DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌组织和细胞中的表达及意义

目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在人膀胱癌组织和人膀胱癌细胞系BIU-87中的表达及意义.方法 用免疫组织化学法分别检测DNMT1和DNMT3b蛋白在24例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中的阳性表达率;用RT-PCR和Western blot分别检测DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌细胞系BIU-87中mRNA表达水平和蛋白表达水平.结果 在24例膀胱癌组织中,DNMT1阳性表达率为(75.29±2.51)%,而在10例正常膀胱组织中的阳性表达率为(12.61±1.57)%,二者之间的差异具有显著性意义(P<0.05);DNMT3b在24例膀胱癌组织中的阳性表达率为(70.91±2.86)%,在10例正常膀胱组织中的阳性表达率仅为(10.16±1.22)%,二者差异亦具有显著性意义(P<0.05);在人膀胱癌细胞系BIU-87中,通过RT-PCR和Western blot均检测到DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白的表达.结论 在膀胱癌组织中,DNMT1和DNMT3b蛋白的表达较正常膀胱组织明显增加,说明DNMT1和DNMT3b的高表达可能与膀胱癌的发生发展有关;DNMT1和DNMT3b在人膀胱癌细胞系BIU-87中存在表达.     

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。     

不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9基因甲基化水平及病变组织CEA、DNMT3b蛋白的表达

目的:分析不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9基因甲基化水平及病变组织CEA、DNMT3b蛋白的表达水平。方法:选取114例结直肠癌前病变患者为研究对象,均行肠镜和病理检查,并检测血浆Septin9甲基化水平和病变组织CEA、DNMT3b蛋白水平,比较不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9甲基化水平和病变组织CEA、DNMT3b蛋白的表达水平。结果:肠镜和病理检查结果显示,114例结直肠癌前病变患者中,结直肠腺瘤43例,腺瘤病30例,炎症性肠病相关异型增生41例;腺瘤病患者血浆Septin9基因甲基化水平及病变组织CEA、DNMT3b蛋白相对表达量均高于腺瘤及炎症性肠病相关异型增生患者,且腺瘤患者高于炎症性肠病相关异型增生患者,差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌前病变组织中CEA与DNMT3b蛋白均呈高表达,尤以腺瘤病患者最为明显,CEA蛋白表达部位以细胞膜为主,DNMT3b蛋白表达部位以细胞质为主。结论:不同类型结直肠癌前病变患者血浆Septin9基因甲基化水平、病变组织CEA与DNMT3b蛋白相对表达量均存在差异,以腺瘤病患者最高,腺瘤患者次之,炎症性肠病相关异型增生患者最低。     

DNMT3b基因多态性及其在胃癌组织中的表达水平与胃癌的关联性分析

目的:探讨中国北方汉族人群DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)基因单核苷酸多态性(SNPs)和胃癌发病风险之间的关联性,阐明DNMT3b基因是否为胃癌的易感基因。方法:选择447例胃癌患者作为病例组,961名健康对照者作为对照组,采用TaqMan技术检测2组研究对象DNMT3b基因的rs1569686、rs6119954、rs4911107、rs4911259和rs8118663位点的基因型分布。免疫组织化学技术检测病例组(104例)胃癌患者胃癌组织和85例患者的癌旁对照组织中DNMT3b蛋白的表达水平。结果:在病例组和对照组研究对象中5个SNPs位点基因型分布频率相近,未发现5个SNPs位点的多态性与胃癌的发生有关联(P>0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织中DNMT3b蛋白的表达水平升高(P<0.05)。5个SNPs的不同基因型与胃癌组织中DNMT3b蛋白的表达水平均无关联(P>0.05)。结论:中国北方汉族人群中DNMT3b基因多态性与胃癌的发生无关联,DNMT3b基因可能不是胃癌的易感基因。     

DNMT1、DNMT3b在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）和DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）在胃癌中的表达及其临床病理意义。方法应用免疫组化和RT-PCR方法检测93份胃癌组织、93份胃癌癌旁组织及90份正常胃组织中DNMT1和DNMT3b蛋白和mRNA的表达情况,分析两者与临床病理特征之间的关系。结果DNMT1蛋白在胃癌及癌旁组织阳性表达分别为88．17％和68．89％,明显高于正常胃组织内的阳性表达13．33％;DNMT3b在胃癌中阳性表达为18．28％和45．16％,明显低于正常胃组织内的阳性表达96．67％,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。且DNMT1和DNMT3b与胃癌的病理分化类型、肿瘤大小及胃液的幽门螺杆菌阳性有关（均P〈0．05）。结论DNMT1和DNMT3b的异常表达与胃癌的发生发展有紧密的关系,为基因治疗开辟新的途径。     

