L-苏糖酸镁增强恩替卡韦对HBV感染小鼠的抗病毒作用及其机制

目的：观察L-苏糖酸镁（MLT）是否可增强恩替卡韦（ETV）对乙型肝炎病毒（HBV）感染小鼠的抗病毒作用,并初步探讨其机制。方法：采用高压水动力法经尾静脉注射携带1.3拷贝HBV基因组（ayw亚型）的重组8型腺相关病毒建立HBV持续感染的C57BL/6小鼠模型。成模后分为模型组、MLT组（1.2 g·kg^-1 L-苏糖酸镁胶囊）、ETV组（75 μg·kg^-1恩替卡韦片）、联合处理组（1.2 g·kg^-1 L-苏糖酸镁胶囊+75 μg·kg^-1恩替卡韦片）,每组8只;另选取8只未经病毒感染的正常小鼠作为对照组,连续给药4周。采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;采用荧光定量PCR法检测小鼠肝脏组织及血清中HBV DNA拷贝数;分离小鼠外周血CD8+T细胞,检测小鼠血清及CD8+T细胞中Mg²⁺含量,并采用流式细胞仪检测小鼠外周血CD8+T细胞中表面分子程序性死亡受体1（PD-1）、自然杀伤细胞活化受体（NKG2D）、CD95和CD38表达水平。结果：与对照组比较,模型组小鼠血清和CD8+T细胞中Mg²⁺含量及CD8+T细胞中表面活化性分子NKG2D和CD38表达水平明显降低（P<0.05）,而抑制性分子PD-1和CD95表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,各给药组小鼠血清HBsAg、HBeAg水平及肝脏组织和血清中HBV DNA拷贝数均明显降低（P<0.05）,且联合处理组小鼠各指标改善效果最好;与模型组比较,MLT组和联合处理组小鼠血清及CD8+T细胞中Mg²⁺含量及CD8+T细胞表面活化性分子NKG2D和CD38表达水平明显升高（P<0.05）,而抑制性分子PD-1和CD95表达水平明显降低（P<0.05）,但ETV组小鼠各指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论：MLT可增强ETV对HBV感染小鼠的抗病毒作用,其机制可能是MLT可引起CD8+T细胞内Mg²⁺含量增加,提高CD8+T细胞活性,进而更加有效地清除HBV。     

镁离子转运蛋白1在脓毒症患者外周血CD8+T淋巴细胞中的表达及其意义

目的:探讨镁离子转运蛋白1(MagT1)在脓毒症患者外周血CD8⁺T淋巴细胞中的表达水平及其作用。方法:收集2018年3月至2021年5月于东莞市滨海湾中心医院就诊的96例脓毒症患者资料,根据感染及循环衰竭程度将脓毒症患者分为普通脓毒症组(n=39)、严重脓毒症组(n=33)和脓毒性休克组(n=24),另取同期健康者为对照组(n=30)。分离培养各组患者外周血CD8⁺T细胞,检测外周血和CD8⁺T细胞中Mg²⁺浓度;qRT-PCR检测CD8⁺T细胞中多种Mg²⁺转运体(TRPM7、TRPM6、Mrs2p、SLC41A1、SLC41A2、MagT1及ACDP2)mRNA表达水平;Western blot检测CD8⁺T细胞中MagT1表达水平;流式细胞术检测CD8⁺T细胞表面抑制受体PD-1、Tim-3和活化受体NKG2D、HLA-DR表达水平;Pearson相关性分析MagT1与PD-1、Tim-3、NKG2D及H...     

