单宁酸通过内质网应激途径增强顺铂抗肝癌细胞HepG2的作用

目的 探讨单宁酸(TA)与顺铂(CDDP)协同抗肝癌细胞HepG2的作用及其内质网应激(ERS)通路的激活情况.方法 将人肝癌细胞HepG2分为对照组、TA组、CDDP组、TA+ CDDP组(联合组),并在体外培养24 h.MTT法测定药物对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;药物联合作用指数、药物剂量降低指数和等效图解法分析两药物之间药效学的协同作用;4'6二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核变化;实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)和免疫印迹检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白(GRP) 78、GRP94的水平.结果 TA和CDDP对HepG2细胞生长均呈剂量依赖性抑制作用,其半数有效浓度(IC50)分别为360.00 μmol/L和1.80 μg/mL;用180.00μmol/L TA和0.90 μg/mL CDDP联合处理肝癌HepG2细胞后,能够加强对细胞生长的抑制作用;TA和CDDP具有协同抑制肝癌细胞生长的作用.与TA、CDDP组比较,联合组细胞皱缩、变圆加剧且凋亡细胞增多,细胞核固缩、边缘不规则、致密浓染及核裂解碎片增多;细胞GRP78、GRP94的表达均上升.结论 TA能够增强CDDP的抗肝癌HepG2细胞作用,该协同作用的机制可能与激活ERS通路有关.     

下调miR 221 5p靶向ALDH1A2基因增强鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性

【摘要】目的 研究miR 221 5p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响及潜在作用机制。方法 以人鼻咽上皮细胞NP69为对照组(NP69组),qRT PCR和Western blot检测鼻咽癌细胞系SUNE1、HNE1和CNE2中ALDH1A2 mRNA和miR 221 5p的表达,然后在SUNE1细胞中抑制miR 221 5p 表达和过表达ALDH1A2确定两者对细胞的影响。MTT法测定SUNE1细胞存活率和对顺铂的敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中ALDH1A2、CyclinD1、Cleave caspase 3和MRP1蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR 221 5p和ALDH1A2的调控关系。结果 与NP69组相比,在鼻咽癌细胞SUNE1、HNE1和CNE2中,miR 221 5p高表达,ALDH1A2低表达;低表达miR 221 5p和高表达ALDH1A2均可抑制鼻咽癌细胞SUNE1增殖,诱导凋亡,增强对顺铂的敏感性;miR 221 5p靶向负调控ALDH1A2的表达;低表达ALDH1A2可部分逆转miR 221 5p低表达对SUNE1细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。结论 下调miR 221 5p可靶向促进ALDH1A2表达增强鼻咽癌SUNE1 细胞的顺铂敏感性,抑制癌细胞增殖并诱导凋亡;miR 221 5p有望成为鼻咽癌顺铂的增敏靶点。     

顺铂在肺癌细胞Fas基因上调中的作用

目的：研究顺铂能否上调肺癌细胞Fas凋亡基因的表达。方法：逆转录聚合酶链法比较经顺铂处理前后肺癌细胞Fas mRNA的表达水平。结果：顺铂可以显著增高肺癌细胞的Fas基因表达水平。结论：顺铂与Fas配体或抗体联合应用将增高肺癌细胞的凋亡率，有一定的抗肿瘤临床应用前景。     

E20通过上调Sirt1介导顺铂损伤人卵巢颗粒细胞的保护作用

目的：研究新型螺杂环查尔酮衍生物E20对顺铂（CDDP）所致人卵巢颗粒细胞（KGN）损伤的保护作用及其分子机制。方法：体外培养KGN细胞系中加入不同浓度E20后通过MTT法筛选出E20的安全浓度;选择浓度为5μg/mL的CDDP单独作用或与不同浓度的E20联合作用KGN细胞,MTT法检测细胞活力的变化;选择不同浓度的CDDP单独作用或与E20联合作用卵巢癌细胞ES-2,MTT法检测细胞活力并计算出半数抑制率（IC50）;倒置显微镜观察不同处理后KGN细胞形态变化;流式细胞术测定KGN细胞凋亡变化;ELISA法测定KGN细胞上清液中雌二醇（E2）水平变化;蛋白质印迹（Western blot）法检测KGN细胞Sirt1和凋亡分子Bax、Bcl-2蛋白表达变化;Sirt1-siRNA转染KGN细胞后用Western blot法验证沉默效果,并用MTT法检测Sirt1下调后E20对KGN细胞活力的影响。结果：E20对KGN细胞的安全浓度在20μmol/L以下;CDDP能使KGN细胞和ES-2细胞活力下降,E20能减轻CDDP对KGN细胞的损伤且不会降低CDDP对ES-2细胞的抗增殖能力。CD...     