MicroRNA-196b、IGFBP-3在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后关系

目的 探究microRNA-196b（miR-196b）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2020年4月—2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例。收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达。所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组。筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能。分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异。结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组（P <0.05）。进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组（P <0.05）,IGFBP-3阳性表达率低于稳定组（P <0.05）。癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）,IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织（P <0.05）。多因素逐步Logistic回归分析结果显示：临床分期［O^R=3.684（95% CI：1.259,10.778）］、术前淋巴结转移［O^R=3.557（95% CI：1.216,10.408）］、癌组织miR-196b表达［O^R=3.979（95% CI：1.359,11.641）］是NSCLC患者预后的危险因素（P <0.05）,癌组织IGFBP-3表达阳性［O^R=0.220（95% CI：0.075,0.642）］是NSCLC患者预后的保护因素（P <0.05）。癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25%（95% CI：0.512,0.797）、60.00%（95% CI：0.496,0.781）、87.50%（95% CI：0.725,0.963）,特异性分别为69.74%（95% CI：0.534,0.825）、76.32%（95% CI：0.603,0.892）、72.37%（95% CI：0.576,0.861）,曲线下面积分别为0.703、0.680、0.805。miR-196b低表达组生存情况优于高表达组（P <0.05）。IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组（P <0.05）。结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好。     

PBK基因在膀胱癌中的表达及临床意义

【摘要】目的 探讨PBK基因表达对膀胱癌患者临床病理特征及预后的影响,并寻找膀胱癌诊治的新靶点。方法 在GEO数据库中下载膀胱癌样本资料GSE13507及相关临床信息。通过两独立样本t检验分析PBK在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达差异,运用2检验研究PBK的表达与膀胱癌临床病理特征的相关性;并应用Kaplan Meier法和对数秩检验进行生存分析,最后运用基因集富集分析（GSEA）寻找PBK调控膀胱癌细胞的相关通路。结果 与正常膀胱组织比较,PBK在膀胱癌细胞中高表达（P＜0001）;PBK的高表达与膀胱癌患者性别（P＜0001）,年龄（P=0027）,侵袭性（P＜0001）,高分级（P ＜0001）,T分期（P=0001）,N分期（P=0015）,M分期（P＜0001）,疾病进展（P＜0001）和疾病复发（P＜0001）显著相关。PBK高表达患者的总生存期（P=00023）和肿瘤特异性生存期（P=00003）显著低于低表达患者。GSEA的结果显示PBK可能通过调节MYC信号通路、G2M检查点、精子发生、E2F转录因子、未折叠蛋白反应等影响膀胱癌的发生发展。结论 PBK在膀胱癌中高表达,与膀胱癌的多个临床病理特征相关,可能成为膀胱癌新型肿瘤标志物或者治疗靶点。     

MiR-141在膀胱癌组织中的表达及与肿瘤分级的相关性研究

目的：探究微小RNA(micro RNA, MiR)-141在膀胱癌组织中的表达及与肿瘤分级的相关性。方法：选取2012年3月—2014年3月于南通大学附属医院确诊的80例膀胱癌患者的癌组织及癌旁正常组织,采用实时聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测膀胱癌组织及癌旁正常组织中MiR-141 mRNA相对表达量,分析MiR-141表达与膀胱癌患者临床病理特征及预后的相关性。结果：MiR-141 mRNA在膀胱癌组织相对表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05);不同性别、年龄的膀胱癌患者癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤的不同分级、分期、肌层有无浸润、有无远处转移等,其癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤分级、肿瘤分期、转移与否、组织中MiR-141表达量与膀胱癌患者5年生存率差异均有统计学意义(均P<0.05);肿瘤分级、肿瘤分期、转移与否、MiR-141表达水平是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(P<0.05);MiR-141低表达患者总生存率(overall survival, OS)、无进展生存率(progression free survival, PFS)显著高于MiR-141高表达患者(P<0.05)。结论：MiR-141在膀胱癌组织中呈高表达;MiR-141表达水平与膀胱癌患者肿瘤分级、肿瘤分期、是否转移及预后情况具有相关性,可为膀胱癌患者早期诊疗及预后评估提供参考依据。     

