Fe3O4-PMMA复合纳米微球的制备与表征

采用化学共沉淀法合成了超顺磁Fe3O4纳米粒子,并采用油酸和油酸钠对其表面进行修饰,制备了可稳定分散于水中的磁流体。以该磁流体为种子,通过一步乳液聚合制备了表面带有功能化羧基的Fe3O4-聚甲基丙烯酸甲酯复合纳米微球(Fe3O4-PMMA)。利用动态光散射、透射电镜观察、傅里叶红外光谱、热失重分析、振动样品磁强计测试等手段表征了复合微球的尺寸、形态、结构、组成和磁性能。结果表明,复合微球的平均直径约120 nm,表面带有羧基功能基团,在室温下具有超顺磁性和较高的饱和磁化强度。     

铁离子通过ROS-乙酰化P53促进巨噬细胞M1型极化

目的 探讨铁离子在促进巨噬细胞向促炎型表型(经典激活型,M1)极化的具体机制.方法 Western blot、qRT-PCR、流式细胞术(FCM)、组织免疫荧光、ROS探针(DCFH-DA)分别检测巨噬细胞极化指标(IL-1β、TNF-α、IL-10、TGF-β、CD86及CD206等)、p53、乙酰化p53和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;通过还原性谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)和P300/CBP乙酰化转移酶抑制剂(C646)分别处理巨噬细胞后,观察巨噬细胞的极化状态;通过皮下注射H22肝癌细胞,建立BALB/c裸鼠皮下H22肝癌细胞模型,给予铁剂处理后,观察肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM)极化状态.结果 铁剂处理促鼠源性巨噬细胞(RAW 264.7)向M1型极化并高表达乙酰化P53(P ＜0.05);抑制p300/CBP乙酰化转移酶,能够明显抑制p53乙酰化、减弱M1极化效应(P＜0.05);小鼠皮下瘤模型中,经铁剂处理后,小鼠皮下瘤组织中CD86高表达、CD206低表达,并有更多的ROS产生.结论 细胞内铁过载促巨噬细胞向M1型极化,其机制可能与ROS产生,提高p300/CBP乙酰化转移酶活性,促进p53乙酰化有关.     

没食子酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的:体外建立M1型巨噬细胞极化模型,探讨没食子酸(GA)对M1型巨噬细胞极化的影响.方法:选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,取腹腔巨噬细胞进行体外原代培养,通过对细胞培养基进行不同的处理,将实验分为对照组(不做处理)、M1极化模型组[加入脂多糖(LPS,100μg·L-1)和干扰素γ(IFN-γ,20μg·L-1)诱...     

As2O3磁性Fe3O4白蛋白微球的制备与表征

目的 :制备用于肿瘤热化疗和逆转多药耐药的As2O3磁性Fe3O4白蛋白微球并表征。方法:化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒,运用透射电镜、X射线衍射分析进行表征,溶血实验及MTT试验进行毒理学评定。去溶剂化交联法制备As2O3磁性Fe3O4白蛋白微球,运用透射电镜和能谱仪进行表征,在交变磁场作用下进行体外升温试验,体外释药方法研究其释药速率。结果:Fe3O4磁性纳米粒近似球形,粒径约20 nm,无溶血作用,细胞毒性为1级。As2O3磁性Fe3O4白蛋白微球近似球形,大小均匀,粒径约193.4 nm,其不同浓度的磁流体在交变磁场下可升温至39.5~58.0℃并保持恒定。体外释药实验证实As2O3磁性Fe3O4白蛋白微球具有明显的缓释功能。结论:Fe3O4磁性纳米粒作为药物载体具有良好的生物相容性。用去溶剂化交联法可以成功制备出As2O3磁性Fe3O4白蛋白微球,As2O3磁性Fe3O4白蛋白微球释药速率缓慢,为研究肿瘤热化疗和逆转多药耐药提供理论和实验基础。     

全反式维甲酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的 利用M1型巨噬细胞极化模型,探讨全反式维甲酸(ATRA)对M1型巨噬细胞极化的影响.方法 选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,提取并纯化腹腔巨噬细胞,随机分为M组、M1组、DMSO组和ATRA组.脂多糖(LPS,100 ng/mL)联合干扰素-γ(IFN-γ,20 ng/mL)诱导巨噬细胞构建M1型巨噬细胞极化模型...     

