蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及其定位

目的：检测小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期中蛋白激酶Wee1B的表达水平及其定位水平,初步阐明Wee1B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法：超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B的mRNA和蛋白表达水平;放射自显影测定Wee1B活性;间接免疫荧光观察Wee1B在各个细胞时期的定位。结果：小鼠1-细胞期受精卵G₁、S、G₂和M期Wee1B mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05);S、G2和M期Wee1B蛋白表达量与G₁期比较差异有统计学意义(P＜0.01);与G1期比较,S、G₂期Wee1B活性逐渐增高（P＞0.05, P＜0.01）, M期Wee1B活性迅速下降（P＜0.01）。G₁期和S期细胞Wee1B蛋白偶联的红色荧光信号主要集中分布于细胞核,但在G₂期细胞红色荧光信号弥散分布于细胞浆,在M末期和2-细胞期可见红色荧光信号又重新分布于细胞核,细胞浆内荧光减弱。结论：蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期动态表达,Wee1B蛋白存在核浆转位,Wee1B的定位变化可能调控小鼠受精卵有丝分裂。     

Wee1在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位

目的 研究Wee1在小鼠1-细胞期受精卵发育全过程(G₁、S、G₂、M期)中的表达和定位,为进一步探究Wee1对小鼠胚胎有丝分裂(主要是G₂/M转换)的作用提供理论依据。方法 应用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测小鼠1-细胞期受精卵在G₁、S、G₂、M不同时期Wee1的表达谱,并利用间接免疫荧光观察Wee1蛋白在1-细胞期受精卵发育全过程中的定位。结果 Wee1 mRNA和蛋白在不同时期的表达水平变化趋势一致：从G₁到G₂期表达水平持续升高(P<0.05),但进入M期后表达水平显著降低(P<0.01)。间接免疫荧光显示：Wee1蛋白在G₁、S期定位于细胞质,在G₂期Wee1蛋白开始向核转位,M期细胞核内Wee1蛋白明显增多。结论 小鼠1-细胞期受精卵的发育伴随Wee1表达水平的改变和Wee1蛋白的核浆转位,提示Wee1表达水平及其蛋白亚细胞定位的改变可能是调节小鼠1-细胞期受...     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

IL-4协同雌二醇对小鼠乳腺癌细胞生长的促进作用及其机制

目的：探讨白细胞介素4（IL-4）协同雌二醇对小鼠乳腺癌4T1细胞对其生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养4T1细胞,加入不同浓度（0、12.5、25.0、50.0和100.0 μg·L^-1） IL-4或雌二醇（0、6.25、12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1）,作用72 h后MTT法检测乳腺癌4T1细胞增殖率。将乳腺癌4T1细胞分为对照组（不进行任何处理）、IL-4组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4）、雌二醇组（加入12.50 nmol·L^-1雌二醇）和联合组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4+12.50 nmol·L^-1雌二醇）,MTT法检测各组乳腺癌4T1细胞增殖率,流式细胞术检测各组不同细胞周期乳腺癌4T1细胞百分比,Western blotting法检测各组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、Erk、p-Erk、P70S6K、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平。结果：与0 μg·L^-1 IL-4组比较,25.0、50.0和100.0 μg·L^-1IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与0 nmol·L^-1雌二醇组比较,12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与对照组比较,雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）;雌二醇组乳腺癌4T1细胞中S期细胞百分比明显升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高,雌二醇组乳腺癌4T1细胞中p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）;联合组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：IL-4协同雌二醇可促进小鼠4T1乳腺癌细胞膜IL-4受体（IL-4R）和雌激素受体（ER）表达,增强乳腺癌4T1细胞中Erk1和p70S6K激酶的激活及下游分子S6蛋白的磷酸化。     

奥沙利铂对人舌鳞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨奥沙利铂（Oxaliplatin）对人舌鳞状细胞癌（简称舌鳞癌）CAL27细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其潜在作用机制。方法：采用不同浓度（0、10、20、40和80 mg·L^-1）Oxaliplatin处理CAL27细胞,分别作为对照组和10、20、40及80 mg·L^-1 Oxaliplatin组,采用结晶紫染色法观察各组CAL27细胞形态表现,CCK-8法检测各组CAL27细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期CAL27细胞百分比和凋亡率,实时荧光定量PCR法检测各组CAL27细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和细胞周期蛋白E（cyclin E）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组CAL27细胞中抗凋亡蛋白survivin和促凋亡蛋白Bax的表达水平。结果：与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞出现一定程度的皱缩,80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞明显失去原有形态,细胞间连接丧失。与对照组比较,10、20、40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组G₀/G₁期CAL27细胞百分比明显升高（P<0.01）,CDK2和cyclin E mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较,40与80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。与对照组比较,40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞中survivin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bax蛋白表达水平则明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Oxaliplatin能够抑制CAL27细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与细胞发生G₀/G₁期阻滞以及survivin蛋白表达水平降低和Bax蛋白表达水平升高有关。     

