人脑胶质母细胞瘤miR-4516表达与病人预后的关系

目的 探讨人胶质母细胞瘤（GBM）组织微小核糖核酸-4516(miR-4516)的表达情况及其与病人预后的关系。方法选取2015年1月～2019年5月手术切除的GBM组织89例和颅脑损伤内减压术切除的非肿瘤脑组织35例为对照组,采用qRTPCR检测miR-4516的表达水平,根据miR-4516表达水平的中位数分为高表达和低表达。GBM病人术后随访2年,记录生存情况。结果 GBM组织miR-4516表达水平[（5.32±1.75）]明显高于对照组[（1.13±0.45）;P<0.01]。术后2年随访,42例（47.19%）生存,47例47(52.81%)死亡。多因素Cox回归分析显示,miR-4516高表达是GBM生存预后病例的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示miR-4516高表达组2年累积生存率（27.45%）明显低于低表达组（73.68%;P<0.001）。结论 GBM组织miR-4516表达增高,其高表达是病人预后不良的危险因素。     

下调TTK表达改善胶质母细胞瘤裸鼠的生存预后

目的 探讨苏氨酸/酪氨酸激酶（TTK）在胶质母细胞瘤（GBM）中的表达变化及其作用。方法 计算机检索TCGA数据库,利用生物信息学技术分析GBM组织TTK的表达水平及其与病人生存预后的关系。免疫组化染色分析我院生物样本库中60例脑胶质瘤组织的TTK表达水平。体外培养U251细胞,慢病毒转染构建TTK低表达细胞系,利用Alarma blue试剂盒测定细胞增殖能力,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期。将不同TTK表达水平的U251细胞接种裸鼠构建移植瘤模型,分析TTK表达水平与移植瘤模型生存期的关系。结果 生信分析结果显示,GBM组织TTK表达水平明显高于低级别胶质瘤及正常脑组织（P<0.05）,TTK低表达GBM病人的总生存期更长（P<0.05）。我院60例胶质瘤中,高级别胶质瘤TTK高表达率（69.0%,29/42）明显高于低级别胶质瘤（16.7%,3/18;P<0.05）。下调TTK表达明显抑制U251细胞增殖、促进细胞凋亡（P<0.05）。TTK低表达裸鼠移植瘤模型的生存期明显延长（P<0.05）。结论 GBM组织...     

miR-182参与调节胶质母细胞瘤的凋亡、生长和分化（英文）

Glioblastoma multiforme(GBM)is a lethal,therapy-resistant brain cancer consisting of numerous tumor cell subpopulations,including stem-like glioma-initiating cells(GICs),which contribute to tumor recurrence following initial response to therapy.Here,we identified miR-182 as a regulator of apoptosis,growth,and differentiation programs whose expression level is correlated with GBM patient survival.Repression of Bcl2-like12(Bcl2L12),c-Met,and hypoxia-inducible factor 2α(HIF2A)is of central importance to miR-182 anti-tumor activity,as it results in enhanced therapy susceptibility,decreased GIC sphere size,expansion,and stemness in vitro.To evaluate the tumor-suppressive function of miR-182 in vivo,we synthesized miR-182-based spherical nucleic acids(182-SNAs);i.e.,gold nanoparticles covalently functionalized with mature miR-182 duplexes.Intravenously administered 182-SNAs penetrated the bloodbrain/blood-tumor barriers(BBB/BTB)in orthotopic GBM xenografts and selectively disseminated throughout extravascular glioma parenchyma,causing reduced tumor burden and increased animal survival.Our results indicate that harnessing the anti-tumor activities of miR-182 via safe and robust delivery of 182-SNAs represents a novel strategy for therapeutic intervention in GBM.     