KLF8蛋白膀胱癌组织中的表达及与预后的关系

目的：探讨KLF8蛋白在膀胱癌中的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法选择膀胱癌标本137例,正常膀胱组织标本19例,采用免疫组织化学方法,检测膀胱癌和正常组织中KLF8蛋白的表达,并结合临床资料进行分析。结果正常组织中KLF8蛋白的表达水平明显低于肿瘤组织（P＜0.001）。低级别和高级别膀胱癌中KLF8蛋白表达的阳性率分别为37.2%、58.5%,差异有统计学意义（P＜0.05）。非肌层浸润性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌中KLF8蛋白表达的阳性率44%和67.4%,差异有统计学意义（P＜0.05）。本组随访7-112个月,在肌层浸润性膀胱癌中,Kaplan- Meier生存显示：KLF8蛋白的阳性表达与膀胱癌患者的总生存率有关（P＜0.05）。结论 KLF8蛋白的表达在膀胱癌组织中明显高于正常组织,KLF8蛋白的表达与膀胱癌的分级、分期、预后有关;与患者的年龄、性别、肿瘤的数目无相关性（P＞0.05）。KLF8蛋白的检测有助于膀胱癌的诊断及预后的评估。     

SALL4和DNMT3b在子痫前期胎盘组织中的表达及临床意义

目的 探究人类婆罗双树样基因4 (SALL4)、DNA甲基转移酶3b (DNMT3b)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达水平及其临床意义。方法 选取2019年5月至2020年8月于郑州大学第三附属医院行剖宫产的88例PE孕妇作为PE组,按PE孕妇病情将其分为轻度组51例和重度组37例,另纳入同期行剖宫产的正常妊娠孕妇88例作为对照组。比较三组孕妇的一般资料,收集孕妇分娩后的胎盘组织,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法测定并比较三组孕妇胎盘组织中SALL4、DNMT3b m RNA表达水平;采用Pearson法分析胎盘组织SALL4、DNMT3b mRNA表达水平与PE孕妇舒张压、24 h尿蛋白、收缩压及新生儿体质量的关系,及SALL4 m RNA表达水平与DNMT3b m RNA的关系。结果 轻度组、重度组和对照组孕妇的舒张压[(11.36±1.44) kPa vs (12.36±1.77) kPa vs (9.83±1.31) kPa]、24 h尿蛋白[(2.07±0.68) g/24 h vs (3.21±1.11) g/24 h vs (0.12±0.04) g/24 ...     

Effects on Biological Behavior of Bladder Carcinoma T24 Cells via Silencing DNMT1 and/or DNMT3b with shRNA In Vitro

In this study,RNA interference technique was employed to silence the expression of DNMT1 and/or DNMT3b in human bladder cancer T24 cells.The expression levels of their mRNA and protein were greatly decreased by up to 75% and 65% respectively after T24 cells were transfected with lipofectamine2000 for 72 h,indicating RNA interference is an effective tool in gene knockdown.Proliferation and apoptosis of T24 cells were detected by MTT,and annexin-V-FITC and propidium iodide staining flow cytometry,respectively.It was found that loss of the DNMT1 or DNMT3b expression could inhibit the cell growth and promote the cell apoptosis to some extent.However,combined treatment with shRNA targeting both DNMT1 and DNMT3b mRNA could ob-viously enhance the above effects.It was concluded that simultaneously silencing both genes could result in strong suppressing effect on tumor proliferation and promoting ceil apoptosis than separate use,suggesting combined use of DNMT1 and DNMT3b can achieve a synergistic effect in the CpG island methylation in human bladder tumorigenesis.     

Effects on biological behavior of bladder carcinoma T24 cells via silencing DNMT1 and/or DNMT3b with shRNA <Emphasis Type="Italic">In Vitro</Emphasis>

In this study, RNA interference technique was employed to silence the expression of DNMT1 and/or DNMT3b in human bladder cancer T24 cells. The expression levels of their mRNA and protein were greatly decreased by up to 75% and 65% respectively after T24 cells were trans- fected with lipofectamine2000 for 72 h, indicating RNA interference is an effective tool in gene knockdown. Proliferation and apoptosis of T24 cells were detected by MTT, and annexin-V-FITC and propidium iodide staining flow cytometry, respectively. It was found that loss of the DNMT1 or DNMT3b expression could inhibit the cell growth and promote the cell apoptosis to some extent. However, combined treatment with shRNA targeting both DNMT1 and DNMT3b mRNA could obviously enhance the above effects. It was concluded that simultaneously silencing both genes could result in strong suppressing effect on tumor proliferation and promoting cell apoptosis than separate use, suggesting combined use of DNMT1 and DNMT3b can achieve a synergistic effect in the CpG island methylation in human bladder tumorigenesis.     