氯喹通过诱导凋亡增强5-氟尿嘧啶的抗结肠癌效果

目的:探讨结肠癌化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)与各个阶段的自噬抑制剂联合使用后,结肠癌细胞的增殖和凋亡情况,以寻找合适的治疗结肠癌的药物。方法:自噬三个阶段的抑制剂与5-FU联合使用处理结肠癌细胞系HT-29和SW480后,MTT方法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,western blot检测细胞自噬和凋亡情况。结果:5-FU能诱导结肠癌细胞的自噬和凋亡。3-甲基腺嘌呤(3 methyladenine,3-MA)和氯喹(Chloroquine,CQ)均能增强5-FU诱导的结肠癌细胞凋亡,而CQ的增强效果更加明显。同时,又进一步证明了CQ可诱导结肠癌细胞发生caspase依赖的结肠癌细胞凋亡。结论:CQ有望成为一种能与5-FU联合使用治疗结肠癌的有效化疗药物。     

Dishevelled2在鼻咽癌顺铂耐药中的作用研究?

目的：探讨散乱蛋白2(Dishevelled2,DVL2)对鼻咽癌顺铂化疗敏感性的影响,为进一步研究 DVL2在肿瘤化疗耐药中的作用机制奠定前期基础。方法转染 pcDNA3.1-DVL2至鼻咽癌细胞5-8F,并用不同浓度(0,1,2,4,8,10,20μmol/L)的顺铂处理细胞,MTT 检测过转染 DVL2对5-8F 顺铂抑制率及半数抑制浓度(IC50)的影响,流式检测 DVL2高表达对顺铂的5-8F 细胞凋亡的影响,Western blotting 检测 DVL2对 Wnt/β-catenin 信号的影响。结果过表达 DVL2明显降低了顺铂对5-8F 的抑制率,提高了其 IC50,同时过表达 DVL2明显降低了顺铂诱导的5-8F 细胞的凋亡,进一步研究显示,过表达 DVL2明显增加了β-catenin 及其靶基因 P-gp 和 Survivin 的蛋白表达。结论过表达 DVL2可通过上调 Wnt/β-catenin 信号增强耐药相关蛋白 P-gp、Survivin 的表达,从而诱发鼻咽癌顺铂耐药。     

顺铂上调STAT1蛋白抑制宫颈癌细胞增殖

目的研究Stat1蛋白对宫颈癌Hela细胞生长、增殖及顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法采用蛋白印迹法（Western
blot）检测不同浓度DDP处理Hela细胞后Stat1蛋白表达差异;转染Stat1-siRNA后,通过Western blot验证干扰效果;应用四甲
基偶氮唑蓝（MTT）法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）观察转染Stat1-siRNA后Hela细胞对DDP敏感性变化,并检测Stat1相关细
胞因子c-Myc的表达变化。结果随着DDP浓度的增加,Hela细胞中Stat1蛋白的表达量逐渐增加,DDP浓度为5 mg/L时,Stat1
蛋白表达上调1.5倍,DDP浓度为10 mg/L时,Stat1蛋白表达上调近2倍;特异性Stat1-siRNA 使Hela细胞中Stat1的表达下调
70%,促进细胞生长和增殖;Stat1-siRNA可以降低DDP对Hela细胞生长和增殖的抑制效应,削弱DDP对c-Myc的抑制作用。
结论Hela细胞中c-Myc是STAT1发挥抑癌作用的靶点基因之一;STAT1/c-Myc通路介导了DDP抑制Hela细胞生长、增殖的作
用;STAT1可增强Hela细胞对DDP的敏感性。
     