microRNA-9-5p靶向MEF2C对腺泡状横纹肌肉瘤细胞生物学行为的影响

目的：探讨microRNA-9-5p （miR-9-5p）靶向肌细胞增强因子2C （MEF2C）对腺泡状横纹肌肉瘤（ARMS）细胞生物学行为的影响,为ARMS的分子诊断和靶向治疗提供依据。方法：qRT-PCR法检测ARMS组织和细胞中miR-9-5p和MEF2CmRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因检测293T细胞中荧光素酶活性,Western blotting法检测细胞中MEF2C蛋白表达水平。结果：ARMS组织和细胞中miR-9-5p表达水平高于正常骨骼肌组织和HSKMC细胞（P<0.05）。与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中miR-9-5p表达水平降低（P<0.01）,细胞增殖率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞侵袭和迁移数降低（P<0.05）。加入miR-9-5p后,共转染MEF2C-3'-UTR-WT的293T细胞中荧光素酶活性降低（P<0.01）;与miR-NC组比较,miR-9-5p抑制剂组RH30细胞中MEF2C mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。ARMS组织中MEF2C mRNA表达水平低于正常骨骼肌组织（P<0.01）,且与ARMS组织中miR-9-5p表达呈负相关关系（r=-0.542,P<0.05）;RH30细胞和PLA802细胞中MEF2CmRNA表达水平低于HSKMC细胞（P<0.01）。与转染对照质粒（EV）比较,转染MEF2C过表达质粒后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平升高（P<0.01）,细胞增殖率降低（P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞侵袭数降低（P<0.05）,细胞迁移数降低（P<0.01）。与转染si-NC比较,转染MEF2CsiRNA后RH30细胞中MEF2C mRNA表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,细胞侵袭数升高（P<0.01）,细胞迁移数升高（P<0.01）。结论：miR-9-5p通过直接靶向MEF2C mRNA的3'-UTR诱导mRNA降解而抑制MEF2C表达,从而促进RH30细胞的增殖、侵袭、迁移以及抗凋亡能力。     

新型冠状病毒肺炎患者Mg~(2+)水平对CD8~+T淋巴细胞和NK细胞功能的影响

目的:探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者血清及外周血单个核细胞(PBMCs)中Mg~(2+)水平变化及其对CD8~+ T淋巴细胞和NK细胞功能的影响。方法:选取2020年1月20日～2月20日期间鄂州市中心医院收治的COVID-19确诊患者165例,其中轻型/普通型组98例,重型/危重型组67例,另选34例健康体检者作为对照组。采集外周血,分离PBMCs,检测各组血清及PBMCs中Mg~(2+)水平;流式细胞术检测各组外周血CD8~+ T淋巴细胞和NK细胞亚群以及其表面抑制分子程序性死亡受体1(PD-1)和激活分子自然杀伤细胞活化受体(NKG2D)的表达水平;并分析Mg~(2+)水平与PD-1和NKG2D表达水平的相关性。结果:与对照组比较,轻型/普通型组和重型/危重型组患者血清及PBMCs中Mg~(2+)水平、CD8~+T淋巴细胞和NK细胞计数均明显降低(P<0.05),同时CD8~+T淋巴细胞和NK细胞表面抑制分子PD-1表达水平明显升高(P<0.05),而活化分子NKG2D表达水平均明显降低(P<0.05)。重型/危重型组患者以上各指标改变幅度又大于轻型/普通型组(P<0.05),且COVID-19患者Mg~(2+)水平与CD8~+T淋巴细胞和NK细胞表面分子PD-1表达水平呈负相关性(P<0.05),与NKG2D表达水平呈正相关性(P<0.05)。结论:COVID-19患者血清及PBMCs中Mg~(2+)水平会明显降低,其可能会导致CD8~+ T淋巴细胞和NK细胞功能被抑制。     

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的：探讨微小RNA-216a-5p（miR-216a-5p）靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白（WASL）对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法：收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物（miR-216a-5p）、模拟物阴性对照（miR-con）、沉默对照（si-con）、沉默WASL的小干扰RNA（si-WASL）、抑制物阴性对照（anti-miR-con）、miR-216a-5p抑制物（anti-miR-216a-5p）、miR-216a-5p及空载质粒（pcDNA）和miR-216a-5p及WASL过表达质粒（pcDNA-WASL）分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR（Real-time RT-qPCR）和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果：与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低（P<0.05）,WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,两者呈负相关关系（r=-0.317,P<0.01）。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平（P<0.01）和细胞增殖活性均明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群的分布及其与疾病活动和预后的关系

