内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。     

高糖经内质网应激途径诱导胰岛内皮细胞凋亡

目的:探讨高糖诱导胰岛微血管内皮细胞株MS-1凋亡及其可能机制?方法:体外培养MS-1细胞,用含有不同浓度葡萄糖(5.6?25.0和33.6 mmol/L)的培养液分组培养12?24 h?流式细胞术分析各组细胞凋亡率变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖率变化;RT-PCR分析GRP78?CHOP?caspase-3?caspase-12 mRNA表达变化情况;Western blot分析GRP78?CHOP蛋白表达变化情况?结果:与5.6 mmol/L组相比,培养12 h及24 h后,25.0和33.6 mmol/L组MS-1细胞凋亡率显著增加(P < 0.05);而细胞增殖率显著下降(P < 0.05),且呈浓度和时间依赖性?进一步研究表明,在高糖刺激12 h及24 h后,caspase-3?caspase-12 mRNA表达显著上调(P < 0.05),CHOP mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P < 0.05);而GRP78 mRNA和蛋白表达水平在刺激12 h后显著上调,24 h后却显著下降(P < 0.05)?结论:高糖可以促进胰岛内皮细胞凋亡增加,并呈浓度和时间依赖性升高,其机制可能与启动胰岛内皮细胞内质网应激有关?     

杨梅素诱导卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径及DNA断裂介导的凋亡

目的:杨梅素具有抗肿瘤效果的具体机制还未被阐明。目前有研究表明,杨梅素通过线粒体凋亡途径诱导肿瘤细胞死亡。凋亡是一种细胞的程序性死亡过程,其经典诱导途径主要为:线粒体途径介导凋亡、内质网(ER)应激所介导的凋亡、以及由DNA双链断裂损引起的细胞凋亡。为此,我们想探究杨梅素在诱导SKOV3细胞凋亡中,是否也存在内质网(ER)应激和DNA双链断裂损伤途径所介导的凋亡。方法:采用人卵巢癌SKOV3细胞,给予杨梅素进行体外实验。MTT法检测细胞生存率。结果:杨梅素作用于SKOV3细胞后,能够抑制其增殖,且呈剂量依赖性。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白GRP78和促凋亡转录因子CHOP(C/EBP同源蛋白,GADD153)的表达,发现杨梅素上调了GRP78和CHOP的表达。免疫荧光技术检测细胞内DNA断裂的标记性物γ-H2AX,发现γ-H2AX也明显上调。结论:杨梅素能诱导SKOV3内质网应激途径和DNA损伤所介导的凋亡。     

缺糖缺氧对经内质网应激途径诱导Hela细胞凋亡的影响

目的：体外构建肿瘤细胞缺糖缺氧( OGD)模型,观察缺糖缺氧应激条件对肿瘤细胞凋亡的影响及其机制。方法：利用平衡盐溶液EBSS取代细胞正常培养液构建缺糖模型,利用连二亚硫酸钠消耗培养基中氧构建缺氧模型;实验分为对照组、缺糖缺氧4、8和12 h组。MTT法检测各组细胞增殖率;Western blotting检测各组Hel...     

内质网应激诱导细胞凋亡机制的研究进展

内质网应激在多种疾病的发病机制中起到关键作用,持续或强烈的内质网应激反应可诱导细胞凋亡,然而对内质网应激诱导细胞凋亡的机制尚不清楚.近几年的研究发现未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）通路既可促进细胞生存又可诱导细胞凋亡,与UPR的多条通路对蛋白翻译、过氧化物质产生、Bcl-2蛋白表达、钙离子浓度、microRNA表达及JNK通路等的精确调节有关.     