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1、3A和3B mRNA的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1、3A和3B在宫颈癌发生发展中的作用。方法应用real-time PCR技术检测10例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤变和10例正常宫颈组织DNMT1、3A和3BmRNA的表达。结果宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 1mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.30±0.1、0.26±0.12和0.10±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 1表达有显著差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT3A mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.94±0.27、0.51±0.24和0.13±0.04,三组相比较有显著性差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 3B mRNA对GAPDH mR-NA的相对丰度值分别是0.30±0.09、0.28±0.11和0.11±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 3B表达有显著差异（P〈0.05）。结论 DNMT1、3A和3B参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了一定作用。     

尿素通道蛋白B在人膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的：检测膀胱癌患者肿瘤组织和正常膀胱黏膜组织中尿素通道蛋白B（UT-B）的表达,阐明其在膀胱癌组织中表达的临床意义。方法：收集临床膀胱癌患者术后石蜡包埋标本52例,以正常膀胱黏膜组织15例作为对照,采用免疫组织化学方法检测UT-B蛋白阳性表达率,分析UT-B蛋白阳性表达率在膀胱癌组织和正常膀胱黏膜表达的差异以及其与患者临床病理参数的关联。结果：UT-B蛋白在膀胱癌组织中低表达,阳性表达率为44.2%;在正常膀胱黏膜组织中高表达,阳性表达率为93.3%,2组UT-B蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义（P=0.001）。膀胱癌组织中UT-B蛋白的阳性表达率随肿瘤组织分级的增高而逐渐降低,不同分级间比较差异有统计学意义（P=0.010）。膀胱癌组织中UT-B蛋白在非肌层浸润期（Ta+T1）的阳性表达率明显高于肌层浸润期（T2+T3）,组间比较差异有统计学意义（P=0.014）。结论：UT-B蛋白的表达降低或缺失可能促进了膀胱癌的发生发展和侵袭。     

Rab27b在结直肠癌中的表达情况及临床意义

目的:检测Rab27b在结直肠癌中的表达情况,并探讨Rab27b表达与结直肠癌中重要临床指标尤其是临床预后之间的关系?方法:在组织芯片上(80例肠癌标本及20例癌旁对照标本)进行免疫组化检测,使用Cox回归法及Kaplan-Meier生存分析法进行结直肠癌患者的预后分析?结果:免疫组化结果显示结直肠癌中的Rab27b表达明显高于癌旁对照组Rab27b的表达(P=0.041)?Rab27b的表达与结直肠癌患者的性别(P=0.012)?血清CEA水平(P=0.014)?远处转移(P=0.021)及TNM分期(P=0.013)有重要关联?生存分析显示Rab27b表达(P=0.021)与结直肠癌患者预后关系密切,Rab27b高表达提示预后不良?结论:Rab27b在结直肠癌组织中异常高表达,且Rab27b的表达与结直肠癌的数种恶性表型相关?Rab27b可作为结直肠癌患者预后的独立危险因素?     

水通道蛋白1、3在非肌层浸润性膀胱癌组织中的表达及其与复发现象的相关性

目的 研究水通道蛋白1、3 (AQP1、AQP3)在非肌层浸润性膀胱癌组织中的表达及其与膀胱癌复发现象的相关性.方法 采用免疫组织化学S-P法、Wester blot 蛋白免疫印迹法检测15例经尿道膀胱癌电切术后非肌层浸润性膀胱癌组织及15例复发组织水通道蛋白1、3的表达量,分析两者在复发前及复发前后表达量的差异与复发时间的相关性.结果 复发后水通道蛋白1、3的表达量较复发前有所增加,且复发前蛋白表达量高的容易复发,其蛋白表达增加的量与随访的复发时间之间呈负相关.结论 水通道蛋白1、3的表达量在复发后的明显增加,其增加的量及初发后蛋白表达量与随访的复发时间相关,AQP1、AQP3可成为检测膀胱癌早期复发的有效指标之一.