白藜芦醇通过上调miR-361-3p逆转卵巢癌顺铂耐药的研究

目的 研究白藜芦醇(RES)逆转卵巢癌顺铂(DDP)耐药的作用机制。方法 选取人卵巢癌SKOV3细胞,采用DDP构建SKOV3/DDP耐药细胞株。使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测RES和DDP对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)和增殖能力的影响;采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测RES对微RNA-361-3p(miR-361-3p)的调控作用;采用流式细胞术检测RES和DDP对细胞凋亡的作用;细胞转染miR-361-3p抑制剂后检测DDP对细胞增殖和凋亡的作用。采用Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路关键蛋白的表达。结果 RES终浓度4μmol/L对SKOV3/DDP细胞生长无明显抑制作用(P>0.05),可作为最大安全浓度。RES+DDP组的IC₅₀明显低于DDP组(P<0.05)。RES可明显上调SKOV3/DDP细胞miR-361-3p的表达(P<0.05)。miR-361-3p抑...     

顺铂化疗鼻咽癌94例疗效观察

顺铂是近年来广泛应用于临床的抗癌药物之一。本文总结了我科自1989年以来用顺铂化疗的94例鼻咽癌患者,就其疗效及主要副作用作一评价。     

氯喹抑制肾癌细胞活性促进舒尼替尼诱导的细胞凋亡

目的：研究氯喹（经常用于抑制自噬体与溶酶体的融合,是一种晚期自噬的抑制剂）是否能抑制肾癌细胞的增殖以及对舒尼替尼(sunitinib, ST)诱导的细胞凋亡的影响。方法：以肾癌细胞系786-O和ACHN为模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3 羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) 5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt, MTS］观察氯喹对细胞活性的影响;透射电子显微镜、免疫杂交等手段检测氯喹影响ST诱导的凋亡、自噬的情况。应用早期自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)、RNA干扰技术敲降自噬相关蛋白Ulk1 (unc-51-like kinase 1)和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein, LC3)确定早期自噬对ST引起的细胞凋亡的影响。结果：氯喹和ST均可以抑制786-O和ACHN细胞的增殖,氯喹可促进ST诱导的细胞凋亡。与氯喹不同,抑制早期自噬减少了ST诱导的细胞凋亡和活性丢失。结论：舒尼替尼既可以引起细胞自噬,也可以促进细胞的凋亡;早期、晚期自噬对ST诱导的细胞凋亡作用不同,氯喹可以作为一种潜在的抗肾癌药物进行相关的临床研究。     

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性

目的探讨下调microRNA-221（miR-221）表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人
结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221（anti-miR-221）后,应用实时荧光定量PCR（Real-time Q-PCR）检测Caco2
细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经
照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显
下调（P<0.05）,同时PTEN蛋白表达增高（P<0.05）;流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组
死亡细胞比例均明显增多（P均<0.01）,转染anti-miR-221可明显提高Caco2细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部
分但不完全阻断。结论Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。
     

YM155诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬并促进其凋亡

目的:研究生存素(survivin)抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡及自噬的影响及其可能的作用机制?方法:采用CCK-8法检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时联合加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞与单用组比较细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Real-time PCR法检测不同加药组与对照组细胞的survivin?beclin 1和bcl-2的mRNA表达量;蛋白质印迹法检测survivin?bcl-2?caspase-3?PARP及自噬相关蛋白beclin 1和LC-3表达变化情况?结果:YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性?流式细胞结果显示YM155在0.5?1.0?1.5 ng/mL浓度对细胞的凋亡率分别是(11.9 ± 2.4)%?(21.7 ± 2.6)%?(30.8 ± 4.5)%,与对照组(6.4 ± 1.2)%相比具有统计学意义(P < 0.01)?当使用自噬抑制剂3-MA(5 mmol/L)联合处理细胞24 h后细胞增殖率(62.5 ± 3.3)%,与单用YM155组(54.7 ± 2.7)%相比,细胞增殖活性增强(P < 0.05)?YM155可显著下调survivn的mRNA和蛋白表达,降低bcl-2和提高caspase-3?PARP的蛋白表达,同时上调beclin 1表达及增加LC-3Ⅱ/ LC-3Ⅰ的比值,促进细胞自噬的发生?结论:YM155能够有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及自噬的发生,其诱导的自噬效应进一步促进其凋亡的发生?     