IL-10对TNF-α诱导肝星状细胞激活的抑制作用

目的探讨白细胞介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肝星状细胞(HSC)激活的抑制作用。方法使用10 ng/ml TNF-α刺激体外培养的HSC,建立HSC激活模型,给予HSC激活模型不同浓度IL-10(2、10、20 ng/ml)作用不同时间(1、2、24、48、72、96 h)后,油红O染色观察细胞脂肪含量,分别用Western blot和RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平。结果 TNF-α刺激后,HSC脂肪含量显著减少,α-SMA和MCP-1表达量水平均随时间延长而升高(P<0.05)。联合使用IL-10,α-SMA水平显著下降(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05),MCP-1水平亦下降(P<0.05)。结论 IL-10可以抑制由TNF-α诱导的HSC激活,在肝脏早期炎症和肝纤维化进程中起保护作用。     

内质网应激介导滋养细胞凋亡信号通路的研究进展

内质网(ER)作为近年来重点研究的细胞器,在生理或病理状况下,内质网过度应激介导细胞发生凋亡。而滋养细胞在胚胎植入及发育过程中起着重要的调节作用,妊娠期受各种因素影响机体发生内质网应激(ERS),在很大程度上提高了不良妊娠结局的几率。研究内质网应激与滋养细胞凋亡的关系,为临床治疗疾病提供新思路、新靶点。本文就近几年来内质网应激介导滋养细胞凋亡的信号转导通路进行综述。     

姜黄素通过内质网应激途径诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察姜黄素诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡并探讨其相关机制。方法:在以不同浓度姜黄素处理HeLa细胞后,采用MTT法观察细胞活性并选择姜黄素的最适干预浓度。将等量HeLa细胞分为4组:对照组(Ctrl)不加任何药物干预;对照组+4-苯基丁酸钠组(Ctrl+PBA)采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预;姜黄素组(Cur)采用姜黄素(25μM)对HeLa细胞进行干预;姜黄素+4-苯基丁酸钠组(Cur+PBA)则在姜黄素干预后48h采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预。流式细胞术检测各组HeLa细胞凋亡情况;采用Real-time PCR和Western Blotting检测各组HeLa细胞中内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)以及C/EBP同源蛋白质(CHOP)mRNA及蛋白表达情况。结果:不同浓度姜黄素干预HeLa细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制,并呈现出浓度依赖性;与Ctrl及Ctrl+PBA组相比,Cur组HeLa细胞凋亡率显著升高;与Cur组相比,Cur+PBA组HeLa细胞凋亡率显著降低;与Ctrl组及Ctrl+PBA组相比,Cur组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Cur组相比,Cur+PBA组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:内质网应激途径是姜黄素诱导HeLa细胞凋亡的重要机制之一。     

干扰素-α对肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的诱导作用

目的：研究干扰素－α（IFN－α）对肝纤维化大鼠肝星状细胞（HSC）凋亡的影响。方法：用四氯化碳（CCl4)复制肝纤维化模型大鼠32只，随机分为A，B，C3组。A组：6只，造模结束即处死；B组14只，皮下注射－α10万／100g8周，C组12只，注射等量的生理盐水8周。治疗结束时用TUNEL法检测各组肝星状细胞凋亡情况；HE染色观察肝组织学变化；免疫组化染色检测中间丝蛋白（Desmin,),α-平滑肌肌动蛋白（α－SMA），I型胶原，转化生长因子1（TGF－β1）等指标。结果：B组较其他两组肝组织学明显改善，肝纤维化程度减轻，I型胶原，TGF－β1的显色指数降低；B组肝星状细胞明显减少，凋亡指数增加，与C组相比，差异有统计学意义。结论：IFN－α在体内可诱导HSC凋亡，这可能是IFN－α抗肝纤维化的作用机制之一。     