目的：分析系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中T淋巴细胞亚群的分布,并阐明其与SLE疾病活动性及预后的关系。方法：收集100例初治SLE患者外周血,分析不同临床亚型SLE患者（肾脏受累、皮肤受累、关节受累、血液系统受累和不同疾病活动期） T淋巴细胞亚群计数,评估初治SLE患者基线期临床指标与T淋巴细胞亚群计数之间的关系。100例患者中有78例随访12个月,随访患者中26例出现不良预后,比较预后不良组与临床缓解组SLE患者T淋巴细胞亚群计数;SLE患者T淋巴细胞亚群计数与临床指标的相关性分析采用Spearman相关分析。结果：狼疮肾炎组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数低于非狼疮肾炎组（P<0.05）,关节受累组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞计数低于非关节受累组（P<0.05）,皮肤受累组SLE患者CD8+T淋巴细胞计数低于非皮肤受累组（P<0.05）,血液系统受累组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数低于非血液系统受累组（P<0.05）。SLE患者基线水平CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数与SLE疾病活动性指标（SLEDAI）评分呈负相关关系（r=-0.391,P=0.001;r=-0.360,P=0.002;r=-0.315,P=0.008）;CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞计数与SLE患者血浆C3水平呈正相关关系（r=0.407,P=0.001;r=0.395,P=0.001;r=0.254,P=0.035）;CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数与SLE患者外周血淋巴细胞（LY）计数呈正相关关系（r=0.717,P=0.000;r=0.617,P=0.000;r=0.599,P=0.000）;重度活动组SLE患者CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞计数低于轻度活动组（P<0.05）;预后不良组SLE患者CD3+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞计数于临床缓解组（P<0.05）。结论：T淋巴细胞亚群分布在不同亚组SLE患者中各有不同,并且与SLE疾病活动性密切关联;CD4+T淋巴细胞计数与SLE患者预后不良有关,有可能成为SLE疾病活动性标志物和预后判断的标志物。     

冠心病患者心外膜脂肪组织和血浆中脂联素相关miR-371b-5p表达及其对脂肪细胞因子分泌的影响

目的：探讨冠心病（CAD）患者心外膜脂肪组织（EAT）和血浆中脂联素（APN,又称ADIPOQ）相关差异表达miR-371b-5p对脂肪细胞因子APN、Kruppel样因子4（KLF4）、白细胞介素6（IL-6）和单核细胞因子趋化蛋白1（MCP-1）分泌的影响,阐明miR-371b-5p在CAD中的作用机制。方法：收集CAD （CAD组,n=34）和非CAD （non-CAD组,n=16）患者的EAT和血液标本,采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测2组患者EAT和血浆中miR-371b-5p的表达水平。将诱导成功的3T3-L1前体脂肪细胞分为空白对照组（不做任何处理）、miR-371b-5p过表达组（转染miR-371b-5p模拟物）和miR-371b-5p抑制剂组（转染miR-371b-5p抑制剂）。qRT-PCR法检测转染24 h后各组3T3-L1前脂肪细胞中APN、KLF4、IL-6和MCP-1 mRNA表达水平,并对miR-371b-5p进行生物信息学分析。结果：与non-CAD组比较,CAD组患者EAT和血浆中miR-371b-5p表达水平均升高（P<0.01）。与空白对照组比较,miR-371b-5p过表达组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4 mRNA表达水平降低（P=0.043,P=0.045）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平升高（P=0.037,P=0.041）;miR-371b-5p抑制剂组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4mRNA表达水平升高（P=0.025,P=0.027）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平降低（P=0.039,P=0.041）。miR-371b-5p预测靶基因富集于多个生物学功能及过程,KEGG通路主要富集于脂肪细胞因子等信号通路;蛋白互作,miR-371b-5p预测靶基因APN、瘦素（LEP）和AKT1编码蛋白位于互作网络中核心位置。结论：CAD患者EAT中过表达miR-371b-5p转染成熟的3T3-L1脂肪细胞后可使细胞的抗炎因子表达水平降低,炎性因子表达水平升高,miR-371b-5p有望成为CAD治疗的新靶点。     

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗循环血中sPD-1/sPD-L1与T淋巴细胞亚群相关性分析