miR-126表达水平及其基因启动子甲基化状态与胶质母细胞瘤术后复发的关系

目的 探讨miR-126表达水平及其基因启动子甲基化状态与胶质母细胞瘤（GBM）术后复发的关系。方法 收集2016年8月到2020年12月手术切除的GBM组织标本86例和同期颅脑损伤内减压术中切除非肿瘤脑组织30例，采用PCR和MSP法检测miR-126表达水平及其基因启动子甲基化状态。随访至2021年3月，随访时间2~56个月，中位随访时间24.0个月。术后定期复查MRI确定肿瘤复发和复发时间。结果 术后58例复发，复发率为67.44%。与非肿瘤脑组织相比，GBM组织miR-126表达水平明显降低（P<0.05），miR-126基因启动子甲基化率明显升高（P<0.05）。与未复发组相比，复发组GBM组织miR-126表达水平明显降低（P<0.05），同时miR-126基因启动子甲基化率明显升高（P<0.05）。生存曲线分析显示，miR-126甲基化组中位复发时间（16.0个月）较非甲基化组（39.0个月）明显缩短（P<0.05）。多因素logistic回归分析显示miR-126基因启动子高甲基化是GBM术后复发的独立危险因素（P<0.05）。ROC曲线分析显示，miR-126表达水平预测GBM术后复发的曲线下面积为0.894（95% CI 0.837~0.950；P<0.05），最佳截断值为0.830，灵敏度和特异度分别为90.0%和75.6%。结论 GBM组织miR-126表达水平普遍降低，与其基因启动子异常甲基化有关。检测miR-126表达水平对GBM术后复发有良好的预测价值。     

胶质母细胞瘤氧化应激相关基因的表达分析

目的 探讨胶质母细胞瘤（GBM）氧化应激关键基因的表达变化。方法 从UCSC Xena数据库下载167例GBM基因表达谱数据（TCGA-GBM）,从GeneCards数据库下载氧化应激基因集（168个氧化应激相关基因）;通过富集分析确定差异表达基因（DEGs）,建立蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络识别关键基因,利用Spearman相关系数对免疫因子和免疫检查点与关键基因进行相关性分析。结果 鉴定出两种与氧化应激相关的GBM分子亚型（Cluster1和Cluster2）,Cluster1型GBM生存期明显高于Cluster2型（P<0.05）。共筛选出54个DEGs,在细胞因子/趋化因子相关功能中显著富集。PPI网络鉴定出10个关键基因,即CSF2、CSF3、CCL7、LCN2、CXCL6、MMP8、CCR8、TNFSF11、IL22RA2和ORM1。大多数免疫因子和免疫检查点与关键基因呈正相关。结论 本文基于氧化应激相关基因将GBM划分为两个亚型,并且筛选出10个氧化应激基因,可能在GBM的发生、发展过程中起重要作用,也可能对GBM预后评估具有一定的价值。     

下调RNA去甲基化酶FTO的表达对胶质母细胞瘤干细胞功能的影响

目的 分析下调N⁶-甲基酰胺(m6A)去甲基化酶脂肪组织和肥胖相关蛋白(FTO)的表达对人胶质母细胞瘤干细胞(GSC)增殖与干性维持的影响。方法 构建稳定下调FTO表达的干细胞株,运用CCK-8法检测下调FTO对GSC细胞增殖的影响;应用神经球形成实验检测两组细胞神经球形成能力的变化;运用体外有限稀释实验检测两组细胞自我更新能力的影响;流式细胞术检测下调FTO对GSC细胞凋亡的调控作用。结果 CCK-8结果显示,与对照组相比,下调FTO表达后减慢了GSC细胞生长速度。成球实验结果表明实验组的GSC神经球大小和数量较对照组显著减少。体外有限稀释实验结果显示,下调FTO表达后神经球自我更新能力减弱;流式细胞术检测凋亡显示,下调FTO表达后增加了GSC细胞凋亡率。结论 下调FTO的表达可抑制GSC的生长与自我更新能力,靶向FTO可能是清除GSC的潜在策略之一。     

阻断NHE1抑制人胶质母细胞瘤细胞增殖和侵袭的研究

目的分析Na⁺/H⁺交换蛋白1（NHE1）抑制剂对癌基因BRAF野生型（BRAF^WT）和激活型BRAF^V600E突变的胶质母细胞瘤（GBM）细胞生长和侵袭能力的影响。 方法NHE1抑制剂Cariporide分别处理U251（BRAF^WT）和AM38（BRAF^V600E）GBM细胞系,乙酰甲酯化的2’,7’-双（2-羧乙基）-5（6）-羧荧光素荧光探针处理细胞并采用紫外分光光度计检测细胞在440 nm与490 nm的荧光强度,计算荧光强度比值以反映NHE1的活性,MTT法检测细胞增殖活性,基质胶-Transwell实验检测细胞侵袭能力。 结果AM38细胞的NHE1活性、增殖和侵袭能力均显著高于U251细胞,差异均有统计学意义（P=0.006、0.010、0.047）;Cariporide处理的U251和AM38细胞的NHE1活性、增殖和侵袭能力均显著低于溶剂二甲基亚砜处理的U251和AM38细胞,差异均有统计学意义（U251：P=0.012、0.023、0.044;AM38：P=0.006、0.001、0.038）。 结论采用Cariporide阻断NHE1活性可有效抑制BRAF^WT和BRAF^V600E突变型GBM细胞的增殖和侵袭。     