槲皮素通过内质网应激诱导宫颈癌细胞凋亡的机制

目的：分析槲皮素通过内质网应激对宫颈癌细胞凋亡的诱导情况,探讨其可能的作用机制。方法：将宫颈癌C33A细胞分为对照组和实验组,对照组（DMEM培养基+0.1%DMSO）、实验组（DMEM培养基+12.5、25.0、50.0、100μmol/L槲皮素）分别处理24h和48h。利用CCK8实验检测C33A细胞活力的变化,利用流式细胞技术检测细胞周期的变化,以实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测内质网应激通路关键因子蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）以及线粒体凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（BAX）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(CASPASE3)、细胞色素C(CYT-C)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)在转录水平的变化情况。结果：CCK8结果表明,经12.5、25.0、50.0、100μmol/L槲皮素处理24和48h后,C33A细胞活力均显著低于对照组,并且随着槲皮素浓度和时间的增加,细胞活力均呈下降趋势。流式细胞检测结果表明,槲皮素可增加C33A细胞周期G0/G...     

大黄素诱导人肾上皮HK-2细胞凋亡及内质网应激的介导作用

目的 研究大黄素诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡的作用及其机制是否与内质网应激有关。方法 不同浓度大黄素处理HK-2细胞不同时间。MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、转录激活因子3（ATF3）和X盒结合蛋白1（XBP1）的基因表达,Western blotting法检测caspase-3、GRP78、CHOP、真核生物启动因子2α（eIF2α）的蛋白表达。结果 大黄素以浓度相关方式降低HK-2细胞存活率,诱导caspase-3剪切。RT-PCR检测表明,大黄素能诱导内质网相关基因GRP78、CHOP、ATF3基因表达,Western blottinh检测结果进一步证实大黄素能诱导GRP78、CHOP的蛋白表达。大黄素还明显诱导eIF2α磷酸化和XBP1 mRNA剪切。在大黄素给药之前给予内质网应激干扰药4-苯基丁酸和salubrinal,能增加HK-2细胞的存活率。结论 大黄素能诱导HK-2凋亡,内质网应激参与了大黄素诱导HK-2细胞凋亡的作用。     

姜黄素诱导肝星状细胞凋亡的初步研究

目的　观察姜黄素对体外培养肝星状细胞凋亡的影响。方法　体外培养肝星状细胞株HSC -T6 ,流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡的改变。结果　在 2 0 ,4 0 ,6 0 μmol/L 姜黄素培养 2 4h后 ,①流式细胞术检测到明显的亚G1峰 ,各组的凋亡指数 (% )分别是 15 3± 1 88,2 6 7± 2 79,37 6± 4 38,与对照组(1 9± 0 6 4 )相比 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;②透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等细胞凋亡特征性的改变 ;③琼脂糖凝胶电泳可以见到明显的DNA梯度带形成。以 4 0 μmol/L 姜黄素作用 12 ,2 4 ,36 ,4 8h ,流式细胞仪检测各组的凋亡指数 (% )分别是 12 0± 2 35 ,2 6 7± 3 4 7,33 8± 1 78和 4 9 3± 1 5 6 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　姜黄素可以诱导HSC凋亡 ,其作用具有剂量和时间依赖性     

缺血再灌注损伤中内质网应激介导细胞凋亡的研究进展

内质网参与蛋白折叠、脂类合成和维持钙离子稳态。打乱内质网的稳态将导致未折叠蛋白或错误折叠蛋白在内质网腔蓄积并引起内质网应激。缺血再灌注损伤由器官血流受限（缺血）和随后血流恢复（再灌注）所致,缺血再灌注损伤可发生于心血管手术、高血压和器官移植,而且器官移植不可避免发生缺血再灌注损伤。近年来研究发现内质网应激介导细胞凋亡在缺血再灌注损伤中发挥重要作用,内质网应激主要通过诱导CAAT区/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12（caspase-12）和激活c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路介导细胞凋亡。本文将对缺血再灌注损伤中内质网应激介导细胞凋亡做一综述。     

