密蒙花总黄酮对去势导致干眼症雄鼠泪腺Bax mRNA、BcL-2 mRNA表达的影响

目的观察密蒙花总黄酮对雄激素水平下降所致干眼症雄鼠的泪腺上皮细胞中Bax mRNA、Bcl-2mRNA表达的影响。方法将健康1月龄、体质量150～180gWistar雄性大鼠150只随机分为A1、B1、C1、D1、E1、A3、B3、C3、D3、E3、A5、B5、C5、D5、E5共15组,每组10只。采用去势的方法建立雄激素水平下降所致干眼症动物模型,分别观察各组SchimerI试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色情况,以确定干眼症模型是否建立成功。其中,A代表正常组;B代表假手术组;C代表模型对照组;D代表雄激素对照治疗组(造模成功后,丙酸睾酮1mg.kg-1大腿肌肉注射,每3d1次);E代表密蒙花总黄酮治疗组(造模成功后,密蒙花总黄酮0.045g.kg-1灌胃,每3d1次);1代表饲养1个月;3代表饲养5个月;5代表饲养7个月。用RT-PCR法对各组泪腺组织中Bax mRNA、Bcl-2mRNA的表达进行检测,并比较。结果SchimerI试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色结果显示,大鼠均在造模3个月后形成干眼症。D3组、D5组泪腺组织中的BaxmRNA相对含量较C3组、C5组降低,差异均有统计学意义(均为P<...     

密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响

目的：观察密蒙花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型中泪腺上皮细胞Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。

方法：将培养生长状态良好的泪腺上皮细胞,随机分为无雄激素培养黄酮治疗组(以下简称密蒙花总黄酮组),含雄激素培养对照组(以下简称雄激素组),无雄激素培养空白组(以下简称空白组)。分别加入含密蒙花总黄酮血浆、丙酸睾酮、含空白血浆开始进行干预。建立干眼症细胞模型。用Trizol试剂提取细胞总RNA。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达。

结果：密蒙花组、雄激素组能够抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA的表达,与空白组比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bax mRNA的表达低于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。密蒙花组、雄激素组Bcl-2 mRNA的表达均高于空白组,比较差异有显著性(P<0.01); 密蒙花组Bcl-2 mRNA的表达高于雄激素组,比较差异有显著性(P<0.01)。

结论：密蒙花总黄酮含药血浆作用于雄激素水平下降所致干眼症的细胞模型可抑制Bax mRNA的表达,使Bax mRNA的表达量降低,同时促进Bcl-2 mRNA的表达,使Bcl-2 mRNA的表达量增加。密蒙花总黄酮含药血浆很可能是通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA及促进Bcl-2 mRNA表达的途径而达到抑制细胞凋亡的作用。     

淫羊藿总黄酮含药血浆对雄兔干眼泪腺上皮细胞凋亡模型Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达的影响

目的　观察淫羊藿总黄酮含药血浆对雄兔干眼泪腺上皮细胞Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达的影响。方法　取61只健康无眼疾1月龄雄性新西兰大耳白兔，随机取1只雄兔泪腺，培养泪腺上皮细胞，取第3代泪腺上皮细胞用于实验。60只雄兔随机分成淫羊藿总黄酮10.0倍组、5.0倍组、2.5倍组和空白对照组，通过MTT法确定后续干预细胞的含药血浆的浓度。将所培养第3代泪腺上皮细胞随机分为淫羊藿总黄酮治疗组、含雄激素培养对照组和空白组（DMEM/F12低糖培养基中分别加入含淫羊藿总黄酮血浆、10^-6 mol·L^-1丙酸睾酮和空白血浆）。干预48 h后各组均加入H₂O₂继续培养60 min诱导细胞凋亡，采用RT-PCR法检测各组细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达。结果　MTT实验显示应选取淫羊藿总黄酮2.5倍组作为干预细胞含药血浆的浓度。淫羊藿总黄酮10.0倍组、5.0倍组、2.5倍组和空白对照组兔血浆中朝藿定A浓度分别为120.5 μg·L^-1、65.7 μg·L^-1、21.9 μg·L^-1、0 μg·L^-1，淫羊藿苷浓度分别为130.8 μg·L^-1、45.3 μg·L^-1、18.9 μg·L^-1、0 μg·L^-1。淫羊藿总黄酮治疗组、含雄激素培养对照组、空白组的Caspase-3 mRNA相对含量分别为0.35±0.07、0.68±0.18、1.00±0.19，Caspase-8 mRNA相对含量分别为0.27±0.21、0.72±0.10、1.00±0.15。空白组Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达均高于含雄激素培养组，空白组和含雄激素培养组均高于淫羊藿总黄酮治疗组，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　淫羊藿总黄酮能够下调雄兔干眼泪腺上皮细胞Capase-3、Capase-8 mRNA的表达，这可能是其治疗干眼的关键机制之一。     