白细胞介素6通过抑制自噬促进人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：探讨IL-6对血管内皮细胞自噬和凋亡的影响以及自噬与凋亡的相互作用关系。方法：采用不同浓度IL-6诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs),Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖与活性,流式细胞术检测细胞凋亡变化,单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色观察细胞嗜酸性自噬泡情况,透射电镜观察细胞超微结构的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase3)以及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和(sequestosome 1, SQSTM1)/P62表达水平。进一步采用IL-6分别联合自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,RP)诱导自噬或3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)抑制自噬,观察自噬对IL-6诱导血管内皮细胞凋亡的影响。结果：1. 与对照组相比,IL-6可以呈浓度依赖性降低血管内皮细胞的活性(P＜0.05),增加血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05);2. IL-6浓度依赖性降低血管内皮细胞内LC3-II/LC3-I的表达(P＜0.05)而增加P62的表达(P＜0.05),在IL-6刺激下,MDC 染色观察可见血管内皮细胞内自噬泡逐渐减少(P＜0.05),荧光强度明显减弱,透射电镜下表现为自噬小体明显减少;3. 采用自噬抑制剂3-MA刺激血管内皮细胞,发现3-MA可以进一步抑制IL-6刺激下的血管内皮细胞的自噬水平而增加凋亡水平,表现为LC3-II/LC3-I的表达进一步下降(P＜0.05)和P62的表达进一步增加(P＜0.05),血管内皮细胞内的自噬泡和自噬小体数量明显减少(P＜0.05),并且3-MA可以进一步增加IL-6刺激下血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05);4. 进一步采用自噬促进剂RP刺激血管内皮细胞,发现RP可以改善IL-6刺激下的血管内皮细胞的自噬水平而降低凋亡水平,表现为LC3-II/LC3-I的表达升高(P＜0.05)和P62的表达下降(P＜0.05),血管内皮细胞内的自噬泡和自噬小体数量的增多(P＜0.05),并且RP可以明显减少IL-6刺激下血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05)。结论：白介素-6可通过抑制自噬而增加血管内皮细胞凋亡。     

下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡

目的 探讨Pannexin2（Panx-2）蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平以及干扰Panx-2表达对顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡的影响。方法 免疫印迹法Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;以睾丸癌I-10细胞株为研究对象,实验分为转染试剂对照组（mork组）、阴性对照质粒组（NC组）、干扰Panx-2组（shRNA1质粒组和shRNA2质粒组）,采用免疫印迹法验证Panx-2的表达;在转染细胞中添加16 μmol/L的顺铂诱导细胞死亡,通过MTT法分别检测细胞在24、48、72 h的存活率,集落克隆法检测细胞的集落形成能力;在顺铂（16 μmol/L）处理8 h后,采用AnnexinV/PI双染法检测细胞的早期凋亡;在顺铂（16 μmol/L）作用24 h后,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白caspase 3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果 与I-10细胞和Tcam-2细胞相比,I-10/DDP细胞（P< 0.001）和Tcam-2/DDP细胞（P<0.01）中Panx-2的表达显著增加;干扰Panx-2基因后,免疫印迹结果显示,与NC组相比,shRNA1和shRNA2组中Panx-2的表达量下降（P<0.05）;MTT法显示shRNA1和shRNA2组细胞的存活率均低于NC组（P<0.001）;在含顺铂培养基的培养下,集落克隆法显示shRNA1和shRNA2组细胞的集落形成能力低于NC组（P<0.001）;AnnexinV/PI双染法显示shRNA1和shRNA2组的早期凋亡率（P<0.01）均低于NC组;免疫印迹结果显示,与NC组相比,shRNA1和shRNA2组中凋亡相关蛋白caspase 3表达升高（P<0.05）,Bcl-2表达降低（P<0.01）,Bax表达升高（P<0.05）。结论 下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡。     

Insulin enhances apoptosis induced by cisplatin in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells related to inhibition of autophagy