组织因子表达下调影响阿霉素诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的研究组织因子（TF）对阿霉素诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡的影响。方法以免疫印迹法检测TF表达。分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,以脂质体介导进行基因转染。以水溶性四唑盐法检测阿霉素的细胞毒性。以印迹法检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解。以Hochest33342染色荧光显微镜检测凋亡细胞。结果人胶质母细胞瘤细胞系U373MG高表达TF。转染TFsiRNA-pSUPER表达载体的U373MG细胞及对照细胞分别以阿霉素处理,可见转染细胞较对照细胞Caspase-3、PARP的裂解增强。以不同浓度阿霉素处理48h后,可见转染后的U373MG细胞的存活数较对照细胞明显减少（P〈0.05）。以Hochest33342染色检测到转染后的U373MG细胞经阿霉素处理后的凋亡细胞数显著增多（P〈0.05）。结论人胶质母细胞瘤U373MG中TF异常高表达的下调,可增强阿霉素诱导的细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性。     

P53、PTEN、Ki-67在原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨P53、PTEN、Ki-67蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达差异及其意义。方法采用免疫组化方法检测人原发性和继发性胶质母细胞瘤标本及正常人脑组织标本中P53、PTEN和Ki-67蛋白的表达情况,并分析上述蛋白的表达差异。结果在正常脑组织标本中,PTEN蛋白阳性率为100%;P53和Ki-67均表达阴性。原发性和继发性胶质瘤标本中,P53蛋白阳性率分别为28.6%、62.5%;PTEN蛋白阳性率分别为78.5%、37.5%;Ki-67蛋白阳性率分别为35.7%、68.8%。P53和Ki-67在原发性胶质母细胞瘤与正常脑组织之间表达均有显著差异(均P0.05)。P53、PTEN和Ki-67蛋白在继发性胶质母细胞瘤和正常脑组织之间以及原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤之间表达均有显著差异(均P0.05)。结论 P53、PTEN及Ki-67蛋白在胶质母细胞瘤的发生、发展中起重要作用,联合检测三者表达可为判断不同类型胶质母细胞瘤提供依据。     

Proliferative potential of vascular components in human glioblastoma multiforme

Summary Sixteen patients with glioblastoma multiforme received a 1-h intravenous infusion of 5-bromodeoxyuridine (BrdU), 150–200 mg/m² at the start of surgery, to label S-phase cells in tumor tissue. Labeled cells of vascular components and of tumor parenchyma were detected in excised tumor specimens by indirect immunoperoxidase staining using anti-BrdU monoclonal antibodies followed by periodic acid-Schiff staining. The BrdU labeling index (LI, defined as the percentage of labeled cells in relation to the total number of cells scored) was calculated separately for vascular components and tumor parenchyma in each specimen. The BrdU LI of vascular components of glioblastoma multiforme was remarkably higher than that of normal brain (1.1%–8.7% vs.<0.05%). The mean BrdU LIs of vascular components and tumor cells in eight primary glioblastomas were 4.5±0.8% (mean±SE) and 9.9±1.1%, respectively, while the corresponding BrdU LIs in eight recurrent tumors were 2.7±0.5% and 9.3±0.7%. The differences in the BrdU LIs of primary and recurrent tumors were not statistically significant, but the BrdU LI of vascular components was consistently much lower than that of tumor cells. BrdU labeling of vascular components was inconsistent and occurred mostly in glomerular-shaped vessels, but only about 20% of them contained labeled cells. These results suggest that unusual vascular proliferation, such as the formation of glomerular-shaped vessels and endothelial or adventitial proliferation, in glioblastoma multiforme may have been programmed to slow down or even to cease at a certain stage, and is not likely to be the result of neoplastic transformation.Supported in part by grant PDT-159 from the American Cancer Society and by grant CA 13525 from the National Cancer Institute     