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的：探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2（Frat2）通过Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法：选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应（Real-Time RT-qPCR）法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4 μmol·L^-1Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3（pGSK-3β）蛋白表达水平。结果：与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

敲减TLR2基因对结直肠癌细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：应用慢病毒RNA干扰技术敲减结直肠癌细胞中Toll样受体2（TLR2）基因,探讨其对结直肠癌细胞增殖的作用,并阐明其作用机制。方法：将处于对数生长期的结直肠癌HCT116细胞和HT29细胞分为未感染对照组、阴性对照组及基因敲减组（TLR2-RNAi组）,分别给予无慢病毒感染、慢病毒RNAi及慢病毒TLR2-RNAi稳定转染。感染后采用蛋白印迹法检测各组细胞中TLR2蛋白表达水平,采用CCK-8法和流式细胞术检测各组细胞增殖活性及不同细胞周期细胞百分率,蛋白印迹法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶（PI3K/Akt）和核因子κB（NF-κB）细胞信号通路相关蛋白及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3蛋白表达水平。结果：与未感染对照组和阴性对照组比较,TLR2-RNAi组HCT116细胞和HT29细胞中TLR2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与未感染对照组和阴性对照组比较,TLR2-RNAi组HCT116细胞和HT29细胞增殖活性明显降低（P<0.05）,S期和G₂期细胞百分率明显降低（P<0.05）,G₁期细胞百分率明显升高（P<0.05）。与未感染对照组和阴性对照组比较,TLR2-RNAi组HCT116细胞和HT29细胞中PI3K、p-Akt、p-NF-κβ、cyclin D1和cyclin D3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：敲减TLR2基因可以通过调控PI3K/Akt和NF-κB细胞信号通路及细胞周期相关蛋白cyclin D1和cyclin D3的表达而抑制结直肠癌细胞的增殖。     

miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制

目的：观察miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法：乳腺癌T47D和MDA-MB-361细胞分别给予0.0、2.5和5.0 Gy γ射线照射,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程,实时定量PCR法检测72 h内细胞中miRNA-21表达水平。T47D和MDA-MB-361细胞分别转染anti-miRNA-21序列（anti-miRNA-21组）和阴性对照序列（阴性对照组）,并设置未转染细胞为空白对照组,实时定量PCR法检测各组细胞中miRNA-21表达水平;经0.0和5.0 Gy γ射线照射后,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程。结果：经5.0 Gy γ射线照射后,T47D细胞存活率明显高于MDA-MB-361细胞（P<0.05）;与0.0 Gy照射组比较,5.0 Gy照射组T47D和MDA-MB-361细胞G₂/M期细胞百分率均明显升高（P<0.05）,miRNA-21表达水平均明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞中miRNA-21表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）;给予5.0 Gy γ射线照射后,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞存活率均明显降低（P<0.05或P<0.01）,T47D细胞G₂/M期细胞百分率明显降低（P<0.05）,而subG₁期细胞百分率明显升高（P<0.05）。结论：miRNA-21表达下调能够增强乳腺癌细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制细胞周期G₂/M期阻滞有关。     

