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【摘要】 目的 探讨性别决定区Y-BOX21(SOX21)在胃癌(GC)中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用。 方法 收集2016年4月~2017年5月于东莞市人民医院行胃癌根治术患者的癌组织及对应的癌旁组织各44例,以胃癌细胞株AGS和人胃粘膜上皮细胞株GES-1为进一步研究对象,将培养后的细胞分为空白对照组、NC组和SOX21组,甲基化特异性PCR检测SOX21甲基化状态;qRT-PCR、免疫组化(IHC)和Western blot检测SOX21和Wnt/β-catenin通路相关基因表达;CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。 结果 与癌旁组织相比,GC组织SOX21甲基化率明显升高(P<0.001),SOX21 IHC评分、mRNA表达和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。SOX21在GES-1细胞中呈去甲基化状态,而在AGS中呈完全甲基化状态。与GES 1细胞相比,AGS细胞中SOX21 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与NC组相比,SOX21组中SOX21 mRNA表达、蛋白表达和细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05),β-catenin、c-myc、cyclinD1和MMP7蛋白表达明显降低(P<0.05)。 结论 SOX21在胃癌组织中呈高 甲基化状态且表达降低,过表达SOX21可能通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。 相似文献
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目的 研究安罗替尼对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 取对数生长期宫颈癌SiHa细胞,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验根据半数抑制浓度(IC50)确定安罗替尼实验浓度,将SiHa细胞分为对照组(0μmol/L)、低浓度组(5μmol/L)、中浓度组(10μmol/L)、高浓度组(20μmol/L)。以平板克隆实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测安罗替尼对SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。以Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、上皮钙黏附素(E-cadherin)、无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。结果 CCK-8实验显示安罗替尼能够剂量依赖性抑制SiHa细胞的增殖,作用24、48和72 h的IC50分别为(26.96±2.25)、(13.59±1.13)和(9.27±0.75)μmol/L。平板克隆实验显示,处理SiHa细胞48 h后,对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞克隆形成率分别为(62.05±7.88)%、(39.96±5.1... 相似文献
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目的探讨转录调节因子SOX7对人胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭能力的影响。方法以人胃癌MKN45细胞株作为研究对象,用脂质体介导转染pIRES2-EGFP-SOX7重组质粒并建立稳定过表达SOX7的MKN45细胞株,用Real-timePCR和Western blot验证SOX7过表达的情况,并检测转染前后MKN45细胞增殖和侵袭能力的变化,并用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9的表达情况。结果 Real-time PCR和Western blot证实转染后的MKN45细胞SOX7表达明显上调,转染组较对照组增殖和侵袭能力明显下降,且Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9表达明显下调。结论 SOX7在体外可以有效抑制人胃癌MKN45细胞株的增殖和侵袭,其机制可能是通过负性调控Wnt/β-catenin信号通路引起的。 相似文献
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目的 探讨大黄酸对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 利用低、中、高浓度(6、12、24μmol/L)大黄酸处理喉癌Hep-2细胞,通过MTT法、划痕实验、Transwell法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测β-catenin、Dvl2、GSK-3β和p-GSK-3β在Hep-2细胞中的表达水平。结果 随着大黄酸浓度的增大,喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著减弱(P <0.05)。大黄酸可降低喉癌细胞Dvl2、p-GSK-3β和β-catenin蛋白的表达水平(P <0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P <0.05)。使用SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,能够逆转大黄酸对Hep-2细胞迁移和侵袭的抑制作用(P <0.05);使用XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,能够降低Dvl2、p-GSK-3β和β-catenin的蛋白表达水平(P <0.05),进一步加强大黄酸对Hep-2细胞迁移的抑制作用(P <0.05... 相似文献