H19在多形性胶质母细胞瘤中的表达及对细胞系增殖、侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(Long noncoding RNAs,LncRNAs)H19在人多形性胶质母细胞瘤((glioblastoma mutliforme,GBM)中的表达及其对U87-GBM生物学功能的影响及作用机理。方法实时荧光定量核酸扩增检测系统(Realtime Quantitative PCR Detecting System,qPCR)检测H19在GBM表达;CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测U87细胞增殖;流式细胞技术(Flow Cytometry,FCM)检测U87细胞凋亡及细胞周期;侵袭小室(transwell)检测U87细胞迁移和侵袭.蛋白质印迹法(Western blot)法检测P53表达。结果 H19在GBM中高表达,上调H19促进GBM的增殖、侵袭、迁移;抑制凋亡;增加了细胞周期S期比例;抑制了P53的表达。结论 H19促进GBM的致癌性。     

Molecular pathogenesis of glioblastoma multiforme: Nuances,obstacles, and implications for treatment

Glioblastoma multiforme(GBM), the literal apogee on the hierarchy of malignant brain tumors, remains one of the greatest therapeutic challenges in oncology andmedicine. Historically this may be contextualized in the fact that the medical and scientific communities have had a very elementary understanding of its intricate and complex pathophysiology. The last 10-15 years have yielded a number of studies that have elucidated much of the molecular and genetic complexities of GBM that underlie its pathogenesis. Excitingly, some of these discovered genetic mutations and molecular profiles in GBM have demonstrated value in prognostication and utility in predicting response to treatment. Despite this, however, treatment options for patients have remained somewhat limited. These treatment options are expected to expand with the availability of new data and with the transition of novel treatment modalities from animal to human studies. This paper will have a threefold objective: provide an overview of the traditional paradigm in understanding and treating GBM, describe recent discoveries in the molecular pathogenesis of GBM against this historical backdrop, and acquaint the reader with new treatment modalities that hold significant therapeutic potential for patients.     

lncRNA MLK7-AS1通过抑制miR-375的表达促进胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）MLK7-AS1在人脑胶质瘤组织中表达及其对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响。方法 选择2016~2017年手术切除的脑胶质瘤组织标本45例,2007版WHO分级Ⅰ级8例,Ⅱ级15例,Ⅲ级10例,Ⅳ级12例。另选择其中10例瘤旁正常脑组织作对照。体外培养U251细胞和人正常星形胶质细胞（NHA）。U251细胞根据转染质粒分成四组:转染miR-375 mimic组、转染si-MLK7-AS1组、同时转染miR-375 inhibitor和si-MLK7-AS1组以及只转染miR-375 inhibitor组。RT-qPCR检测MLK7-AS1和miR-375的表达水平;荧光素酶报告基因实验验证MLK7-AS1与miR-375之间的关系;CCK-8法检测U251细胞增殖活性,Transwell实验检测U251细胞侵袭能力。结果 高级别胶质瘤组织MLK7-AS1表达水平明显高于低级别胶质瘤组织（P<0.05）,而后者明显高于瘤旁正常脑组织（P<0.05）;高级别胶质瘤组织miR-375表达水平明显低于低级别胶质瘤组织（P<0.05）,而后者明显低于瘤旁正常脑组织（P<0.05）。U251细胞MLK7-AS1表达水平明显高于NHA（P<0.05）,miR-375表达水平明显低于NHA（P<0.05）。序列分析显示MLK7-AS1和miR-375 存在特异性结合序列,荧光素酶报告基因实验表明U251细胞MLK7-AS1负调控miR-375表达。沉默MLK7-AS1表达通过上调miR-375表达明显抑制U251细胞增殖和侵袭（P<0.05）。结论 lncRN AMLK7-AS1可能通过调节miR-375的表达水平在人脑胶质瘤中发挥着促癌的作用     

替莫唑胺通过TFRC抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭

目的 探讨转铁蛋白受体（TFRC）在替莫唑胺抑制U87胶质瘤细胞增殖和侵袭中的作用。方法 体外培养U87胶质瘤细胞,加入50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L替莫唑胺作用;构建control siRNA、siTFRC转染U87细胞沉默TFRC表达,构建pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1/TFRC转染U87细胞过表达TFRC;利用CCK-8方法检测U87细胞增殖;利用Transwell小室实验检测U87细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR和免疫印迹法检查U87细胞TFRC mRNA和蛋白表达。结果 与空白组相比,替莫唑胺处理后,U87细胞的增殖和侵袭能力显著下降（P<0.05）,TFRC mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,当替莫唑胺浓度为200 μmol/L时,对U87细胞的抑制能力最强（P<0.05）。当利用pcDNA3.1/TFRC过表达U87细胞TFRC处理后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著下降（P<0.05）;而当利用siTFRC沉默U87细胞TFRC表达后,替莫唑胺对U87细胞增殖和侵袭的抑制能力显著增强（P<0.05）。结论 替莫唑胺可能通过抑制TFRC的表达而抑制U87胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