巨噬细胞极化为M1型或M2型对铁代谢的影响

目的探讨巨噬细胞极化形成M1型或M2型对铁代谢的影响。方法应用脂多糖（LPS）20ng/mL或IL-410ng/mL诱导RAW264.7巨噬细胞极化,电子显微镜下观察处理后的巨噬细胞极化形态特征,采用免疫荧光染色法及Westernblot法检测M1型标志物TNF-α和一氧化氮合酶（iNOS）及M2型标志物精氨酸酶1（Arg-1）的表达情况;LPS或IL-4处理后的巨噬细胞与红细胞及铁剂共培养,通过瑞氏染色和铁染色,评价其铁摄入功能;ELISA法检测LPS或IL-4处理后巨噬细胞内及培养液中铁蛋白含量,以评价其铁储存功能。结果LPS处理后巨噬细胞由圆形向多形性转化;同时,TNF-α和iNOS的表达水平明显增加;可见吞噬红细胞现象,胞质中吞噬的铁颗粒明显增多。IL-4处理后巨噬细胞形态也呈多形性改变,同时Arg-1表达水平增加,但未见吞噬红细胞现象,且胞质内吞噬的铁颗粒较少。此外,LPS处理后巨噬细胞胞内铁蛋白含量较IL-4处理后明显增多。结论LPS与IL-4可诱导巨噬细胞形成不同极化亚型,其铁代谢存在明显差异。LPS处理的M1型巨噬细胞对铁的摄入及储存较IL-4处理的M2亚型巨噬细胞增加,有固铁优势。     

LPS诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响

目的 研究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响。方法 将Balb/c雌性小鼠随机分为对照组和实验组。Renca细胞皮下建模,待肿瘤体积生长至50mm3时瘤旁注射生理盐水（100μl/只, 1次/2d）或LPS（100μg/只,1次/2d）,采用流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞M1型极化水平。将小鼠肿瘤细胞系（ML-1、MC38、Renca）分成三组：空白组（完全培养基加入50%DMEM基础培养基）、对照组（完全培养基加入50%巨噬细胞培养基上清液）和实验组（完全培养基加入50%LPS预处理的巨噬细胞培养基上清液）。采用细胞计数试剂-8（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测肿瘤细胞增殖情况;采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。 结果 经LPS处理后肿瘤相关巨噬细胞M1型比例增多（P<0.001）,从而增强其抗肿瘤功能;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可显著抑制肿瘤细胞的增殖（Renca：P=0.023;ML-1：P=0.045）;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞周期G0/G1（MC38：P=0.011;ML-1：P=0.022）或S期（Renca：P=0.022）阻滞,进而抑制细胞分裂;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞凋亡（Renca：P=0.04;ML-1：P=0.007）。结论 LPS可通过诱导巨噬细胞M1型极化发挥抗肿瘤功能。     

载紫杉醇PLGA微球在Skov3卵巢癌荷瘤小鼠体内的治疗效果

目的   应用乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备载紫杉醇(PTX)PLGA微球,评价PTX-PLGA微球对荷瘤小鼠治疗效果。方法   采用4周龄雌性BALB/c-nu裸小鼠建模,将卵巢癌Skov3细胞株注射于裸鼠背部一侧,制备裸小鼠皮下移植瘤。设空白对照组、生理盐水组、PLGA微球悬液组、PTX注射液组和PTX-PLGA微球悬液组。分别对成瘤后荷瘤鼠进行治疗、观察记录、绘制肿瘤生长曲线。对Skov3移植瘤裸小鼠瘤内直接注射药物并应用免疫组化法检测移植瘤微血管密度(MVD)、相关死亡促进因子(Bad)。结果   给药6周后,PTX-PLGA微球组瘤内注射抑瘤效果明显大于其他各组(P＜0.05),肿瘤体积明显减小,癌细胞增殖受到抑制。结论   PTX-PLGA微球瘤内直接注射对卵巢癌的治疗有明显体内抑瘤效果。     