菊花总黄酮对去势导致干眼症雄兔泪腺细胞Fas、FasL表达的影响

目的：观察菊花总黄酮对去势所致干眼症白兔泪腺凋亡相关基因蛋白Fas、FasL表达的影响,探讨菊花总黄酮治疗干眼症的作用机制。
　　方法：将150只雄性日本大耳白兔随机分为正常组( A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、雄激素对照治疗组(D组)和菊花总黄酮治疗组(E组)。 C组、D组、E组行双侧去势术建立白兔干眼症模型。 E组白兔用菊花总黄酮灌胃治疗,D组用雄激素肌肉注射,A组、B组、C组用生理盐水灌胃。分别于治疗后1,3,5mo每组处死10只,取材用与相关指标检测。全部白兔行 SchirmerⅠ试验,并检测泪膜破裂时间,处死后取泪腺组织,采用免疫组织化学法检测泪腺组织中凋亡相关基因蛋白Fas、FasL的表达,并计数凋亡细胞数量。
　　结果：E组SchirmerⅠ试验测量所得滤纸湿长明显高于C组(P<0.01),泪膜破裂时间明显长于C组(P<0.01)。 E组治疗1,3,5 mo后,泪腺导管及腺泡上皮细胞中Fas阳性表达的细胞数均明显低于C组,FasL阳性表达的细胞数均明显高于C组,细胞凋亡数量均明显低于C组(P<0.01)。结论：菊花总黄酮中主要成分为黄酮类物质,可显著抑制雄激素水平降低后白兔干眼症的发生,抑制泪腺细胞凋亡,维持泪腺基础分泌量和泪膜的稳定性。     

密蒙花总黄酮对去势雄鼠干眼症泪腺TGF-β_1及其基因表达的影响

目的观察密蒙花总黄酮对去势雄鼠导致干眼症泪腺TGF-β1及其基因表达的影响。方法90只健康1月龄SPF级Wistar雄性大鼠切除双侧睾丸及附睾建立干眼症模型;30只匹配大鼠切开阴囊而不切除睾丸作为假手术组。手术1周后,雄激素治疗组用丙酸睾酮注射液1 mg/kg股四头肌内注射,每3日1次（30只模型鼠）;密蒙花总黄酮治疗组以密蒙花总黄酮0.02 g/kg与生理盐水混悬液灌胃,每日1次（30只模型鼠）;正常组（30只正常鼠）、假手术组、模型组（30只）以生理盐水灌胃,每日1次。造模1、3、5个月后各组随机抽取10只大鼠处死,取双眼泪腺组织免疫组织化学法检测TGF-β1的表达,采用实时定量PCR（real-time PCR）法荧光定量检测TGF-β1mRNA的表达。结果造模5个月后,正常组和假手术组大鼠泪腺组织细胞中几乎无TGF-β1阳性表达,而模型组、雄激素治疗组和密蒙花总黄酮治疗组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1大量阳性表达,表现为大量棕黄色颗粒沉着。正常组、假手术组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均光密度值（OD）高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）;密蒙花总黄酮治疗组和雄激素治疗组大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均OD值大于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）;密蒙花总黄酮治疗组的大鼠泪腺组织细胞中TGF-β1的平均OD值小于雄激素治疗组,差异有统计学意义（P〈0.05）。TGF-β1mRNA在不同组大鼠泪腺组织细胞中的表达差异比较与TGF-β1表达相同（P〈0.05）。结论密蒙花总黄酮可抑制去势雄鼠干眼症泪腺炎症反应,上调TGF-β1mRNA的表达以增加TGF-β1的合成是其作用途径之一。     

NFkBp65、NOS2在去势雄兔角膜、结膜和泪腺中的表达及意义

基于免疫的炎症反应是各种类型干眼症发病的共同机制，本研究通过制作去势雄兔的干眼症模型，检测NFkBp65、NOS2在其角膜、结膜、泪腺组织的表达和意义，探讨干眼症组织破坏的发生机制。     