内质网应激介导滋养细胞凋亡在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用及机制

目的探讨内质网应激介导滋养细胞凋亡在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）中的作用及机制。方法收集2015 年12 月~ 2016年12月在南方医科大学南方医院住院分娩的ICP孕妇20例为病例组,另以同期因社会因素行择期剖宫产术的20例无合 并症的正常孕妇为正常对照组。利用HE染色计量观察正常对照孕妇及ICP孕妇胎盘合体细胞结节数量;RT-PCR法检测正常 孕妇及ICP孕妇胎盘组织中GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-7的mRNA表达;建立不同浓度胆酸（0、10、50、100 μmol/L）体 外刺激HTR-8/SVneo人早孕滋养细胞株模型,利用RT-PCR法检测HTR-8/SVneo细胞GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-7的 mRNA表达及利用蛋白印迹法检测GRP78、CHOP蛋白的表达;caspase-3、caspase-7活性检测试剂盒分别检测其活化程度;电镜 观察细胞凋亡形态。结果ICP 组较对照组孕妇胎盘组织中合体细胞结节数明显增多（P<0.01）;GRP78、CHOP、caspase-3 及 caspase-7的mRNA表达明显上调（P<0.05）;不同浓度（0、10、50、100 μmol/L）去氧胆酸作用细胞24 h后,GRP78、CHOP、caspase-3 及caspase-7 mRNA的表达水平较对照组显著增高（P<0.05）,GRP78、CHOP蛋白的表达水平较对照组也显著增高,且均存在浓 度依赖效应;50 μmol/L去氧胆酸作用细胞24 h后检测caspase-3及caspase-7活性增高（P<0.05）;50 μmol/L去氧胆酸作用细胞 12 h后电镜观察HTR-8/SVneo细胞呈现凋亡小体。结论ICP孕妇胎盘组织中存在滋养细胞过度凋亡及内质网应激激活的现 象。去氧胆酸可以呈浓度依赖性地促进滋养细胞内质网应激相关基因mRNA和蛋白的表达,引起细胞凋亡,提示内质网应激介 导的滋养细胞凋亡在ICP的发病机制中可能起着重要的作用。     

苦参碱诱导大鼠肝星状细胞凋亡的体外研究

目的研究苦参碱对体外培养的大鼠肝星状细胞系rHSC-99凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养rHSC-99,随机分成4组：对照组（A组）,苦参碱0.12 mg/kg组（B组）,苦参碱0.24 mg/kg组（C组）,苦参碱0.48 mg/kg组（D组）。苦参碱作用24 h后,TUNEL法检测rHSC-99凋亡,半定量RT-PCR方法及免疫细胞化学方法检测rHSC-99中神经生长因子（NGF）,p75及Caspase-3的表达情况。结果不同浓度的苦参碱干预rHSC-99 24 h后,rHSC-99凋亡率随苦参碱的浓度增大而增高,D组凋亡率最高（P〈0.01）;NGF,p75,Caspase-3mRNA及其蛋白表达随苦参碱的浓度加大而表达升高,C组表达最高（P〈0.01）。结论苦参碱可诱导HSCs凋亡。激活NGF/p75通路、上调Caspase-3蛋白表达可能是苦参碱诱导肝星状细胞凋亡的机制之一。     

丹参诱导大鼠肝星状细胞凋亡作用的研究

目的 利用体外培养大鼠传代星状细胞为模型，观察丹参对星状细胞凋亡相关蛋白FasL、Fas、bax和bcl—2表达的调节作用，以进一步阐明丹参诱导星状细胞凋亡的机理。方法 大鼠星状细胞的分离采用胶原酶原位循环灌流法。星状细胞经20g／L丹参作用48h后，用免疫细胞化学法检测FasL、Fas、bax和bcl—2，用Western blot法检测bcl—2表达。结果 免疫细胞化学结果表明：星状细胞经丹参作用后FasL表达明显增强，Fas稍增加，bax明显增强，bcl—2减少；用Western blot法未能检出bcl—2。结论 丹参通过Fas途径及增加bax表达和减少bcl-2诱导肝星状细胞凋亡。