Background Chemoresistance is common among patients with esophageal squamous cell carcinoma （ESCC）.We investigated the effect and mechanism of insulin on enhancing anticancer functions of cisplatin in human esophageal cancer cell line EC9706.Methods The viability of EC9706 cells exposed to cisplatin was assessed using MTT assay.The times T1,when the number of living cells reached a plateau and T2,when the number of living cells reached a new plateau after the addition of insulin were found.T1 and T2 plateau cells were stained by Annexin V-FITC/PI and monodansylcadaverin （MDC）.Fluorescent microscopy was used to observe the expression of apoptosis and autophagy intuitively.Apoptotic ratio and fluorescent intensity were analysed by flow cytometry （FCM） quantitatively.Western blotting analysis was used to estimate the protein expression levels of AKT,mTOR,PI3K,PTEN,autophage related indicator LC3-Ⅱ and autophage related protein Beclin1 changes that occurred in the course of treatment.Results A larger number of typical autophagosomes were detected in EC9706 cells exposed to cisplatin.Insulin can increase the apoptosis induced by cisplatin.Apoptotic ratio of T1 plateau cells （（32.6±4.3）％） is significantly less than T2 plateau （（47.5±5.6）％）.MDC fluorescent intensity at T1 plateau （104.9±13.2） was significantly higher than intensity at T2 plateau （82.6±10.3）.After cotreatment with insulin,the expression level of LC3-Ⅱ,Beclin1 and PTEN in T2 plateau cells were significantly downregulated,but AKT,mTOR and PI3K expressions significantly upregulated compared with T1 plateau.Conclusions Insulin could enhance cisplatin-induced apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells related to inhibition of autophagy.The activation of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway induced by insulin resulted in the suppression of autophagy in EC9706 cells,which may be attributed to the anticancer effects of cisplatin.     

TSA可能通过抑制APE1 BER功能增强顺铂的肺腺癌细胞毒性

目的 探讨曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对顺铂诱导的细胞毒性的影响.方法 给予0、250、500 nmol/L TSA预处理A549细胞24 h后,分别联合0、5、10、15 μmol/L顺铂处理A549细胞24 h后,通过0、0.5、1、2μmol/L APE1 InhibitorⅢ调控APE1 BER功能,应用CCK-8方法检测细胞增殖率,AP内切酶活性实验检测APE1 BER功能,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平,immunoblot检测γ-H2AX表达水平.结果 TSA联合顺铂处理A549细胞明显增强顺铂的细胞增殖抑制,并促进顺铂诱导的细胞凋亡;随着TSA浓度的升高APE1内切酶活性逐渐减弱,TSA联合顺铂促进顺铂诱导的γ-H2AX表达;利用inhibitorⅢ抑制APE1内切酶活性,促进顺铂诱导细胞增殖抑制和凋亡水平.结论 TSA可能通过抑制APE1 BER功能增强顺铂诱导的细胞毒性反应.     

PRMT1通过促进RRM2表达抑制鼻咽癌细胞凋亡

目的 探讨PRMT1能否通过促进RRM2抑制鼻咽癌细胞凋亡。方法 免疫组化和Western blot共同检测鼻咽癌和癌旁组织中PRMT1及RRM2的相对表达量;以人正常鼻黏膜上皮细胞系（HNEpC）作为对照,Western blot实验检测不同鼻咽癌细胞系中PRMT1和RRM2蛋白的相对表达量;对CNE-2细胞中PRMT1分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达PRMT1组（oe PRMT1:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 PRMT1质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及PRMT1小干涉RNA组（si-PRMT1:CNE-2细胞中转染PRMT1小干涉RNA）,对CNE-2细胞中RRM2分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达RRM2组（oe RRM2:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 RRM2质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及RRM2小干涉RNA组（si-RR...     

RN181过表达影响SMMC7721肝癌细胞凋亡的初步研究

目的构建过表达RN181基因的SMMC7721重组细胞株,研究RN181对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其凋亡机制。方法构建高表达RN181逆转录病毒感染SMMC7721细胞,显微镜观察其细胞株荧光强弱,Western blot鉴定RN181蛋白表达水平;采用DAPI染色法、Western blot检测RN181对顺铂诱导SMMC7721细胞株凋亡的变化情况。结果重组细胞株荧光表达良好,7721RN181细胞中RN181蛋白表达量高于其对照,差异有统计学意义(P0.05)。DAPI染色法观察到在顺铂作用下,7721RN181的细胞凋亡阳性率高于其对照,差异有统计学意义(P0.05);Western blot检测到7721RN181的activated caspase-3、cleaved PARP的表达量高于对照组,procaspase-6,pro-caspase-8的表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 RN181表达能促进肝癌细胞的凋亡,其可能通过参与死亡受体凋亡途径来促进肝癌细胞凋亡。进而推测RN181基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。