常规培养的小鼠胚胎干细胞中约14%的细胞具有分化残留能力.结论 残留胚胎干细胞全能性维持不依赖外源性白血病抑制分化因子;常规培养的胚胎干细胞仅部分具有残留能力.