迷迭香酸通过激活Nrf2/HO-1通路对Aβ1-42所致星形胶质细胞损伤的保护作用

目的 探讨迷迭香酸（RA）对β淀粉样蛋白1-42（Aβ_1-42）引起的星形胶质细胞损伤的保护作用及炎症因子释放的抑制作用,并阐明其相关机制。 方法 原代培养星形胶质细胞,将细胞分为对照组,Aβ_1-42组（5 μmol?L^－1）,不同浓度（20,50和100 μmol?L^－1）RA+Aβ_1-42组,核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）组,ML385+RA+Aβ_1-42组。星形胶质细胞以不同浓度（20、50和100 μmol?L^－1）RA预处理24 h,再给予终浓度5 μmol?L^－1Aβ_1-42处理24 h,ML385组在加入RA前先加入终浓度10 μmol?L^－1 ML385预处理6 h。MTT法检测各组细胞活性,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞LDH释放率,酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Griess法检测各组细胞培养液中一氧化氮（NO）水平,免疫荧光法检测各组细胞中胶质原纤维酸蛋白（GFAP）和Nrf2表达情况,Western blotting法检测各组细胞中GFAP、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与Aβ_1-42组比较,不同浓度RA+Aβ_1-42组细胞活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显降低（P<0.01）,GFAP荧光强度明显减弱, Nrf2荧光强度明显增强,细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与RA（50 μmol?L^－1）+Aβ_1-42组比较,ML385+RA+Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 RA对Aβ_1-42诱导的星形胶质细胞炎症因子和NO释放有抑制作用,使星形胶质细胞免受损伤,该保护作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。     

蚓激酶对胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：探讨蚓激酶（LBK）对胃癌SGC7901细胞的调控作用,并阐明其作用机制。方法：取对数生长期SGC7901细胞,将细胞分为对照组和2、4、8 U·mL^-1LBK组。采用MTT法检测不同时间段（24、48和72 h）各组SGC7901细胞增殖抑制率,采用细胞划痕实验检测各组SGC7901细胞体外迁移能力,采用流式细胞术检测各组SGC7901细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测各组SGC7901细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24、48和72h后不同剂量LBK组SGC7901细胞增殖抑制率明显升高（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞划痕距离明显增加（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,G₁期和S期细胞百分率明显降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,8U·mL^-1LBK组SGC7901细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：LBK可抑制胃癌细胞株SGC7901增殖和迁移能力,且能够诱导细胞凋亡,其可能的机制是通过调节Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平来实现的。     

14-3-3蛋白调节1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂

 [摘要]目的：研究14-3-3蛋白在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂中的作用。方法：RT-PCR技术鉴定小鼠受精卵14-3-3蛋白亚型。采用显微注射方法将14-3-3siRNA注射入小鼠受精卵G1期,观察受精卵的卵裂率、形态学变化及MPF活性。结果：小鼠受精卵中的14-3-3蛋白亚型是14-3-3ε。小鼠受精卵注射pSUPER-14-3-3εsiRNA后,与对照组相比,卵裂率下降,有丝分裂延迟,有更多的受精卵发生形态异常,MPF活性最高值显著下降。结论：14-3-3蛋白在调节小鼠受精卵有丝分裂中发挥重要作用。     

蛋白磷酸酶2A参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用

目的探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是否参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用,以进一步揭示孕激素作用的分子机制。方法分离培养原代小鼠子宫内膜上皮细胞,在细胞生长汇合时将其分为4组:以1μmol/L孕激素为对照组(P4组),其他3组分别给予1μmol/L孕激素和5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L 3种不同剂量的PP2A抑制剂冈田酸(OA)作为实验组,分别为A、B和C组。各组细胞在上述实验因素作用24h后,采用流式细胞术检测细胞周期各时相分布的细胞百分数。结果与P4组相比,A组分布在细胞周期各时相的细胞百分数差异没有统计学意义;B组处于G1期和G2/M期的细胞百分数降低,而S期的细胞百分数增加;C组处于G1期和S期的细胞百分数增加,但G2/M期细胞百分数降低(P均<0.05)。结论适当剂量PP2A抑制剂OA可明显解除孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的抑制作用,使细胞周期进程加快,从而证实PP2A参与了孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用。     

胡桃醌对宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 探讨胡桃醌对人宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响,阐明胡桃醌在宫颈癌治疗中的作用。方法: 选取处于对数生长期的SiHa细胞,随机分为对照组和10、20、40、60、80和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组。倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和细胞生长抑制率,流式细胞术检测SiHa细胞的细胞周期。结果: 与对照组比较,胡桃醌处理组SiHa细胞体积缩小,连接消失,与周围细胞脱离。与对照组比较,胡桃醌处理组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞生长抑制率升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)为20.7 μmol·L^-1;流式细胞术检测,与对照组比较,10和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组SiHa细胞的亚二倍体峰(SubG₁)比率增加,G₀/G₁和S期细胞比率降低,G₂/M期细胞比率先升高后降低。结论: 胡桃醌对SiHa细胞增殖具有抑制作用,并可使细胞周期SubG₁比率增加。     