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目的 探讨miR-3200-3p对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法 采用RT-qPCR方法检测miR-3200-3p在正常肝细胞系HL-7702与肝癌细胞系Bel-7402中的表达;构建miR-3200-3p的慢病毒低表达载体,转染Bel-7402细胞,倒置荧光显微镜及RT-qPCR检测敲低效果;根据转染病毒质粒的不同将Bel-7402细胞分为2组:LV-control组及LV-inhibitor组。Transwell迁移和侵袭实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法检测2组细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白的表达水平。结果 与HL-7702细胞比较,Bel-7402细胞中miR-3200-3p的相对表达量显著升高(P<0.001);成功建立miR-3200-3p低表达的Bel-7402稳转细胞系;与LV-control组比较,LV-inhibitor组肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显受到抑制(均P<0.001),β-catenin(总、胞核和胞质)和MMP2蛋白表达均显著下调,E-cadherin的表达明显上调(均P<0.05)。结论 miR-3200-3p在肝癌细胞中发挥促癌作用,敲低其表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能是通过影响Wnt/β-catenin通路的活化而下调MMP2表达,上调E-cadherin而实现的。 相似文献
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目的 探讨丙泊酚对不同分化程度人结肠癌细胞体外增殖、迁移及肿瘤细胞中Wnt1、β-catenin mRNA表达的影响。 方法 选取2株分化程度不同的人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)和LoVo(低分化),分别按丙泊酚浓度分为P0(0 μg/mL)、P6.25(6.25 μg/mL)、P25(25 μg/mL)、P100(100 μg/mL)组,CCK-8法检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞生长增殖的影响,Transwell迁移实验检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞迁移的影响,比较不同分化程度结肠癌细胞对丙泊酚的敏感性。Real-time PCR检测丙泊酚处理后Caco-2和LoVo细胞中Wnt1和β-catenin基因mRNA的表达。 结果 CCK-8检测结果显示,对于高分化Caco-2细胞,P100组处理24 h与P0组相比细胞存活率差异有统计学意义(P<0.001),P25组处理48 h与P0组相比,差异有统计学意义(P<0.05);对于低分化LoVo细胞,P100组处理24 h与P0组相比,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),P25组处理48 h与P0组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明,Caco-2细胞系P6.25、P25、P100组与P0组OD570 nm值比较,差异有统计学意义(P<0.001);LoVo细胞系P25、P100组与P0组OD570 nm值比较,差异有统计学意义(P<0.001)。Real-time PCR结果表明,Caco-2细胞系P25、P100组与P0组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),LoVo细胞系P25、P100组与P0组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001);Caco-2细胞系P25、P100组与P0组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001),LoVo细胞系P100组与P0组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001)。 结论 丙泊酚呈剂量和时间依赖性抑制人结肠癌细胞Caco-2和LoVo的生长增殖及迁移。Caco-2较LoVo对丙泊酚的抑制作用更敏感。 相似文献
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《中国现代医生》2019,57(4):1-5+169
目的探究胃癌组织中Lgr5和β-catenin蛋白表达的差别及相关性。方法选择2012年1月~2017年12月间嘉兴市第一医院80例胃癌患者组织病理标本作为观察组,30例浅表性胃炎患者组织病理标本和30例萎缩性胃炎患者组织病理标本分别作为对照组,采用免疫组化法检测Lgr5和β-catenin蛋白的表达。结果 Lgr5和β-catenin蛋白在观察组中的表达率高于对照组,三者之间存在显著差异(χ2=12.937、13.654,P均0.05)。Lgr5蛋白在胃癌中的表达与患者的组织分化程度及患者的肿瘤TNM分期存在明显相关性(P均0.05);β-catenin蛋白在胃癌中的表达与患者是否存在淋巴结转移以及患者的肿瘤TNM分期存在明显相关性(P均0.05)。同时,在胃癌组织中,Lgr5和β-catenin蛋白的表达呈明显相关性(rp=0.226,P=0.038)。结论在胃癌的发生发展过程中,Lgr5和β-catenin蛋白发挥着重要作用,二者的检测对于胃癌的靶向诊疗意义重大。 相似文献
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探究人胃癌组织中染色盒同源物7(CBX7)的表达及对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法收集2013 年1 月1 日-2015 年1 月1 日间于该院普通外科行手术切除的45 例胃癌及对应癌旁组织,免疫组织化学染色观察CBX7蛋白表达,分析胃癌组织中CBX7 蛋白表达高低与肿瘤临床特征的关系。通过重组质粒在胃癌SGC-7901 细胞中过表达CBX7,经Transwell 小室实验确定CBX7 过表达对胃癌细胞迁移侵袭的作用。结果CBX7 在胃癌组织中表达较癌旁组织下降( t=3.517, p=0.000),胃癌组织低表达CBX7 与肿瘤淋巴结转移(χ2=5.829,p =0.022)及高TNM 分期(Ⅲ+Ⅳ期,χ2=4.465, p=0.047)相关。过表达CBX7 对SGC-7901 的迁移(t =42.040,p =0.000)及侵袭( t=40.119,p =0.000)具有显著的削弱作用。结论CBX7 在胃癌组织中表达降低,过表达CBX7 能够通过抑制胃癌细胞迁移及侵袭发挥抗肿瘤作用。 相似文献