过表达MiR-494抑制脑胶质瘤细胞U87的增殖

目的观察微小RNA-494(miR-494)对脑胶质瘤细胞U87增殖能力的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测5例瘤旁组织和14例胶质瘤样本中miR-494的表达水平,并且检测其在6种胶质瘤细胞系中的表达;将100 nmol/L miR-494 mimics瞬时转染至脑胶质瘤U87细胞,qRT-PCR检测miR-494表达情况;采用四唑盐比色法(MTT)检测U87细胞增殖情况;流式细胞术(FCM)检测对U87细胞周期的影响。结果与瘤旁脑组织相比,miR-494在胶质瘤中呈现低表达;U87细胞转染48 h后,miR-494 mimics组miR-494表达为对照组的357倍(P0.05);与对照组相比,miR-494 mimics转染后抑制了U87细胞的增殖能力(P0.05);S期细胞显著减少,而G1期细胞则明显增多。结论 miR-494在胶质瘤中低表达,过表达miR-494 mimics有效抑制了U87细胞的增殖,调节细胞周期S期降低G1期增多,提示miR-494有望成为胶质瘤治疗的分子靶点。     

miR-103a-3p过表达靶向负调控PDK4抑制胶质瘤生长及侵袭

目的 探讨miR-103a-3p过表达对胶质瘤C6细胞恶性生物学行为的影响及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法 体外培养鼠源性C6胶质瘤细胞,转染miR-103a-3p mimics质粒过表达miR-103a-3p,转染miR-103a-3p mimics+pcDNA-PDK4质粒分析PDK4过表达对miR-103a-3p过表达的影响;EDU法检测细胞增殖活性;qRT-PCR检测miR-103a-3p、PDK4 mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;免疫印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。取40只裸鼠,其中20只皮下注射未转染质粒的C6细胞、20只皮下注射转染miR-103a-3p mimics质粒的C6细胞构建移植瘤模型,分析miR-103a-3p mimics过表达对移植瘤生长的影响。结果 生物信息学及双荧光素酶试验证实PDK4是miR-103a-3p的靶点。过表达miR-103a-3p明显降低C6细胞PDK4、Ki67、PCNA、N-cadherin、vimentin表达水平（P<0.05）,明显抑制C6细胞增殖活性、侵袭能力（P<0.05）,明显增加C6细胞E-cadherin表达水平、细胞凋亡率（P<0.05）。过表达PDK4明显抑制过表达miR-103a-3p对C6胶质瘤细胞的作用（P<0.05）。过表达miR-103a-3p明显抑制裸鼠移植瘤生长（P<0.05）,抑制肿瘤组织PDK4、Ki67、vimentin表达（P<0.05）。结论 过表达miR-103a-3p通过靶向抑制PDK4表达,一方面抑制胶质瘤细胞增殖、促进胶质瘤细胞凋亡,从而抑制胶质瘤生长;另一方抑制胶质瘤上皮-间质转化过程,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。     

Monoclonal antibody against human glioblastoma multiforme (U-87MG) immunoprecipitates a protein of molecular mass 38 kDa and inhibits tumor growth in nude mice

A monoclonal antibody 6DS₁ against a human glioblastoma multiforme cell line U-87MG recognizes a tumor-specific, cell surface antigen of human glioblastoma cell lines. Partial cross-reactivity is observed with two human neuroblastoma cell lines, SK-N-SH and SK-N-MC, with little or no reactivity towards a rat glioma cell line C6 or normal human adult and fetal brain tissues. The antibody recognizes an antigen of molecular mass 38 kDa as inferred from Western blot analysis and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis of the immunoprecipitate. The monoclonal antibody 6DS₁ inhibits both the attachment to substratum and growth of U-87MG cells. It strongly cross-reacts with xenotransplants of U-87MG cells and inhibits tumorigenesis (subcutaneous implants of U-87MG cells) in nude mice.