苯甲酸雌二醇对大鼠RIRI后Bcl-2和Bax表达的影响

目的：探讨外源性雌激素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用机制及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。 方法：雄性SD大鼠72只随机分为正常组（N,n=8）,单纯缺血再灌注组（IR,n=32）,苯甲酸雌二醇处理组(E₂+IR,n=32)。其中后两组又分为再灌注后6,24,48和72h组（每组8只）。通过前房灌注加压法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。常规HE染色观察视网膜组织形态变化,免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。 结果：E2+IR组视网膜组织损害程度在各时间点较IR组好转。IR组Bax蛋白在6h时已经开始表达,24h达高峰,48h表达开始下降,72h仍有部分表达;而E₂+IR组Bax蛋白的表达在各时间点上较IR组明显下调（P<0.01）;IR组Bcl-2蛋白的表达在再灌注6h时表达量最多,随时间延续表达量逐渐减少;Bcl-2蛋白的表达在各时间点上较IR组明显上调（P<0.01）。 结论：缺血再灌注损伤损害了视网膜组织结构。Bcl-2和Bax参与了视网膜缺血再灌注损伤的调控,苯甲酸雌二醇可上调Bcl-2的表达,下调Bax的表达,保护视网膜组织。     

黄芪对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中Bcl-2和Bax表达的影响

目的：探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)过程中黄芪对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响及作用机制。 方法：前房加压法制作实验性RIRI的大鼠模型。将66只SD大鼠随机分为正常组、缺血再灌注模型组、黄芪注射液治疗组。后两组各分为 6,12,24,48h和3d五个时间段,HE染色后光镜下观察视网膜组织变化, 采用免疫组织化学法与Western-blot法测定大鼠RIRI后视网膜中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。 结果：Bcl-2和Bax在正常视网膜组织中几乎不表达,在缺血再灌注6h开始表达,24h表达显著,48h开始下降,3d后表达已经明显减弱。黄芪注射液治疗组各观察指标变化趋势基本与单纯缺血再灌注组相似。黄芪注射液治疗组与模型组比较,Bcl-2表达均明显增强,Bax表达均明显减弱,两组间比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。 结论：黄芪注射液预处理可使神经节细胞Bcl-2表达增强,Bax表达减弱,减少神经节细胞凋亡,对RIRI神经节细胞有明显的保护作用。     

Bcl-2和Bax在结膜松弛症患者结膜组织中的表达

目的：研究Bcl-2和Bax在结膜松弛症患者的结膜组织中的表达状况。

方法：HE染色观察松弛结膜组织的组织特点,免疫组织化学方法检测20例结膜松弛症患者松弛结膜组织中Bcl-2和Bax的表达状况,并与10例正常结膜组织进行比较。

结果：松弛结膜组织鳞状上皮增生间质中有淋巴、浆细胞浸润,Bcl-2在松弛结膜组织中表达与对照组比较差别无显著性意义(P>0.05),Bax在松弛结膜组织中表达明显增加,与对照组比较差别有显著性意义(P<0.05),经Spearman等级相关分析(r=0.432,P>0.05),Bcl-2与Bax阳性表达间无相关性。

结论：Bcl-2和Bax表达失衡可能在结膜松弛症的发生和发展中起着重要的作用。     

银杏叶提取物对H2O2诱导的晶状体上皮细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(EGb761)对晶状体上皮细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:将离体培养的SD大鼠的晶状体上皮细胞分成3组:实验组用H2O2 EGb761处理,对照组用H2O2处理,空白对照组未做任何处理。用免疫组化的方法检测上皮细胞Bcl-2,Bax的表达,分析实验组、对照组和空白对照组的表达情况。结果:Bcl-2蛋白表达的阳性细胞率:实验组随时间的延长而上升,24h时为(20.7±1.4)%,对照组则随时间的延长而下降,24h时为(2.6±0.6)%,空白对照组为(6.8±1.1)%;Bax蛋白表达的阳性细胞率:实验组随时间的延长无明显变化,24h时为(10.7±0.9)%;对照组则随时间的延长而上升,24h时为(33.4±4.6)%,空白对照组为(4.6±0.8)%。结论:EGb761通过使晶状体上皮细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bcl-2/Bax减少,阻止氧化损伤所致的晶状体上皮细胞凋亡;细胞凋亡可能与白内障形成有关,EGb761在早期白内障形成中可能起抑制作用。     