新型八核铜配合物乳剂的体内外抗肿瘤作用

目的探讨新型八核铜配合物乳剂(N-Cu)的体内、外抗肿瘤作用。方法采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度N-Cu对HT29、HeLa、SGC7901和EC9706肿瘤细胞增殖的影响。利用S180腹水瘤小鼠模型观察不同浓度N-Cu的体内抗肿瘤作用。采用流式细胞仪测定不同浓度N-Cu对S180细胞周期的影响。结果 N-Cu作用4种肿瘤细胞24h后,细胞增殖均受到了不同程度的抑制,且呈浓度依赖性。N-Cu对荷S180小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用。N-Cu能使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,细胞被阻滞于G0/G1期,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 N-Cu在体内、外具有抗肿瘤作用。     

己酮可可碱对人肝癌HepG2细胞的放射增敏作用及其作用机制

目的 研究己酮可可碱(pentoxifylline, PTX)对人肝癌HepG₂细胞的放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法 应用MTT法检测PTX药物毒性实验,用克隆形成实验观察PTX对放射敏感性的影响,用流式细胞仪(FCM)技术分析X射线照射对HepG₂细胞周期分布和PTX对放射引起的细胞周期阻滞的影响。结果 不同浓度的PTX作用于肝癌HepG₂细胞24 h后,其细胞毒性呈剂量依赖性,最适浓度为2 mmol/L。PTX能显著降低放射后HepG₂细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.31±0.16。单纯照射组照射可以导致HepG₂细胞G₂期阻滞,单纯照射组及照射6 Gy加2 mmol/L PTX组的细胞20 h G₂-M期比例分别为32.15%和19.52%,PTX能够去除放射引起的HepG₂细胞G₂期阻滞。结论 PTX对HepG₂细胞有放射增敏作用,其机制可能与PTX去除放射引起的G₂期阻滞等因素有关。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

乌苯美司对卵巢癌A2780细胞的生物学影响

目的 研究乌苯美司对卵巢癌A2780细胞增殖、细胞周期、凋亡和自噬以及迁移和侵袭能力的影响,探讨可能的作用机制。 方法 CCK-8实验检测乌苯美司对A2780细胞增殖的影响;Transwell实验检测乌苯美司对A2780细胞迁移及侵袭能力的影响;流式细胞术检测乌苯美司对A2780细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测APN、AKT、p-AKT、LC3B、p62表达水平的变化。 结果 (1)乌苯美司能够抑制A2780细胞的增殖(F浓度=812.56,P<0.001;F时间=8.58,P=0.010;F交互=4.00,P=0.027)、迁移(t=56.9,P<0.001)和侵袭(t=11.8,P<0.001)、导致G₂/M期细胞比例增高(t=7.9,P=0.016),G₁期细胞比例减少(t=14.8,P=0.005),发生G₂/M细胞周期阻滞。(2)乌苯美司能够诱导A2780细胞凋亡(P=0.002),且联合应用AKT抑制剂后诱导细胞凋亡的作用增强(P=0.007)。(3)乌苯美司可以导致APN表达降低,p-AKT、LC3-B和p62表达增加。 结论 乌苯美司可能是卵巢癌的一种治疗方法或者辅助治疗方法,与AKT抑制剂联用能够增强其治疗效果。     

酪酪肽对胰腺癌Miapaca-2细胞凋亡的影响

目的 观察酪酪肽(PYY)对体外培养的胰腺癌Miapaca-2细胞凋亡的影响。方法 不同浓度(0.01、0.005、0.0025、0.00125 mmol/L) PYY分别作用于体外常规培养的Miapaca-2细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期;RT-PCR法检测Survivin mRNA,Western blotting法检测Survivin、Caspase-3蛋白的表达。结果 PYY处理48 h后细胞凋亡率明显升高,并呈浓度依赖性;G₀/G₁期细胞数明显增多,S、G₂/M期细胞数明显减少,G₁期前出现亚二倍体凋亡峰;PYY明显抑制Survivin蛋白和mRNA表达(P<0.01),上调Caspase-3蛋白表达(P<0.01)。结论 PYY能诱导胰腺癌Miapaca-2细胞凋亡,参与细胞周期调控,其机制可能与抑制Survivin蛋白和mRNA表达、上调Caspase-3蛋白表达有关。