A1类清道夫受体通过促进M2型巨噬细胞极化增加脂肪组织产热能力

目的：探讨A1类清道夫受体（macrophage scavenger receptor 1,MSR1）在低温刺激诱导白色脂肪产热进程中的作用及其机制。方法：正常饮食（common diet,CD）的野生型小鼠（MSR1^+/+）和MSR1缺失表达小鼠（MSR1^-/-）分别给予低温刺激1 d 或者 14 d 后,通过 qRT-PCR、Western blot 和免疫组织化学染色检测皮下白色脂肪组织（subcutaneous white adipose tissue, scWAT）和棕色脂肪组织（brown adipose tissue,BAT）中脂肪产热能力标志物（UCP1、Cidea和Cox8b）的表达。qRT-PCR和流式细胞术检测正常饮食的MSR1^+/+和MSR1^-/-小鼠给予低温刺激14 d后,小鼠scWAT中巨噬细胞极化情况。建立高脂饮食（high fat diet,HFD）诱导的小鼠肥胖模型,监测CD和HFD 12周的MSR1^+/+和MSR1^-/-小鼠体重变化,并使用代谢笼监测小鼠耗氧量和产热量变化;qRT-PCR和免疫组织化学染色检测HFD 12周的小鼠给予低温刺激7 d后,小鼠scWAT和BAT中产热基因表达。 体外实验应用巨噬细胞条件培养基刺激小鼠前脂肪细胞分化,待分化成熟后应用qRT-PCR检测产热基因表达。结果：慢性低温刺激下,与MSR1^+/+小鼠相比,MSR1^-/-小鼠脂肪组织产热基因表达明显降低。进一步,MSR1^-/-小鼠scWAT中M2型巨噬细胞数量明显减少。HFD喂养12周后,MSR1^-/-小鼠体重增加更为明显,并且耗氧量和产热量明显降低。低温刺激下,与MSR1^+/+ HFD小鼠相比,MSR1^-/- HFD小鼠脂肪产热能力明显降低。体外细胞研究发现,与MSR1^+/+小鼠腹腔巨噬细胞条件培养基诱导的成熟脂肪细胞相比,MSR1^-/-小鼠腹腔巨噬细胞条件培养基诱导的成熟脂肪细胞产热基因表达明显降低。结论：低温刺激下,MSR1通过增加M2型巨噬细胞极化促进小鼠脂肪组织产热。     

四氧化三铁基复合材料在生物磁分离中的应用

磁分离是一种借助外部磁场实现物质分离的技术,广泛应用于污水处理、生物医学及酶反应工程等领域。与传统的分离方法相比,磁分离技术具有反应条件温和、成本低廉、操作简便等优点。四氧化三铁基复合纳米粒子因具有高的比表面积、优秀的生物相容性和量子尺寸效应,且易于表面修饰,成为目前生物磁分离材料研究热点之一。功能化的四氧化三铁复合材料对细胞、病毒、蛋白、核酸等多种生物活性物质都有优秀的特异性和极高的分离效率。本文总结了四氧化三铁基复合材料在生物医学磁分离各个分领域的研究进展。     

纳米级超顺磁性Fe3O4超细粒子的制备及表征

目的 采用水解法,在碱性条件下制备出具有超顺磁性的Fe3O4纳米粒子。方法 在N2保护和剧烈搅拌等条件下,将Fe^3 和Fe^2 混合液滴入氨水溶液中。结果 所制得的Fe3O4纳米粒子,平均粒径为25nrn,具有超顺磁性。结论 用扫描电子显微镜(SEM)及X-射线粉末衍射法对所制得的Fe3O4纳米粒子进行了表征,本法可用于Fe3O4纳米粒子的制备。     

稳定的水溶性Fe_3O_4纳米粒子的制备及其表征

目的:制备稳定的水溶性Fe3O4纳米粒子(PMAT-Fe3O4)磁共振成像(MRI)造影剂,并对合成的粒子进行表征.方法:利用高分子聚-1-十四碳烯-马来酸酐(PMAT)修饰油溶性Fe3O4纳米粒子表面,使粒子表面富含亲水性羧基基团,使粒子能够稳定存在于水相中,并用透射电镜(TEM)、动态光散射(DLS)、振动样品磁强计(VSM)、傅立叶红外吸收光谱(FT-IR)和MRI等方法进行表征.结果:(1) TEM分析显示,PMAT-Fe3O4粒子直径约为10 nm,DLS测定其水动力学平均直径约为80 nm;(2) PMAT-Fe3O4粒子能稳定分散于去离子水、PBS、Tris、MES等缓冲液中,不发生团聚;(3) VSM、MRI等分析手段显示,PMAT-Fe3O4的饱和磁化强度Ms≈14.0 emu·g-1,弛豫率r2=367.79 mM-1s-1.结论:PMAT-Fe3O4具有良好的水溶性、磁学性能和较高的r2值,有望发展成为一种性能优异的MRI造影剂.     