密蒙花滴眼液对去势雄兔泪腺细胞炎症因子的影响

目的：观察不同浓度密蒙花滴眼液对去势雄兔泪腺细胞炎症因子TNF-α、IL-1β的影响,探讨不同浓度密蒙花滴眼液对去势雄兔干眼症模型的疗效。

方法：将密蒙花原药材制备成低、中、高3种浓度滴眼液。将42只健康成年新西兰长耳白兔(雄性),随机分为A：空白组; B：模型组; C：低浓度密蒙花滴眼液组; D：中浓度密蒙花滴眼液组; E：高浓度密蒙花滴眼液组; F：安慰剂滴眼液组; G：睾酮组等7组,每组6只。除A组外其余6组实验用兔行双侧睾丸及附睾切除术。从术后第3天开始C、D、E、F组分别予相应滴眼液滴双眼。各组实验用兔,分别于术前和术后第4wk各进行一次Schirmer I试验(SIT)和泪膜破裂时间(BUT)测定。采用免疫组化法对泪腺细胞炎症因子TNF-α和IL-1β的表达进行检测。

结果：1)SIT与BUT值比较：术后C组与D、E、G组比较,有统计学意义(P<0.01); D、E、G组间相比较,无统计学意义(P>0.05); 2)术后各组炎症因子TNF-α、IL-1β比较：C组与D、E、G组比较,有统计学意义(P<0.05); D、E、G组间相比较,无统计学意义(P>0.05)。

结论：1)密蒙花滴眼液具有与雄激素相似的抑制细胞炎症因子表达的作用,但其作用弱于雄激素; 2)中、高浓度密蒙花滴眼液对TNF-α和IL-1β的抑制作用要强于低浓度密蒙花滴眼液,但中、高浓度密蒙花滴眼液的抑制作用差别不明显。     

Effect of Buddleja officinalis eye drops to inflammatory factors of lacrimal gland cells of castrated male rabbit with dry eye

AIM: To observe the effect of different concentrations Buddleja offcinalis eye drops (BOED) to inflammatory factors of lacrimal gland cells of castrated male rabbit with dry eye. METHODS: Forty-two healthy adult New Zealand rabbits were randomly divided into 7 groups, 6 rabbits each group. Group A: blank group, Group B: model group, Group C: low concentrations BOED group, Group D: medium concentrations BOED, Group E: high concentrations BOED, Group F: the placebo group, Group G: testosterone groups. All rabbits of group B to G were cut off bilateral testis and epididymis except group A. The rabbits of group C, D, E and F were dropped relevant eye drops except groups A and B. All rabbits were tested Schimer I test (SIT) and break-up time (BUT) before operation and 4wk after operation. Expressions of inflammatory factors of TNF-α, IL-1β from lacrimal gland cells were checked in immunohistochemical staining method. RESULTS: 1) Comparison of SIT and BUT: Compared with the groups D, E and G, group C had statistical significance (P<0.01). Compared with group D and E, G groups, there was no significant difference among those group before and after operation (P>0.05); 2) Comparison of inflammatory factors of TNF-α, IL-1β after operation: Compared with value of the average optical density of TNF-α and IL-1β of group C, those of group D, E and G were obviously different after operation (P<0.05). Compared D and with E, G groups, there was no significant difference between those group after operation (P>0.05).     

中药复光颗粒对家兔视神经夹伤后Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察复光颗粒对家兔受损视神经的保护作用。方法:采用视神经夹伤方法,建立家兔外伤性视神经病变(traumatic optic neuropathy,TON)模型,通过测定凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,观察复光颗粒对受损视神经的影响。结果:视神经夹伤后,凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达及Bcl-2/Bax值在复光颗粒组间(低、高剂量组)比较无显著差异性(P>0.05)。而复光颗粒各组与模型对照组间均有显著差异(P<0.05),复光颗粒各组较模型组Bcl-2表达增加,Bax表达减少。结论:在本实验条件下,复光颗粒具有上调抗凋亡基因Bcl-2和下调促凋亡基因Bax表达的作用,可减轻视神经损伤的作用。     