目的检测慢性乙型肝炎CHB患者循环血可溶性程序性死亡因子sPD-1/可溶性程序性死亡因子配体-1sPD-L1的水平表达,了解抗乙肝病毒治疗对CHB患者循环血sPD-1/sPD-L1表达水平的影响,分析sPD-1/sPD-L1与ALT、AST、HBV DNA水平间的相关性,探讨sPD-1/sPD-L1水平与CHB患者循环血T淋巴细胞亚群间的关系。方法采用酶联免疫法检测各观察时点的sPD-1/sPD-L1水平表达,运用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量,采用化学发光法检测乙肝病毒感染标志物,及运用全自动生化分析仪测定肝功能指标。结果治疗前CHB患者循环血sPD-1、sPD-L1表达水平,较健康体检者组及HBV携带者组高表达（P<0.01）;随着抗乙肝病毒治疗时间的延长,其表达水平逐渐下降,在抗乙肝病毒治疗第24周时循环血sPD-1、sPD-L1表达水平较治疗前显著下调（P<0.01）,较健康体检者组、HBV携带者组比较差异无统计学意义（P>0.05）。治疗前CHB患者ALT、AST、TBIL表达水平及HBV DNA载量与sPD-L1水平间呈正相关;治疗24周后CHB患者循环血中ALT、AST、TBIL表达水平、HBV DNA载量与sPD-1/sPD-L1水平间均无相关性。治疗前CHB患者循环血sPD-1与CD3+T与CD4+T、CD8+T淋巴细胞亚群水平正相关;治疗24周后CHB患者循环血中sPD-1、sPD-L1水平与CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞亚群水平间均无相关性。结论抗病毒治疗能抑制HBV DNA复制并调节CHB患者循环血中sPD-1、sPD-L1及T淋巴细胞各亚群水平表达,可在一定程度上反应肝组织损伤程度和HBV的复制水平。     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

乳双歧杆菌M8对免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响

目的：探讨给予乳双歧杆菌M8后免疫抑制模型大鼠淋巴细胞亚群百分比、T淋巴细胞转化增殖活性、血清免疫球蛋白和细胞因子表达水平，阐明乳双歧杆菌M8对免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响。方法：50只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、低剂量乳双歧杆菌M8组、中剂量乳双歧杆菌M8组和高剂量乳双歧杆菌M8组，每组10只。各组大鼠适应性灌服益生菌乳双歧杆菌M8 6 d，第7天开始除空白对照组外，其余4组大鼠每日给予环磷酰胺（CTX），连续3 d，构建大鼠免疫抑制模型，造模完成后低、中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠给予0.01、0.10和1.00 g乳双歧杆菌M8，空白对照组和模型对照组大鼠灌服等体积无菌生理盐水。流式细胞术检测各组大鼠全血淋巴细胞亚群（CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞）百分比，CCK-8法检测各组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性，ELISA法检测各组大鼠血清免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白G （IgG）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果：与空白对照组比较，模型对照组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞百分比明显降低（P<0.05）；与模型对照组比较，高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比明显升高（P<0.05或P<0.01），B淋巴细胞和NK细胞百分比明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较，模型对照组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性降低（P<0.01）；与模型对照组比较，中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性升高（P<0.01）。与空白对照组比较，模型对照组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平降低（P<0.01）；与模型对照组比较，中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论：灌服乳双歧杆菌M8可以提高免疫抑制模型大鼠的特异性和非特异性免疫应答调控能力，乳双歧杆菌M8对免疫抑制大鼠免疫调节有一定促进作用。     

人环状RNA＿0114428对脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用及其机制

目的：探讨人环状RNA＿0114428 (circ＿0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ＿0114428通过调节微小RNA-139-5p (miR-139-5p)/转化生长因子β受体2 (TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法：体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ＿0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L^-1 LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ＿0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、 LPS+circ＿0114428沉默(LPS+si-circ＿0114428)组、LPS+circ＿0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ＿0114428+in-NC)组和LPS+circ＿0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ＿0114428+in-miR-139-5p)...     

miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的：探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G (NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。方法：通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5pmimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性...     