超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒的制备和结构表征

目的:制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒,并检测物理和磁学性质.方法:共沉淀法制备超顺磁性四氧化三铁壳聚糖纳米粒,通过透射电镜与原子力显微镜、X射线粉末衍射法、振动样品磁场计和激光衍射粒度分析仪初步分析其形态和磁性.结果:所得样品核心为四氧化三铁晶体,粒径为20～30 nm,矫顽力为0.532 oe,剩磁为1.281 8×10-5 emu,饱和磁化0.01152 emu.结论:制备的样品具有粒径小,分散性好,超顺磁性的特点,可以作为非病毒基因的载体.     

Synthesis and characterization of surface-modified Fe3O4 super-paramagnetic nanoparticles

Aqueous dispersion and stability of Fe304 nanoparticles remain an issue unresolved since aggregation of naked iron nanoparticles in water. In this study, we successfully synthesized different Fe304 super-paramagnetic nanoparticles which were modified by three kinds of materials [DSPE-MPEG2000, TiO2 and poly acrylic acid （PAA）] and further detected their characteristics. Trans- mission electron microscopy （TEM） clearly showed sizes and morphology of the four kinds of nanopar- ticles. X-ray diffraction （XRD） proved successfully coating of the three kinds of nanoparticles and their structures were maintained. Vibrating sample magnetometer （VSM） verified that their magnetic proper- ties fitted for the super-paramagnetic function. More importantly, the particle size analysis indicated that Fe304@PAA had a better size distribution, biocompatibility, stability and dispersion than the other two kinds of nanoparticles. In addition, using CNE2 cells as a model, we found that all nanoparticles were nontoxic. Taken together, our data suggest that Fe304@PAA nanoaparticles are superior in the applica- tion of biomedical field among the four kinds ofFe304 nanoparticles in the future.     

阻断TIM-4分子对M1/M2型巨噬细胞极化及同种异体免疫排斥反应的影响

目的: 运用特异性单克隆抗体阻断抗原T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin domain containing protein-4,TIM-4),探讨其对巨噬细胞(M1/M2)极化及同种异体免疫排斥反应的影响。方法: 构建同种异体免疫排斥模型,将BALB/c小鼠脾细胞悬液注入C57BL/6小鼠腹腔,分为同型对照组(n=6)和抗TIM 4组(n=6);分别腹腔注射同型对照免疫球蛋白和抗TIM-4单克隆抗体, 300 μg/只;第5天,重复注射1次;第10天,处死两组小鼠,采用流式细胞术检测受体鼠脾和腹腔中M1和M2型巨噬细胞百分比;用实时荧光定量PCR法检测受体鼠脾和腹腔细胞中微小RNA-21(miR-21)、IL-10、p40、p35和EB病毒诱导基因3 (Epstein-Barr virus-induced gene 3,EBi-3)等mRNA表达水平。结果： 在脾细胞中,与同型对照组相比,抗TIM-4组M1和M2型巨噬细胞百分比、miR-21和p40 mRNA表达水平无明显变化(P均>0.05),但IL-10和p35 mRNA表达水平明显升高(P均<0.05),EBi-3 mRNA表达水平明显下降(P<0.05);在腹腔中,与同型对照组相比,抗TIM-4组M1型巨噬细胞百分比和p35 mRNA表达水平无明显变化(P均>0.05),而M2型巨噬细胞百分比、IL-10、p40和EBi-3 mRNA表达水平均显著升高(P均<0.05),miR-21表达水平显著降低（P<0.05）。结论： 阻断TIM-4分子促进小鼠腹腔M2增殖分化,上调脾和腹腔细胞中抑炎因子和促炎因子mRNA表达,减轻同种异体免疫排斥反应。     

C3a-C3aR轴通过巨噬细胞向M1型极化对慢性牙周炎模型小鼠炎症反应和组织损伤的影响

目的:探讨补体C3a在体外对巨噬细胞极化状态的影响和C3a受体(C3aR)敲除对慢性牙周炎模型小鼠牙周组织中巨噬细胞极化状态、牙周组织炎症和软硬组织破坏程度的影响,阐明C3a-C3aR轴在慢性牙周炎发生发展过程中的作用及其可能机制.方法:根据基因型鉴定筛选出18只8周龄C57BL/6雌性小鼠,以基因型分为C3ar+/+...     