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目的探究hsa_circ_100395对胃癌细胞HGC-27、MGC-803增殖、侵袭和迁移的影响。 方法收集72例胃癌患者胃癌组织及其癌旁组织样本,采用qRT-PCR检测hsa_circ_100395在胃癌组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。将胃癌细胞系HGC-27和MGC-803分成过表达组(转染hsa_circ_100395过表达质粒)、沉默组(转染hsa_circ_100395沉默质粒)和对照组(转染空质粒)。采用CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell法、裸鼠成瘤实验检测胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。 结果hsa_circ_100395在胃癌组织中表达明显下调。hsa_circ_100395低表达与高表达在组织分化程度、浸润深度及TNM分期上差异有显著性(P<0.05)。与对照组比较,hsa_circ_100395过表达显著抑制HGC-27和MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭及体内肿瘤的生长;hsa_circ_100395沉默显著促进了HGC-27和MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭及体内肿瘤的生长。 结论hsa_circ_100395在胃癌组织中低表达,且过表达hsa_circ_100395可抑制胃癌细胞HGC-27、MGC-803增殖、侵袭和迁移。 相似文献
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目的 通过挖掘GEPIA数据库中的基因信息,分析T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)基因在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及作用机制。方法 采用GEPIA数据库在线分析TIM-3基因在EOC组织和正常卵巢组织中的表达水平。收集2018年6月~2019年12月在我院实施卵巢手术治疗的82例EOC癌变组织标本和18例正常卵巢组织标本,免疫组织化学法检测标本组织中TIM-3的表达水平,分析TIM-3表达与EOC临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier Plotter分析TIM-3表达水平与EOC患者生存之间的关系。qRT-PCR法检测卵巢癌组织和正常组织标本TIM-3和Wnt1 mRNA表达水平及相关性。采用pMAGic 4.0质粒转染构建TIM-3沉默卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组(未转染的SKOV3细胞系)、沉默阴性对照组(SKOV3+NC siRNA组:转染pMAGic 4.0 NC siRNA质粒的SKOV3细胞系)和沉默TIM-3组(SKOV3+TIM-3 siRNA组:转染pMAGic 4.0 TIM-3 siRNA质粒的SKOV3细胞系);采用pcDNA3.1质粒转染构建TIM-3过表达卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组、过表达阴性对照组(pcDNA NC组:转染pcDNA3.1质粒的SKOV3细胞系)和过表达TIM-3组(pcDNA TIM-3组:转染pcDNA3.1 TIM-3质粒的SKOV3细胞系)。MTT法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin通路活性,qPCR检测Wnt/β-catenin信号通路中转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平,Western blot检测SKOV3细胞中MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin及E-cad蛋白表达。结果 TIM-3在正常卵巢组织中呈阴性表达,在EOC组织中呈阳性表达,EOC组织中TIM-3阳性表达率(84.14%)显著高于正常卵巢组织(16.67%,P<0.05)。TIM-3表达与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结是否转移有关(P<0.05),与年龄、病理类型无关(P>0.05)。且TIM-3与Wnt1水平呈正相关(P<0.05)。沉默TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性受到抑制,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著升高(P<0.05),转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著下调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著下调,EMT相关蛋白E-cad水平显著上调(P<0.05)。过表达TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性被激活,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),凋亡能力显著降低(P<0.05),转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著上调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著上调,EMT相关蛋白E-cad水平显著下调(P<0.05)。结论 TIM-3在EOC组织中高表达,可促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。 相似文献
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目的:探讨结直肠癌及癌旁组织中R-spondin家族的表达水平及其与患者临床病理分期之间的关系。
方法:收集中南大学湘雅医院2014年1月至2014年8月行根治性手术治疗后的64例结直肠癌新鲜组织及配对的癌旁组织
标本,利用实时荧光定量PCR及免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中R-spondin 1~4及β-链蛋白(β-catenin)的mRNA
及蛋白表达情况;分析R-spondin 1~4表达水平与结直肠癌的临床病理因素之间的关系;探讨R-spondin 1~4与β-catenin
在结直肠癌中表达的相关性。结果:与癌旁组织相比较,R-spondin 1蛋白及mRNA在结直肠癌组织中呈高表达