过表达miR-27a对急性脑梗死大鼠海马神经元损伤的影响及其机制

目的 探究过表达miR-27a对急性脑梗死大鼠海马神经元损伤的影响及可能机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Agomir阴性对照组(Agomir-NC组)和miR-27a agomir组(Agomir组),每组15只。采用改良Longa线栓法构建急性脑梗死大鼠模型,于造模前1天和造模成功时,分别经侧脑室注射15 mg/kg的agomir-NC或miR-27a agomir。术后72 h,采用Zea-Longa评分法对大鼠神经功能缺损进行评分;采用氯化三苯基四氮唑染色法(TTC)测量大鼠脑梗死面积;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠海马组织细胞凋亡水平;qRT-PCR法检测各组大鼠海马组织miR-27a的表达水平;流式细胞术(FCM)检测各组大鼠海马组织中Iba-1⁺/CD68⁺小胶质细胞所占百分比;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α及iNOS的表达水平;Western blotting检测大鼠海马组织中TLR4信号通路相关蛋白TLR4、MyD...     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞凋亡相关因子的表达及其与乙肝慢性化的关系

目的 探讨外周血淋巴细胞凋亡的不同路径及其在HBV感染慢性化过程中的作用。 方法 应用实时荧光定量PCR对9例慢性HBV携带者(ASC组),48例慢性乙型肝炎患者(CHB组),24例肝硬化(LC组)患者和20例正常对照者(NC组)外周血单个核细胞(PBMC)中的凋亡相关基因(FAS、CASP8、CYCS、CASP9、CASP3)进行检测,同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中的凋亡相关基因在蛋白水平的表达。 结果 CHB组和ASC组PBMC中凋亡相关基因mRNA水平的表达较NC组和LC组明显升高(P<0.05),CHB组和ASC组间差异无统计学意义(P>0.05),LC组高于NC组(P<0.05); CHB组和ASC组血浆中凋亡相关基因蛋白水平的表达较NC组和LC组明显升高(P<0.008 3),CHB组和ASC组间差异无统计学意义(P>0.008 3),LC组表达量较NC组升高(P<0.008 3)。 结论 HBV感染可诱导外周血单个核细胞凋亡,内源性路径和外源性路径均参与其中,PBMC的凋亡在HBV感染慢性化过程中发挥了重要作用。     

LncRNA MALAT1通过miR-34c/SATB2轴对脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的：探讨长非编码RNA肺癌转移相关转录本1（LncRNA MALAT1）通过微小RNA（miR）-34c/特异AT序列结合蛋白2（SATB2）轴对脂肪来源的间充质干细胞（ADSCs）成骨分化的影响,并阐明其作用机制。方法：人ADSCs转染Lenti-NC、Lenti-MALAT1、sh-NC、sh-MALAT1、miR-NC和miR-34c,RT-PCR法检测ADSCs中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表达水平;miRcode和TargetScan 7.1网站预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-34c与LncRNA MALAT1、miR-34c与SATB2之间的靶向结合作用;Western blotting法检测ADSCs中成骨标志物Runt相关转录因子2（Runx2）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙蛋白（OCN）表达水平;碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S（ARS）染色检测ADSCs中ALP和ARS水平及钙盐沉积。结果：与第0天比较,ADSCs成骨诱导第3、7、14和21天后,细胞中LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,miR-34c表达水平明显降低（P<0.05）。与Lenti-NC组和sh-NC组比较,Lenti-MALAT1组ADSCs中LncRNA MALAT1表达水平,Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平,ALP和ARS水平明显升高（P<0.01）,sh-MALAT1组上述指标明显降低（P<0.01）。与miR-NC+Lenti-NC组比较,miR-34c+Lenti-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,ALP和ARS水平明显降低（P<0.01）,miR-34c+Lenti-MALAT1组ADSCs中上述各项指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。与Lenti-NC+miR-NC组比较,Lenti-SATB2+miR-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平及ALP和ARS水平明显升高（P<0.01）,Lenti-SATB2+miR-34c组上述各项指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论：LncRNA MALAT1通过miRNA-34c/SATB2轴促进ADSCs的成骨分化。