掺杂F3O4磁性纳米粒子壳聚糖凝胶的制备及其性质研究

目的:制备用聚丙烯酸(PAA)包裹的水溶性四氧化三铁(Fe3O4)纳米粒子(PAA@Fe3O4NPs)掺杂的壳聚糖水凝胶,并对其进行表征。方法:用戊二醛为交联剂,对壳聚糖进行交联,向其中添加PAA@Fe3O4NPs,获得Fe3O4磁性纳米粒子均匀掺杂的水凝胶。应用衰减全反射傅利叶变换红外线光谱(ATR-FTIR)分析仪和流变仪对凝胶的化学结构、流变学性质和溶胀率等进行表征。结果:ATR-FTIR结果显示,戊二醛交联的壳聚糖水凝胶中交联点-C=N-位于1 650 cm-1附近。Fe3O4磁性纳米粒子均匀掺杂在戊二醛交联的壳聚糖水凝胶中,其存储模量G’远大于损耗模量G″,具有高的溶胀率。结论:Fe3O4磁性纳米粒子可以均匀分布在戊二醛交联的壳聚糖水凝胶中,并显示出良好的弹性模量,是一种有潜力的烧伤瘢痕增生抑制辅助用凝胶材料。     

磁性Fe3O4纳米颗粒对大鼠脏器组织中Caveolin-1和Clathrin Heavy Chain蛋白表达的影响

目的：探讨磁性Fe₃O₄纳米颗粒对大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain蛋白表达的影响,阐明其作用机制。方法：将24只Wistar大鼠按体质量随机分成对照组和低、中、高剂量磁性Fe₃O₄纳米颗粒组,尾静脉注射不同剂量磁性Fe₃O₄纳米颗粒24h后取脏器组织,Western blotting法检测大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain蛋白的表达水平,荧光实时定量PCR法检测大鼠主要脏器组织中Caveolin-1及Clathrin Heavy Chain mRNA的表达水平。结果：与对照组比较,中和高剂量组大鼠肝脏和脾脏组织中Clathrin Heavy Chain蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。高剂量组大鼠肾脏组织中Clathrin Heavy Chain mRNA的表达水平与其他3组比较明显升高（P<0.05）。Caveolin-1蛋白表达水平在各剂量组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,低、中和高剂量组大鼠肝脏、肺脏和脾脏组织中Caveolin-1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;各组肾脏组织中Caveolin-1mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：磁性Fe₃O₄纳米颗粒能够诱导大鼠肝脏、肺脏、脾脏中Clathrin Heavy Chain蛋白表达增强,通过Clathrin Heavy Chain蛋白的内吞作用是磁性Fe₃O₄纳米颗粒进入大鼠肝脏、肺脏和脾脏细胞的途径之一。     

ARFI破坏微泡增强Fe3O4纳米粒子在大鼠皮下移植瘤靶向递送的实验研究

目的 制备一种具有磁共振显像功能的Fe3O4纳米粒子,通过声脉冲辐射成像(acoustic radiation force impulse,ARFI)辐照脂质微泡(microbubbles,MBs),探讨ARFI辐照微泡对Fe3O4纳米粒子在肿瘤组织分布的影响.方法 采用高温水热法制备Fe3O4纳米粒子,检测其形态、大小、分布等,观察其体外磁共振显像效果.选取60只SD雌性大鼠,体质量为170 ～200 g,制备Walker256皮下移植瘤模型,分为6组(n=10):单纯ARFI辐照组、单纯MBs组、ARFI辐照MBs组、单纯Fe3O4纳米粒子组、ARFI辐照Fe3O4纳米粒子组、ARFI辐照MBs和Fe3O4纳米粒子组.微泡0.2 mL及5 mg/kg Fe3O4纳米粒子经大鼠尾静脉推注,ARFI辐照条件为探头间隔5 s辐照肿瘤部位,累计辐照5 min.将处理后的SD大鼠肿瘤部位行MRI扫描观察肿瘤组织信号变化;处死SD大鼠,取组织标本行病理学分析.结果 制备的Fe3O4纳米粒子形态规则,粒径分布均匀,具有磁共振显像功能.SD大鼠肿瘤组织普鲁士蓝染色结果为单纯Fe3O4纳米粒子组、ARFI辐照Fe3O4纳米粒子组、ARFI辐照MBs和Fe3O4纳米粒子组均可见点状蓝染颗粒.其中ARFI辐照MBs和Fe3O4纳米粒子组蓝染颗粒计数明显多于其余2组(P＜0.05).SD大鼠肿瘤部位磁共振成像结果为单纯Fe3O4纳米粒子组、ARFI辐照Fe3O4纳米粒子组、ARFI辐照MBs和Fe3O4纳米粒子组经相应处理后T2*WI均可见肿瘤内部低信号部分增加.结论 ARFI辐照MBs能够有效地提高Fe3O4纳米粒子在SD大鼠皮下移植瘤组织的分布,增强Fe3O4纳米粒子在活体肿瘤内的靶向递送效果.