盐酸多奈哌齐对眼挫伤后大鼠视网膜Bcl-2和Bax mRNA表达的调节

目的:建造视网膜挫伤模型,探讨多奈哌齐对眼挫伤大鼠视网膜保护作用的可能机制。方法:选2mo龄SD雌性大鼠24只,随机分为为3组,每组8只,正常对照组(A组)、多奈哌齐处理组(B组)和蒸馏水组(C组)。A组不处理,B组和C组用重击法致左眼挫伤。伤后第2d,B组用1g/L的盐酸多奈哌齐5mL/kg灌胃,2次/d,C组用同体积的蒸馏水灌胃。连续给药7d,各组于第8d取材。应用RT-qPCR法检测视网膜组织中Bcl-2和Bax mRNA的表达变化。结果:多奈哌齐组视网膜组织内Bcl-2 mRNA的表达水平在挫伤后7d有下降,与正常组相比有显著差性差异(P<0.01),与蒸馏水组相比也有显著差性差异(P<0.05)。与Bcl-2的表达相反,多奈哌齐组Bax mRNA的表达显著高于正常组(P<0.01)但是低于蒸馏水组(P<0.05)。结论:多奈哌齐有可能具有保护眼挫伤大鼠视网膜的功能。     

针刺对干眼兔泪腺形态学及泪腺上皮细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的 探讨针刺对干眼兔泪腺形态学及泪腺上皮细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,分析针刺对干眼的作用机制.方法 取健康新西兰白兔18只随机分为空白组、模型组、针刺组,每组6只,空白组不作任何处理;模型组皮下注射氢溴酸东莨菪碱,每天4次,每次2 mg·kg-1共24 d;针刺组在与模型组同样处理的基础上进行针刺,每天1次,共14 d.不同时段观察各组泪液分泌试验检测泪液量的结果,光镜、电镜观察泪腺形态学变化,免疫组织化学检测泪腺组织中凋亡相关基因蛋白的表达.结果 泪液分泌试验检测泪液量结果显示在针刺第4、7、14天同时段针刺组与模型组相比明显升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);在针刺第14天时,针刺组与实验前相比,差异无统计学意义(P＞0.05).光镜、电镜示针刺组泪腺上皮细胞胞浆丰富,排列紧密,活动良好,与空白组接近.免疫组织化学检测显示与模型组比较,针刺组泪腺导管及腺泡上皮细胞中Bax的阳性细胞半定量评分值明显低,差异有统计学意义(P ＜0.05);Bcl-2的阳性细胞半定量评分值亦低,但差异无统计学意义(P＞0.05).与空白组相比,针刺组Bax、Bcl-2评分值差异均无统计学意义(均为P＞0.05).与模型组比较,针刺组的泪腺导管及腺泡上皮细胞中Fas、FasL的阳性细胞半定量评分值明显低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与空白组相比,针刺组Fas、FasL评分值差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 针刺通过抑制干眼兔泪腺组织的细胞凋亡及腺体萎缩,促进兔干眼模型的泪腺代谢,从而达到增加泪液分泌的作用.     

干眼症患者增多原因的初步调查

目的:了解干眼症患者的症状及出现干眼症原因的初步调查。方法:对2006-01/2007-01来我院就诊的眼科患者行基础泪液试验和泪膜破裂时间的测定,并分析形成干眼症的原因。结果:在所调查的1500例3000眼(男750例,女750例)门诊患者中,干眼症的患病率为34.60%(519例/1500例),其中男性患病率为13.00%(195例/1500例),女性患病率为21.60%(324例/1500例)。统计学分析显示,与干眼症形成的相关因素包括性别、年龄、职业、环境、眼病及是否伴有全身疾病。结论:眼科门诊患者的泪液分析有助于确定患者眼表的健康状况、影响患者泪液分泌的多种因素。     

角膜散光对干眼患者泪膜的影响

目的探讨角膜散光对干眼患者泪膜的影响。方法对临床确定为干眼的患者(除外其他任何眼病)进行电脑验光,筛查出存在散光的干眼患者和无任何散光的正视眼干眼患者,分别对其进行泪膜干涉成像仪检查(DR-1)、基础泪液分泌试验(SchirmerⅠtest,SⅠt)以及泪膜破裂时间测定(break-up time,BUT)。将所得到的数据进行统计学分析。结果散光的干眼患者与正视眼干眼患者DR-1及BUT结果比较其差异有统计学意义,但SⅠt结果差异无统计学意义;散光患者的DR-1及BUT、SⅠt结果与散光的屈光度之间不存在相关性;近视散光、远视散光患者的DR-1检查及BUT之间的差异无统计学意义;逆规和顺规散光患者相比其DR-1差异有统计学意义,BUT差异有统计学意义;斜轴和顺规散光患者相比其DR-1差异有统计学意义,BUT差异有统计学意义;逆规散光与斜轴散光的DR-1和BUT比较差异均无统计学意义。结论(1)角膜散光对干眼患者泪膜稳定性存在一定的影响;(2)逆规散光患者的泪膜稳定性较顺规散光和斜轴散光差。