(P<0.05);与正常组织比较,R-spondin 2~4在结直肠癌组织中呈高表达,但与癌旁组织的表达水平比较差异无统计学
意义(P>0.05);结直肠癌组织中R-spondin 1表达水平与β-catenin的细胞核表达水平呈正相关(r=0.6307,P<0.05)。结论:
与癌旁组织相比较,R-spondin 1在结直肠癌组织中呈高表达;R-spondin 1可能通过调控Wnt信号通路下游的β-catenin活
性而发挥促癌作用。 相似文献
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探讨沉默LIM激酶1(LIMK1)对人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭的影响。采用RNA干扰技术沉默MGC803细胞LIMK1基因,RT-PCR和Western blot检测干扰效率,MTT、流式细胞术、细胞划痕和侵袭实验分别检测沉默LIMK1对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移与侵袭能力的影响。结果显示,成功构建稳定沉默LIMK1基因MGC803细胞。MTT显示,LIMK1沉默组细胞在24、48、72、96 h分别较对照组与空载体组的抑制率为61.0%、36.9%、12.1%、1.6%和54.7%、46.2%、13.5%、1.5%(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组G2/M期17.96%明显高于MGC803组11.45%和空载体组11.68%(P<0.05)。划痕实验显示,24 h后,沉默组划痕距离(155.9±7.6)较对照组(65.9±11.0)和空载体组(73.2±5.1)明显增加(P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(25.1±1.3)较对照组(42.4±2.8)和空载体组(45.2±3.0)明显减少(P<0.05)。沉默LIMK1可抑制MGC803细胞增殖、迁移与侵袭和阻滞G2/M期。 相似文献
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蔡毅 《中国现代医学杂志》2017,27(12):35-39
探索胃癌MGC-803细胞和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞中,长链非编码RNA PRNCR1的表达,以及沉默PRNCR1 对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中PRNCR1 表达水平;设计并合成PRNCR1-siRNA及对照序列(PRNCR1-NC)转染胃癌细胞,通过qRT-PCR 检测细胞中PRNCR1 的沉默效果;利用四甲基偶氮唑盐比色法检测胃癌细胞
的增殖;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PRNCR1 在胃癌MGC-803 细胞中的表达高于人正常胃黏膜上皮GES-1 细胞,PRNCR1-siRNA 可以下调胃癌MGC-803 细胞中PRNCR1 的表达,并可以抑制MGC-803 细胞的增殖和侵袭转移能力。结论PRNCR1-siRNA 能够下调PRNCR1 的表达,并有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭迁移力,为以PRNCR1 为靶点的胃癌基因治疗奠定理论基础。 相似文献
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本文旨在研究长链非编码RNA UNC5B-AS1在胃癌中差异表达的临床意义及其对胃癌细胞活力和迁徙的影响。从TCGA和GEO数据库中筛选出所有差异表达的mRNAs和lncRNAs,通过qRT-PCR检测mRNA水平UNC5B-AS1在胃癌中的差异表达;CCK-8实验检测UNC5B-AS1表达对胃癌细胞增殖的影响;划痕实验检测UNC5B-AS1对胃癌细胞迁移的影响。结果显示,相较于癌旁组织,UNC5B-AS1在人胃癌组织中表达显著下调,但胃癌患者的总生存期无显著影响,高表达UNC5B-AS1的胃癌患者无复发生存期较差,且相对于Ⅰ期胃癌患者,Ⅱ-Ⅳ期的胃癌患者高表达UNC5B-AS1,异常表达的UNC5B-AS1对胃癌细胞的增殖无显著影响,然而敲降UNC5B-AS1,胃癌细胞的迁移能力显著增加;过表达UNC5B-AS1,胃癌细胞的迁移能力显著抑制。结果推测UNC5B-AS1可作为评价胃癌复发和转移的相关标志物和潜在的治疗靶点。 相似文献
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目的:研究人microRNA-212(miR-212)对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响。方法:通过化学方法合成人成熟型miR-212抑制基因i-miR-212,分别以25、50、75、100 nmol/L浓度通过脂质体转染方法转染SGC7901细胞,同时设空白组和无序列对照组。采用Real-time PCR、细胞计数和Transwell小室等实验方法,分别检测各组细胞miR-212的表达、miR-212对细胞增殖的影响及miR-212对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:各浓度i-miR-212转染SGC7901细胞后,miR-212表达均降低,以50 nmol/L i-miR-212转染组最佳,较无序列对照组降低约94.60%;50 nmol/L i-miR-212转染组与无序列对照组在细胞计数上差异有统计学意义(P<0.01)。在细胞侵袭实验中50 nmol/L i-miR-212转染组透膜细胞明显多于无序列对照组(P<0.01),在迁移实验中i-miR-212转染组(50 nmol/L)的透膜细胞明显多于无序列对照组(P<0.01)。结论:转染成熟型人i-miR-212能使胃癌细胞系SGC7901细胞中miR-212的表达明显下降,并能显著促进胃癌细胞系SGC7901的增殖、迁移及侵袭能力,表明miR-212与胃癌肿瘤细胞的转移具有相关性。 相似文献
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目的:探讨miR-30a-5p靶向三结构域蛋白31(TRIM31)基因对结直肠癌(CRC)细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,并阐明其作用机制.方法:收集27例5-FU化疗敏感(5-FU/S组)CRC患者和23例5-FU化疗耐药(5-FU/R组)CRC癌患者的CRC组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测癌... 相似文献